抑癌基因PTEN在膀胱癌中的研究进展

膀胱癌在中国为最常见的泌尿系肿瘤,膀胱癌的发生发展是一个多步骤的过程。PTEN通过FAK途径,P13K途径等发挥其脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长,调节细胞迁移与黏附,参与胚胎的发育及维护免疫系统的稳定。PTEN的失活与膀胱癌紧密联系。PTEN的表达与BcL-2,Survivin,VEGF,P153等因子调控。     

人肝细胞癌中PTEN基因的DNA杂交及突变分析

目的　研究人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因缺失及第５、第８外显子突变。方法　应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因限制性片段长度多态性和纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。应用聚合酶链单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）检查ＰＴＥＮ基因的第５、第８外显子的突变。结果　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,所有３４例肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见限制性片段长度多态性或纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。ＰＣＲＳＳＣＰ检测发现,２例肝细胞癌第５外显子ＰＣＲ产物均显示１条额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）。另２例肝细胞癌第８外显子ＰＣＲ产物呈现额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）,合计突变率为１１．８％（４／３４）。结论　所检３４例人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失,但存在突变。     

脑胶质瘤组织PTEN基因异常及其蛋白表达

目的:研究不同级别脑胶质瘤中PTEN基因第7外显子缺失,突变及PTEN蛋白的表达,分析PTEN基因与脑胶质瘤发生发展的关系.方法:64例胶质瘤标本中病理分化为高分化组(Ⅰ,Ⅱ级)29例,低分化组(Ⅲ,Ⅳ级)35例.采用双重PCR,PCR-SSCP,DNA测序对PTEN基因第7外显子的异常进行分析;采用免疫组化技术对PTEN蛋白表达进行分析.结果:PTEN基因第7外显子总的缺失和突变率为52%.高分化组14%,低分化组83%,2组差异显著(P＜0.05).PTEN 蛋白的表达率为48%.高分化组66%,低分化组34%,2组差异显著(P＜0.05).PTEN蛋白表达在PTEN基因异常组阳性表达率3%,低于PTEN基因正常组的97%,2组差异显著(P＜0.05).结论:PTEN基因缺失和突变是胶质瘤发生的晚期事件,与其蛋白阳性表达率呈负相关.PTEN蛋白阳性表达随胶质瘤恶性程度的增加有不同程度的减少.     

脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达及其基因突变SSCP分析

目的：探讨PTEN基因表达水平及其基因突变与脑胶质瘤的发生及恶性进展的关联性。方法：选取脑胶质瘤组织15例,以4例非胶质瘤脑组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达水平,采用单链构象多态性分析法（SSCP analysis）快速筛查脑胶质瘤组织PTEN基因突变状况。结果：RT-PCR结果,脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达水平(0.063±0.006)较对照组(0.126±0.015)明显降低（P<0.05）。经单链构象多态性分析, 脑胶质瘤组织PTEN基因外显子8、9未检测到突变,但其中1例PTEN基因外显子5的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示电泳带飘移,考虑可能为杂合子突变。结论：PTEN基因低表达及基因突变可能对胶质瘤发生、发展有促进作用。     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87凋亡的影响

目的：研究外源性抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87凋亡的影响,探索膀胱癌基因治疗的新途径.方法：将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染BIU-87细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测PTEN的表达情况,应用细胞原位凋亡检测试剂盒和流式细胞仪分别研究PTEN基因转染前、后膀胱癌细胞凋亡的变化.结果：转染PTEN基因的膀胱癌细胞系BIU-87中PTEN mRNA能稳定表达,肿瘤细胞凋亡明显增多,与对照组比较有显著性差异.结论：转染外源性PTEN基因能显著诱导膀胱癌细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的.     

云南个旧和宣威地区肺癌p53突变检测研究

目的 云南个旧与及宣威地区是云南省肺癌的两大点状高发区,个旧以 矿工为高发人群,宣威以农民为高发,该两地区肺癌发生的病因已初步阐明,本研究旨在深入探讨其发病的分子生物学基础。方法 对26例个旧矿工肺癌患者,15例宣威农民肺癌患者,应用聚合酶链反应－单链构象多态性法研究p53第5至第8外显子突变,并对有突变的个体进行测序。结果 发现云锡矿工肺癌患者中有13例、宣威农民肺癌患者中有4例发生p53突变,应用DNA测序,发现云锡矿工肺癌中有1例于第135位密码子发生突变,由GCC→GTC,导致氨基酸改变,由丙氨酸→缬氨酸（Ala-Val),宣威农民肺癌患者中有1例于247位密码子突变,由AAC→TTC,导致氨基酸发生改变,由天冬酰氨→苯丙氨酸（Asn-Phe)。结论 p53突变在云锡矿工肺癌和宣威农民肺癌中较常发生,并发现两例新的突变位点。p53突变与病人的年龄、性别、坑龄及组织学分类无明显联系。     

中国人苯丙氨酸羟化酶基因的10种新突变

目的 研究中国人苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变的分子基础。方法 应用PCR／SSCP、序列分析等技术,分析中国北方地区120个经典型苯酮尿症(PKU)核心家系,对PAH基因外显子3、5、7、10、11、12进行突变基因的筛查和确定。结果 在确定的31种突变中(另文报道)有10种突变首次在中国PKU人群中发现：165T、S70del、G239D、R241fsdelG、L255S、P281L、G346R、L367fsinsC、R400S和Ivsllnt2t→c。其中4种突变G239D、R241fsdelG、R400S和Ivsllnt2t→c在国际PAH数据库末见公布(至投稿日期)。新突变显示中国人PAH基因虽以点突变为主,但存在小的碱基插入、缺失以及移码突变。新突变主要发生在外显子7中(4／10),每种突变的发生频率均很低(0．42％。1．3％)。结论 中国人PAH基因存在高度异质性和突变的多样性,外显子7是PAH基因的突变热点区域。     

PTEN基因mRNA在膀胱癌中的表达

目的 探讨PTEN基因在膀胱癌组织中转录水平的表达及临床意义。方法 采用RT-PCR方法检测27例膀胱癌及癌周组织PTENmRNA的表达。结果 27例膀胱癌组织中,PTENmRNA无表达10例,阳性表达17例;癌旁组织全部为阳性表达。癌组织表达率明显低于癌周组织(P<0.05)。27例膀胱癌标本中18例表浅性癌,PTENmRNA阳性表达14例(78%);9例浸润性癌,阳性表达3例(33%)。浸润性膀胱癌PTENmRNA表达率明显低于表浅性癌(P<0.05)。结论 PTEN基因转录水平的低表达与膀胱癌细胞的浸润有关。     

抑癌基因PTEN在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的　研究抑癌基因PTEN在宫颈癌组织中的表达 ,探讨PTEN与宫颈癌临床及病理特征的关系及其对宫颈癌预后的影响。方法　应用免疫组织化学方法 (SP法 )检测PTEN基因在 6 2例宫颈癌组织中的表达。结果　 6 2例宫颈癌组织中 ,PTEN阳性表达率为 4 8.39% ;PTEN在直径 <4cm的宫颈癌组织中的阳性表达率为6 1.11% ,明显高于癌灶≥ 4cm患者的 30 .77% (P <0 .0 5 ) ;临床分期≤Ⅰb 期者和Ⅱa-Ⅲa 者阳性表达率分别为78.2 6 %和 30 .77% (P <0 .0 1) ;在高、中、低分化宫颈癌中的阳性表达率分别为 83.33%、5 6 .5 2 %和 2 5 .92 % ,分别比较 ,差异均有极显著意义 (P <0 .0 1) ;无、有淋巴结转移者的阳性表达率分别为 5 7.87%和 2 3.5 3% (P <0 .0 5 ) ;PTEN表达阳性者的 3年和 5年生存率分别为 92 .31%和 84 .6 2 % ,显著高于表达阴性者的 72 .0 %和 5 0 .0 % (P <0 .0 5 )。结论　PTEN基因抑制宫颈癌的生长、浸润及淋巴结转移。其表达率的高低可作为判断预后的参考指标之一     

PTEN基因在人肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:研究人原发性肝癌(HCC)PTEN基因的表达及其临床意义.方法:用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测人HCC组织、癌旁组织、正常组织中PTEN-mRNA和人HCC组织、癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况.结果:PTEN mRNA在人的正常组织、癌旁组织、HCC组织中的表达依次降低,差异有统计学意义(P＜0.01);PTEN蛋白的表达在人HCC组织显著低于癌旁组织(P=0.038).PTEN基因的表达与临床分期、门脉癌栓、病理分级有密切的关系(P=0.031, P=0.001, P=0.025).临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的,其表达较Ⅲ～Ⅳ期的高;无门脉癌栓的较有门脉癌栓的表达高;病理分级为Ⅰ～Ⅱ级的较Ⅲ～Ⅳ级的表达高.结论:HCC的发生中可能存在PTEN 基因的突变或缺失.PTEN基因的表达缺失可能与HCC的恶性程度、疾病的进程及HCC的侵袭转移有密切关系.PTEN基因低表达,HCC病人病程较晚、肝癌的恶性程度较高,较容易发生侵袭转移,预后较差.     

前列腺癌中PTEN基因突变

目的　分析PTEN基因在前列腺癌中的突变情况。方法　对 80例前列腺癌冰冻组织 ( 60例来自前列腺癌原发部位 ,2 0例来自盆腔淋巴结转移灶 )中PTEN基因进行聚合酶链反应 -单链构象多态性分析(PCR -SSCP) ,检测PTEN基因突变。结果　共有 32例发生PTEN基因突变 ,突变发生率为 4 0 % ( 32 / 80 )。来自前列腺癌原发部位的 60例标本中有 18例发生PTEN基因突变 ,突变发生率为 30 % ( 18/ 60 ) ;来自盆腔淋巴结转移灶的 2 0例标本中共有 14例发生PTEN基因突变 ,突变发生率为 70 % ( 14/ 2 0 )。后者PTEN基因突变发生率显著高于前者 ( χ2 =10 ,P <0 .0 0 5)。结论　PTEN基因突变在前列腺癌发生、发展、转移中起重要作用。PTEN基因可作为完善前列腺癌诊断的指标及前列腺癌联合基因治疗方案中的目的基因     

PCR-SSCP法检测人胃癌组织中Rhobtb2基因突变的研究

目的观察Rhobtb2基因在人胃癌组织中的突变情况，探讨Rhobtb2基因突变与胃癌发生的关系。方法采用聚合酶链式反应一单链构象多态性（PCR-SSCP）方法对58例胃癌组织以及癌旁正常组织的Rhobtb2基因进行突变检测，采集1例正常人抗凝血作为正常对照。结果58例胃癌组织中发现1例位于外显子5的错义突变。结论胃癌组织中存在Rhobtb2基因突变，其突变可能与胃癌的发生有关。     

人脑星形细胞瘤PTEN基因的突变

目的 探讨phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten (PTEN)基因突变在人星形细胞瘤发生和恶性进展中的作用。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性结合银染技术检测星形细胞瘤PTEN基因第5外显子区域的突变情况。结果 10例正常脑组织和10例良性脑膜瘤均无点突变发生,62例星形细胞瘤中7例（11．29％）有点突变发生,并且点突变发生与星形细胞瘤病理分级明显相关（P＜0．05）,其中高恶性度星形细胞瘤（Ⅲ－Ⅳ级）突变率（18．91％）明显高于低恶性度（Ⅰ－Ⅱ级）星形细胞瘤（P＜0．05）。结论 PTEN基因突变与星形细胞瘤病理分级关系密切,属于星形细胞瘤恶性进展的后期事件。     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测皮肤癌p53基因突变的比较

目的：检测皮肤癌p53基因5－8外显子的突变频率,比较变性和梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）检测p53基因突变的敏感性,方法：分别采用DGGE和SSCP,对40例皮肤癌患者手术切除组织的p53基因5－8外显子进行突变检测。结果：皮肤癌p53基因5－8外显子的总突变率为35％,其中鳞状细胞癌（SCC）的突变率为36％,基底细胞癌（BCC）为33％,采用GGE和SSCP检测的突变率分别为33％和25％。结论35％的皮肤癌组织存在p53基因5－8外显子突变。GGE检测p53基因突变的敏感性高于SSCP。DGGE结合SSCP有助于提高突变检出率。     

乳腺癌组织抑癌基因PTEN的表达及其意义

目的研究抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化技术（S-P）检测72例乳腺癌中PTEN的表达情况。结果PTEN总的表达缺失率为62.5%（45/72）。PTEN表达缺失率与乳腺癌的组织学分级,TNM临床分期,腋窝淋巴结转移和生存时间有关（P〈0.05）,而与肿瘤的大小和ER、PR状况无关。结论检测乳腺癌PTEN在蛋白水平的表达缺失状况可能有助于对其预后的判断。     

新疆哈萨克族食管癌APC抑癌基因等位基因杂合缺失和点突变研究

目的：探讨抑癌基因在哈萨克族（简称哈族）食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法：应用ＰＣＲ技术并配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和银染的单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法对４１ 例新疆地区原发性食管癌及正常组织中家族性结肠腺瘤样息肉易感基因（ＡＰＣ）第１１ 外显子杂合缺失（ＬＯＨ）及点突变进行检测。结果：３１ 例信息个体中１３ 例显示杂合缺失,杂合缺失率为４１．９％ ,其中哈族的杂合缺失率为５０．０％ （７／１４）,而汉族的杂合缺失率为３５．３％ （６／１７）。点突变率为２４．４％ （１０／４１）,其中哈族食管癌的点突变率为３０．０％ （６／２０）,汉族食管癌的点突变率为１９．０％ （４／２１）。结论：ＡＰＣ抑癌基因第１１ 外显子的ＬＯＨ 存在于食管癌的各个临床分期,ＬＯＨ不是癌症发生的结果,可能是癌症发生的早期因素,且与食管癌的恶性程度有关。     

Cx基因组在大肠癌中的表达及突变

目的 :研究大肠癌基因组中Cx基因的表达 ,探讨诱导剂作用后Cx基因的表达及Cx4 3基因编码序列突变。方法 :Northern杂交、RT PCR和PCR 单链构象多肽分析。结果 :正常大肠粘膜有Cx32、Cx37、Cx4 3mRNA的高表达 ,大肠癌癌旁组织有较弱的Cx32、Cx37、Cx4 3基因表达 ,大肠癌组织中仅有Cx4 3基因微弱表达。维甲酸 (RA)、二甲基亚砜 (DMSO)对大肠癌基因组中Cx4 3基因有诱导作用 ,而其本身表达的Cx4 6基因在RA及佛波酯 (TPA)作用后明显减弱或消失。Cx4 3基因编码区未发现突变。结论 :Cx32可能是人大肠粘膜上皮细胞基因组中维持细胞间隙连接通讯功能的特异表达的Cx基因 ,Cx4 6可能是大肠癌Cx基因表达的一种变异。Cx4 3基因在人大肠癌中表达下调的原因不是其编码区的点突变     

大鼠肝癌变过程中几种癌基因的原位表达及c-Ha-ras1点突变的研究

目的：研究大鼠肝癌变过程中几种癌基因的表达和c-ha－ras1点突变。方法：通过DEN诱发癌变启动模型和肝癌模型,应用免疫组化、原位杂交和MDT－PCR－SSCP分别观测癌基因的表达和c-Ha-ras1点突变。结果：c-Ha-ras和c-myc基因的过表达参与了肝癌变的全过程,其中c-Ha-ras的过表达与癌前嗜碱性肝细胞灶、c-myc基因的过表达与卵圆细胞增殖关系密切。IGF－II基国在的过表达对癌前肝细胞增生灶／结节向肝细胞癌的演讲起重要作用。fms基因过表达仅与个别大鼠肝细胞癌有关。结论：大鼠肝癌变过程与c-Ha-ras1、IGF－II和fms基因的过表达及c-Ha-ras1点突湾有关,并与形态演变相联系。     

哈萨克族苯丙酮尿症F161S/EX6-96A→G双重突变基因杂合子鉴定

目的鉴定新疆哈萨克族苯丙酮尿症（PKU）F161S和EX6-96A→G双重突变基因杂合子。方法应用PCR及单链构象多态性（SSCP）分析技术结合基因序列测定方法确定突变类型。结果对患者PAH基因第3、5、6、7、11、12外显子分别进行SSCP实验筛检，在外显子5和外显子6中，均发现患者的SSCP电泳条带位置与正常对照不同，遂对患者的这两个外显子基因区域分别测序，结果显示：在外显子5中cDNA第482位发生了T→C突变，是F161S型基因突变，而外显子6则在cDNA第611位发生了A→G突变。是EX6-96A→G型基因突变，即患者为F161S／EX6-96A→G型双重突变基因杂合子。结论在新疆哈萨克族中检出的PKU F161S／EX6-96A→G型双重突变基因杂合子，为本民族首次报道。