UroplakinⅢ在侵袭性膀胱癌中的表达及其临床意义

目的研究UroplakinⅢ（UPⅢ）在侵袭性膀胱癌（aggressive bladder cancer）中的表达情况及意义。方法选取74例侵袭性膀胱癌根治性膀胱切除术后的标本和10例正常膀胱组织,用免疫组织化学的方法检测UPⅢ的表达情况及膀胱癌组织中微血管密度（microvascular density,MVD）,并分析其与侵袭性膀胱癌的临床病理学指标关系。结果UPⅢ在侵袭性膀胱癌中的表达与在正常膀胱组织中表达相比差异有统计学意义（P〈0.0001）,74例侵袭性膀胱癌标本中,49例UPⅢ的表达阴性,25例表达阳性,其表达缺失与膀胱癌高分级、肌层浸润、淋巴管浸润呈正相关（P〈0.05）,侵袭性膀胱癌组织中UPⅢ阴性表达组的MVD明显高于UPⅢ阳性表达组（P〈0.01）。结论UPⅢ表达缺失与侵袭性膀胱癌的病理分级、分期及淋巴管浸润有相关性;UPⅢ可促进肿瘤血管形成从而进一步促进肿瘤细胞的生长。     

膀胱癌中肿瘤坏死因子α表达的临床意义

目的：探讨内源性肿瘤坏死因子α(TNFα)在膀胱癌发病机制中作用及其与生物学行为之间的关系。方法：应用免疫组化方法检测88例膀胱癌组织和12例正常膀胱组织中TNFα的表达。结果：正常膀胱组织中TNFα阳性率为25．0％，显著低于膀胱癌组织的61．5％。膀胱癌组织中TNFα表达与肿瘤病理分级、分期和大小密切相关，但与肿瘤复发无显著意义。结论：TNFα异常高表达参与膀胱癌发病过程，而且可以作为评估肿瘤侵袭性和恶性程度的指标。     

子宫颈鳞状细胞癌细胞外间质改变的免疫荧光抗体法研究

目的：通过对细胞外间质 ECM 成分进行检测，探讨间质重构与子宫颈鳞状细胞癌侵袭性生长及播散的关系。方法：应用双重免疫荧光染色技术和激光共聚焦显微镜观察，对正常人及不同分化程度的子宫颈鳞状细胞癌患者的子宫颈石蜡包埋组织切片纤维结合素 FN、层粘连蛋白 LN 及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白的表达进行检测。结果：正常子宫颈组织中，ECM内可见结构致密的Ⅰ、Ⅲ型胶原和细条索状的FN蛋白表达，Ⅳ型胶原和LN蛋白主要呈线状分布于基底膜内。子宫颈鳞状细胞癌组织中，Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原降解，尤以后者为著，表现为Ⅰ、Ⅲ型胶原结构稀疏，排列紊乱，基底膜内Ⅳ型胶原的线状荧光减弱、断裂甚至缺失，间质和癌细胞浆内FN和LN蛋白表达增多，胶原的降解和FN、LN表达与癌细胞分化程度负相关。结论：子宫颈鳞状细胞癌，间质胶原降解，基底膜断裂，FN及LN表达增多，ECM重构，其程度与癌细胞分化程度呈负相关。     

miR-623在膀胱癌中的表达及靶向Fascin1抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-623在膀胱癌中的表达及通过靶向Fascin1对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测正常膀胱上皮组织、膀胱癌组织、正常永生化膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中miR-623的表达量;采用脂质体瞬时转染miR-623 mimics,划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-623过表达后膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的改变;生物信息学预测miR-623的作用靶蛋白。miR-623过表达后Western blot及双荧光素酶报告基因检测其靶点的表达及结合情况;使用Fascin1特异性siRNA观察膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,并同时转染miR-623 inhibitor进行恢复实验。结果:miR-623在膀胱癌中的表达水平显著低于在正常膀胱组织中的表达（P＜0.05）,在膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中的表达水平显著低于正常膀胱细胞系(SV-HUC-1)（P＜0.05）;miR-623过表达显著抑制T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力。生物信息学预测Fascin1为miR-623的靶基因,在T24和UMUC3细胞中过表达miR-623,能够显著降低Fascin1的蛋白水平;荧光素酶报告基因分析结果证实miR-623作用于Fascin1的3'-UTR。下调Fascin1表达能够抑制膀胱癌T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制miR-623的表达能够提高细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-623在膀胱癌中表达水平降低,是一个抑癌因子;并可能通过靶向Fascin1调节膀胱癌的侵袭和转移能力。     

膀胱癌中肿瘤坏死因子α表达的临床意义

目的 :探讨内源性肿瘤坏死因子α(TNFα)在膀胱癌发病机制中作用及其与生物学行为之间的关系。方法 :应用免疫组化方法检测 88例膀胱癌组织和 12例正常膀胱组织中TNFα的表达。结果 :正常膀胱组织中TNFα阳性率为 2 5 0 % ,显著低于膀胱癌组织的 6 1 5 %。膀胱癌组织中TNFα表达与肿瘤病理分级、分期和大小密切相关 ,但与肿瘤复发无显著意义。结论 :TNFα异常高表达参与膀胱癌发病过程 ,而且可以作为评估肿瘤侵袭性和恶性程度的指标     

膀胱癌基底膜与肿瘤浸润分化关系的研究

 采用免疫组织化学SP法检测85例膀胱移行细胞癌基底膜的主要成份层粘连蛋白和Ⅳ型胶原,发现基底膜是否完整与膀胱癌分期有关(P<0.01),基底膜连续完整,膀胱癌浸润较浅,分期较低;而基底膜与膀胱癌分级无关(P<0.05)。说明了基底膜是阻止肿瘤浸润的主要屏障,而层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的表达有助于判定肿瘤分期和发现早期肿瘤浸润。     

一氧化氮合酶在膀胱癌中的表达及其与肿瘤血管形成的关系

目的:探讨一氧化氮(NO)在膀胱肿瘤中的作用及其与肿瘤血管形成的关系。方法:采用免疫组化方法对58例膀胱移行细胞癌及14例正常膀胱粘膜进行一氧化氮合酶(NOsynthese,NOS)抗体染色和微血管密度计数(microvessaldensity,MVD),观察NOS表达结果与肿瘤生物学特性及其肿瘤血管形成之间的相关性。结果:诱导型NOS(iNOS)在膀胱癌组织中的阳性表达率为81.0%(47/58),而正常膀胱粘膜则无表达,其表达程度与肿瘤分级、分期无关(P>0.05);iNOS表达阳性组和阴性组的MVD分别为每个高倍视野39.3±19.5和29.3±10.5,即iNOS的表达程度与肿瘤的微血管密度成正比(P<0.01);而内皮型NOS(eNOS)在膀胱肿瘤和正常膀胱粘膜的血管内皮细胞都有明显的表达;而在移行上皮细胞中则未见表达。结论:iNOS在膀胱癌中表达,在正常膀胱粘膜中则未见表达,提示iNOS和eNOS在膀胱移行细胞癌的血管形成中都起重要的作用。     

MMP-2与Ⅳ型胶原在膀胱癌中的表达及临床意义

目的研究MMP-2、Ⅳ型胶原在膀胱癌中的表达以及它们与肿瘤临床病理和预后的联系.方法用免疫组化SP法检测46例膀胱移行细胞癌标本中MMP-2及膀胱基底膜Ⅳ型胶原的表达,并将它们与肿瘤临床病理和预后参数相比较.结果在46例膀胱癌中,MMP-2阳性率为47.8%(22/46),Ⅳ型胶原的缺失率为56.5%(26/46).MMP-2阳性表达及Ⅳ型胶原的缺失随着肿瘤病理分期和分级的升高而增加.在浅表性膀胱癌(pTa-pT1)中,MMP-2与Ⅳ型胶原的表达与肿瘤两年内复发无关,此外,MMP-2的阳性表达病人中Ⅳ型胶原的缺失率较高.结论MMP-2表达升高对于膀胱癌的侵袭发展发挥了重要作用.     

膀胱移行细胞癌中cPKCα的表达及意义

目的　探讨cPKCα 与膀胱癌生物学行为之间的关系及意义。方法　采用WesternBlot技术检测 38例膀胱癌及癌周正常膀胱粘膜组织胞膜、胞浆中cPKCα 的表达。结果　1 与癌周正常膀胱粘膜组织相比 ,cPKCα 在膀胱癌中胞膜表达升高 ,胞浆表达渐降低 ,膜质比增高 (P <0 0 1) ;2 cPKCα随膀胱癌病理分级的升高 ,胞膜表达渐增高 ,胞浆表达渐降低 ,膜质比渐增大 (P <0 0 5 ) ;3 cPKCα 随膀胱癌临床分期的升高 ,胞膜表达渐增高 ,胞浆表达渐降低 ,膜质比渐增大 (P<0 0 0 1)。结论　cPKCα 在膀胱癌的发生发展过程中存在CKP膜转位 ,其表达与膀胱癌的恶性程度及患者预后关系密切。     

人膀胱移行细胞癌复发相关基因的筛选

目的：应用基因芯片技术筛选人膀胱移行细胞癌复发相关基因。方法：使用人肿瘤基因表达谱芯片检测11例膀胱移行细胞癌患者的正常膀胱粘膜组织、原发膀胱癌组织及复发膀胱癌组织的基因表达谱．筛选出在原发膀胱癌组织及复发膀胱癌组织中差异表达的基因，并用半定量RT—PCR对部分差异表达基因进行验证。结果：以正常膀胱粘膜组织为对照，11例膀胱肿瘤组织中有87个基因表达明显下调，102个基因表达明显上调．其中有15个基因的表达在原发膀胱癌组织及复发膀胱癌组织呈相反变化。结论：膀胱肿瘤与正常膀胱粘膜组织之间存在大量差异表达的基因，说明膀胱肿瘤的发生与发展是多种肿瘤相关基因表达失常或肿瘤抑制基因失活所致：在原发膀胱癌组织及复发膀胱癌组织中呈反向变化的15个基因可能与膀胱癌的复发有关。     

微小RNA-106a在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响

目的:观察微小RNA-106a（miR-106a）在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响。方法:提取35例膀胱癌组织及正常膀胱组织中的总RNA，实时定量RT-PCR法检测miR-106a在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达量；培养膀胱癌T24细胞，分成实验组及对照组，实验组转染miR-106a mimics，对照组转染空白脂质体，噻唑蓝(MTT)法检测转染miR-106a mimics后对T24细胞增殖的影响，流式细胞仪检测T24细胞周期变化，Transwell侵袭小室检测T24细胞侵袭能力。结果:膀胱癌组织中miR-106a的表达量显著低于正常膀胱组织。膀胱癌T24细胞转染miR-106a mimics后，T24细胞增殖能力降低，细胞周期停滞于G1期，Transwell侵袭小室检测提示T24细胞侵袭能力降低。结论:miR-106a的表达量在膀胱癌组织中减少，miR-106a过表达抑制膀胱癌T24细胞的增殖及侵袭能力。     

TSHZ3在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞生物学功能的影响

目的:采用生物信息学分析TSHZ3基因在膀胱癌组织中的表达水平,并通过体外实验探讨TSHZ3基因对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及对上皮-间质转化相关蛋白的调控作用。方法:运用Oncomine和GEPIA数据库分析TSHZ3基因在膀胱癌组织中的表达水平,利用HPA数据库分析TSHZ3蛋白在正常膀胱和膀胱癌组织中的表达情况,并收集膀胱癌标本验证TSHZ3蛋白的表达。在膀胱癌T24细胞中转染TSHZ3质粒,CCK8法和克隆形成实验检测过表达TSHZ3基因对T24细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达TSHZ3基因对T24细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测过表达TSHZ3对上皮-间质转化相关蛋白的影响。结果:Oncomine和GEPIA数据库显示TSHZ3基因在膀胱癌组织中的表达水平降低。HPA数据库表明TSHZ3蛋白在正常膀胱尿路上皮组织中呈中等强度染色,而在膀胱尿路上皮癌组织中呈弱-中等强度染色。免疫组化结果显示TSHZ3在癌旁组织中呈现高表达,在膀胱癌组织中呈现低表达。过表达TSHZ3显著抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力。过表达TSHZ3增加E-cadherin蛋白的表达,降低N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结论:TSHZ3基因在膀胱癌中低表达,可作为抑癌基因抑制膀胱癌的发展。     

VEGF和bFGF共同表达与膀胱癌生物学行为的关系

目的 探讨血管生成因子在膀胱移行细胞癌发生、发展中的作用。方法 应用免疫组化方法，对62例原发性膀胱移行细胞癌及8例正常膀胱组织 血管内皮生长因子（VEGF）和碱性纤维细胞生长因子（bFGF）进行检测。结果 膀胱癌组织中VEGF和bFGF阳性表达率分别为56.5%和46.8%，共同表达率为33.9%。VEGF和bFGF表达与膀胱癌的病理分级、临床分期、复发及3年生存率密切相关。结论 VEGF和bFGF表达对膀胱癌生物学行为有重要影响，VEGF和bFGF共同表达对于判定膀胱癌复发、转移和预后更有价值。     

miRNA-451在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨miRNA-451在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中的表达水平及其与膀胱癌临床病理特征的关系.方法 采用RT-qPCR检测miRNA-451在30例膀胱癌、18例癌旁组织、15例正常膀胱组织及3个不同转移潜能的膀胱癌细胞株中的表达水平,分析其表达与膀胱癌临床病理特征的关系.结果 miRNA-451在癌组织及癌旁组织中的表达水平明显低于正常组织,且其表达水平和膀胱癌临床分期及病理分级相关,P＜0.01.miRNA-451在低度转移潜能的癌细胞株中的表达水平高于具有高转移潜能的细胞株,P＜0.01.结论 miRNA-451在癌组织及高转移潜能细胞株中呈低表达,且其表达水平与膀胱癌临床病理特征及癌细胞转移潜能密切相关,可能是膀胱癌潜在的调控基因.     

MMP-2和PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metaloproteinase-2,MMP-2)和PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学PV-6000通用型二步法检测65例膀胱癌及10例正常膀胱组织中MMP-2和PTEN蛋白的表达。结果:MMP-2在正常膀胱组织中不表达,在65例膀胱癌组织中的阳性表达率为56.9%;随着肿瘤细胞病理分级、临床分期的增加,MMP-2阳性表达率逐渐增高,各组间比较差异有统计学意义,P<0.05。PTEN蛋白在正常膀胱组织中均呈阳性表达,在65例膀胱癌组织中的阳性表达率为46.2%;随着癌细胞病理分级、临床分期的增加,PTEN蛋白阳性表达率逐渐减低,各组间比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:MMP-2和PTEN蛋白异常表达与膀胱癌的发生发展关系密切,检测两者在膀胱癌组织中的表达,可作为判断膀胱癌发生发展的有用指标。     

四种基因在单发和多发性膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨p16、p21、p53和上皮细胞膜抗原(EMA)在单发性和多发性膀胱癌组织中的表达及意义。方法收集临床正常、单发和多发性膀胱癌标本,通过免疫组化法检测膀胱癌组织中相关基因的蛋白表达和定位分布。结果与正常膀胱黏膜上皮相比,p16和p53蛋白定位于细胞核,随着膀胱癌恶性程度的升高和侵袭程度的增加,p16蛋白表达明显下降,而p53表达明显升高(P<0.05)。p21蛋白定位于细胞膜,高分化膀胱癌的p21蛋白表达低于低分化膀胱癌(P<0.05);多发性膀胱癌表达阳性率明显高于单发性(P<0.05)。EMA主要表达于细胞浆,随着肿瘤分级和(或)分期的增加,阳性细胞数逐渐减少(P<0.05),在单发和多发性膀胱癌中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p16、p53、p21和EMA在膀胱癌组织中不同水平的表达与膀胱癌的分级/分期密切相关,对膀胱癌相关基因的检测有助于膀胱癌的临床诊断、预后判断和治疗方法的选择。     

MNU诱导大鼠膀胱癌基底膜病变与LN的相关性

目的观察N-甲基亚硝基脲(MNU)在诱导SD雌性大鼠膀胱癌的过程中,膀胱基底膜的病变情况与层粘连蛋白(Laminin,LN)的相关性。方法MNU 2 mg/次进行大鼠膀胱灌注,间隔2周,共4次;然后继续正常喂养6周,14周为诱癌终点。分别在MNU灌注后1周及诱癌终点14周用病理学检测观察膀胱粘膜变化情况;免疫组织化学检测基底膜中LN的表达情况,分析其相关性。结果病理结果显示:MNU灌注后膀胱粘膜经过了炎症性改变、异型增生、原位癌、浸润性癌等过程;免疫组化显示基底膜连续、完整的结构,出现断裂、缺损,最后视野下为散在碎片,无基底膜形态;LN在MNU诱导大鼠膀胱癌形成过程中随着基底膜的破坏逐渐减少,缺失;LN在基底膜中的表达在正常膀胱组织与膀胱癌之间存在差异性统计意义(χ2=25.37;P<0.01)。结论膀胱癌的发生、发展与基底膜的破坏密切相关,且LN的缺失是基底膜破坏导致膀胱癌的因素之一。     

膀胱癌中bFGF和血管形成的研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和血管形成与膀胱癌的发病及生物学行为之间关系。方法：采用免疫组化方法检测７２例膀胱癌组织和２１例正常膀胱组织中ｂＦＧＦ和第ＶＩＩＩ因子相关抗原表达。结果：膀胱癌组织中ｂＦＧＦ表达和微血管密度（ＭＶＤ）均显高于正常膀胱胱组织，而且两与肿瘤病理分级分期均密切相关。肿瘤复发的ｂＦＧＦ表达和ＭＶＤ均显高于复发，ｂＦＧＦ强阳性表达的ＭＶＤ值显高于阴性及弱阳性表达，结论：ｂＦＧＦ通过促进血管形成而在膀胱癌的发生发展过程中起着重要的作用，而且ｂＦＧＦ和ＭＶＤ可作为膀胱癌生物行为和预后的评估指标。     

miRNA-137在膀胱癌中的表达情况及对膀胱癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miRNA-137在膀胱癌中的相对表达量及其对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选取30例膀胱癌患者的膀胱癌组织和癌旁组织标本。实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测膀胱癌组织和癌旁组织中的miRNA-137的相对表达量,检测不同病理分级膀胱癌患者膀胱癌组织中miRNA-137的表达量及其与膀胱癌病理分级的相关性。将mimic-NC、miRNA-137 mimic、miRNA-137 inhibitor质粒转染至膀胱癌T24细胞,并分别作为空白组、过表达组和低表达组,RT-PCR法检测3组细胞miRNA-137的相对表达量,Transwell小室检测3组细胞的迁移和侵袭能力。结果浸润性膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量明显高于非浸润性膀胱癌组织和癌旁组织(P﹤0.01);病理分级为Ⅳ级的膀胱癌患者膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量明显高于病理分级为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的患者(P﹤0.01)。过表达组迁移和侵袭细胞数目均高于空白组细胞(P﹤0.05);低表达组迁移和侵袭细胞数目均低于空白组细胞(P﹤0.05)。结论浸润性膀胱癌组织和病理分级为Ⅳ级的膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量较高,上调miRNA-137的表达可以促进膀胱癌细胞侵袭和迁移,抑制其表达可以抑制膀胱癌细胞的迁移和侵袭。     

尿液MMP-2 MMP-9定量检测在膀胱癌筛检中的价值

膀胱肿瘤的发生、发展和侵袭转移与其细胞外微环境的改变有密切的联系，大量实验表明：膀胱癌细胞的分化，浸润及转移与其诱导产生基质金属蛋白酶（matrixmelauoproteinoses，MMPs）的水平密切相关，而其中的MMP-2和MMP-9参与降解细胞外基质（extracellular matrix，ECM）和基底膜（basement mambrance，BM）的主要成分Ⅳ型胶原，是最为重要的两种蛋白酶，在癌细胞的侵袭和转移中有重要的作用。本文通过对膀胱癌患者手术前、后尿液中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的含量进行同步定量检测和对比分析，以探讨MMP-2、MMP-9在膀胱癌早期诊断中的价值。