大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF—β1基因可增强MMP—2表达

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦ－β１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦ－β１的ＭｓＣＭＭＰ－２ｍＲＮＡ蛋白及酶活性变化。结果成功获得稳定过     

转化生长因子β1基因转染人肝癌细胞及其对MMP—2,9表达 …

目的 通过对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）转染ＴＧＦ－β１基因,观察该细胞ＭＭＰ－２,９表达的变化。方法 用电穿孔法进行基因转染,并经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ法作鉴定,后分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法观察该细胞株表达ＭＭＰ－２,９ｍＲＮＡ和ＭＭＰ－２蛋白的变化。结果 经转染ＴＧＦ－β１基因的细胞株ＭＭＰ－２ ｍＲＮＡ和蛋白表达均高于对     

透析对糖尿病肾衰竭病人外周血单个核细胞TGF—β1mRNA？…

①目的 探讨透析对糖尿病肾衰竭病人转化生长因子（ＴＧＦ－β）表达的影响。②方法 采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量技术，对糖尿病肾衰竭不同治疗组病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达进行检测。③结果 糖尿病肾衰竭透析病人ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达明显高于对照组（ｔ＝１２．５３０，Ｐ〈０．０１），且血液透析病人ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达较腹膜透析病人高（ｔ＝２．１３４，     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

自由基促进猪内皮细胞c－sis mRNA／PDGF－B链蛋白表达的实验研究

采用免疫组织化学和原位杂交方法，研究自由基（ＦＲ）对猪主动脉内皮细胞（ＥＣ）的ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ及血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ｂ链蛋白表达的影响。结果显示，ＦＲ促进ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达。ＥＣ暴露于ＦＲ２０ｍｉｎ，ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达较对照组分别增加１．０和２．２倍。提示，ＦＲ损伤ＥＣ所诱导的ＰＤＧＦ合成增多在动脉粥样硬化的发病过程中可能起重要作用。     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

环孢素A联合雷公藤单体T_4对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成及Ⅳ型胶原α1、转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的探讨环孢素Ａ（ＣsＡ）、雷公藤单体Ｔ４单独或联合使用对肾小球系膜基质合成的影响及可能机制。方法用ＥＬＩＳＡ法测定人系膜细胞培养上清Ⅳ型胶原含量,用ＲＴ－ＰＣＲ法测定人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原α１ｍＲαＮＡ（Ｃｏｌｌα１（Ⅳ）ｍＲＮＡ）、转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ的表达。结果ＣｓＡ可双向调节人系膜细胞Ⅳ型胶原的合成,ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ为促进作用,ＣｓＡ０．０１～０．１ｕｇ／ｍｌ为抑制效应。Ｔ４剂量依赖性促进Ⅳ型胶原产生。两药联合应用具有协同效应,小剂量ＣｓＡ和Ｔ４联合在获得较强免疫抑制作用的同时促胶原生成作用较弱。ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ和Ｔ４１０ｎｇ／ｍｌ均可上调人系膜细胞Ｃｏｌｌβ１（Ⅳ）、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,两者变化趋势基本一致。结论ＣｓＡ和Ｔ４均参与调节基质合成,两药小剂量联合促胶原生成作用减轻,这一作用可能由ＴＧＦβ１介导发生于转录水平。     

肝硬变患者TGF—β1基因在外周血中表达及与PⅢP血清水平？…

目的：为验证肝纤维化动物模型和慢性肝病患者肝组织中,转化生长因子（ＴＧＦ－β１）的ｍＲＮＡ表达增强。作者分析肝硬变患者外周血ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ和血清中有活性的ＴＧＦ－β１蛋白及其结果与Ⅲ型前胶原Ｎ端肽血清水平间的关系。方法：肝硬变患者５０自愿者８人,取其外周血,分离单核细胞（ＰＢＭＣ）,提取ＲＮＡ,用巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ并测定血清中ＴＧＦ－β１和ＰⅢＰ的水平。结果：分析表明患者     

bFGF、TGFβ1在心肌细胞肥大中与cAMP、cGMP的关系研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在心肌细胞肥大过程中与ｃＡＭＰ ｃＧＭＰ的关系及意义。方法 分离培养大鼠心肌细胞，分组并使细胞内ｃＡＭＰ或ｃＧＭＰ增加，用放免法检测细胞体积与数量的关系，并用免疫细胞化学及原位杂交技术检测细胞中ｂＦＧＦ、ＴＧＦβ１表达的变化。结果 培养细胞中ｃＡＭＰ增加时细胞体积增大，数量比例无变化，ｂＦＧＦ、ＴＧＦβ１蛋白及ｍＲＮＡ表达     

转化生长因子—β1及其受体的表达与大鼠肝纤维化关系 …

探讨肝纤维化形成过程转化生长因子－β及其受体的表达对胶原合成的影响。方法：采用免疫组化和斑点杂交技术,观察实验性大鼠肝纤维化过程肝内ＴＧＦ－β１,ＴＧＦ－βＲⅡ和Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ及其蛋白表达的动态变化。结果随着肝纤维化程度的加重,肝内ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βＲⅡ和Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ及其蛋白表达均明显增加,组间比较均有显著差异（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）。ＴＧＦ－β１与Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲ     

自由基促进猪内皮细胞c—sis mRNA／PDGF—B链蛋白表达的实…

采用免疫组织化学和原位杂交方法，研究自由基对猪主动脉内皮细胞的ｃ ｓｉｓ ｍＲＮＡ及血小板源生长因子Ｂ链蛋白表达的影响。结果显示，ＦＲ促进ｃ－ｓｉｓ ｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达。ＥＣ暴露于ＦＲ２０ｍｉｎ，ｃ－ｓｉｓ ｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达较对照组分别增加１．０和２．２倍。     

缺血再灌注大鼠心肌Fos蛋白表达及川芎嗪的作用

目的：研究大鼠心肌缺血再灌注（ＭＩＲ）时Ｆｏｓ蛋白表达与其病理组织学改变,并观察川芎嗪（ＴＭＰ）对ＭＩＲ时Ｆｏｓ蛋白表达的作用。方法：采用大鼠ＭＩＲ模型,用免疫组化ＡＢＣ法检测ＭＩＲ过程中不同时期Ｆｏｓ蛋白表达并与病得组织学改变进行对照分析．结果：（１）非缺血心肌无Ｆｏｓ蛋白表达,ＭＩＲ６０ｍｉｎ可诱导Ｆｏｓ蛋白表达,９０ｍｉｎ时达高峰,主要分布在心外膜侧。（２）与ＭＩＲ大鼠相比,ＴＭＰ干预缺血心     

环孢素A联合雷公藤单体T4对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合？…

目的 探讨环孢素Ａ（ＣｓＡ）、雷公藤单体Ｔ４单独鄞艇对肾小球系膜基质合成的影响及可能机制。方法用ＥＬＩＳＡ法测定人系膜细胞培养上清Ⅳ型胶原含量用ＲＴ－ＰＣＲ法测定人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原α１ｍＲＮＡ、转化生长因子β１ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ的表达。结果 ＣｓＡ可双向扁队系膜细胞Ⅳ型胶原的合成,ＣｓＡ１．０μｇ／ｍＬ为促进作用,ＣｓＡ０．０１￣０．１μｇ／ｍｌ为抑制效应。Ｔ４剂量依赖性促进Ⅳ型胶原产生。     

大鼠浅Ⅱ度烫伤愈合渗出液细胞中生长因子mRNA的表达动态

为探讨生长因子在浅Ⅱ度烫伤愈合中的作用提供基础资料，从分子水平研究了烫伤愈合渗出液细胞中生长因子ｍＲＮＡ的表达动态。在ＳＤ大鼠背部埋入海绵，于热烫伤浅Ⅱ度后６ｈ和１、３、７、１０、１４ｄ分别取渗出液细胞，提取细胞总ＲＮＡ，用逆转录聚合酶链反应方法，以βａｃｔｉｎ为内对照，计算ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达量的变化。结果表明：伤后６ｈ，ＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ｂＦＧＦ均有表达；伤后３ｄＴＧＦα、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ均出现表达峰，表达水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；伤后１０ｄＴＧＦβ１、ｂＦＧＦ出现表达峰，表达水平也明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。这提示它们在烫伤愈合的不同时期协同发挥效应。     

低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF—β1 mRNA及蛋白表达的影响

应用细胞培养、核酸分子原位杂交、免疫细胞化学、图像分析技术研究低氧对肺血管周细胞转化生长因子ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ及蛋白表达的影响,探讨低氧条件下肺血中细胞增殖、向平滑肌样细胞分化的机制。结果发现低氧（Ｈ）组周细胞内ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ及蛋白表达量分别是常氧（Ｎ）组的１．３５倍和１．２３倍,差异均有显著意义（均为Ｐ〈０．０１）。研究表明,低氧可促进肺血管周细胞ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ及蛋白表达增高     

体外鼠脑星形胶质细胞损伤后c-fos蛋白、GFAP及其mRNA的动态表达

研究ｃ－ｆｏｓ蛋白、ＧＦＡＰ—ｍＲＮＡ和ＧＦＡＰ在鼠脑星形胶质细胞（ａｓｔｒｏｃｙｅ，ＡＳ）损伤后反应性星形胶质化时的动态变化。用ＡＳ原代培养技术建立体外ＡＳ机械损伤模型．并结合应用免疫组织化学和原位杂交方法．结果：（１） ｃ－ｆｏｓ蛋白于损伤后 ４５ ｍｉｎ即有阳性表达，伤后 ２ ｈ消失； （２损伤边缘的 ＡＳ于损伤后 ６ ｈ开始表达 ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ， １ｄ达高峰，３ ｄ则在损伤边缘少数 ＡＳ中可检出 ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ；（３）损伤后 １ｄ，ＧＦＡＰ表达明显增强，胞体肥大，粗大突起伸向损伤区形成反应性星形胶质化。结论：（ｌ） ＡＳ受损后原癌基因 ｃ－ｆｏｓ首先被激活，ｃ－ｆｏｓ蛋白呈－过性的表达，参与调节ＡＳ的激活；（２）ＡＳ损伤后，ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ的转录增加，ＧＦＡＰ表达增强是由于在转录水平上ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ表达增强的结果；（３）反应性星形胶质化是ＡＳ的自身特性，以ＡＳ肥大为主，ＡＳ受损后，原癌基因ｃ－ｆｏｓ的蛋白参与调节ＡＳ激活的确切机制尚待阐明。     

多发性硬化患者血清TGF-β1及sICAM-1水平测定

目的：探讨可溶性细胞间粘附分子（ｓＩＣＡＭ－１）和转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１ ）在多发性硬化（ＭＳ）发生、发展中的作用。方法：采用ＥＬＩＳＡ方法,测定了３０ 例ＭＳ患者血清中ｓＩＣＡＭ－１ 和ＴＧＦ－β１ 的水平。结果：与对照组和ＮＩＮＤ组相比,ＭＳ患者血清ＴＧＦ－β１ 水平明显下降（Ｐ＜ ０．０１）,而ｓＩＣＡＭ－１ 水平则明显升高（Ｐ＜ ０．０１）。动态观察显示,随着病情的好转,ＴＧＦ－β１ 水平逐渐升高,而ｓＩＣＡＭ－１ 水平则逐渐下降。ＭＳ患者头ＭＲＩ上病灶越大,ｓＩＣＡＭ－１ 水平升高也越明显。结论：血清ＴＧＦ－β１ 和ｓＩＣＡＭ－１的检测对判断ＭＳ患者的病情变化具有重要的临床实用价值     

缺氧对肺动脉内皮细胞PDGF─A、─B链及其受体α、β亚基基因表达的影响

为了研究缺氧性肺动脉高压形成的机理，采用核酸分子杂交技术观察缺氧对肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ链、－Ｂ链及其受体α、β亚基基因表达的影响。结果表明低氧和无氧（２．５％Ｏ２和０％Ｏ２）１．５、３ｈＰＡＥＣ的ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达显著增加（Ｐ＜０．０１，ｖｓ常氧组），而６～４８ｈＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达水平无明显改变。低氧和无氧１．５～４８ｈ均能显著地增加ＰＡＥＣ的ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲ－ＮＡ表达（Ｐ＜０．０５）。常氧条件下ＰＡＥＣ均能低水平地表达ＰＤＧＦ－α亚基受体和β亚基受体，低氧和无氧则上调此两受体ｍＲＮＡ表达水平（Ｐ＜０．０５）。由此说明缺氧不仅能使ＰＡＥＣ“旁分泌”ＰＤＧＦ参与肺动脉平滑肌细胞增殖调节，也使ＰＡＥＣ通过“自分泌”ＰＤＧＤ及上调其膜上的ＰＤＧＦ受体基因表达，参与缺氧肺动脉内皮细胞自身功能调节，从而在缺氧性肺动脉高压肺血管收缩反应增强及肺血管结构改建中发挥重要作用。     

PDGF与肝素对动脉SMCI,Ⅲ型前胶原mRNA表达及胶原蛋白合成？…

目的 研究,探讨血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＰＤＧＦ）和肝素对人主动脉平滑肌细胞（ｈｕｍａｎａｏｒｔａａｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ,ｃｅｌｌ,ｈＡＳＭＣ）增殖,胶原蛋白的合成,分泌以及Ｉ,Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ－ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ表达的调节作用,方法＾３Ｈ－ＴｄＲ,＾３Ｈ－脯氨酸掺入及Ｎ     

细胞因子对人肾小球系膜细胞表达细胞粘附分子的调控

研究白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα），对体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）的调节作用。方法用ｒｈＩＬ－１β（２５ｎｇ／ｍｌ）或ｒｈＴＮＦα（１００ｎｇ／ｍｌ）与系膜细胞共同孵育４、８、１６及３２小时，然后用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测该细胞ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ表达，并用细胞ＥＬＩＳＡ检测它们的蛋白质表达。结果未予任何刺激的对照组，系膜细胞仅低水平表达ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１ｍＲＮＡ和蛋白质。ｒｈＩＬ－１β或ｒｈＴＮＦα刺激后，系膜细胞上这两种细胞粘附分子ｍＲＮＡ的表达，均迅速上调（仅ＴＮＦα刺激ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达高峰在８小时，其余均在４小时），蛋白质表达也显著增加（Ｐ＜０．００１））。结论细胞因子ＩＬ－１β及ＴＮＦα可能通过刺激肾小球系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１而参与肾小球肾炎发病。