一种新的胃癌中性糖脂抗原MG_7-Ag的纯化及分析

本文应用本室制备的一株经免疫病理、细胞学诊断、动物及人体内放射免疫显象均已证实,对胃癌有较好反应性的鼠抗人胃癌单抗MG_3。用电泳纯化单抗MG_735.6mg,制备免疫亲和层析柱,从胃癌组织及胃癌转移性腹水癌细胞中获得一种胃癌相关抗原命名为MG_7-Ag。     

肝癌抗原特异性的检测

目的　检测两种新的人肝细胞癌 (HCC)抗原 (编号为HCC 1 8a和HCC 3 13)对HCC的特异性。方法　应用重组克隆表达抗原的血清学技术 (SEREX) ,用异体HCC血清和非HCC血清检测两种新的HCC抗原的特异性。结果　相应的抗体主要见于HCC患者 ,阳性反应率分别为 80 % (8/ 10 )及 90 % (9/ 10 ) ;胃癌为 0及 2 0 % (1/ 5 ) ;正常人各为 7.1% (2 / 2 8) ;乳癌为 0。结论　两种新的HCC抗原对HCC有高度特异性 ,可考虑作为HCC血清学诊断的指标之一。     

两株新的抗肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及特异性鉴定

以外科手术切除的肝癌标本制备的细胞悬液和新建株的肝癌细胞为免疫原。籍多免疫除经致敢ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经２０次融合，从近１０，０００个融合孔中，筛选出两株（ＨＡＢ２５，ＨＡｂ２７）肝癌单克隆抗体，在９４例肝癌１４１例其他肝病组织，２６种正常组织，１２９例各组织系统的肝外恶性肿瘤组织上做了交叉反应，除ＨＡｂ２７与毛细胆管有弱的反应外，两株抗体与肝癌细胞结合的阳性率高（８３．１５％，８５．１１％），仅与     

新的结肠癌相关抗原MC3—Ag的纯化及鉴定

作者利用饱和硫酸铵沉淀和ＤＥＡＥ５２离子层析柱纯化本中心自制结肠癌单克隆抗体ＭＣ３，以此为配基与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ偶联，经免疫亲和层析从自制可溶性结肠癌抽提液中纯化出一种新的肠癌肿瘤相关抗原ＭＣ３－Ａｇ。其特性分析表明，ＭＣ３－Ａｇ可为高碘酸氧化或强佥水解，而对胰蛋白酶、神经氨酸酶、去糖酯混合液及弱佥处理不敏感，提示其决定族可能位于Ｎ糖苷键型糖蛋白糖链上。ＳＤＳ－ＰＡＣＥ弱及免疫印迹分析表明     

人胃腺癌组织中Le~x糖脂抗原的分离纯化

<正> Le~x糖脂是一组带有x决定簇[Gal B_1-4Fu(1-3 Glc NAc)]的糖脂,一系列的研究提示为胚胎抗原。已知变癌时,细胞表面正常的糖脂标记减少或消失,出现新的肿瘤相关糖脂标记。据报道,国外已从人消化系统腺癌组织中提取出一系列具有Le~x血型活性的糖脂组织抗原用于癌肿的诊断,并获得单克隆抗体。本文参考Hakomori等介绍的方法,从人胃腺癌组织中分离得到具有Le~x血型活性的糖脂抗原-6B神经节苷脂,现报告如下。     

抗结肠癌单抗CL—4对应抗原性质及决定簇的初步分析

本文对本室制备抗结肠癌单克隆抗体CL-4的对应癌相关抗原进行了初步分析,证明该抗原的性质为糖脂和糖蛋白;其抗原决定簇为一种含涎酸的碳水化合物结构,可能是结肠癌细胞膜上的神经节苷酯和癌细胞内的粘液性大分子糖蛋白,其分子量分别为115-205KD和256KD。并研究了CL-4和CA19-9两种单抗所作用的对应抗原决定簇是否相同。根据添加指数为28％,此值稍大于25％,表明这两种单抗所识别抗原决定簇不完全相同。该抗原可能是一种新的含涎酸的结肠癌标志物。     

肝癌相关抗原HAg18—1ELISA诊断药盒对肿瘤病人血清学诊断的临床意义

本文报告用ＨＡｇ１８－１ ＥＬＩＳＡ诊断药盒测定肝细胞肝癌病人，胃、肠、肺、乳腺等多种恶性肿瘤病人血清及对肿瘤组织浸液的ＨＡｇ１８－１阳性率，其数值分别为８０．０％－８６．１％、４４．２％－７６．２％和６２．０％。肝细胞肝癌的阳性率最高，在多种恶性肿瘤病人中广泛交叉存在、且血清阳性的６个病例手术探查肝脏正常。但ＨＡｇ１８－１在术后临床无病阶段的多种恶性肿瘤病人及非肿瘤对照者阳性率很低，分别为４．１     

免疫亲和层析纯化大肠癌相关抗原

目的 :从培养的大肠癌细胞Hce 86 93中分离纯化并鉴定大肠癌相关抗原。方法 :利用流式细胞术选择高表达大肠癌相关抗原的大肠癌细胞系 ,分别用单去污及三去污裂解液裂解细胞。然后用 5株抗大肠癌单克隆抗体 (mAb)CYL 1～CYL 5进行Westernblot,分析与大肠癌细胞结合反应最强的mAb。以此mAb作为配基进行亲和层析纯化大肠癌相关抗原 ,纯化结果利用Westernblot法进行鉴定。结果 :大肠癌细胞系Hce 86 93上相关抗原的表达量最高 ;抗大肠癌mAbCYL 2与Hce 86 93的结合力最强。纯化所获与CYL 2特异结合的大肠癌相关抗原 ,Mr 约为 13× 10 3 。该抗原由Mr 为 6 0× 10 3 和70× 10 3 两种亚基组成。结论 :利用mAbCYL 2进行亲和层析 ,从大肠癌细胞系Hce 86 93中获得纯化的肿瘤相关抗原。     

抗肝癌NMP单克隆抗体的制备及初步鉴定

为制备出具较高特异性抗肝癌核基质蛋白单克隆抗体,以用于肝癌的基础和临床的研究。首次免疫用肝癌细胞纯核,用高盐抽提法提取的肝癌细胞核基质蛋白加强免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,ＥＬＩＳＡ法同时测定培养上清对肝癌核基质蛋白及正常肝细胞核基质蛋白的免疫反应,ＬＳＡＢ法进行单抗的鉴定。结果：建立了一株能稳定分泌抗肝癌核基质蛋白单抗的杂交瘤细胞株２Ｇ８,染色体数目为８６－９２,Ｉ     

─株特异抗人血浆Lp（a）单克隆抗体（A5g3）的制备及特征分析

用序列超速离心和柱层析分离纯化的人血浆脂蛋白（ａ）（Ｌｐ（ａ））免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，得到具有对Ｌｐ（ａ）高抗体活性的小鼠脾细胞，与小鼠ＮＳ１骨髓瘤细胞经聚乙二醇（ＰＥＧ）杂文融合，建立分泌特异抗人血浆Ｌｐ（ａ）的单克隆杂交瘤细胞系，对其中的─株单克隆细胞株──Ａ５ｇ３进行了初步分析。Ａ５ｇ３分泌的单克隆抗体类型为ＩｇＧ（２ａ），经间接ＥＬＩＳＡ法分析与Ｌｐ（ａ）有高度反应性，与低密度脂蛋白（ＬＤＬ）及血浆纤溶酶原（Ｐｇ）无反应，免疫印迹结果也表明，Ａ５ｇ３可与纯化的或血浆中的Ｌｐ（ａ）结合，与血浆中的其它成分和纯化的ＬＤＬ及Ｐｇ均不结合，因此Ａ５ｇ３是特异抗人血浆Ｌｐ（ａ）的单克隆抗体。Ａ５ｇ３与还原后的Ｌｐ（ａ）也不结合，说明其与Ｌｐ（ａ）的结合依赖于抗原的完整结构，具有此种特性的Ｌｐ（ａ）特异抗体国内少见报道。     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

一株与正常人细胞成分反应的巨细胞病毒单克隆抗体的鉴定

用ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原建立了一株分泌ＨＣＭＶＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株Ｎ４Ｅ６。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ＭｃＡｂ与ＨＣＭＶ抗原和正常人成纤维细胞（ＨＥＦ）抗原均有多条免疫沉淀带出现：与ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原反应的沉淀带为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ和４２Ｋ；与Ｄａｖｉｓ株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ；与８１６地方株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ，４４Ｋ；与ＨＥＦ抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ。表明Ｎ４Ｅ６除能识别ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株和８１６地方株特异成分７３Ｋ，外，尚能识别ＨＣＭＶ和ＨＥＦ共同成分８９Ｋ，８７Ｋ和４４Ｋ。     

抗hER合成肽单克隆抗体的制备与鉴定

用合成的人雌激素受体（ｈＥＲ）抗原决定簇多肽（氨基酸序列从１５１～１６５）与ＫＬＨ的偶联物为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经鼠－鼠杂交，ＥＬＩＳＡ和免疫细胞化学法筛选，有限稀释克隆化，得到一株分泌抗ｈＥＲ合成肽的杂交瘤细胞株（２Ｂ１２）。用ＥＬＩＳＡ法测定。该纯化抗体１０ｎｇ／ｍｌ仍与抗原反应，其免疫球蛋白为ＩｇＧ２ａ．ｋ。与ＭＣＦ－７乳腺癌细胞溶解蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，在分子量６７ｋＤ     

SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。方法以重组SARS—CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。结果共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS-CoV呈阳性反应。10株单抗的相对亲和常数在108～109mol／L^-1之间;10株中有1株为IgG2b。、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg/L。结论获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS-CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。     

6株抗rhlL－8单克隆抗体识别表位的鉴定及双单克隆抗体夹心法ELISA检测IL－8方法的建立

采用酶标抗体竞争结合试验对６株抗ＩＬ－８单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同可将６株单克隆抗体分为两组，一组包括２Ｇ２、４Ｃ３和４Ｅ１，识别相同或相近的表位；另一组包括４Ｄ７、５Ｃ９和５Ａ４，识别相同或相近的表位。在表位鉴定的基础上，选择识别不同表位的单克隆抗体用于建立双单克隆抗体夹心法ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－８，其中以４Ｄ７为包被抗体，４Ｃ３为酶标抗体的组合可获得最高的敏感性，对单核细胞源性ｒｈＩＬ－８（ＭＩＬ－８）及内皮细胞源性ｒｈＩＬ－８（ＥＩＬ－８）检测的敏感性可分别达到１５６ｐｇ／ｍｌ及３１２ｐｇ／ｍｌ。     

一组抗人重组IL－6单克隆抗体的制备及鉴定

以基因重组的人ＩＬ－６免疫了Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，利用小鼠杂交瘤技术，建立了２０余株分泌抗人重组ＩＬ－６单克隆抗体的杂交瘤，并对其中的Ｃ＿（９２）、Ｃ＿（９７）、Ｃ＿（２０３）、Ｃ＿（２２０）进行了较系统的鉴定，其抗体类别均为ＩｇＧ，亚类分别为ＩｇＧ＿（２ａ）、ＩｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ａ）和ＩｇＧ＿（２ａ）。它们均特异性地识别ＩＬ－６，而与多种其它因子和无关蛋白无交叉反应。免疫转印结果显示，各单抗均能识别分子量为１７ｋＤ的ＩＬ－６单一条带，并具有中和ＩＬ－６生物活性的效应。     

IgG重链同种异型Gm同肝癌的相关分析

对９５例肝癌患者、１８４例其他肿瘤患者、１９３例乙型肝炎患者，９４８例正常人进行了ＧＭ分型分析。结果显示，Ｇｍ（ｚａｘｆｂ０ｇ）与肝癌有关，连锁不平衡参数的相对△为５５．５％，Ｐ＜０．０１，单倍型Ｇｍ１，２，３，１１，２１的频率增高。可以认为，原发性肝癌的发生中存在着一种免疫学背景。     

SRBC膜提取物及其对猪PBMNC激活作用的研究

胰酶水解绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）膜得到粗提物，经离子交换层析部分纯化后，获得组分ＴＲＦ－Ⅲ（Ｔｒｙｐｓｉｎ－ｒｅｌｅａｓｅｄｆｒａｃｔｉｏｎⅢ）具有明显抑制ＳＲＢＣ与猪外周血淋巴细胞形成Ｅ玫瑰花的活性，花环形成率与ＴＲＦ－Ⅲ含量有明显的函数关系，电泳测定其分子量为６６ｋＤ。ＴＲＦ－Ⅲ单独作用尽管对ＰＢＭＮＣ的增殖无作用，但可增强ＰＨＡ刺激ＰＢＭＮＣ的增殖作用，ＴＲＦ－Ⅲ单独作用于ＰＢＭＮＣ可显著增强