坐骨神经损伤后脊髓前角神经元形态学的观察

目的 研究大鼠坐骨神经损伤后，脊髓前角运动神经元胞体形态学的变化，以探讨其主要死亡性质。方法 切断大鼠右侧坐骨神经，再原位吻合，手术后不同时间取腰4--腰6(L4-L6)节段脊髓，作石蜡切片，通过苏木素—伊红(HE)染色，光镜下观察脊髓前角运动神经元胞体的形态学变化特征；作超薄切片，电镜下观察脊髓前角运动神经元胞体超微结构的变化情况。结果 右侧脊髓前角运动神经元胞体尼氏体和细胞核染色质浓缩(光镜下)；电镜下，细胞膜内陷，将细胞分割成凋亡小体，然后裂解、细胞体消失；而左例脊髓前角运动神经元胞体均一、无变化。结论 坐骨神经损伤后，脊髓前角运动神经元有死亡，死亡性质主要是细胞凋亡。     

重组心肌营养素-1对成年大鼠坐骨神经损伤后脊髓前角神经元存活的研究

心肌营养素 1(CT 1)是一种新的细胞因子 ,能够刺激体外新生大鼠心肌的生长[1,2 ] 。本实验旨在是观察重组CT 1对成年大鼠坐骨神经损伤后脊髓前角神经元的存活作用。一、材料与方法1.材料 :重组心肌营养素 1(rCT 1)为大肠杆菌表达及纯化而得到。采用PCR及T A克隆将huCT 1开放阅读框基因克隆到 pMD 18T载体上 ,再构建原核表达载体pGEX2T huCT1。在不同温度不同时间 ,通过IPTG诱导 pGEX2T huCT1在DH5a大肠杆菌中表达 ,SDS PAGE分析表达量和可溶性蛋白比例。GST亲和柱纯化huCT 1融合蛋白 ,凝血酶酶切融合蛋白并纯化。2 .方…     

GDNF对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：证实胶质源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对脊髓前角运动神经元有保护作用。方法：切断SD大鼠一侧坐骨神经建立脊髓前角运动神经元损伤模型。借助单盲端硅胶管系统在损伤神经局部给予GDNF，术后不同时间分别取L5脊髓切片，利用酶组织化学染色方法显示胆碱酯酶（CHE）和酸性磷酸酶（ACP）活性并进行图像分析。结果：坐骨神经切断可导致腰段脊髓前角运动神经元明显损害，表现为CHE活性降低。ACP活性升高；应用GDNF可显著改善上述酶学变化。结论：GDNF对损伤的脊髓前角运动神经元有保护作用。     

FK506对GAP-43和Tau蛋白活性影响的实验研究

目的观察FK506缓释膜片对大鼠神经损伤后生长相关蛋白(Growthassociatedprotein43,GAP43)和Tau蛋白活性的影响。方法将FK506缓释膜片(释放速度为1mg·d,共21d)放置于损伤坐骨神经周围为实验组,损伤坐骨神经周围不放置药物者为对照组。于术后3d,术后1、2、3、4、6和8周共7个时间组,分别取神经缝合口近端和远端的神经段、腰段脊神经节及脊髓腰膨大,用SABC法检测GAP43及Tau蛋白的阳性标记量。结果实验组于术后1～4周已出现GAP43及Tau蛋白表达增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论FK506能增加GAP43及Tau蛋白表达,对周围神经损伤后的神经再生有一定的促进作用。     

大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段中P-S473-AKT表达的变化

目的 探讨成年Wister大鼠在坐骨神经切断后P-S473-Akt于相应脊髓节段前角运动神经元内的表达变化.方法 选取健康成年雄性Wister大鼠50只,随机分为坐骨神经切断组和对照组,分别于术后1、2、4、6、8周5个时相处死后取其L4～L6脊髓,利用免疫组织化学技术检测P-S473-Akt在相应脊髓节段中的表达变化,并利用影像分析系统进行统计学分析.结果 在对照组中P-S473-Akt表达呈阴性,随着时间的变化无明显改变.坐骨神经切断组与对照组在5个时相中的变化:1周时两组比较差异无统计学意义;2周时坐骨神经切断组运动神经元胞体内P-S473-Akt有明显表达,4周时达到高峰,6～8周时逐渐下调,8周时仍可见细胞核内有少量表达.结论 坐骨神经切断可导致成年大鼠相应脊髓节段中前角运动神经元P-S473-Akt表达明显增加,可能对损伤的运动神经元发挥保护作用.     

蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化

将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.     

白细胞介素-1β对周围神经损伤后运动神经元的保护作用

目的　研究周围神经损伤后白细胞介素 1β(IL 1β)对周围神经运动神经元的保护作用。方法　将Wistar大鼠 2 0只 ,随机分为 2组 ,每只动物均切断右侧坐骨神经 ,以硅胶管套接于坐骨神经损伤近端 ,囊内分别给予 1μg/L的IL 1β和磷酸缓冲液 (PBS)各 15 μl。术后 2周 ,应用酶组织化学方法进行相应节段脊髓前角α运动神经元一氧化氮合酶 (NOS)和乙酰胆碱酯酶 (AchE)染色 ,通过标准网格法进行神经元计数并应用计算机图像分析测定胞体的直径和面积。结果　与正常侧对比 ,对照组损伤侧脊髓前角α运动神经元NOS活性明显增高 ,实验组的差异无显著性 (P <0 .0 5 )。损伤侧实验组 3 .8± 1.4、对照组 11.4± 2 .6,差异有非常显著性 ;对照组损伤侧神经元胞体直径 (2 7.84± 5 .2 7)cm、面积 (63 0 .2 4± 2 5 2 .97)cm2 ,未损伤侧直径 (2 3 .3 1± 3 .87)cm、面积 (4 3 8.47± 14 2 .14 )cm2 ,损伤侧明显增加。结论　周围神经损伤后 ,外源性IL 1β对脊髓前角α运动神经元具有保护作用。     

鞘内注射γ-氨基丁酸转运体-1特异性小干扰RNA对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨鞘内注射γ-氨基丁酸转运体-1(GAT-1)特异性小干扰RNA(siRNA)对大鼠神经病理性痛的影响.方法 雄性SD大鼠,体重200～250 g.第一部分实验20只大鼠随机分为5组(n=4):GAT-1 siRNA-1组、GAT-1siRNA-2组、GAT-1 siRNA-3组、阴性对照siRNA组和DEPC处理组.坐骨神经结扎2 d后鞘内注射相应的siRNA 2μg/d或等容量DEPC水,连续3 d,于末次鞘内注射后第2天取大鼠脊髓腰膨大,采用Western blot法检测脊髓背角GAT-1蛋白的表达.第二部分实验 30只大鼠随机分为3组(n=10):GAT-1 siRNA-3+lipo2000组、GAT-1 siRNA-3错译siRNA+lipo2000组和DEPC处理+lipo2000组,于坐骨神经结扎前、坐骨神经结扎后3 d、鞘内续给药结束后1、3、5、7、10 d时测定机械痛阈和热痛阈.第三部分实验84只大鼠随机分为3组(n=28),同第二部分实验,于各时点每组随机取4只大鼠处死,取脊髓腰膨大,采用Western blot法测定脊髓背角GAT-1蛋白的表达.结果 鞘内注射GAT-1 siRNA后神经病理性痛大鼠机械痛阈和热痛阈升高,脊髓背角GAT-1蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射GAT-1 siRNA可通过抑制脊髓背角GAT-1蛋白表达上调,减轻大鼠神经病理性痛.     

银杏叶提取物对周围神经损伤后运动神经元的保护作用

目的　研究银杏叶提取物在大鼠坐骨神经损伤后对运动神经元的保护作用。方法　SD大鼠 3 6只 ,按手术先后随机平分为银杏叶提取物 (EGb 761)组和生理盐水 (SAL)组。大鼠均制成坐骨神经部分切除后结扎断端的模型 ,术后每天经腹腔分别注射EGb 761(10 0mg/kg-1·d-1)和同体积的生理盐水直到取材。术后 2、4、6周取材 ,大鼠处死后取L4～ 6节段脊髓 ,经酶组化染色后观察乙酰胆碱脂酶 (AChE)及酸性磷酸酶 (ACP)的活性变化 ;冰冻切片硫槿染色后对前角大型运动神经元计数 ;电镜观察脊髓前角运动神经元超微结构的变化。结果　与对照组相比 ,银杏叶提取物组的乙酰胆碱脂酶、酸性磷酸酶活性、损伤侧前角运动神经元数目及前角运动神经元超微结构 ,均有明显的改善。结论　银杏叶提取物对周围神经损伤后的脊髓前角运动神经元损害有保护作用     

兔坐骨神经火器伤后腰段脊髓一氧化氮和一氧化氨合酶的变化及其意义

目的　探讨兔坐骨神经火器伤后腰段脊髓一氧化氮 (NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性变化规律及在细胞凋亡发生中的作用。方法　大耳白兔 94只 ,火器伤组致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点 ,切割伤组在同一致伤水平切断坐骨神经 ,应用DNA电泳、原位末端标记法 (TUNEL)进行腰段脊髓细胞凋亡定性检测 ,流式细胞术进行定量检测 ,同时对腰段脊髓NO含量和NOS活性进行检测。结果　火器伤组 1周和 2周时 ,运动神经元和胶质细胞发生了凋亡 ,切割伤组 4周时有少量运动神经元发生凋亡。火器伤组 1、3d、1、2周时 ,脊髓NO含量显著升高 (P <0 .0 1 ) ;3d、1周、2周时 ,NOS活性升高 (P <0 .0 5 ,0 .0 1 )。结论　火器伤组细胞凋亡发生早、数量多 ,NO和NOS变化是其发生原因之一。     

胶质细胞活化对慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征(CP/CPPS)大鼠脊髓背角P物质的影响

目的探讨胶质细胞活化对慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndromes,CP/CPPS）大鼠脊髓背角P物质的影响。方法完全福氏佐剂和3%角叉菜胶前列腺内注射造成CP/CPPS模型,脊髓插管给药胶质细胞活化抑制剂Propentofylline干扰CP/CPPS模型大鼠,免疫组织化学方法观察正常组、疼痛模型组、药物干扰组脊髓节段（L6和S1）背角的胶质细胞的活化和P物质的定性定位,并用放射免疫的方法观察三组脊髓背角P物质的变化。结果脊髓背角胶质细胞活化阳性细胞数疼痛组明显增加,药物干扰组明显减少;P物质主要表达于脊髓背角且疼痛模型组明显增多,药物干扰组明显减少。结论胶质细胞活化是CP/CPPS大鼠脊髓背角P物质变化的重要原因,胶质细胞活化抑制剂的应用将是治疗CP/CPPS的新亮点。     

星形胶质细胞活化对慢性前列腺炎大鼠模型脊髓背角P物质的影响

目的:探讨星形胶质细胞活化对慢性前列腺炎模型大鼠脊髓背角P物质的影响。方法:SD雄性大鼠60只随机分为正常组(n=20)、疼痛组(n=20)、干扰组(n=20),完全福氏佐剂和3%角叉菜胶前列腺内注射造成慢性前列腺炎疼痛模型,脊髓插管给药胶质细胞活化抑制剂干扰慢性前列腺炎疼痛模型大鼠,免疫荧光法观察正常组、疼痛组、干扰组脊髓节段(L6和S1)背角星形胶质细胞的活化和P物质的分布,并用放射免疫法观察3组脊髓背角P物质的变化。结果:与正常组比较,脊髓背角星形胶质细胞活化阳性细胞数疼痛组明显增加(P<0.01),而干扰组较疼痛组明显减少(P<0.01),P物质主要表达于脊髓背角且疼痛组明显增多(P<0.01),干扰组明显减少(P<0.01)。结论:星形胶质细胞活化是慢性前列腺炎疼痛大鼠脊髓背角P物质变化的重要原因之一。     

大鼠尺神经功能储备的实验研究

目的 研究尺神经部分束支切取后主干功能变化,提出"周围神经功能储备"的概念,探讨其功能储备量.方法 取3月龄SD大鼠220只,雌雄各半,体重300～350 g.随机分为实验组和对照组(n=110),再根据尺神经切取比例将实验组分为1/8组、1,4组、1/3组、1/2组和2/3组(n=22).根据分组情况,各实验组在10倍手术显微镜下,用微细玻璃针交叉定位的方法切取相应比例尺神经束;对照组于相同平面仅分离神经柬.观察术后大鼠一般情况,于术后1、2周及2个月检测脊髓前角α运动神经元;术后2周,2、3及4个月.行电生理学及支配肌功能学检测.结果 术后大鼠均存活至实验完成,切口无感染,肢端无明显溃疡.各实验组间脊髓前角α运动神经元数量无明显变化(P＞0.05).1/2组和2/3组于术后1周及2周的超微结构变化明显,其他各组变化不明显:术后2个月后各组均恢复正常.术后各时间点,各实验组诱发电位潜伏期与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);各实验组同组术后2、3及4个月诱发电位潜伏期与术后2周比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其余各时间点间差异无统计学意义(P＞0.05).术后各时间点,各实验组诱发电位波幅、支配肌最大强直收缩力波幅和持续时间分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);各实验组同组术后2、3及4个月分别与术后2周比较,差异有统计学意义(P＜0.05);其余各时间点间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 尺神经功能良好代偿的功能储备量为其主干直径的1/3.     

许旺细胞源神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的 了解许旺细胞源神经营养因子对神经损伤所致脊髓前角运动神经元死亡的保护作用。方法 选用出生３周ＳＤ鼠切断坐骨神经,神经近侧行旺细胞源神经营养因子或生理盐水,４周后观察腰４－５节段脊髓前角运动神经元的存活率和一氧化氮合成酶表达情况。结果术后４周,营养因子组神经元的存活率是９３．４％,生理盐一是５９．６％,两组一氧化氮合酶表达均未见增加。结论 许旺细胞源神经营养因子对员的俏髓前角运动神经元有明显     

睫状神经营养因子对周围神经损伤后再生的影响

目的 研究睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对周转神经损伤后再生的影响。方法 用硅胶管桥接大鼠双侧坐骨神经缺损,形成神经再生室。左侧室内注入基因重组人ＣＮＴＦ,右侧注入生理盐水（ＮＳ）。术后１４、３０、６０和９０天取材,行大体、光镜、电镜观察。术后９０天行轴突图像分析、电生理检测及霍乱毒素－辣根过氧化物酶（ＣＢ－ＨＲＰ）逆行追踪。结果 与对照侧相比,实验侧再生有髓神经纤维数目较多、轴突较粗且髓鞘较厚,复合肌肉动作电位（ＣＭＡＰ）的潜伏期较短、神经传导速度较快且波幅较高。实验侧ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓前角运动细胞数明显多于对照侧。结论 外源性ｈＣＮＴＦ有明显促进周围神经再生作用。     

大鼠臂丛神经根吻合后脊髓病理改变和轴突再生的研究

目的 评价臂丛神经根椎孔外断裂后神经根直接吻合的可行性.方法 取4～6月龄SD大鼠48只,雌雄不限,体重250～300 g.手术分离左侧C5～7神经根至臂丛神经干部,于椎孔外根干交界部位切断C5～7神经根,切断后即刻吻合(实验侧);右侧不作处理(对照侧).术后观察大鼠一般情况,于术后3周,3、6个月取材,行大体、组织学观察及BDA神经示踪技术,观察肱二头肌湿重变化,脊髓前角α运动神经元和神经元内尼氏体数目及形态的改变,周围神经纤维再生数目、距离,轴索和髓鞘发育情况.结果 大鼠术后存活良好.实验侧术后呈跛行步态,出现展爪反射;3个月后展爪反射消失;对照侧正常.大体观察,实验侧术后6个月内神经粘连加重,吻合口两侧神经干干瘪,无光泽;对照侧正常.术后3周和3个月实验侧及对照侧肱二头肌湿重分别为(0.28±012)、(1.37±0.33)g和(0.58±0.10)、(1.36±0.35)g,差异有统计学意义(P＜0.05);6个月时分别为(1.39±0.31)、(1.37±0.38)g,差异无统计学意义(P＞0.05).实验侧脊髓和上干改良Marsland与LFB双重染色后观察脊髓内神经元数目减少,胞体由肿大到皱缩,细胞核和尼氏体减少;上干内染色完整的神经纤维逐渐增多,神经轴索较细,髓鞘淡染.术后3周、3个月、6个月实验侧脊髓前角α运动神经元数目分别为对照侧的84.5%±3.2%、74.4%±4.5%、73.7%±3.8%.实验侧肱二头肌HE染色观察术后3个月内变性明显,之后逐渐恢复;对照侧无明显变性.术后6个月神经纤维BDA染色观察:神经越靠近近端,髓鞘着色越明显,轴突越粗大:越靠近远端时情况相反,并可见到轴突中断.肌皮神经入肌点处偶见阳性标记的神经髓鞘和轴突.结论 臂丛神经根椎孔外断裂即刻吻合后,脊髓前角α运动神经元坏死比率为20%～30%,残存神经元多为受损神经元,再生神经纤维表现为动力不足和发育不全,对终末器官功能恢复无意义.肱二头肌恢复机制有待进一步研究.     

雄性大鼠盆底横纹肌运动神经元的定位分布

目的：探讨研究正常雄性大鼠盆底横纹肌运动神经元的定位分布。方法：分别用辣根过氧化物酶(HRP)、荧光金(FG)注射于正常雄性SD大鼠的尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌、肌门外括约肌，行逆行神经追踪。结果：尿道外括约肌或坐骨海绵体肌注射HRP或FG后，标记神经元位于脊髓L5～S1段前角背外侧核；球海绵体肌或肛门外括约肌注射HRP或FG后，标记神经元位于脊髓L5～S1段前角背内侧核。结论：雄性大鼠支配盆底横纹肌的运动神经元位于两个区域：支配坐骨海绵体肌运动神经元聚集分布于脊髓L5～S1(以L6多见)段前角背外侧核；支配球海绵体肌和肛门外括约肌的运动神经元主要聚集分布于脊髓L5～S1(以L6多见)段前角背内侧核。     

Does spinal instrumentation influence the healing process of posterolateral spinal fusion? An in vivo animal model.

STUDY DESIGN: An in vivo sheep model was used to investigate the effect of spinal instrumentation on the healing process of posterolateral spinal fusion. OBJECTIVES: To examine the role of spinal instrumentation during the healing process of posterolateral fusion. SUMMARY OF BACKGROUND DATA: In long bone fractures, internal fixation improves the union rate but does not accelerate the healing process. Spinal instrumentation also improves the fusion rate in spinal arthrodesis. However, it remains unclear whether the use of spinal instrumentation expedites the healing process of spinal fusion. METHODS: Sixteen sheep underwent posterolateral spinal arthrodeses at L2-L3 and L4-L5 using equal amounts of autologous bone. One of those segments was selected randomly to be augmented with transpedicular screw fixation (Texas Scottish Rite Hospital spinal system). The animals were killed at 8 weeks or 16 weeks after surgery. Fusion status was evaluated by biomechanical testing, manual palpation, plain radiography, computed tomography, and histology. RESULTS: Instrumented fusion segments demonstrated significantly higher stiffness than did uninstrumented fusions at 8 weeks after surgery. Radiographic assessment and manual palpation showed that the use of spinal instrumentation improved the fusion rate at 8 weeks (47% versus 38% in radiographs, 86% versus 57% in manual palpation). Histologically, the instrumented fusions consisted of more woven bone than the uninstrumented fusions at 8 weeks after surgery. The 16-week-old fusion mass was diagnosed biomechanically, radiographically, and histologically as solid, regardless of pedicle screw augmentation. CONCLUSION: The current study's results demonstrated that spinal instrumentation creates a stable mechanical environment to enhance the early bone healing of spinal fusion.     

Intradiscal pressure changes with dynamic pedicle screw systems

STUDY DESIGN: In vitro study using porcine spines instrumented with pedicle screw and rod fixation. OBJECTIVES: To determine the intradiscal pressure (IDP) changes with the use of dynamic and rigid pedicle screw systems in simulated spinal fusion. SUMMARY OF BACKGROUND DATA: The intervertebral discs are prone to injury under conditions of altered IDP. The effects of instrumentation with dynamic pedicle screw systems on IDP have not been clearly delineated. METHODS: A 2-level posterior instrumentation was applied to fresh porcine spinal segments (n=16). Dynamic and rigid pedicle screw constructs along with uninstrumented (n=6) spinal segments as controls were tested. The spinal segments were subjected to 24,000 cycles of flexion compression loading at 5 Hz. IDP within the instrumented (L2-L3 and L3-L4) and adjacent (L1-L2 and L4-L5) discs were measured using a pressure transducer needle. Results were recorded at 6000 cycle intervals. RESULTS: Instrumentation increased IDP. Within the instrumented levels, the greatest increase in IDP was found at the L2-L3 disc. Here, after 24,000 loading cycles, IDP for spines instrumented with mobile screws was 6.8 times higher than that of uninstrumented spines whereas for rigid screws the factor was 9.1. For the L3-L4 cases, the presence of instrumentation increased IDP by factors of 1.7 and 2.7 for mobile and rigid screws, respectively. In the uninstrumented levels, IDP at L1-L2 and L4-L5 was lower with mobile screws. These were statistically significant at for L1-L2 (24,000 cycles, P=0.008) and L4-L5 level (12,000, 18,000, and 24,000 cycles, P<0.04 in all cases). CONCLUSIONS: Of the 2 types, mobile screws produced the least increase in IDP. This feature might be beneficial for the fusion process while at the same time prevent secondary pathology such as premature disc degeneration and facet joint pathology due to excessive disc pressures.     

损伤大鼠坐骨神经诱导运动神经元凋亡的初步报告

目的探索成年大鼠坐骨神经高位损伤后是否出现运动神经元细胞的凋亡。方法取鼠龄为５～６周的成年雄性ＳＤ大鼠２４只,体重１２０～１５０ｇ。大鼠分组：（１）正常对照组,６只大鼠;（２）实验组：１８只大鼠。高位切断并结扎其坐骨神经,按手术先后随机分成术后５、１４、２１天３个不同时间组。按术后不同时间处死动物。用４％多聚甲醛经心脏灌注后,切取Ｌ４～６节段腰髓,制成石蜡切片。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的ｄＵＤＰ标记法标记凋亡的神经元。结果对照组未出现阳性标记的细胞。神经损伤后第５天有１只大鼠伤侧前角出现３个阳性标记的凋亡运动神经元。伤后第１４天、２１天出现凋亡神经元的数目分别为２．２±１．２及５．２±２．３个（ｘ±ｓｘ,下同）。结论当成年大鼠坐骨神经切断并被结扎后,由于阻断了神经营养因子的逆行运输,可以导致运动神经元的凋亡。