5-羟色胺转运体基因启动子区CpG岛甲基化状态与精神分裂症Ⅰ型和Ⅱ型的关联

目的:探讨5-羟色胺转运体(5-HTT)基因启动子区CpG岛甲基化状态与精神分裂症Ⅰ型和Ⅱ型的关联。方法:运用特异性甲基检测PCR和直接测序法对62例精神分裂症Ⅰ型患者、38例Ⅱ型患者和50例健康被试5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化状态进行检测。结果:三组5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化阳性率无显著性差异;精神分裂症Ⅰ型患者5-HTT基因启动子区CpG岛内位点甲基化率显著高于精神分裂症Ⅱ型患者和健康被试组。结论:5-HTT基因启动子区CpG岛内位点高甲基化可能是精神分裂症Ⅰ型的发病机制之一。     

结直肠癌及结直肠粘膜p16基因5′CpG岛甲基化状态的研究

目的　了解国人结直肠癌及正常肠粘膜p16基因 5′CpG岛甲基化状况 ,并探讨其意义。方法　用甲基化敏感的限制性内切酶消化结合PCR法检测 6 0例结直肠癌及其正常结直肠粘膜p16基因 5′CpG岛中HpaⅡ、SacⅡ、SmaⅠ位点的甲基化状况。结果　结直肠癌与正常结直肠粘膜的p16基因 5′CpG岛均有不同程度的甲基化 ,比较结直肠癌与正常结直肠粘膜的p16基因甲基化状态及其与临床病理资料的关系 ,差异均无显著性。正常结直肠粘膜的p16基因甲基化状态在不同的酶切位点存在差异 (P <0 .0 5 )。结直肠粘膜甲基化与年龄有相关趋势。结论　结直肠粘膜的p16基因甲基化在不同的酶切位点间存在差异。正常结直肠粘膜和结直肠癌的p16基因甲基化状态是比较复杂的。结直肠粘膜甲基化率有随年龄增加而增高趋势     

FMR1基因启动子区CpG岛甲基化与智力低下的相关性研究

目的探讨智力低下基因1启动子区CpG岛甲基化与智力低下的相关性。方法应用甲基化PCR方法对79例智力低下儿童及79例正常儿童的外周血中FMRI基因启动子区CpG岛甲基化状态及（CGG）n进行检测。结果2例智力低下儿童的FMRI启动子区CpG岛发生甲基化,正常儿童基因CpG岛无甲基化;两组（CGG）n重复数分别为33—48、27—43,两者之间比较（P〉0．05）无统计学意义。结论FMRl基因启动子区CpG岛甲基化可能引起智力低下。     

粪便DNA中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子甲基化状态在结直肠癌筛查中的应用研究

目的以粪便DNA中x染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子（XAF）1基因启动子区域的甲基化状态为靶目标,建立新的有效的筛查结直肠癌的方法。方法收集需做肠镜检查患者自然排泄粪便,经肠镜或病理学检查确诊后,分为3组,结直肠正常组45例,结直肠腺瘤组30例,结直肠腺癌组24例。使用QIAampDNAStoolMiniKit自粪便抽提人DNA。应用甲基化特异性的PCR（MSP）检测粪便DNA中XAFl基因启动子区域甲基化状态。结果经genomic—DNAPCR,证实所提取DNA均含有人基因组DNA。经MSP检测,正常组存在高甲基化15例,阳性率33．33％;腺瘤组18例,阳性率60．00％;腺癌组15例,阳性率62．50％,腺瘤组、腺癌组与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,但腺瘤组与腺癌组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论使用Qiagen试剂盒抽提粪便中人DNA的方法比较稳定。以粪便DNA中XAFl基因启动子区域甲基化状态为靶目标进行结直肠肿瘤的早期诊断,敏感度、特异度较高,但尚需要大样本研究进一步验证。     

散发性乳腺癌及乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化分析

目的 了解散发性乳腺癌及癌旁增生组织、乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化状态,探讨其与乳腺癌发生的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)结合巢式PCR技术,研究23例散发性乳腺癌及其癌旁增生组织、6例乳腺不典型导管增生组织及5例健康成人女性外周血淋巴细胞中BRCA1基因启动子区甲基化状态.结果 5例健康成人女性外周血淋巴细胞均表现BRCA1基因启动子区甲基化阴性;23例原发性乳腺癌组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化率为65.22%(15/23);癌旁增生组织检出CpG岛甲基化者11例,甲基化率为47.83%(11/23),且均为癌组织阳性患者;6例乳腺不典型导管增生组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化阳性者2例,甲基化率为33.33%(2/6);统计学检验结果表明,乳腺癌、癌旁增生组织之间,BRCA1基因启动子区甲基化阳性率无显著差异.结论 BRCA1基因启动子区CpG 岛甲基化是散发性乳腺癌发生过程中的早期事件,可能在乳腺癌发生中和乳腺增生病癌变过程中起重要生物学作用.     

ASPP2基因启动子区DNA甲基化及转录因子DNA结合位点的干湿研究

对p53凋亡刺激蛋白2 (ASPP2)基因启动子区进行了甲基化及转录因子结合位点(TFBS) 的生物信息学分析及实验研究.结果表明,在该基因近端启动子区存在一个长1391bp的CpG岛,且此区域中包含19个转录因子的37个结合位点,其中有13个转录因子的结合位点含有CpG;甲基化预测发现在含CpG的23个TFBS中有18个位点的CpG易发生甲基化.由此推断ASPP2是典型的多因子调控的CpG岛基因,CpG岛的异常甲基化将影响转录因子结合,导致ASPP2基因表达下调.通过对人肝癌细胞株HepG和人成纤维细胞HFL-1的ASPP2基因启动子CpG岛中含4个E2F结合位点区域的甲基化实验检测,证明这种推断是正确的.这一研究说明,对重要基因启动子区DNA甲基化及TFBS的生物信息学研究可为相关的实验研究提供指南,对促进基因表达的表观遗传调控研究具有重要意义.     

MPC基因甲基化在迟发性运动障碍发病机制中的作用

目的:探讨线粒体丙酮酸载体(MPC)基因差异甲基化在迟发性运动障碍(TD)发病机制中可能的作用。方法:共纳入符合DSM-IV精神分裂症诊断标准伴发TD患者14例(TD组)、不伴TD患者14例(NTD组)、首发患者14例(FE组)及正常对照组14例(HC组),运用MassArray系统检测精神分裂症患者和正常对照的MPC基因启动子区CpG位点的甲基化程度。结果:精神分裂症组MPC2基因CpG182∶187∶195位点的甲基化水平高于正常对照组[(-1.38±0.21) vs.(-1.58±0.02)];FE组MPC1的CpG87∶90位点[(-1.29±0.25) vs.(-1.61±0.28)]与MPC2的CpG 37位点[(-1.55±0.13) vs.(-1.90±0.14)]的甲基化水平高于慢性精神分裂症组;慢性精神分裂症组MPC1基因CpG276位点的甲基化水平高于FE组[(-0.86±0.21) vs.(-1.34±0.56)];TD组MPC1基因的CpG87∶90位点上的甲基化水平高于NTD组[-1.41±0.18) vs.-1.80±0.23)](均P﹤0.05)。相关分析结果显示,CpG CpG87∶90位点与AIMS总分呈正相关(r=0.59,P0.01)。结论:本研究提示精神分裂症和抗精神病药物的作用可能影响着MPC基因甲基化的表达。MPC基因甲基化在精神分裂症伴TD患者中存在异常,提示其在TD的发病机制中可能起一定作用。     

上皮性卵巢癌组织脆性组氨酸三联基因甲基化和3p14的等位基因丢失

目的 探讨肿瘤抑制基因脆性组氨酸三联(FHIT)基因在上皮性卵巢癌(简称卵巢癌)组织中的甲基化状态以及该基因定位的3p14位点的等位基因丢失及其在卵巢癌的发生发展中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测61例卵巢癌组织及10例交界性上皮性卵巢肿瘤(简称交界性卵巢肿瘤)组织FHIT基因启动子CpG岛的甲基化频率,并采用微卫星多态性标志D3S1287检测45例卵巢癌组织3p14位点杂合子丢失(LOH)和纯合子丢失(HD)状态。结果卵巢癌组织中FHIT基因甲基化频率为39．3％(24／61),其中浆液性囊腺癌为45．2％(19／42),黏液性囊腺癌为14．3％(1／7),子宫内膜样癌为33．3％(4／12);交界性卵巢肿瘤组织中FHIT基因甲基化为6／10,其中交界性浆液性囊腺瘤1／3,交界性黏液性囊腺瘤5／7。卵巢癌组织甲基化频率与临床分期、细胞分化程度相关性无统计学意义。交界性卵巢肿瘤与卵巢癌之甲基化频率差异无统计学意义。43．5％(10／23)卵巢癌显示LOH;有信息的浆液性囊腺癌中33．3％(6／18)检测到HD。FHIT基因甲基化与基因丢失之间无明显相关性。结论首次证实卵巢癌FHIT基因启动子有较高的甲基化频率,这可能是FHIT基因沉默的重要原因,在卵巢癌的发生与发展过程中起着重要的作用;同时3p14位点等位基因的丢失可使基因完全失去功能,促进肿瘤的发生。     

基因组CpG岛甲基化检测技术研究进展

启动子CpG岛甲基化所致的抑癌基因失活和肿瘤发生密切相关，因而了解抑癌基因CpG岛甲基化情况具有重要意义。目前CpG岛甲基化的检测方法众多，其原理分别基于甲基化敏感的限制性内切酶切割和亚硫酸氢钠修饰，用于全基因组大量CpG岛甲基化检测和基因特异性CpG岛的一个或多个CpG位点甲基化检测。     

NDRG-1基因甲基化与乳腺癌发生的关系

目的 对NDRG-1基因启动子区甲基化状态进行研究,探讨NDRG-1基因甲基化在乳腺癌发生中的作用.方法 采用双色荧光杂交微阵列基因芯片技术对33例乳腺癌样本和癌旁组织样本进行NDRG-1基因启动子区甲基化状态研究.结果 33例肿瘤样本和癌旁组织样本中NDRG-1基因启动子区CpG位点均有不同程度的甲基化,肿瘤组织中NDRG-1基因启动子区CpG位点甲基化率显著高于相应的癌旁样本组织(t=14.12,P＜0.05).结论 DNA甲基化作为NDRG-1基因的重要调控机制,NDRG-1基因启动子区过甲基化可能在乳腺癌的发生过程中起重要作用.     

2型糖尿病患者单核巨噬细胞胆固醇外流的降低与ABCG1表达下调相关

目的 研究2型糖尿病患者巨噬细胞内胆固醇外流的变化及ABCA1、ABCG1和SR-B1的表达情况。方法 选取2型糖尿病患者30例（包括合并冠心病组与单纯糖尿病组各15例）和正常对照组15例。分离外周血单核细胞进行巨噬化培养,应用Real-time PCR与Western blot方法测定细胞ATP结合盒受体A1（ABCA1）、ATP结合盒受体G1（ABCG1）和清道夫受体B1（SR-B1）的mRNA及蛋白表达。以5%自身血清及标准血清为接受体测定巨噬细胞胆固醇流出率。 结果ABCG1在2型糖尿病患者巨噬细胞的mRNA与蛋白表达显著低于对照组,而ABCA1与SR-B1的表达在各组间无差异。2型糖尿病患者巨噬细胞的胆固醇流出率也显著低于对照组（P＜0.01）;ABCG1的mRNA表达与巨噬细胞胆固醇外流率呈显著正相关（r=0.552,r=0.630,P＜0.01）。结论 2型糖尿病患者巨噬细胞的胆固醇外流功能明显降低,与ABCG1表达下调相关。     

HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 genes in Japanese multiple sclerosis patients

Japanese MS patients and controls were examined for the distribution of HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 alleles using in vitro amplification of genomic DNA and probing with sequence-specific oligonucleotides. No significant difference in frequency of the examined alleles was observed among the two groups. This is in contrast to Norwegian MS patients, where an association to a combination of certain DQA1 and DQB1 alleles has previously been demonstrated.     

多房囊性肾细胞癌18例临床病理分析

目的：探讨多房囊性肾细胞癌（ mu1ti1ocu1ar cystic rena1 ce11 carcinoma,MCRCC）的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析18例MCRCC的临床病理学及免疫表型特征,并复习相关文献。结果18例中男性12例,女性6例,年龄26~68岁（平均55.6岁）。影像学检查均示多囊性占位,边界清楚。眼观：肿瘤切面见大小不等的多房囊腔,内含浆液性或血性液体。镜检：肿瘤囊内壁被覆单层透明细胞、复层上皮或上皮缺如,囊内成分大部分流失,纤维性囊壁或囊腔间隔中见灶状透明细胞,呈Ⅰ级细胞核,其为形态学诊断线索。免疫表型：透明细胞CD10、vimentin、EMA均阳性,Ki-67增殖指数低。18例患者平均随访43个月,均无复发或转移,预后良好。结论 MCRCC是一种罕见的肾细胞癌组织学亚型,预后良好,需与肾透明细胞癌囊性变及良性肾囊性病变相鉴别。     

结直肠癌中5-氟尿嘧啶代谢酶的表达及临床意义

目的：分析5-氟尿嘧啶（5-F1uorouraci1,5-FU）代谢酶在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系,为进一步探讨其在指导结直肠癌化疗中的潜在意义提供理论依据。方法构建含有72例结直肠癌、56例癌旁远端切缘的组织芯片,采用免疫组化EnVision两步法检测胸苷酸合成酶（ thymidy1ate synthetase,TS）、胸苷酸磷酸化酶（ thymidine phosphory1ase, TP）、二氢嘧啶脱氢酶（ dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD）在两种组织芯片中的表达,并分析三者表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中的TS表达水平低于癌旁远端切缘组织（ P=0.876）;其表达与TNM分期有关（P=0.043）;与患者总生存期呈正相关（P=0.027）。结直肠癌组织中TP表达水平高于癌旁远端切缘组织（P=0.315）;其表达与淋巴结转移有关（ P=0.009）;与患者预后呈负相关（ P=0.040）。结直肠癌组织中DPD表达水平高于癌旁远端切缘组织（P=0.071）;其表达与组织学类型有关（P=0.029）;DPD高表达的患者总生存期显著缩短（P=0.011）。结论在以5-FU为基础化疗的结直肠癌患者中,TS、TP、DPD可以作为预后的重要指标。TS表达与临床分期密不可分,可作为结直肠癌进展的生物学标志。TP表达与淋巴结远处转移及复发密切相关,是影响患者术后复发转移的重要因素。     

BER修复基因多态性与肺癌易感性的研究进展

碱基切除修复(base excision repair,BER)通路是DNA损伤修复的关键通路,通路中的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因(human 8-oxoguanine glycosylase,hOGG1),人类X线交叉互补修复基因(X-ray repair cross-complementing group 1,XRCC1),MutY homolog(MUTYH)基因的单核苷酸多态性影响BER通路中重要的酶和蛋白质的功能,导致修复障碍,最终引起癌症发生.DNA损伤修复基因单核苷酸多态性和肺癌易感性的研究结果尚存在争议,本文对近年来BER通路基因hOGG1Ser326Cys,XRCC1 Arg194Trp,XRCC1 Arg280His,XRCC1 Arg399Gln,XRCC1-77T>C和MUTYHHis324Gln多态性与肺癌易感性的关系的研究进行汇总,并探讨了多项研究对BER基因多态性与不同肺癌亚型的关系以及与吸烟之间关系.基因多态性与肺癌易感性关系受多因素影响,其相关性尚待进一步探索.     

NDE1 and NDEL1: Multimerisation,alternate splicing and DISC1 interaction

Nuclear Distribution Factor E Homolog 1 (NDE1) and NDE-Like 1 (NDEL1) are highly homologous mammalian proteins. However, whereas NDEL1 is well studied, there is remarkably little known about NDE1. We demonstrate the presence of multiple isoforms of both NDE1 and NDEL1 in the brain, showing that NDE1 binds directly to multiple isoforms of Disrupted in Schizophrenia 1 (DISC1), and to itself. We also show that NDE1 can complex with NDEL1. Together these results predict a high degree of complexity of DISC1-mediated regulation of neuronal activity.     

深圳市2008-2009年A型H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶抑制剂耐药性监测

目的 对深圳市2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂的耐药性进行监测.方法 根据原始临床样本的采集时间,按周抽取了55株2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒,对其NA片段进行全长测序,选取WHO推荐的疫苗株和部分国内外分离到的H1N1季节性流感病毒作为参考株,运用Mega3.1软件进行种系发生树的构建、耐药相关位点及糖基化位点的分析.结果 对NA片段的序列分析发现2008年有2株(7.1%)出现了H275Y突变,但是2009年则有25株(92.6%)出现了该突变.提示H275Y达菲耐药突变株成为了2009年深圳市社区传播的优势株.同时还发现了一株Q136K变异株,显示对乐感清出现耐药.分子进化分析结果显示,H275Y变异成为了毒株在系统进化树上分布的主要依据.所有的深圳株NA片段上潜在的糖基化位点序列保守.结论 大量H275Y达菲耐药株的出现提示在今后的工作中应当密切关注流感病毒的耐药进展,进一步加强其耐药机制的研究.

Abstract：

Objective To analyze neuraminidase(NA) inhibitor resistance of seasonal H1N1 influenza A viruses isolated in Shenzhen during 2008 to 2009. Methods The NA gene of these viruses were sequenced. Phylogenetic analysis of the sequences was performed with Mega3. 1 software. Results In 2008, most isolates of the seasonal H1 N1 virus were susceptible to neuraminidase inhibitors, but the H275Y mutation in the neuraminidase gene region associated with high-level oseltamivir resistance had been detected in 92.6% of the strains isolated in 2009. Furthermore, a strain with Q136K was found, which showed the resistance to Zanamivir. Conclusion In the light of emerging resistance, close monitoring and understanding of the nature and dynamics of resistance mutations in influenza virus should be a priority.     

H1N1患者心肌标志物及常规生化检测的临床意义

目的:探讨心肌标志物及部分生化项目检测对于H1N1甲型流行性感冒患者(简称"甲流")的临床意义.方法:对54例H1N1甲流患者(包括4例重症甲流死亡患者)和50例正常对照者用电发光免疫分析、全自动临床化学分析检测H1N1甲流患者心肌标志物及常规生化项目.结果:与正常对照组相比,甲型H1N1感染者在治疗前血清肌酸激酶(C...     

神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶

目的 对Musashi1发挥功能的 RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法 通过构建Musashi1RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果 通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论 Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。     

1995-2007年深圳市H1N1流感病毒血凝素基因的序列分析

目的 研究1995-2007年深圳市流行的H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因特性.方法 选取在该期间分离培养到的64株H1N1流感病毒,对其进行HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用Simmonic软件和Mega软件对其进行分析.结果 深圳市H1N1流感毒株在进化树上可以划分为A、B、C三个分枝.部分2005-2006年毒株与2001年毒株在同一分枝上.通过同源性分析发现部分WHO所推荐的疫苗株在时间上滞后于深圳株.深圳H1N1株的4个抗原决定簇及受体结合位点均发生了氨基酸的替换.除1995年外其余年份的毒株均在137位上发生了氨基酸的缺失.结论 1995-2007年深圳市H1N1毒株氨基酸的变异主要集中在抗原决定簇及受体结合部位.并且抗原决定簇的变异活跃区域随时间的推移发生了转移.