新鲜肿瘤组织单细胞悬液的制备方法

新鲜肿瘤组织单细胞悬液的制备方法董敬朋，陈艺华，张素娟单细胞悬液在肿瘤病理、肿瘤分子生物学行为等研究方面均有广泛用途，如乳腺癌的癌细胞倍体测定应先制备单细胞悬液，ＰＣＲ技术用于某些肿瘤的诊断或其他疾病诊断也可先制备单细胞悬液，然后再提取ＤＮＡ，以最大...     

恶性肿瘤细胞多药耐药基因（MDR1）表达产物P170的流式细胞？…

目的，探讨用流式细胞免疫学检测恶性实体瘤组织及腹水细胞多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的方法和临床意义，方法；采用搓网方法，将１２种９４例不同的恶性肿瘤手术切除标本制成细胞膜完整的单细胞悬液，并从６例癌性腹水中提取富含癌细胞的悬液，再用流式细胞免疫学方法检测悬液中的癌细胞ＭＤＲ１表达产物Ｐ１７０含量，结果：经所用方法制备悬液中癌细胞丰富，杂质细胞少，荧光显微镜下观察细胞膜完整，Ｐ１７０阳性细胞抗体荧光     

恶性肿瘤细胞多药耐药基因(MDR1)表达产物P170的流式细胞学的检测

目的，探讨用流式细胞免疫学检测恶性实体瘤组织及腹水细胞多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的方法和临床意义。方法：采用搓网方法，将１２种９４例不同的恶性肿瘤手术切除标本制成细胞膜完整的单细胞悬液，并从６例癌性腹水中提取富含癌细胞的悬液，再用流式细胞免疫学方法检测悬液中癌细胞ＭＤＲ１表达产物Ｐ１７０含量。结果：经所用方法制备悬液中的癌细胞丰富，杂质细胞少，荧光显微镜下观察细胞膜完整，Ｐ１７０阳性细胞抗体荧光位于细胞膜上。结论：研究恶性实体肿瘤细胞ＭＤＲ１表达是可行的，可明确其原始的药物敏感性，对临床化疗有重要价值     

石蜡包埋组织用于流式细胞光度术的单细胞悬液样品制备的研究

流式细胞光度术(Flow Cytometry)是一种快速定量分析细胞核酸含量的新技术,近年来已广泛用于肿瘤研究。单细胞悬液制备方法是应用该技术的重要环节。文献报道多采用新鲜肿瘤组织制备单细胞悬液。因此,不能结合恶性肿瘤病人     

用Medimachine系统制备实体组织的单细胞悬液

流式细胞术（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）作为一种可在单细胞水平上对大量细胞进行快速、准确、多参数定量分析和分选的高技术，在细胞生物学、免疫学、肿瘤学等方面的应用日趋广泛和深入。进行ＦＣＭ分析的前提是样品为单细胞悬液，而大多数实体组织都难以制成高质量的单细胞悬液样本，因而大大限制了ＦＣＭ对实体组织特别是实体瘤的分析和研究〔１〕。实体组织单细胞样本制备一般采用手工方法，主要有机械剪切法、酶消化法、去污剂化学处理法、针头抽吸法等〔２〕。但上述方法均存在组织用量多，制样过程繁琐耗时，细胞产率及实…     

机械法与机械-酶消化法制备大鼠膈肌组织单细胞悬液的比较

文题释义： 流式细胞分析技术：简称流式细胞术,是20世纪70年代初发展起来的一种在功能水平上可以对单个细胞或其他生物离子进行快速定量的一项新型分析技术和分选技术。它能够在短时间内高速分析上万个细胞,可以同时测量如细胞或粒子的体积、内部结构以及膜电位变化等生物或化学性质,进行多信息分析,具有快速、高灵敏、准确、多参数等特点。 单细胞悬液：是进行细胞体外培养和流式细胞分析的基础,即将组织分散成单个游离细胞,使其悬浮在液体培养基中,当然如外周血及骨髓标本等本身即为天然的单细胞悬液,这些细胞经过简单处理,就可以应用于流式分析、细胞分选、细胞培养等实验。如果2个或多个细胞粘连在一起或细胞碎片过多都将影响流式分析结果,进而导致实验失败。 背景：流式细胞术作为目前先进的细胞分析技术,其研究基础是单细胞悬液,但目前尚无有关膈肌组织单细胞悬液制备方法的相关报道。 目的：探索应用机械法与机械-酶消化法分别制备大鼠膈肌单细胞悬液的可行性并比较2种方法获得单细胞的数量和活性。 方法：以SD大鼠的新鲜膈肌组织为标本,在机械法的基础上,选用胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ及其不同组合进行消化制备膈肌单细胞悬液,观察细胞形态并经锥虫蓝染色后测定细胞活性,对活细胞、失活细胞和细胞团块进行计数并计算出细胞存活率和单细胞悬液浓度,结果进行统计学比较分析。 结果与结论：①机械-酶消化法所制得的单细胞悬液较机械研磨法细胞分散度好、形态完整、边界清楚、杂质及细胞碎片较少、背景较干净;②单纯机械研磨法制备的单细胞悬液活细胞数较低,失活细胞数较高,细胞存活率最低,团块较多;③在机械法的基础上,加入胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ3种等体积混合酶所得单细胞悬液的活细胞数及悬液浓度最高,每0.1 g膈肌组织可获得(1.0-2.0)×10⁶个细胞,细胞存活率较高,与单纯机械法获得单细胞悬液比较,在活细胞、失活细胞、细胞团块、细胞存活率及悬液浓度方面差异均有显著性意义(P < 0.05);其次是加入胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ这2种等体积混合酶消化法,所得单细胞悬液浓度、细胞成活率及细胞团块方面也均较为理想;④结果表明,机械法和机械-酶消化法均能成功制备出大鼠膈肌单细胞悬液,机械-酶消化法优于单纯机械法,其中加入胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ3种等体积混合酶的机械-酶消化法所得单细胞悬液效果最佳,是较优选的膈肌单细胞悬液制作方法。 ORCID: 0000-0002-4486-5917(张远圆) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

大鼠肺组织单细胞悬液制备方法的研究

流式细胞术(flow cytometry,FCM)中细胞的分析检测均以单个细胞为基础,而各种单细胞悬液的制备是其中的关键环节,若细胞数量不足、细胞粘连成块、样品中杂质碎片过多均可造成分析失败。本实验采用胰酶消化法和研磨法制备新鲜大鼠肺实体组织单细胞悬液,通过细胞活力测定、FCM检测分析比较两种方法优劣。     

流式细胞术实体瘤组织标本制备的研究

近年来,流式细胞术越来越多地应用于临床和科研,文献报道较多。但是,在实体瘤组织标本制备方面研究报道较少。因此,我们重点进行了实体瘤标本单细胞悬液制备的研究。现将我们制备实体瘤组织单细胞悬液的具体方法论述如下。 资料与方法 1.标本采集:住院病人手术取下的活体实体瘤组织新鲜标本,迅速在无菌条件下放入到RPMI1640培养液中,立即     

计算机在流式细胞计上的应用

流式细胞计是一种新型的单细胞定量分析仪器。它不同于传统细胞涂片的方法,而是将被分析的细胞染色,制备成悬液,通过流动室,以单细胞流高速流过激光照射的分析区。如图一所示,细胞内不同成份被激发     

不同组织处理方法对流式检测结果的影响

正流式细胞检测技术,结合了单克隆抗体技术、定量细胞化学技术和定量荧光细胞化学,可对特定细胞及颗粒进行定性及定量分析,因操作简便、重复性好、结果可靠,已在生物学、临床医学、药学等学科中得到广泛的应用~([1])。流式细胞进行检测和分析的前提,是必须以单细胞为基础,因此制备出合格的单细胞悬液对流式分析的成败至关重要。本实验利用流式检测所用不同抗体,考察单细胞悬液的三组不同处理方法对流式检测结果的影响,探讨三种方法的优缺点~([2])。     

两种纯化噬菌体DNA方法的比较

两种纯化噬菌体ＤＮＡ方法的比较徐励新王凡＊刘彦仿（第四军医大学病理学教研室＊西京医院眼科，西安７１００３２）万大方顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）１材料和方法噬菌体λｇｔ１１贮存液以合适的滴度铺平板成单一噬斑...     

人结直肠癌肝转移瘤中CD11b~+髓系细胞分选方法的建立与鉴定

目的:从结直肠癌肝转移瘤组织中分选出高纯度的CD11b~+髓系细胞,从而建立从一种组织中获得特异单细胞的方法。方法:采用机械联合酶消化法将实体瘤组织制备成单细胞悬液;利用流式细胞术分选出CD11b~+髓系细胞,并回测细胞纯度;采用免疫细胞化学技术对分选出细胞的特异性进行鉴定;采用吉姆萨和台盼蓝染色对获得细胞进行评价。结果:流式细胞术能从机械联合酶消化法制备的单细胞悬液中分选出高纯度、足够数量的CD11b~+细胞;分选前细胞阳性率与分选后纯度的差异有统计学意义(P0.01),分选后纯度达到实验研究的要求(P0.05);免疫细胞化学技术验证了分选细胞的特异性;分选后的细胞形态完整,活性良好。结论:机械联合酶消化法制备的单细胞悬液,经过流式细胞术分选,能够分选出高纯度、活性良好且形态完整的特异性细胞,操作方法稳定可重复,满足进一步研究的要求。     

P53基因蛋白在乳腺良性病变和癌细胞表达的定量研究

应用流式细胞术和细胞免疫荧光染色技术，对乳腺良性病变和乳腺癌细胞Ｐ５３基因蛋白表达进行定量研究。结果表明，乳腺良性病变Ｐ５３蛋白表达量明显低于乳腺癌。Ｐ５３表达阳性率和表达量与乳腺癌的组织学分级密切相关，Ｐ５３表达量与乳腺癌ＤＮＡ倍体相关，非整倍体肿瘤Ｐ５３表达量高于二倍体肿瘤。Ｐ５３表达阳性（ＦＩ＞１．０）的乳腺癌，其生存期和五年生存率明显低于Ｐ５３表达阴性（ＦＩ≤１．０）的乳腺癌。     

凋亡相关基因产物Fas和bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达

用流式细胞免疫技术检测胃癌组织中Ｆａｓ及ｂｃｌ－２蛋白表达,报告如下。１　材料与方法１．１　一般资料　２７例进展期胃癌病人中男１５人,女１２人,年龄２７～６６岁。术前未化疗、放疗。即取新鲜癌组织和切缘正常粘膜组织各１．０ｇ左右,ＰＢＳ冲洗两遍,滤纸吸干后放入１０％福尔马林中待检。１．２　方法　制备单细胞悬液,调整细胞为１０９／ｍｌ。取两试管,每管加细胞悬液１００μｌ,其中一管加Ｆａｓ－ＦＩＴＣ（或ｂｃｌ－２－ＦＩＴＣ）（法国国际免疫公司提供）２０μｌ,一管加ＩｇＧ１－ＦＩＴ－Ｃ２０μｌ,室温避光…     

GST－π基因和癌基因int－2在乳腺癌中的扩增与基因的表达

采用ＤＮＡ和ＲＮＡ的斑点杂交分析方法，对３２例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中ＧＳＴ－π和ｉｎｔ－２基因的ＤＮＡ扩增和ＲＮＡ转录表达情况进行研究，发现ＧＳＴ－π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的ｍＲＮＡ表达增强，ＧＳＴ－π基因表达调控主要在转录水平进行；癌基因ｉｎｔ－２与乳腺癌的发生有一定关系。同时还发现乳腺癌中ＧＳＴ－π与ｉｎｔ－２基因之间存在有共扩增和共表达现象。     

乳腺癌DNA倍性与雌激素受体及淋巴结转移的关系

我们拟采用新鲜标本对乳腺癌的几个预后因素作前瞻性研究，以克服用石蜡包埋组织作回顾性研究时出现的图形分辨差、准确性相对较低的问题。本文作为一个阶段性总结，对１００例乳腺癌进行ＤＮＡ倍性分析，同时比较不同ＤＮＡ倍性的乳腺癌细胞的区域淋巴结转移和雌激素受体...     

GST—π基因和癌基因int—2在乳腺癌中的扩增与基因…

采用ＤＮＡ和ＲＮＡ的斑点杂交分析方法，对３２例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中ＧＳＴ－π和ｉｎｔ－２基因的ＤＮＡ扩增和ＲＮＡ转录表达情况进行研究，发现ＧＳＴ－π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的ｍＲＮＡ表达增强，ＧＳＴ－π基因表达调控主要在转录水平进行；癌基因ｉｎｔ－２与乳腺癌的发生有一定关系。同时还发现乳腺癌中ＧＳＴ－π与ｉｎｔ－２基因之间存在有共扩增和共表达现象。     

长春地区汉族人群C—ab1等位基因的遗传多态性

以完整的Ｖ－ａｂ１癌基因为探针，用ＤＮＡ印迹杂交方法在长春地区汉族人群中随机检测到Ｃ－ａｂ１癌基因位点存在限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ），其原因是Ｃ－ａｂ１癌基因位点存在ａ，ｂ，ｃ３个等位基因。ａ等位基因频率为９４．７％，ｂ等位基因频率为１．９％，ｃ等位基因频率为３．４％，与Ｃａｕｃａｓｉａｎ人群Ｃ－ａｂ１ ＲＦＬＰ比较，ａ，ｂ等位基因相同，基因频率相似，而在中国人群中新发现一个Ｃ等位基因。     

肺癌DNA倍体分析和p53蛋白表达的定量观察

肺癌ＤＮＡ倍体分析和ｐ５３蛋白表达的定量观察王新允张乃鑫赵凤喜宋文静贾易晔赵凤云一、材料和方法收集本室档案材料中肺癌３８例，常规石蜡包埋，ＨＥ染色。按ＷＨＯ国际肿瘤分类标准重新进行组织学分类。（１）细胞ＤＮＡ检测样品的制备：每例制成４０μｍ厚切片，分...     

中国汉族乳腺癌中BRCA1基因的杂合性丢失和微卫星不稳定性

目的探讨中国汉族妇女乳腺癌与乳腺癌基因１的关系。方法对ＢＲＣＡ１区域内的４个微卫星多态位点，应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）－聚丙烯酰胺尿素凝胶电泳（ＰＡＵＧＥ）－ＤＮＡ银染方法，对上海市５０例乳腺癌患者进行了ＢＲＣＡ１有关微卫星的ＬＯＨ和ＭＳＩ研究。结果患者中ＬＯＨ的发生率为５８％，ＭＳＩ的发生率为４６％；对患者进行临床分组，发现病期越晚ＬＯＨ率越高，ＭＳＩ与临床分期的关系不很确定。结论提示中国汉族人的乳腺癌的发生同与ＢＲＣＡ１基因相连锁的微卫星ＤＮＡ有关，因而也可能与ＢＲＣＡ１基因的突变有关。