大鼠胆汁中木犀草素和芹菜素HPLC测定方法的建立及应用

目的:建立大鼠胆汁中木犀草素和芹菜素浓度测定的HPLC方法,并考察大鼠经口给予菊花提取物(CME)后,木犀草素和芹菜素在胆汁中的排泄情况。方法:胆汁样品经葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶酶解后测定,以SB-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm)为分离柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(52∶48,v/v),流速为1.0mL·min~(-1),检测波长为350nm。结果:本法木犀草素、芹菜素分离良好,线性范围分别为0.1745～6.986μg·mL~(-1)(r=0.9998)和0.3693～11.08μg·mL~(-1)(r=0.9999),绝对回收率为84.6%～106.2%,方法回收率为80.1%～106.9%,日内和日间精密度RSD小于14%。大鼠灌胃给药CME后36h内,胆汁中木犀草素和芹菜素的累积排泄量占给药量的2.05%和6.34%。结论:本法可以准确、灵敏地同时测定大鼠胆汁中木犀草素和芹菜素的浓度,两者经胆汁排泄证明存在肝肠循环。     

阿特拉津及其代谢物在大鼠尿液中的排泄动力学研究

目的:建立大鼠尿液中阿特拉津(ATR)及其代谢物脱乙基阿特拉津(DEA)、脱异丙基阿特拉津(DIA)及脱乙基脱异丙基阿特拉津(DEDIA)的分析方法,并考察其排泄特征。方法:采用乙腈沉淀蛋白、SFC柱富集等对尿液样品预处理;以高效液相色谱法测定大鼠尿液中ATR及其代谢物的含量,色谱柱为WelchromTM C18,流动相为0.5%冰醋酸甲醇液-0.5%冰醋酸水溶液梯度洗脱,检测波长为225nm;大鼠按25、50、125mg·kg-1灌服给予ATR溶液,于给药前和给药后6、12、18、24、48、72h收集尿液测定并计算其72h累积排泄量占给药量比。结果:ATR、DEA、DIA、DEDIA检测浓度线性范围分别为0.5～50、1～100、1～100、15～1500μg·mL-(1r=0.994～0.998),各样本高、中、低浓度的回收率为96.76%～99.03%,日内、日间RSD均<5%;大鼠灌服ATR后,尿样中主要以代谢物DEDIA为主(>75%),而原型、DEA和DIA排泄量均较少(<10%)。结论:所建立的分析方法准确、灵敏、重复性好,适用于尿液中ATR及其代谢物的分析;ATR在大鼠体内以代谢物DEDIA排泄占绝对优势,降解更趋完全。     

大鼠排泄物中羟基红花黄色素A的高效液相色谱法测定

目的:建立一种简便、准确、改进的高效液相色谱(HPLC)方法,测定大鼠口服羟基红花黄色素A(HSYA)后粪便和尿液中HSYA的含量.方法:色谱条件:Dikma C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为:A泵,水相(0.5%三乙胺+1%冰醋酸);B泵,有机相(甲醇∶乙腈 ＝23∶2 );梯度洗脱A∶B为84∶16(0.01 min) → 54.7∶45.3 (17.00 min) → 84∶16 (17.01 min) → 84∶16 (22.01 min);平衡时间5 min;检测波长403 nm;代谢笼收集大鼠给药后24 h粪便和尿液.10%三氯乙酸沉淀蛋白及离心后取上清液进样.结果:粪便和尿液中HSYA分别在0.8 μg·mL-1～200 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1～500 μg·mL-1范围内线性关系良好;最低检测限分别为0.0016、0.0032 μg·mL-1;提取回收率为82.5%～90.2%;日内精密度小于3.4%,日间精密度小于4.8%.大鼠灌胃给予HSYA水溶液后,HSYA从粪便和尿液中24 h累计排泄回收率分别为44.66%±8.0%、5.58%±1.3%.结论:本方法检测限低,分析简便、准确,适合于大鼠口服HSYA后的排泄研究.     

HPLC法测定大鼠尿液中9-硝基喜树碱的浓度

目的:建立 HPLC 法测定大鼠尿液中9-硝基喜树碱(9-NC)浓度。方法:尿液样品中加入内标喜树碱后,用甲醇-乙腈(1:1)沉淀后离心取上清液进样。采用 Diamonsil C~(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离,流动相为乙-1%三乙胺(冰醋酸调 pH 至6.5)(45:55),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长370 nm。测定静脉注射3 mg·kg~(-1)9-NC 溶液和其脂质体溶液后大鼠尿液中原形药物的排泄情况。结果:线性范围72～18000 ng·mL~(-1),定量限为72 ng·mL~(-1)。静脉注射9-NC 溶液和脂质体溶液后24 h 尿液中原形药物的累积排泄量分别为给药剂量的5.9%和7.6%。结论:本方法简便实用,定量准确,并成功应用于静脉注射9-NC 脂质体后原形药物肾排泄的研究。     

超高效液相色谱-串联质谱法研究亚硫酸氢钠穿心莲内酯在大鼠体内排泄

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠尿液和粪便中亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)含量,并用于研究大鼠静脉注射ASB在尿液和粪便中的排泄。方法:采用甲醇提取生物样品中的ASB,以脱水穿心莲内酯(DAG)为内标,在HypersilGold C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.9μm)上以流动相甲醇-水梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,柱温35℃,分析时间6 min;在电喷雾离子化电离源上以选择反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 413.2→287.2(ASB)和m/z 331.2→303.3(DAG)。大鼠自尾静脉注射80 mg.kg-1ASB,收集并测定给药后各时段的尿液和粪便中ASB浓度,计算各时段尿液和粪便中累计排泄率。结果:测定ASB的线性范围为50～5000 ng·mL-1,方法定量下限为50 ng·mL-1。日内和日间精密度(RSD)分别在11.2%和13.3%以内,准确度分别在85.8%～101.4%和87.9%～97.5%,提取回收率为96.1%～98.3%,基质效应为96.2%～98.1%。大鼠72 h尿液中累计排泄率为16.9%±3.9%,粪便中为34.1%±18.4%。结论:本方法速度快、专属性好、准确度高,适用于大鼠尿液和粪便中ASB含量测定,可应用于ASB大鼠排泄研究。     

高效液相色谱法同时测定葛根提取物中5种异黄酮的含量

目的:建立葛根提取物中5种异黄酮含量测定的HPLC方法。方法:采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol·L-1醋酸铵(醋酸调pH=4.6)为流动相,进行梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为260 nm,柱温为35℃。结果:葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素分别在0.204～510.4μg·mL-1(r=0.999 9),0.201～503.0μg·mL-1(r=0.999 9),0.233～581.8μg·mL-1(r=0.999 9),0.201～502.4μg·mL-1(r=0.999 9),0.195～487.6μg·mL-1(r=0.999 9)范围内线性关系良好。平均回收率(n=6)分别为101.52%(RSD=0.69%),102.66%(RSD=0.30%),98.90%(RSD=0.26%),98.64%(RSD=0.29%),100.16%(RSD=0.20%)。结论:本方法快速、简便、精密度和重现性好、灵敏度高,可作为葛根提取物的含量控制方法。     

HPLC测定大鼠血浆中的丁香酚

目的 建立测定大鼠血浆中丁香酚的HPLC法.方法 流动相为甲醇-0.5％冰醋酸(63:37),采用Allsphere ODS-2RP-18色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),流速0.8 mL· min-1,检测波长280nm,柱温30℃.结果 丁香酚0.0895～11.445 μg· mL-1与峰面积比的线...     

HPLC法测定大鼠静脉注射汉黄芩素的血药浓度及其药动学研究

目的:建立测定汉黄芩素大鼠血药浓度的HPLC方法,应用该法进行大鼠静脉注射汉黄芩素的药动学研究.方法:采用Lichrospher ODS色谱柱(150 mm×6.0 mm,5μm),流动相为甲醇-水-乙酸(60∶40∶0.5);流速为1 mL·min-1;检测波长为275 nm;柱温为35℃.健康大鼠禁食16 h后,尾静脉iv汉黄芩素溶液,测定不同时间血药浓度,血药浓度-时间数据采用3p97程序拟合其药动学参数.结果:线性范围为0.02-5μg·mL-1,最低定量限为20 ng·mL-1,批内批间精密度(RSD)均小于10%.其主要药动学参数为:t1/2,α0.0656 h,t1/2,β4.447 h,AUC为883 h·ng·mL-1.结论:该方法快速简便,符合生物样品的测定要求,可用于汉黄芩素血药浓度的测定和药动学研究,静脉注射汉黄芩素的大鼠体内药动学呈开放二室模型,分布较快,代谢较慢.     

HPLC法同时测定紫珠叶中3种有效成分含量

目的:建立同时测定紫珠叶中3种有效成分的高效液相色谱(HPLC)方法.方法:采用ZORBAX Extend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％乙酸水(10∶90),梯度洗脱,流速为1mL·min-1,检测波长330nm,柱温30℃.结果:毛蕊花糖苷、木犀草素及芝麻素分别在46.325～926.5μg·mL-1(r=0.9998)、0.81～16.2μg·mL-1(r=0.9997)及0.6625～13.25μg·mL-1(r=0.9999)范围内线性关系良好,加样回收率98.8％～101.4％.结论:建立的HPLC法简便快速、重复性好、结果准确可靠,可作为紫珠叶药材质量标准控制的方法.     

HPLC同时测定氯强滴眼液中氯霉素及醋酸泼尼松龙的含量

目的 建立HPLC法测定氯强滴眼液中氯霉素及醋酸泼尼松龙的含量.方法 色谱柱C18柱(4.6mm×260mm),流动相 甲醇:水(60:40),流速1.0mL·min-1,检测波长270nm,进样量10μL.结果 氯霉素和醋酸泼尼松龙分别在50μg·mL-1～200μg·mL-1和25μg·mL-1～100μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系.(r=0.9982和r=0.9979)平均回收率:氯霉素为l00.3%,醋酸泼尼松龙为100.3%(n=9).结论 本法简便快速,定量准确,可用于氯强漓眼液中氯霉素及醋酸泼尼松龙的含量测定.     

HPLC-MS/MS法测定人尿液中西他沙星的浓度

目的：建立灵敏、快速、准确的人尿液中西他沙星浓度的HPLC-MS/MS检测方法,并将其用于测定健康受试者口服西他沙星颗粒剂后的尿药排泄。方法：尿液经甲醇处理后,取上清液进行HPLC-MS/MS法分析。10例受试者,每例空腹和餐后（随机交叉）单次口服西他沙星颗粒剂50 mg,经5天的清洗期后将两式受试者对调,两周期分别收集给药前（0 h）及给药后0~3、3~6、6~12、12~24、24~36、36~48、48~60 h各时间段的所有尿液并分析,计算西他沙星在尿液中的累计排泄量和累积排泄率。结果：西他沙星尿液的线性范围为0.250~200μg·mL-1,定量限为0.250μg· mL-1。健康受试者口服西他沙星颗粒剂后3 h即能检测到原型药物,36小时内经尿液排泄基本完全,累积排泄量约为35 mg,累积排泄率约为70%。结论：所建立的方法简便、可靠,可用于人口服西他沙星颗粒剂后药物尿液浓度的测定及其尿药排泄研究。     

醋酸去氨加压素经家兔眼部给药后的药动学及药效学研究

比较醋酸去氨加压素经家兔眼部给药、静脉注射以及灌胃给药后的药动学及药效学特征,探索多肽类药物通过眼部给药进入全身循环的可行性。15只家兔随机分成3组(眼部给药, 7.0μg·kg^-1;静脉注射, 0.7μg·kg^-1;灌胃给药, 7.0μg·kg^-1),给药后按预定时间点心脏取血,采用酶联免疫法(ELISA)测定醋酸去氨加压素的血药浓度;另21只家兔随机分成3组(眼部给药, 7.0μg·kg^-1;静脉注射, 0.7μg·kg^-1;灌胃给药, 7.0μg·kg^-1)进行药效学研究,在给药前和给药后的预定时间段收集尿液。家兔静脉注射给药后峰浓度(C_max)为143.0 pg·mL^-1,血药浓度-时间曲线下的面积(AUC_0-t)为999.9 pg·h·mL^-1;眼部给药后达峰时间(t_max)为5 min, C_max为125.6 pg...     

HPLC-MS法测定右酮洛芬人体血药浓度及经尿排泄特征

目的:建立高效液相色谱-质谱联用测定右酮洛芬人体血(尿)药浓度的方法,考察右酮洛芬的血药浓度及经尿排泄特征.方法:色谱柱为Inspire-C18(150 mm×2.1 mm,5 μm),以甲醇-水(5 mmol·L-1醋酸铵和0.05%乙酸)(68∶32,v/v)为流动相.质谱采用电喷雾离子源四级杆质谱,以选择性离子监测方式进行负离子检测.12名健康受试者单次静脉滴注右酮洛芬氨丁三醇注射液25mg后,采集血浆并定时收集尿液.采用甲醇直接沉淀法处理样品后,评价右酮洛芬的血药浓度及尿排泄特征.结果:右酮洛芬在0.01~20.66 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好,精密度(RSD)为4.3%～7.2%,准确度(RE)为0.7%～5.3%,绝对回收率为98.9%～102.2%.静滴右酮洛芬氨丁三醇注射液25mg后,Cmax(3.53±0.57)μg·ml-1,AUC0-t(7.98±0.90)μg·h·ml-1,t1/2(2.0±0.6)h,tmax(0.5±0.03)h.24 h内累积排泄率为(1.2±0.23)%.结论:该方法简单,符合生物样品分析要求;右酮洛芬氨丁三醇在体内以右酮洛芬形式经尿排泄较少,12 h内基本排泄完全.     

LC-UV法测定大鼠血浆中依达拉奉及其药动学研究

目的:建立测定大鼠血浆中依达拉奉的HPLC-UV法,并研究经灌胃给药后的依达拉奉在大鼠体内的药动学特征。方法:经乙酸酸化的血浆样品以高氯酸直接沉淀后,进行LC-UV法分析,色谱柱为Symmetry Shield C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-50 mmol.L-1醋酸铵水溶液(40∶60),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为240 nm,柱温为30℃。测定灌胃给药后大鼠血浆中依达拉奉的浓度,并计算主要药动学参数。结果:依达拉奉浓度在0.2～100.0μg.mL-1范围内线性关系良好,低、中、高3种浓度的日内日间精密度均小于10%。药动学参数:Cmax为(40.7±3.5)μg.mL-1;tmax为(0.22±0.11)h;AUC0～10为(41.6±6.1)μg.h.mL-1;AUC0～∞为(42.4±6.3)μg.h.mL-1;t1/2为(2.5±0.6)h。结论:该方法简单、灵敏,可用于依达拉奉在大鼠体内的药动学研究。     

HPLC-MS法测定氯吡格雷酸人体尿药浓度及氯吡格雷酸经尿排泄研究

目的：建立测定氯吡格雷酸人体尿药浓度的高效液相色谱-质谱联用方法,并通过监测硫酸氢氯吡格雷片经健康受试者口服后其主要Ⅰ相代谢物氯吡格雷酸尿药浓度的经时变化过程,考察氯吡格雷酸经尿排泄特征。方法：色谱采用Lichrospher C18柱（150 mm×2.1 mm,5μm）,以甲醇-10 mmol·L^-1醋酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（42∶58）为流动相。质谱采用电喷雾离子源四级杆质谱,以选择性离子监测方式进行正离子检测。6名健康受试者单次口服硫酸氢氯吡格雷片75 mg后,定时收集尿样。采用甲醇直接稀释法处理尿样后,评价氯吡格雷酸经尿排泄特征。结果：氯吡格雷酸在4.780～9 559μg·L^-1质量浓度范围内线性关系良好,平均回收率大于93.4%。受试者服药后0～2小时间,氯吡格雷酸经尿排泄速率最大;36小时内有（1.1±0.5）%的氯吡格雷以氯吡格雷酸形式从尿中排出。结论：该测定方法符合生物样品分析要求;氯吡格雷在体内以氯吡格雷酸形式经尿排泄迅速,24小时内基本排泄完全。     

鸡屎藤次苷在大鼠体内的药动学研究

目的:测定大鼠血浆中鸡屎藤次苷的含量,并研究其在大鼠体内的药动学过程.方法:采用HPLC -UV法测定大鼠尾静脉注射给药后血浆中鸡屎藤次苷的血药浓度.色谱条件为:DiamonsilTM C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇一乙腈-0.1％冰醋酸(3:2:95,v/v/v),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:230 nm.通过BAPP2.0软件求算其药动学参数.结果:鸡屎藤次苷血浆浓度在0.2～40μg·mL-1(Y=0.07321X-0.00939,γ=0.9940)范围内线性关系良好.日内精密度不大于7.1％,日间精密度不大于13.5％,准确度RE值在一4.5％～1.8％之间.鸡屎藤次苷提取回收率为64.5％～73.1％,内标物提取回收率为74.5％.主要药动学参数为t1/2=(33.5+4.39) min,AUC0-180mm=(922±129) μg·min· mL-1.结论:该法专属、准确、灵敏,适用于鸡屎藤次苷在大鼠体内的药动学研究,为进一步研究鸡屎藤次苷体内药动学行为提供了依据.     

离子对高效液相色谱法测定大鼠尿中草酸含量

目的:建立以离子对高效液相色谱法测定大鼠尿中草酸含量。方法:采用色谱柱Symmetry ShieldTM RP18(4.6 mm×250 mm,5μm),保护柱为Symmetry C18(3.9 mm×20 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(含0.02 mol.L-1四丁基硫酸氢铵,用KOH调pH2.7)(5∶95)为流动相,流速为0.8 mL.min-1,紫外检测波长为220 nm,柱温为40℃。结果:本方法最低检测浓度为5μg.mL-1,尿中草酸高浓度线性范围为67.5～2 160μg.mL-1(r2=0.999 8),低浓度线性范围为6.75～216μg.mL-1(r2=0.997 8),提取回收率>75%,相对回收率为89.2%～105.3%,日内和日间RSD均≤10.2%。结论:本方法简单快速、回收率高、精密度良好,适用于大鼠尿中草酸含量的测定。     

LC-MS/MS法测定人尿液中舒巴坦钠的浓度及其动力学研究

目的:建立测定尿液中舒巴坦钠浓度的方法,并考察其动力学。方法:采用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC-MS/MS)法,以Agilent Zorbax SB C18进行分离,通过串联质谱仪,以选择反应监测方式进行测定。用于定量分析的舒巴坦钠离子对为m/z231.8→140.0,按外标法定量。结果:舒巴坦钠尿药浓度在0.051～40.80μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),该方法的最低检测限为0.051μg.mL-1;相对回收率为98.95%～102.6%,日内和日间RSD分别为1.54%～7.97%、1.99%～9.85%。3个剂量(1、2、4g)组舒巴坦钠24h内平均尿液累积排泄率分别为(79.48±17.22)%、(79.83±15.25)%、(77.72±10.94)%。结论:本方法快速、简便、准确、灵敏,适用于舒巴坦钠的人体药动学研究。     

HPLC法测定人尿液中尼非卡兰浓度

目的建立人尿液中尼非卡兰浓度测定的HPLC法,并研究健康志愿者给予注射用盐酸尼非卡兰后尼非卡兰原形经尿液的累积排泄量。方法采用内标法,以乙酸乙酯进行提取,提取液吹干,残渣用流动相溶解后进行HPLC法检测。色谱柱为μ-BondapakC18（150mm×4.6mm,10μm）;流动相为0.05 mol·L^-1磷酸二氢铵（pH 5.6）-甲醇-乙腈（60：20：20,V/V/V）;流速1.0mL·min^-1;紫外检测波长270 nm;内标为卡马西平。测定了16名健康志愿者先后给予2次负荷剂量并经连续静滴持续给药6h后,收集不同时间段的尿液样品,同时记录不同时间段的尿液体积,以测定尿药浓度后计算累积排泄量。结果尼非卡兰尿样质量浓度测定的线性范围为20～5000μg·L^-1,最低定量限20μg·L^-1;高、中、低3个QC（质量浓度分别为20、300和2500μg·L^-1）的日内精密度分别为6.4%、5.8%和6.9%,日间精密度分别为8.2%、5.9%和10.9%,回收率分别为（83.0±18.9）%、（85.0±26.2）%和（74.4±4.8）%。结论该方法简便,准确,专属性强,可用于人尿液中尼非卡兰的含量测定。     

固相萃取-高效液相色谱法测定紫杉醇脂质纳米粒体外释放度

目的:建立测定紫杉醇脂质纳米粒体外释放度的方法,考察紫杉醇脂质纳米粒24h的体外释放度。方法:采用固相萃取-高效液相色谱法。样品经C18固相萃取柱萃取,采用Phenomenex luna C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-水(80:20),流速为1.0mL.min-1,检测波长为227nm。结果:紫杉醇的检测浓度在2～12μg.mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9993),紫杉醇脂质纳米粒在水杨酸钠(1mol.L-1)-PBS(pH7.4)中24h累积释放度为104.9%,其释放规律符合一级动力方程。结论:所建方法简便、灵敏,干扰小,可用于体外释放的检测。