塑料试管固相放射免疫法测定甲胎蛋白

本文将甲胎蛋白(AFP)特异的抗体IgG包被在塑料管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析(RIA)法测定AFP。标准曲线范围为10～800ng/ml,最小检出值和正常值均<10ng/ml。批内CV％为7.1％,批间CV％为10.3％。本文与液相RIA法平行测定61扮样品的AFP浓度(10.1～3030ng/ml)。经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关,表明本文建立的方法可以替代液相RIA法测定AFP,并适用于大批样品和自动化检测。     

Leptin固相放射免疫分析法的建立

目的：研究瘦素（Leptin）固相放射免疫分析法的建立。方法：将提取的兔抗人Leptin特异性抗体IgG,包被在活化的塑料试管内壁,建立了简便、快速、高灵敏、特异的固相竞争RIA,测定人血清Leptin。结果：标准曲线范围为（0.5～24）ng/ml;测定69例健康人血清正常值为（3.68±1.46）ng/ml;最小检出值为0.38ng/ml,批内CV%为5.6%,批间CV%为8.8%;回收率为92%。本文所建方法与液相RIA标准曲线具有良好的平行性;使用两种方法平行测定88份血清Leptin浓度（1.00～7.68）ng/ml,经统计学处理两者之间具有良好的直线相关（r=0.987,P〈0.001,Y=0.977X）。结论：所建立的Leptin固相放射免疫分析法为科研及临床病人血清Leptin浓度的测定提供了一种新的检测方法。     

白介素8酶联免疫分析方法及其初步应用

建立高灵敏度和特异性的白介素8(IL-8)ELISA法.用人工重组的IL-8多次免疫兔,获取高效价抗体.纯化抗体经生物素标记,同辣根过氧化酶(HRP)标记的亲和素可特异结合.采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体.加入不同浓度标准品后,反应1.5h,洗净后再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线.该方法测定范围为0.2-10.8ng/mL,最低测出值为0.02ng/mL,批内和批间CV小于8%和10%.用该法测得18名正常人血浆中IL-8水平为0.15±0.06ng/mL.18份高低不同浓度IL-8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为0.54±0.35ng/mL和0.63±0.59ng/mL,相关性强(r=0.819,t=5.89).在U937细胞系体外培养液中,LPS刺激24h和48h可测出IL-8水平明显上升;而经TNF-α刺激24h和48h后同对照没有明显变化.该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足人血清和细胞培养液中IL-8水平的检测.     

人血清抵抗素ELISA方法的研究及其临床初步应用

用兔抗人抵抗素(resistin)片断(22～34氨基酸残基)的多克隆抗体(PcAb)包被固相板,用辣根过氧化物酶(HRP)标记PcAb得HRP-PcAb.在包被PcAb的孔中加入抵抗素标准品(或待测样品),加入HRP-PcAb,形成PcAb-resistin-HRP-PcAb复合物,加酶底物邻苯二胺(OPD)显色,用酶标仪在492nm波长处测定OD值,绘制标准曲线.从标准曲线读出样本中抵抗素含量.本方法特异性强,灵敏度高,精密度好.该法测定范围0.5～100ng/mL,最低检出量0.5ng/mL,批内和批间CV%分别为3.4%和7.2%.50例2型糖尿病患者血清抵抗素含量为23.2±3.9 ng/mL,明显高于正常值16.0±2.5ng/mL.结果表明该法稳定,灵敏度适于检测人血清抵抗素水平.     

白细胞介素-10放免方法的建立及其初步临床应用

本文建立了白细胞介素-10(IL-10)放射免疫分析法(RIA)并初步应用于临床.将重组IL-10作免疫原,获多克隆抗体.采用Iodogen法制备高比活度125I-IL-10,建成IL-10 RIA.应用本法测定抑郁症患者组及对照组血清IL-10含量,结果表明:IL-10测定范围为5-1215ng/mL;对照组血清IL-10含量为28.0±8.9ng/mL,而抑郁症患者组IL-10含量为25.3±11.1ng/mL,较对照组低(P《0.05);患者治疗后(28.4±13.2ng/mL)较治疗前有明显升高(P《0.05).IL-10 RIA的建立为进一步开展IL-10在相关学科的研究,提供了一种有价值的指标.     

纤维素固相放射免疫测定甲胎蛋白

本文在国内首次报道了纤维素固相RIA法测定甲胎蛋白。本法简便灵敏,快迅稳定,平均回收率95.7±8.08％,批间变异系数r=7.8±1.7％,批内变异系数r=5.8±2.6％,线性关系较好(r=0.999),灵敏度比液相RIA提高6倍,32份血样品用双位点夹心法和试剂盒的液相RIA进行比较,结果经统计学处理,相关系数分别为r=0.82,r=0.80,均具有显著相关性。     

HCG放射免疫分析与电化学发光分析的比较

2 2　重复性测定　分别用两种方法对各自的质控 1、质控 2浓度样本进行 10个批次以上的HCG测定。RIA法批内变异系数分别为 8 6 2 %、8 73% ;批间变异系数分别为14 38%、9 0 9%。ECLIA法批内变异系数分别为 3 84 %、3 2 9% ;批间变异系数分别为 5 90 %、5 31%。3　讨论83份受检者用两种方法测出血清HCG结果的相关分析表明 ,放射免疫分析和电化学发光分析测定重复性均在允许范围内 ,重复性测定结果表明ECLIA法明显优于RIA法可达到批内CV <4 % ,批间CV <6 %。其原因可能为ECLIA法为全自动操作 ,保证各次实验条件一致 ,且方法学本身和试剂盒质量均优于RIA所致。RIA法系手工操作 ,易受操作者情绪、熟练程度等多方面的影响。两方法所测结果呈显著正相关 ,r =0 .84 9。ECLIA法未孕健康妇女HCG测值低于RIA法 ,而孕妇及患者则明显高于RIA法 ,ECLIA法最低可测值为 0 1U/L ,显示其灵敏度明显高于RIA法。两方法均能满足临床需要。ECLIA法灵敏、准确但价格昂贵。RIA法成熟、便宜、易于开展。     

共价结合和物理吸附制备固相抗体在RIA技术应用中的对比分析

目的:探讨异硫氰酸荧光素(FITC)-抗FITC磁性微粒子系统与试管固相包被系统制备固相抗体在RIA应用中的方法学技术参数.方法:以FITC标记抗体,抗FITC抗体共价结合磁性微粒子为分离剂,与试管固相包被法,用相同的校准品、125I标记物通过检测FT3、sTSH进行技术研究及样本对比分析.结果:FT3两种方法的灵敏度和精密度分别为:0.18 pmol/L、0.43 pmol/L,批内变异(n=10):8.96%、16.26%,批间变异(n=10):15.26%、18.83%.sTSH两种方法的灵敏度和精密度分别为:0.06 μIU/ml、0.04μIU/ml,批内变异(n=10):7.6%、6.92%,批间变异(n=10):8.55%、14.23%.FT3磁性微粒子法测值与PR法测值r=0.9825,FT3试管固相包被法测值与PR法测值r= 0.9102;sTSH磁性微粒子法测值与试管固相包被法测值r=0.9987.结论:FITC磁性微粒子系统应用于FT3、sTSH检测,降低反应时间,共价结合提高均一性.     

肿瘤相关胰蛋白酶原-2免疫放射分析

本文建立了肿瘤相关胰蛋白酶原-2(TAT-2)IRMA,并初步应用于临床, 以探讨其对肿瘤早期诊断的可能性.以抗TAT-2 McAb T2C和T2L分别作为捕捉抗体和标记抗体.在pH9.6的碳酸缓冲液中, 将McAb T2C包被小珠, 成为固相抗体;用氯胺T方法将McAb T2L制成125I-标记抗体;并将两株McAb与不同量的TAT-2标准品, 在pH7.5的磷酸缓冲液中保温反应, 制作TAT-2标准曲线.检测肿瘤患者及正常人血清或尿液TAT-2含量, 并作对比.结果表明, 测定的TAT-2标准曲线(N=10):Bmax/T=(22±3.2)%, Bmax/B0=689.2±35.6倍, 非特异结合率小于0.5%, 检测下限在0.5ng/mL;批内CV为(4.3±0.26)%, 批间CV为(10.6±1.2)%;平均回收率为(98.5±3.1)%和(97.9±2.3)%.正常人血清(87份)和尿(20份)TAT-2浓度为7.58±5.46ng/mL和3.11±1.62ng/mL; 胃癌患者(45例)的血清TAT-2浓度63.2±62.9ng/mL, 胰腺癌和胆管癌患者(12例)和其它各种转移癌患者(16例)尿TAT-2浓度为236.6±185.3ng/mL, 104.9±171.2ng/mL;3组癌症患者血清、尿TAT-2浓度与正常人相比, 差别非常显著(P值均小于0.001).因此, TAT-2有希望成为一项肿瘤辅助诊断指标.     

白细胞介素-4放射免疫分析法的建立及其初步应用

采用重组人白细胞介素-4(IL-4)免疫家兔,获抗IL-4抗血清.用Iodogen 法制备125I标记IL-4,经Sephadex G-50纯化.该法检测范围0.3-24.3ng/mL,批内CV＜8%,批间CV＜15%.166名对照组血清IL-4含量为0.78±0.33ng/mL; 肝癌甲胎蛋白阳性患者血清IL-4含量同对照组没有显著差异(P＞0.05),但原发性甲亢患者IL-4含量明显高于对照组(P＜0.01).     

胃癌患者手术治疗前后血清CA72-4、CA242和叶酸水平检测的临床意义

探讨了胃癌患者手术治疗前后血清糖类抗原72-4（CA72-4）、糖类抗原242（CA242）和叶酸（FA）水平的变化及其意义。用R IA法检测31例胃癌患者手术前后血清CA72-4、CA242和FA水平,并与35名正常组作比较。结果表明,手术前胃癌患者血清CA72-4、CA242水平高于正常组,有显著性差异（P〈0.01）,而FA水平则低于正常组,有显著性差异（P〈0.01）。手术3个月后上述三项指标与手术前比较,有显著性差异（P〈0.05）。提示检测胃癌患者手术前后血清CA72-4、CA242和FA水平的变化对了解病情、观察预后均有临床价值。     

塑料球固相二抗通用分离剂在RIA中的应用

本文报道以聚苯乙烯塑料球为载体．经化学处理制成固相二抗，作为ＲＩＡ技术中的通用分离剂，并先后用于半抗原及大分子蛋白质类的测定。实验结果表明：塑料球固相二抗制备法工艺简便，最佳包被条件为１００ｍｍｏｌ／ＬＰＨ４．８柠檬酸盐缓冲液，不需特殊条件，便于推广应用。本方法不需离心，且各项指标均达对照ＰＲ分离法的标准。     

冠心病患者CGA、NT-proBNP和Hs-CRP水平变化及临床应用分析

探讨血清CGA、NT-proBNP、Hs-CRP水平和冠心病发病机制及不稳定性心绞痛(UAP)治疗前后与其相关性;用CL-ELISA及RIA法测定冠心病组和UAP经皮冠状动脉形成术(PTCA)治疗前后及对照组血清CGA、NT-proBNP和Hs-CRP水平并进行分析.结果表明冠心病组NT-proBNP水平与对照组比较有...     

大鼠泌乳素的放射免疫分析

本文报告用乳过氧化物酶法标记大鼠泌乳素（ｒＰＲＬ）建立ｒＰＲＬ放射免疫分析方法。本法具有良好的稳定性，灵敏度为１．７５μｇ／Ｌ；批内和批间变异系数分别为３．７％￣９．２％和５．６％￣１６％；回收率为８６．１％￣１１４．８％；标准曲线范围为３．１２５￣１００μｇ／Ｌ，为研究大鼠垂体功能提供了一种新的方法。     

心、脑血管病患者血清铁蛋白和β2-微球蛋白的含量变化及其意义

为探讨人血清铁蛋白(SF)和β2-微球蛋白(β2-MG)在心、脑血管疾病中的含量变化及其在临床上的应用, 用放射免疫分析法(RIA)分别对22例冠心病、46例高血压、21例脑梗死共89例心、脑血管疾病患者的血清进行检测, 并与121名健康人作对照.结果表明, 冠心病、高血压及脑梗死患者血清中SF、β2-MG的含量, 均高于对照组, 差异有显著性(P＜0.01). 本文提示SF、β2-MG均参与了冠心病、高血压, 脑梗死疾病的发病机理过程, 可作为心、脑血管疾病进行疗效观察及预后的参考指标.     

二种细胞因子在心脑血管疾病中的临床应用

为探讨肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor,TNF)和白细胞介素 1β(interleukin - 1β ,IL - 1β)二种细胞因子在心脑血管疾病中的水平变化及临床应用 ,本文用RIA分别对 5 1名正常人和 46例冠心病、48例高血压和 34例脑梗死患者进行检测。结果表明 :冠心病、高血压和脑梗死患者血清中这二种细胞因子含量 ,均高于对照组(P <0 .0 1)。本文提示 :TNF和IL - 1β二种细胞因子均参与了冠心病、高血压和脑梗死疾病的病理生理过程 ,是冠心病、高血压和脑梗死疾病进行疗效观察的参考指标     

Comparison of ultrasensitive methods for the measurement of IgE

Because the study of human IgE synthesis and regulation requires exquisitely sensitive and rapidly performed methods for assay of in vitro IgE production, we compared 4 methods for radiometric immunoassay (RIA) of human IgE: double antibody RIA (DARIA), ultrasensitive enzymatic RIA (USERIA), sensitive paper radioimmunosorbent test (SPRIST) and microtiter solid-phase RIA (MSPRIA). IgE protein was measured in serum samples and cord bloods. The USERIA and the MSPRIA consistently detected levels of IgE as low as 27-35 pg/ml. The DARIA and SPRIST were less sensitive. Comparison of the USERIA and the MSPRIA favored the latter because: (1) it is a more rapidly performed assay, (2) it involves fewer manipulations, and (3) it has less variability. We conclude that the MSPRIA for IgE is superior to the other methods both as a research tool for measuring minute quantities of IgE protein (as in tissue culture supernatants) and for measuring IgE in serum samples where concentrations fall below 1 ng/ml (0.42 IU/ml; 1 IU = 2.4 ng).     

SaE3RIA及其临床应用

改良后的雌三醇放免试剂盒适用于测定唾液游离雌三醇，通过方法学鉴定，表明此试剂较高的的特异性和灵敏度，７５０例配对标本（唾液与血液）测定值呈高度相关（ｒ＝０．７２６６；Ｐ〈０．０１），测定２０－４１周正常妊娠孕妇唾液标本１３７８例，显示唾液雌三醇随孕周的增加而逐渐上升，以２．５百分位为各孕周的正常下限值，监护４９６例晚期妊娠，其正确率达９７．４％，因此测定唾液雌三醇是一项产前连续监护围立儿健康的有力     

人降钙素（hCT）放免试剂盒的研制及其临床应用

作者在人血清降钙素的放免试剂盒研制过程中,hCT的~(125)I标记采用Iodogen法,以Sep—PakC_(18)柱分离纯化,通过优选建立了hCT放免非平衡竞争结合分析法。通过方法学和可靠性鉴定,说明了该方法具有较高的特异性、精密度、准确度和灵敏度,在八周内观察,具较好的稳定性。100例正常人测定hCT水平为74.7±30.5ng/L,而75例肾炎、55例肺癌、34例乳腺癌和5例甲状腺髓样癌患者其检测值分别为385.3±159.6ng/L,206.5±77.3ng/L,157.3±65.2ng/L,579.5土357.5ng/L,均明显高于正常对照组(p<0.01)。经临床验证,该试剂盒符合稳定、可靠、灵敏、适用的要求。