鲨鱼软骨粉合剂诱导的抗肝血吸虫性纤维化效应的研究

鲨鱼软骨粉（ＳＣＰ）伍用“４２５”制剂（当归根提取物）,使成鲨鱼软骨粉合剂,用以研究感染日本血吸虫３ｗｋ的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经口服用ＳＣＰ合剂后４ｗｋ（相当于感染后７ｗｋ）诱导的抗血吸虫性纤维化效应及其机制。测定实验小鼠肝内血吸虫卵肉芽肿（ＳＥＧ）大小和纤维化程度;用ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清抗体ＩｇＧ及其亚类ＩｇＧ１水平（ＯＤ均值）;应用流式细胞仪测定小鼠脾脏Ｔ细胞亚群的细胞均数和比值。实验结果：服用ＳＣＰ合剂（Ⅰ组）和单用ＳＣＰ（Ⅲ组）小鼠的ＳＥＧ大小均显著小于感染对照鼠（Ⅳ组）,且前两者肝内血吸虫性纤维化均已消失,而后者显示严重的肝纤维化。单用“４２５”制剂（Ⅱ组）与Ⅰ组和Ⅲ组的血吸虫卵肉芽肿减小率之间无显著性差异,但Ⅱ组仍呈现轻度的肝血吸虫性纤维化。Ⅰ组和Ⅲ组的ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值（１．７０～１．８８）明显高于Ⅱ组（０．９５）;Ⅰ组和Ⅱ组的ＩｇＧ和ＩｇＧ１水平均显著高于Ⅲ组和Ⅳ组。结果表明,服用ＳＣＰ合剂和单用ＳＣＰ小鼠,均能诱导明显的抗肝血吸虫性纤维化效应,若单用“４２５”制剂,则仅显示轻度的抗肝纤维化作用,其机制与细胞免疫密切相关。     

SCP提取物合剂对血吸虫卵肉芽肿诱导的Th1型和Th2型细胞因子的调节效应

目的　进一步研究SCP提取物合剂对感染小鼠诱导的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的调节效应和分子机制。方法　BALB/c小鼠 40只 ,均分为 4组 ,每鼠感染 30± 2条尾蚴。 4w后组I和组III小鼠分别口服SCP提取物SCP1和SCP2 ,并联用“42 5”制剂 14d ,SCP1和SCP2的总量均为 70 0 0 μg ,“42 5”制剂 70 0mg ,组II单用SCP1,用量同上。组IV为对照。停药后1w ,剖检小鼠 ,计算各组小鼠每g肝组织虫卵数 (EPG)和成熟虫卵减少率 ;制成肝组织石蜡切片 ,计算肉芽肿大小 ;分离脾淋巴细胞 ,于 37℃ ,5 %CO2 中培养 48～ 72h ,取上清液 ,测定IFN -γ和IL - 4含量水平 (pg/ml)。 结果　实验组小鼠的EPG均显著低于感染对照鼠者 ,成熟虫卵减少率为 80 .5 6 %～ 87.70 % ;实验鼠肉芽肿的平均面积和体积均显著小于感染对照鼠者 (P<0 .0 5 ) ;实验鼠脾淋巴细胞上清中IFN -γ和IL - 4含量水平均显著低于感染对照鼠的 5 46 .15± 2 43.15和 73.78± 2 8.37。结论应用中药SCP提取物合剂能诱导明显的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变效应及血吸虫性纤维化作用 ,其分子机制与Th1型和Th2型细胞因子应答的调节效应密切相关     

芍药苷对感染血吸虫小鼠肝纤维化的影响

目的探讨小鼠感染日本血吸虫后经吡喹酮治疗的不同时期,给予芍药苷对肝组织虫卵肉芽肿和纤维化的影响。方法以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠构建肝纤维化模型,随机分为(Ⅰ)杀虫前给药组、(Ⅱ)杀虫同时给药组及(Ⅲ)杀虫后给药组。除正常组外,杀虫治疗、芍药苷治疗组和对照组小鼠分别于感染后12d、42d和72d给予芍药苷和对照,并于102d、132d和162d处死。检测透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢP)、羟脯氨酸(Hyp)、虫卵肉芽肿大小、肝纤维化分级以及胶原Ⅰ的表达。结果在组Ⅰ和组Ⅲ,芍药苷明显降低血清中HA、PⅢP和肝组织中Hyp的含量,减小虫卵结节并降低肝纤维化严重程度分级,降低胶原Ⅰ的表达(P<0.05或P<0.01);在组Ⅱ,大部分指标没有明显差别(P>0.05)。结论芍药苷无论是早期或延后给药,都具有抑制虫卵肉芽肿,减少胶原的生成从而对抗小鼠血吸虫性肝纤维化的作用。     

日本血吸虫感染适宜与非适宜宿主的免疫学特征初步研究

目的研究3种不同易感性宿主感染日本血吸虫后免疫应答特征的差异,初步探讨适宜和非适宜鼠类宿主感染血吸虫后免疫应答的机制。方法 C57BL/6小鼠、Sprague Dawley(SD)大鼠和东方田鼠(Microtus fortis)各12只,均随机分为感染组和未感染组,每组6只。C57BL/6小鼠、SD大鼠和东方田鼠的感染组每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴20、200和1000条。感染后42d,剖杀各组动物,观察门脉系统成虫寄生及肝脏肉芽肿情况。收集血清,ELISA法检测细胞因子白细胞介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)和血清特异性抗体IgG、IgG_(2a)及IgG_1的水平。结果感染日本血吸虫后42d,C57BL/6小鼠和SD大鼠均检获日本血吸虫成虫,并在宿主肝脏发现虫卵肉芽肿,而东方田鼠未检获血吸虫成虫及虫卵,肝脏正常。SD大鼠血清中IL-10的含量[(2.21±0.12)pg/ml]明显高于东方田鼠[(1.64±0.39)pg/ml](P<0.05)和C57BL/6小鼠[(0.10±0.04)pg/ml)](P<0.01),而东方田鼠也显著高于C57BL/6小鼠(P<0.01);SD大鼠血清...     

自然杀伤细胞抑制血吸虫病肝纤维化作用的研究

目的 通过单抗敲低或过继自然杀伤(NK)细胞,探讨NK细胞在血吸虫病肝纤维化中的作用。方法 24只C57BL/6健康小鼠取肝脏,制备NK细胞,用白细胞介素-15 (IL-15)、IL-2、IL-18活化NK细胞。40只C57BL/6健康小鼠随机分为单抗组、IgG组、生理盐水组、NK细胞组、PBS组等5组,每组8只,每鼠经腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴(20±1)条。单抗组、IgG组和生理盐水组小鼠于感染前1周开始,每周分别尾静脉注射1次抗NK1.1单抗(100μg/鼠)、IgG (100μg/鼠)、生理盐水,每次200μl/鼠;NK细胞组和PBS组小鼠于感染后4周开始,每周分别尾静脉注射1次活化的NK细胞(1×10~5/鼠)、PBS,每次200μl/鼠。感染后6和8周,分别取各组小鼠肝脏,流式细胞术检测小鼠肝NK细胞比例变化,Masson染色观察肝组织纤维化变化,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Ⅰ-C)、Ⅲ-C、Ⅳ-C、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN) mRNA相对转录水平等肝纤维化指标。结果感染后6周,单抗组肝NK细胞比例为(2.56±0.47)%,低于IgG组的(4.75±0....     

单性日本血吸虫成虫感染性小鼠肝纤维化研究北大核心CSCD

目的观察和评估单性日本血吸虫成虫感染小鼠出现肝纤维化病变风险。方法将40只小鼠随机分为双性感染组、单性雄虫组、单性雌虫组和未感染组,每组10只,分别经腹壁皮肤接触感染雌雄尾蚴、雄性尾蚴、雌性尾蚴和不含尾蚴的去氯水,感染尾蚴数为(40±1)条/只。双性感染组小鼠感染周期为6周,其余3组为36周。取小鼠肝脏,观察肝脏大体形态;经HE和Masson染色镜下观察小鼠肝脏病理变化和胶原纤维增生情况;测定肝脏胶原纤维特有的羟脯氨酸含量;应用荧光定量PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA和蛋白表达水平。结果与无感染组比较,单性雄虫组小鼠肝脏颜色发黑,肝组织内有大量色素沉积,周围有炎性细胞浸润,色素沉积处有胶原纤维;单性雌虫组小鼠肝脏大体形态与无感染组相似,病理变化和胶原纤维增生明显轻于单性雄虫组。单性雄虫组、单性雌虫组、双性感染组和未感染组小鼠的肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.209±0.033)、(0.187±0.034)、(0.194±0.04)和(0.122±0.016)μg/mg,单性雄虫组、单性雌虫组均显著高于未感染组(P均<0.05),与双性感染组均无明显差异。单性雄虫组小鼠肝脏Col1(2.4±0.91)和α-SMA(0.22±0.1)mRNA表达都明显高于未感染组[Col1(1.05±0.29)、α-SMA(0.08±0.01)](P均<0.05),Col1(2.4±0.91)(P<0.01)和TGF-β1(4.28±2.58)(P<0.05)mRNA表达均显著高于双性感染组;单性雌虫组各基因mRNA表达水平与未感染组相比均无显著差异,Col1(1.34±0.18)和TGF-β1(3.55±1.34)mRNA表达水平也显著高于双性感染组[Col1(0.84±0.14)、TGF-β1(0.31±0.11)、α-SMA(0.36±0.11)、Col3(2.15±0.61)](P均<0.01),α-SMA(0.17±0.11)(P<0.05)和Col3(0.51±0.23)(P<0.01)mRNA表达则显著降低。单性雄虫组小鼠肝脏各基因蛋白表达水平与未感染组比较均无明显差异;单性雌虫组TGF-β1(1.03±0.39)蛋白表达量显著低于未感染组TGF-β1(1.78±0.29)(P<0.05)。结论单性血吸虫成虫会导致小鼠肝脏炎症细胞浸润,胶原纤维增生,羟脯氨酸增加、部分肝纤维化分子指标mRNA表达上调等肝纤维化特征和向肝纤维化演变趋势,并且单性雄虫比单性雌虫更易引发小鼠肝脏病变。     

单性日本血吸虫成虫感染性小鼠肝纤维化研究北大核心CSCD

目的观察和评估单性日本血吸虫成虫感染小鼠出现肝纤维化病变风险。方法将40只小鼠随机分为双性感染组、单性雄虫组、单性雌虫组和未感染组,每组10只,分别经腹壁皮肤接触感染雌雄尾蚴、雄性尾蚴、雌性尾蚴和不含尾蚴的去氯水,感染尾蚴数为(40±1)条/只。双性感染组小鼠感染周期为6周,其余3组为36周。取小鼠肝脏,观察肝脏大体形态;经HE和Masson染色镜下观察小鼠肝脏病理变化和胶原纤维增生情况;测定肝脏胶原纤维特有的羟脯氨酸含量;应用荧光定量PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA和蛋白表达水平。结果与无感染组比较,单性雄虫组小鼠肝脏颜色发黑,肝组织内有大量色素沉积,周围有炎性细胞浸润,色素沉积处有胶原纤维;单性雌虫组小鼠肝脏大体形态与无感染组相似,病理变化和胶原纤维增生明显轻于单性雄虫组。单性雄虫组、单性雌虫组、双性感染组和未感染组小鼠的肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.209±0.033)、(0.187±0.034)、(0.194±0.04)和(0.122±0.016)μg/mg,单性雄虫组、单性雌虫组均显著高于未感染组(P均<0.05),与双性感染组均无明显差异。单性雄虫组小鼠肝脏Col1(2.4±0.91)和α-SMA(0.22±0.1)mRNA表达都明显高于未感染组[Col1(1.05±0.29)、α-SMA(0.08±0.01)](P均<0.05),Col1(2.4±0.91)(P<0.01)和TGF-β1(4.28±2.58)(P<0.05)mRNA表达均显著高于双性感染组;单性雌虫组各基因mRNA表达水平与未感染组相比均无显著差异,Col1(1.34±0.18)和TGF-β1(3.55±1.34)mRNA表达水平也显著高于双性感染组[Col1(0.84±0.14)、TGF-β1(0.31±0.11)、α-SMA(0.36±0.11)、Col3(2.15±0.61)](P均<0.01),α-SMA(0.17±0.11)(P<0.05)和Col3(0.51±0.23)(P<0.01)mRNA表达则显著降低。单性雄虫组小鼠肝脏各基因蛋白表达水平与未感染组比较均无明显差异;单性雌虫组TGF-β1(1.03±0.39)蛋白表达量显著低于未感染组TGF-β1(1.78±0.29)(P<0.05)。结论单性血吸虫成虫会导致小鼠肝脏炎症细胞浸润,胶原纤维增生,羟脯氨酸增加、部分肝纤维化分子指标mRNA表达上调等肝纤维化特征和向肝纤维化演变趋势,并且单性雄虫比单性雌虫更易引发小鼠肝脏病变。     

桃仁水蛭煎剂对早期肝纤维化的降解作用

目的:观察桃仁水蛭煎剂对日本血吸虫性早期肝纤维化小鼠血清Ⅰ、Ⅲ型前胶原PC-Ⅰ、PC-Ⅲ)的降解作用。方法:从汉川县日本血吸虫尾蚴实验感染小白鼠,制成肝纤维化模型,采用放免法检测小鼠血清PC-Ⅰ、PC-Ⅲ含量。结果:治疗组与对照组比较,PCⅢ显著下降(P<0.001)。预防组与对照组比较,PC-Ⅰ显著下降(P<0.05)。结论:桃仁水蛭煎剂能有效地促进实验性肝纤维化的吸收和分解。     

不同地区日本血吸虫成虫组分蛋白及其感染鼠肝病变差异的研究

应用SDS-PAGE对我国四川、湖南、江苏和浙江四地日本血吸虫成虫组分蛋白进行电泳分析,表明各地日本血吸虫AWA组分蛋白既有共同成分又存在相互之间及雌、雄虫之间的质与量的差别。应用常规病理切片技术,对相应感染小鼠肝内虫卵肉芽肿进行比较观察,显示江苏地区日本血吸虫感染鼠肝虫卵肉芽肿反应增长比四川、湖南者为小(P<0.01),浙江者也较四川、湖南者为小(P<0.05),而江苏与浙江、四川与湖南者之间无显著性差异(P>0.05);江苏者纤维化程度似较四川、湖南者明显。实验结果为了解我国不同地区日本血吸虫之间是否有所不同,提供了生化和病理方面的参考依据。     

芦荟大黄素和吡喹酮对小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型的影响

目的 探讨芦荟大黄素对血吸虫肝纤维化小鼠的疗效及可能的作用机制.方法 采用日本血吸虫尾蚴感染小鼠建立血吸虫性肝纤维化模型,用芦荟大黄素0.3 mg/kg·d-1灌胃治疗8周.免疫组化检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达.RT-PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK 4)mRNA和细胞周期蛋白DI(cyclin D1)mRNA.结果 实验对照组小鼠肝脏TGF-β1、PDGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的平均吸光度值分别为0.2775±0.0810、0.2140±0.0069、0.2234±0.0248和0.1849±0.0231,较正常对照组升高(P<0.01).CDK4和cyclinD1基因表达增加.芦荟大黄素干预后,小鼠肝脏TGF-β1、PDGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的平均吸光度值分别为0.1615±0.0326、0.1324 ±0.0201、0.1652±0.0216和0.1409±0.0206,较实验对照组降低(P<0.01).CDK4和cyclin D1基因表达受到抑制.结论 芦荟大黄素对血吸虫性肝纤维化有治疗作用,其作用机制可能与影响肝星状细胞周期有关.