高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中硫酸酯型脱氢表雄酮和孕烯醇酮

建立同时测定 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的高效液相色谱-质谱法。方法:选择雌酮硫酸酯(ES)作为内标。雄性 SD 大鼠的血浆使用乙腈沉淀除去蛋白后,经固相萃取、水解及衍生化后,以高效液相色谱质谱检测器测定脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯的浓度。色谱柱为 Zorbax SB C_(18)柱温40℃,流动相为乙腈水,使用梯度洗脱;采用大气压化学离子源(HPLC/APCI-MS),负离子检测方式,用于选择离子检测(SM)定量分析的离子为 m/z 490.0(DHEAS)和 m/z 518.0(PREGS)及 m/z 472.1(ES)[M-H]~-。结果:血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯线性范围分别为:0.05～2.0ng·mL~(-1),0.03～2.0 ng·mL~(-1),r 分别为0.9990和0.9979。低、中、高浓度血样的提取回收率在66.8%～82.3%之间,相对回收率为:98.4%～111.6%,日内、日间变异均小于15%。正常雄性 SD 大鼠的血浆脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯分别为0.070±0.020 ng·mL~(-1)、0.13±0.031 ng·mL~(-1)。结论:本实验方法具有灵敏度高、准确度好及变异较小的特点,适合测定雄性 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和和孕烯醇酮硫酸酯的含量。     

液相色谱-串联质谱法快速测定兔血清及组织中痕量氟尿嘧啶

目的建立灵敏、快速的液相色谱-串联质谱法测定兔血清及组织中氟尿嘧啶的浓度。方法血清及组织样本经乙酸乙酯一步提取后,以乙腈-水(70:30,V/V)为流动相,Hypercarb C_(18)柱分离,采用电喷雾电离源,以多反应离子检测(MRM)方式进行负离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z128.9→m/z41.9(氟尿嘧啶)和m/z188.7→m/z41.9(内标,溴尿嘧啶)。结果测定血清中氟尿嘧啶的线性范围为0.25～50μg·L~(-1),定量下限为0.25μg·L~(-1)。日内、日间精密度(RSD)均小于11%。食管组织中氟尿嘧啶的线性范围为0.5～100μg·L~(-1),定量下限为0.50μg·L~(-1)。日内、日间精密度(RSD)均小于10%。结论该法选择性强、灵敏度很高、操作简便、分析时间短,且可同时测定血清及组织中药物浓度,适用于极低浓度氟尿嘧啶生物样本的大批量检测。     

液相色谱-串联质谱法测定犬血管组织中雷帕霉素的含量

目的建立犬血管组织中雷帕霉素含量测定的液相色谱-串联质谱方法。方法采用AgilentZorbax C18(2.1 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(含10 mmol.L-1醋酸铵,0.08%甲酸)(85∶15,V/V),流速为0.2 mL.min-1;电喷雾离子源,负离子电离模式,选择性反应监测扫描方式,雷帕霉素和罗红霉素(内标)检测的离子对分别为m/z 936.0→m/z 409.0和m/z 837.0→m/z 679.2。结果雷帕霉素在1～1 500μg.L-1浓度范围内有良好的线性关系(r=0.997 6),最低检测限为0.3μg.L-1,日内、日间精密度(RSD)均小于6.7%,提取回收率在81.8%～86.3%范围内,相对回收率在104.4%～109.8%范围内。结论本法简便、快速、灵敏、准确,可用于测定血管组织中雷帕霉素的含量。     

液相色谱-电喷雾串联质谱法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的:建立液相色谱-电喷雾串联质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法:色谱条件为 Discovery ODS C_(18)(2.1 mm×100 mm,3μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(65:35,v/v);柱温30℃;流速0.2 mL·min~(-1);进样量5μL。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),选择性检测定量离子为 m/z 441.3/325.0(辛伐他汀)和 m/z 427.2/325.0(洛伐他汀,内标)带正电荷的离子峰。样品用乙酸乙酯提取。结果:血浆中辛伐他汀浓度在0.20～20.0 ng·mL~(-1)内呈良好线性关系,r=0.9996。提取回收率为90.0%～92.4%(RSD 6.0%～14.9%),方法回收率在85%～115%之内,日内和日间精密度试验的RSD 均<15%,最低检测浓度为0.2 ng·mL~(-1)。结论:该测定方法经全面考察符合血浆样品的测定要求,可以应用于辛伐他汀的人体药动学研究和生物等效性评价。     

液相色谱-大气压化学电离-串联质谱法同时测定人血浆中氯苯那敏和咖啡因的含量

目的建立同时测定人血浆中氯苯那敏和咖啡因含量的液相色谱-大气压化学电离-串联质谱(LC-APCI-MS-MS)法。方法血浆样品经乙酸乙酯提取后,采用Diamonsil C18柱分离,流动相为甲醇-水-甲酸(体积比80∶20∶0.5),采用大气压化学电离(APCI)源,以选择反应监测(SRM)方式进行检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z275→m/z230(氯苯那敏)、m/z195→m/z138(咖啡因)、m/z256→m/z167(内标,苯海拉明)。结果血浆中氯苯那敏和咖啡因的线性范围分别为0.2~40.0μg.L-1和20.0~4 000μg.L-1;日内和日间精密度均小于13.4%,相对误差在±8.2%以内。结论该法适用于人血浆中氯苯那敏和咖啡因的同时测定。     

液相色谱-质谱联用法测定大鼠血浆中盐酸金刚烷胺浓度及体内药动学研究

目的:建立测定大鼠血浆中盐酸金刚烷胺的液相色谱-质谱联用法。方法:色谱柱为 Agilent Zorbax SB-C_(18)(2.1 mm×150 mm,3.5μm);乙腈-0.05%甲酸溶液(28∶72)为流动相,流速0.2 mL·min~(-1);柱温25℃;内标为盐酸美金刚。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),选择正离子抽提方式检测,金刚烷胺和美金刚的选择检测离子分别为 m/z 152.20([M H]~ )、m/z180.20([M H]~ )。选用 SD 大鼠6只,单剂量尾静脉注射给予1 mg·kg~(-1),进行了血药浓度的测定。结果:盐酸金刚烷胺血浆线性范围为0.9824～491.2 ng·mL~(-1),检测限为0.025 ng·mL~(-1),方法回收率均大于95%,日内、日间精密度试验的 RSD<5.0%。结论:本方法专属性强,灵敏度高,线性关系良好,操作简便,适用于药代动力学研究。     

HPLC/MS/MS法测定人血浆中麦考酚酸浓度

目的 建立测定人血浆中麦考酚酸(免疫抑制剂)含量的HPLC/MS/MS方法 .方法 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以15 mmol·L-1醋酸铵-甲醇梯度洗脱,用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱,通过电喷雾离子化三重四极杆串联质谱,经多反应监测模式检测,m/z321.2→m/z 303.0(麦考酚酸),m/z237.0→m/z194.0(卡马西平,内标).结果 血浆中麦考酚酸的线性范围为0.1～10 μg·mL-1,方法 回收率为104.1%～106.6%,日内、日间精密度均小于7%.结论 本法简便、快速、灵敏、准确,已应用于肾移植后患者麦考酚酸酯的治疗药物监测.     

LC-MS/MS法测定人血浆中阿立哌唑及其代谢物脱氢阿立哌唑浓度

目的:建立液相色谱串联质谱法测定人血浆中阿立哌唑和脱氢阿立哌唑浓度。方法:血浆样品中加入适量内标和饱和碳酸氢钠,以乙醚萃取后采用API 3000 LC-MS/MS进行分析。色谱柱采用Chembond ODS-W柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm),柱温30℃,流动相由乙腈-0.1%醋酸水溶液(60∶40,v/v)组成,流速0.2 mL.min-1。质谱采用多反应离子监测(MRM)的扫描模式,以电喷雾离子源(ESI)在正离子电离模式下进行测定。结果:本方法的线性范围是0.1～100 ng.mL-1,最低定量限为0.1 ng.mL-1,日内、日间精密度均小于15%,准确度在85%～115%之间,萃取回收率约70%～80%,稳定性考察结果良好。结论:本方法快速、灵敏,专属性强,适用于阿立哌唑的人体药代动力学研究。     

液相色谱串联质谱法测定人体血清中的类固醇激素

目的：建立一种能同时测定血清中6种类固醇激素［包括孕酮（P）、17-羟基孕酮（17-OHP）、皮质醇（COL）、去氢表雄酮（DHEA）、双氢睾酮（DHT）、硫酸去氢表雄酮（DHEAS）］的快速、灵敏的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）方法。方法：血清样本经甲基叔丁基醚液液萃取,高速离心后上清液氮气吹干,加入复溶液后上机检测。采用安捷伦C18（100 mm × 2.1 mm,1.8 μm）色谱柱进行分离,水相A为纯水,有机相B为纯甲醇,质谱采用电喷雾电离（ESI）模式进行离子化,多反应监测模式（MRM）扫描,同位素稀释法进行定量分析。结果：血清中6个类固醇激素检测限（LOD,以信噪比（S/N）≥3为标准）为0.03～1.25 ng·mL-1;定量限（LOQ,以信噪比（S/N）≥10为标准）为0.05～2.50 ng·mL-1;在0.05～4000 ng·mL-1范围内线性关系良好,相关系数（r）≥0.995 0;低浓度样本日内精密度为2.4%～6.2%;中浓度样本日内精密度为2.3%～5.7%;高浓度样本日内精密度为1.3%～5.4%。低浓度样本日间精密度为0.4%～2.6%;中浓度样本日间精密度为0.3%～3.9%;高浓度样本日间精密度为0.2%～4.7%。加标回收率为86%～106%。结论：建立一种能同时测定血清中6个类固醇激素的HPLC-MS/MS方法。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强,可在6.5 min之内完成分离和检测,适用于人体血清中多种类固醇激素含量的定量分析。     

LC-MS/MS方法测定大鼠血浆中亮丙瑞林浓度

目的建立迅速、简单、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中亮丙瑞林的浓度。方法血浆样品采用固相萃取的方法,混合溶液(乙腈-水-甲酸=21.3:78.5:0.2,v/v/v)为流动相;采用Dikma C18柱(30 mm×4.6 mm,5μm)分离,通过电喷雾电离源(ESI),以选择性反应监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 605.5→221.1(亮丙瑞林)和m/z 584.5→221.1(内标,丙氨瑞林)。结果建立的人血浆内亮丙瑞林测定方法线性范围为0.02~100 ng·m L-1,定量下限可达0.02ng·m L-1。日内、日间精密度(RSD)均<13%。结论该方法预处理简洁,灵敏,专属性强,可方便用于大鼠血浆中亮丙瑞林的测定。     

A rapid and simple ultraperformance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) method for the detection of glucuronic acid-conjugated steroid metabolites

In the present study, we effectively detected 10 steroids and glucuronic acid-conjugated steroid metabolites in 12 min by ultraperformance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). Steroids testosterone (T), 5α-dihydrotestosterone (DHT), androsterone (ADT), etiocholanolone (ETIO), estradiol (E₂) and their glucuronide conjugates were well-separated on an Eclipse Plus C₁₈ column (2.1 mm×50 mm, RRHD 1.8 µm). The mobile phase consisted of a mixture of methanol and ultrapure water (containing 1 mM ammonium formate) at a ratio of 60:40 (v/v), and the flow rate was set at 0.25 mL/min. The LC eluate was detected by electrospray ionization (ESI) source in both positive and negative ion modes. Neutral loss (NL of 176, 194, 211 and 229 Da in positive mode) and precursor ion (PI of m/z 141, 159 and 177 in positive mode and 75, 85 and 133 in negative mode) methods were applied for the detection of steroid glucuronides. The multiple reaction monitoring (MRM) transitions were m/z 289.3→97.1, 291.3→105, 291.3→199.2, 273.2→145.4 and 255.2→159.1 for T, DHT, ADT, ETIO and E₂ in positive mode, respectively; as well as m/z 463.3→85 for T glucuronide (T-G), m/z 465.3→75 for DHT glucuronide (DHT-G), ADT glucuronide (ADT-G), ETIO glucuronide (ETIO-G) and m/z 447.3→271 for E₂ glucuronide (E₂-G) in negative mode. In addition, the analytical method was also applied for the detection of steroid glucuronides in pooled human liver microsomes (HLM), which might serve as a basis for further investigation of steroid metabolism in vivo and in vitro.     

HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中金丝桃素的浓度

目的：建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中金丝桃素的浓度。方法：血浆样本加入适量内标,经乙腈直接沉淀蛋白后采用HPLC-MS/MS进行分析。色谱柱采用Ultimate C18柱（150 mm×2.1 mm,5.0μm）;流动相由乙腈-5 mmol·L^-1醋酸铵（含0.1%甲酸）（90∶10）组成,柱温35℃;流速0.5 ml·min^-1;采用电喷雾离子源（ESI）,以多反应监测方式（MRM）进行定量分析。金丝桃素和内标吡格列酮在负离子模式下定量分析离子对分别为m/z 503.2→m/z 405.1和m/z 355.0→m/z 41.9。结果：金丝桃素在0.1-13.2 ng·ml^-1线性关系良好（r〉0.99）,最低定量限为0.1 ng·ml^-1,提取回收率为84.19%-98.71%,日内、日间精密度均不高于18.47%。结论：该方法分析速度快、灵敏、准确,为临床进一步研究金丝桃素提供了基础。     

UPLC-MS/MS法测定比格犬血浆中阿司匹林、水杨酸和单硝酸异山梨酯的浓度

目的:建立灵敏的超高效液相色谱-质谱联用法测定比格犬血浆中的阿司匹林、水杨酸和单硝酸异山梨酯的浓度。方法:选用Waters BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,分别以0.5%甲酸/5 mmol.L-1醋酸铵-乙腈和2 mmol.L-1醋酸铵-乙腈为流动相,采用梯度洗脱进行分离,样品采用乙酸乙酯提取后进样,通过电喷雾电离源,以多重反应监测(MRM)方式进行负离子检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 178.9→136.9(阿司匹林)、m/z 136.9→64.9(水杨酸)和m/z 293.7→250.0(内标,双氯酚酸钠)测定阿司匹林和水杨酸;m/z 249.6→58.9(单硝酸异山梨酯)和m/z 293.7→250.0(内标,双氯酚酸钠)测定单硝酸异山梨酯。结果:阿司匹林、水杨酸和单硝酸异山梨酯的线性范围分别为2.0～2000.0,20.0～16000.0,9.6～9557.0 ng.mL-1;定量下限分别可达2.0,20.0,9.6 ng.mL-1;日内、日间精密度(RSD)均小于15%。结论:本方法灵敏度较高,血浆用量少,适用于比格犬血浆样品中阿司匹林、水杨酸和单硝酸异山梨酯的测定和药物动力学研究。     

HPLC-MS/MS法检测人血浆中游离花生四烯酸浓度

目的:建立测定人血浆中花生四烯酸浓度的液相色谱串联质谱法。方法:以奥美拉唑为内标,待测血浆经乙酸乙酯萃取后,采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱,以水-甲醇(10∶90,v/v)为流动相,流速0.2 mL.min-1,柱温25℃;采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式将样品离子化,多反应监测(MRM)模式下对花生四烯酸(m/z 303.2→259.2)和奥美拉唑(m/z 344.2→191.1)进行测定。结果:花生四烯酸在497.88～4997.24 ng.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9989)。低、中、高浓度的平均回收率均大于70%,批内与批间RSD均小于10%。结论:本方法简单、快速、灵敏,适用于大样本量血浆中游离花生四烯酸的分析研究。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中雷喏嗪的质量浓度

目的建立HPLC-MS/MS法测定人血浆中雷喏嗪的质量浓度。方法以伏立康唑为内标,采用乙腈-体积分数0.1%甲酸水溶液(90∶10)为流动相,以Agilent-ZORBAX-C18柱(150 mm×2.1 mm,5.0μm)色谱柱为分析柱,通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行检测。雷喏嗪和伏立康唑用于定量分析的离子对分别为[M+H]+m/z428.5→m/z279.3和[M+H]+m/z350.2→m/z281.3。结果雷喏嗪线性范围为20~5 000 ng·mL-1,定量下限为20 ng·mL-1。日内和日间的RSD均小于15%,平均回收率大于75%。结论该方法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于雷喏嗪的临床药动学研究。     

高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中洛伐他汀的浓度

目的:建立高效液相色谱质谱联用法测定人血浆中洛伐他汀的浓度。方法:色谱条件———色谱柱为DiamonsilC18(150mm×2.1mm,5μm),流动相为乙腈∶水=60∶40,流速为0.4mL·min-1,柱温40℃;质谱条件———电喷雾离子化法(ESI)采集正离子,单离子方式检测洛伐他汀m/z405和内标辛伐他汀m/z419。血浆样品预处理采用环己烷二氯甲烷(3∶1)萃取法。结果:方法的线性范围为0.5～50μg·L-1,r=0.9989,检测限为0.1μg·L-1,标准血浆样品0.5,4,20μg·L-1的日内和日间精密度为RSD<14.47%,方法回收率为88.12%～112.09%,提取回收率为76.28%～77.15%。结论:该法灵敏、专属,适用于洛伐他汀人体药动学的研究。     

高效液相色谱串联质谱法测定人血浆硝苯地平浓度

目的建立测定人血浆硝苯地平浓度的高效液相色谱-质谱串联（HPLC-MS/MS）分离法。方法以咪达唑仑为内标,血浆样品经乙腈沉淀,HPLC MS/MS分离 分析。Diamonsil C18柱（2.1 mm×150 mm,5 μm）,流动相：甲醇：水（77.7：23.3）;流速：0.3 mL&#8226;min－1。采用电喷雾离子源（ESI）,以多离子反应监测方式（MRM）进行正离子监测,硝苯地平和内标咪达唑仑定量分析离子对分别为m/z 369.1/224.2和m/z 325.9/291.0。结果硝苯地平血浆浓度测定方法线性范围为1.205～241.000 ng&#8226;mL－1,r＝0.996 9。定量下限为 1.205 ng&#8226;mL－1,方法回收率85%～115%。批内和批间RSD＜9%。结论该方法灵敏、准确、可靠,适用于硝苯地平的人体药动学研究。     

HPLC-MS/MS测定人体血浆和尿液中罗通定的浓度

目的 建立一种简便、灵敏的测定人体血浆和尿液中罗通定浓度的高效液相色谱串联质谱( HPLC-MS/MS)方法.方法 血浆、尿液样品分别采用乙腈沉淀处理后,进样分析.采用Agilent-ECLIPSE-C18柱(2.1mm×150 mm,5μm),以乙腈-0.2％甲酸溶液=85∶15为流动相,采用正离子,多反应监测方式测定样品浓度.检测离子为m/z356.3→192.3(罗通定)和m/z 285.0→193.0(地西泮,内标).结果 罗通定血浆及尿样均在2.5～1000 ng· mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 4);最低定量浓度均为2.5 ng·mL-1.日内与日间RSD均＜10％,血浆样品回收率在91.4％～109.2％,尿样回收率在88.63％～115.8％.结论 本方法简便快速、灵敏准确,适用于罗通定在人体内的药物动力学研究.     

微透析联合LC-MS/MS法研究马钱子总碱囊泡凝胶透皮吸收

目的:建立皮肤微透析采样技术联合LC-MS/MS同时测定马钱子碱和士的宁的分析方法,并研究大鼠经皮给予马钱子囊泡凝胶后的透皮吸收。方法:应用皮肤微透析技术对大鼠给药部位皮下进行采样;微透析样品以他克林为内标,不经预处理直接进样;色谱采用XDB-C18柱,甲醇-乙腈-水(含0.05%甲酸和10 nmol·L-1甲酸铵)梯度洗脱;质谱采用正离子扫描多反应监测(MRM)方式。,用于定量的离子对分别为m/z 335.2→m/z 184.2(士的宁),m/z 395.2→m/z 324.2(马钱子碱),m/z 199.1→m/z 171.1(他克林)。结果:测定微透析样品中马钱子碱和士的宁2种成分的线性范围分别为0.195～50 ng.mL-1和0.156～40 ng.mL-1,日内和日间精密度(RSD)均小于15%,准确度、稳定性符合要求。结论:该方法操作简便、灵敏度高、专属性强,适用于皮肤微透析样品中马钱子碱和士的宁的测定。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定地龙中4个黄曲霉毒素

目的:建立同时测定地龙中4个黄曲霉毒素含量的高效液相色谱串联质谱法。方法:样品经甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱净化后,采用高效液相色谱串联质谱法测定其中4个黄曲霉毒素的含量,以多反应监测(MRM)方式分别监测离子对m/z 313→241(黄曲霉毒素B1,CE 50 eV),m/z 315→259(黄曲霉毒素B2,CE 43 eV),m/z 329→243(黄曲霉毒素G1,CE 38 eV)和m/z 331→245(黄曲霉毒素G2,CE 40 eV)。结果:黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测限分别为0.03,0.02,0.03,0.02μg.kg-1,回收率在88.0%～100.3%范围内,RSD均低于6.1%。结论:该方法快速、灵敏,结果准确,适用于地龙中4个黄曲霉毒素的同时检测。