中剂量rhG-CSF对正常供者外周血CD34+细胞动员效果

本研究探讨中等剂量600μg/d粒细胞集落刺激因子(GCSF)对正常供者CD34 细胞的动员效果及动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化。对2002-2004年我科31例健康供者给予rhGCSF600μg/d,在动员的第4天开始采集外周血干细胞(PBSC),并检测动员前后白细胞总数、动员后的有核细胞(NC)数、单个核细胞(MNC)数、CD34 细胞数及粒巨噬细胞集落形成单位(CFUGM),同时观察动员及采集过程中的不良反应。对12例供者GCSF动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化进行了观察。结果显示:600μg/d组与既往使用的300μg/d组相比,rhGCSF动员后的外周血细胞中NC、MNC和CD34 细胞及CFUGM显著增加(P<0.05),受者造血重建时间缩短(P<0.05),动员和采集过程中的不良反应发生率无明显上升(P>0.05),无严重不良反应发生。动员后CD3 细胞在PBMNC中的比例较动员前下降(15.05±3.3)%,(P<0.05)。动员前后CD4 /CD8 淋巴细胞的比值无明显变化(P>0.05)。结论:600μg/d的GCSF对正常供者的动员效果好,受者造血重建快,无严重不良反应发生。动员后PBMNC中CD3 细胞的下降及CD4 /CD8 淋巴细胞比值无明显变化,从而使得移植后急性GVHD的发生率无明显上升。     

高剂量化疗联合自体外周血造血干细胞移植时骨髓及外周血采集物中CD34+细胞黏附分子的表达

本研究的目的是应用免疫荧光直接三色标记和流式细胞术(FCM)，观测高剂量化疗(HDC)联合自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)时不同阶段的骨髓及外周血CD34^ 细胞，表达CD54、CD49d和CD62L的情况，探讨不同来源的CD34^ 细胞表达黏附分子的差异及其临床意义。将动员前、干细胞采集后和移植结束而骨髓重建后的骨髓样本及每次外周血单个核细胞样本，以CD34-PE和CD45-PerCP标记的同时，分别加CD54-FITC、CD49d—FITC、CD62L—FITC直接三色荧光标记．应用FACS测定CD34^ 细胞及各黏附分子表达情况，并比较不同时段骨髓中各类黏附分子表达的差异，以及外周血造血干细胞采集物与动员前骨髓中各类黏附分子表达的差异。结果表明．动员前、采集后及移植重建后骨髓中CD34^ 细胞对CD54、CD49d和CD62L表达的变化无统计学差异；造血干细胞第1和第2次采集物之间CD34^ 细胞对CD54、CD49d和CD62L的表达变化也无统计学差异；而造血干细胞采集物中CD34^ 、CD49^ 细胞较之动员前骨髓中CD34^ CD49d^ 细胞明显减少(P=0．001)。结论：化疗联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的动员方法，可使骨髓中CD34^ 细胞的CD49d表达下调，并使之动员而进入外周血，移植重建后骨髓中CD34^ 细胞的CD49d表达趋于正常，其进一步的临床意义有待更多的病例积累予以阐明。     

影响外周血CD34+细胞纯化的相关因素

背景:造血干细胞具有良好的自我复制和更新的能力,CD34+细胞具备有造血干细胞的标志.目的:分析影响外周血CD34+细胞纯化的因素.方法:90例患者,经粒细胞集落刺激因子5 μg/(kg·d)动员1～3 d后,应用COBE血细胞分离机采集外周血单个核细胞液80～100 mL,经Clini MACS免疫磁珠分选技术纯化CD34+细胞.结果与结论:90例CD34+细胞平均数为(1.73±1.15)×107,经流式细胞仪分析,CD34+细胞阳性率大于80%.COBE血细胞分离机单次收集的循环血量在980～1 100 mL时,利于CD34+细胞收集(P=0.005);动员后白细胞浓度在(16～21)×109 L-1时,利于CD34+细胞收集(P < 0.05);中间细胞和淋巴细胞总比例超11%时,利于CD34+细胞收集(P < 0.05);单个核细胞液血小板小于2 100×109 L-1时,利于CD34+细胞的收集(P < 0.05);年龄小于16岁,CD34+细胞数高(P=0.003);CD34+细胞抗体的温度、磁性标记及细胞处理时离心力的大小,均有影响.结果提示,经Clini MACS免疫磁珠细胞分选技术纯化的CD34+细胞能满足临床需要,实验稳定性好,重复性好;注重相关因素的影响,可提高纯化的CD34+细胞数量.     

血小板第4因子对脐血CD34+细胞黏附功能的影响

目的研究血小板第4因子(PF4)对新鲜脐血CD34+细胞及扩增后脐血CD34+细胞黏附功能的影响;PF4对脐血CD34+细胞上的黏附分子CD49d及基质细胞趋化因子(SDF-1)受体CXCR4的作用.方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34+细胞,结晶紫染色测定细胞总黏附性,免疫荧光标记流式细胞仪测定CD49d及CXCR4的表达.结果①PF4 可使新鲜脐血CD34+细胞总黏附性提高,且与剂量相关.②SDF-1 100 ng/ml可使脐血CD34+细胞总黏附性提高.③脐血CD34+细胞扩增10 d后未加PF4刺激的自发以及经SDF-1诱导的黏附功能开始下降,在扩增脐血CD34+细胞不同时间段加入100ng/ml PF4,脐血CD34+细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平,以0天时脐血CD34+细胞黏附性为100%,扩增14 d时脐血CD34+细胞黏附性PF4组为(262.04±64.81)%,同期对照组为(64.35±8.29)%,经SDF-1诱导下扩增14 d的CD34+细胞的总黏附性PF4组为(138.31±32.39)%,同期对照组为(67.66±12.44)%.④PF4 100 ng/ml作用于CD34+细胞时,CD49d表达增长13.02%,CXCR4表达增长17.33%.结论 PF4可使新鲜及扩增后的脐血CD34+细胞黏附功能增强,并促进CD49d及CXCR4的表达,提示PF4可能有助于脐血干细胞的归巢.     

急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1、CD34和CD117的表达

背景：血管细胞黏附分子1与白血病浸润密切相关,白血病细胞本身是否表达血管细胞黏附分子1,以及与疾病难治是否相关尚无定论。目的：分析血管细胞黏附分子1、CD34、CD117在急性髓系白血病细胞表面的表达,3者之间的相互关系及与难治性急性髓系白血病的相关性。方法：采用流式细胞技术检测16例急性髓系白血病细胞中血管细胞黏附分子1、CD34、CD117的表达,其中难治组6例,非难治组10例;同时以正常骨髓单个核细胞标本作对照。结果与结论：急性髓系白血病细胞CD34、CD117表达高于对照组（P〈0.05）。难治组急性髓系白血病细胞CD34表达明显高于非难治组（P〈0.05）。难治组与非难治组CD117表达差异无显著性意义（P〉0.05）。急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1表达与对照组比较差异无显著性意义（P〉0.05）。难治组与非难治组血管细胞黏附分子1表达差异无显著性意义（P〉0.05）。表明急性髓系白血病细胞伴CD34表达,为不良预后指标之一,CD117、血管细胞黏附分子1表达与其是否难治无明显相关性。     

急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1、CD34和CD117的表达

背景:血管细胞黏附分子1与白血病浸润密切相关,白血病细胞本身是否表达血管细胞黏附分子1,以及与疾病难治是否相关尚无定论。目的:分析血管细胞黏附分子1、CD34、CD117在急性髓系白血病细胞表面的表达,3者之间的相互关系及与难治性急性髓系白血病的相关性。方法:采用流式细胞技术检测16例急性髓系白血病细胞中血管细胞黏附分子1、CD34、CD117的表达,其中难治组6例,非难治组10例;同时以正常骨髓单个核细胞标本作对照。结果与结论:急性髓系白血病细胞CD34、CD117表达高于对照组(P<0.05)。难治组急性髓系白血病细胞CD34表达明显高于非难治组(P<0.05)。难治组与非难治组CD117表达差异无显著性意义(P>0.05)。急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1表达与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。难治组与非难治组血管细胞黏附分子1表达差异无显著性意义(P>0.05)。表明急性髓系白血病细胞伴CD34表达,为不良预后指标之一,CD117、血管细胞黏附分子1表达与其是否难治无明显相关性。     

异基因外周血干细胞移植供者CD34细胞及亚群的测定

目的　探讨流式细胞技术测定异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)中供者细胞表面分化抗原 34 (CD34 )细胞及其亚群变化和意义。方法　应用流式细胞多色分析技术 ,测定 15 1份allo PBSCT供者 ,经细胞因子动员后外周血标本CD34 及其亚群变化及影响因素。结果　在检测的15 1份标本中 ,CD34 细胞占外周血单个核细胞的 (0 .95 4± 0 .46 6 ) % ,含量为 (3.5 5± 2 .41)× 10 9/L ;其中CD34 CD38-亚群含量为 (0 .2 5 3± 0 .2 40 )× 10 9/L ,占CD34 细胞的 6 .78% ;CD34 HLA DR 亚群含量为 (0 .2 73± 0 .310 )× 10 9/L ,占CD34 细胞的 6 .82 % ,两者差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;随着采集次数的增加 ,CD34 细胞及其亚群数量逐渐减少 (P <0 .0 5 ) ;随着供者年龄增加 ,其外周血CD34 细胞数逐渐减少 ,≥ 40岁供者CD34 细胞百分比和含量比 <2 0岁供者分别降低了 47%和 5 0 % ;动员后外周血CD34 细胞数存在性别差异 ,男性供者外周血CD34 细胞数较女性高 2 3%。结论　应用流式细胞多色技术测定外周血造血干祖细胞 ,不仅能确定造血细胞数量 ,而且对造血干祖细胞的质量进行评价 ,为临床干细胞移植治疗提供重要数据。     

经粒系集落刺激因子刺激外周血CD34~+细胞动员效果相关因素的考察

目的探讨粒系集落刺激因子(G-CSF)动员健康供者外周血造血干细胞效果的影响因素。方法对24例健康供者皮下注射G-CSF动员造血干细胞,检测外周血T淋巴细胞亚群和血常规数据。结果经G-CSF刺激后,外周血CD3+(%)、CD3+CD4+(%)、白细胞计数、血小板均明显升高(P0.05);而动员第4天、第5天、第6天骨有核细胞密度、CD34+细胞百分比无明显差别。经相关性分析,性别、年龄、体质量与CD34+细胞百分比呈负相关(P0.05),白细胞计数呈正相关(P0.01)。结论在一定范围内男性供者优于女性供者,年龄越小,体质量越轻,白细胞计数越高,经G-CSF动员的外周血造血干细胞CD34+细胞百分比越高。     

外周血干细胞移植中标本放置时间对CD34~+细胞及单个核细胞计数结果的影响

目的探讨标本放置温度及时间对外周血CD34+细胞及单个核细胞(MNC)计数结果的影响。方法抽取10例健康供者或自体外周血干细胞(APBSCT)移者经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员第5天EDTA-K2抗凝静脉血,各分装2管,分别在室温和4℃条件下保存,对每份外周血标本分别于0、1、2、4、6、8、10、12、24h计数MNC和CD34+细胞。结果室温放置的标本中,MNC和CD34+细胞计数随着标本放置时间的延长而逐渐减低,放置到8h时,CD34+细胞计数和0h相比差异有统计学意义(t=5.04,P<0.05);放置到12h时,MNC计数和0h相比差异有统计学意义(t=3.68,P<0.05)。4℃条件下,标本放置到24h,MNC和CD34+细胞计数结果和0h相比差异均无统计学意义(t分别为0.50、1.24,P>0.05)。结论为确保检测结果的准确性,室温放置的标本CD34+细胞计数应在采血后8h内完成,MNC计数可在采血后10h内完成,外周血标本最好放置于4℃条件下保存。     

间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增和黏附分子表达的影响

目的研究间充质干细胞(MSC)对脐血CD34+细胞体外扩增能力和黏附分子表达的影响.方法从正常人骨髓中分离扩增MSC,通过免疫表型和向成骨细胞及脂肪细胞分化能力对其鉴定;将脐血CD34+细胞接种到MSC或其他培养液中,比较不同培养条件对造血细胞扩增能力、集落形成能力及黏附分子表达的影响.结果MSC表达Thy-1、SH2、SB10、CD44、CD13、CD49e和CD29,不表达CD34、CD45、HLA-DR、CD14和CD31,经过诱导可以向成骨细胞和脂肪细胞分化;实验组在MSC和细胞因子作用下,扩增8 d后有核细胞、CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD62L+细胞和CFU-Cs分别扩增145.57±17.89,37.47±13.78,69.78±50.07,10.74±5.89和20.73±5.54倍,均显著高于对照组;扩增后CD34+细胞的ALCAM、VLA-α4、VLA-α5、VLA-β1、HCAM、PECAM和LFA-1表达较扩增前无明显变化,虽然ICAM-1和L-选择素表达下降,但实验组CD34+CD62L+和CD34+CD54+细胞的绝对数显著增加.结论MSC可为造血干细胞体外扩增提供适宜的微环境,有助于抑制HSC分化并保持其造血重建潜能和归巢能力.     

Enhanced mobilization of CD34<Superscript>+</Superscript> progenitor cells expressing cell adhesion molecules in patients with STEMI

Background  Adult stem cells can contribute to myocardial regeneration after ischemic injury. The aim of the study was to determine (1) the amount of mobilized CD34⁺/CD117⁺, CD34⁺/KDR⁺ cells into peripheral blood (PB) in relation to inflammatory and haematopoietic cytokines, (2) the presence of circulating CD34⁺ cells, expressing cell adhesion molecules (CAM), in patients with ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI) in comparison to patients with coronary artery disease (CAD). Materials and methods  Twenty-three patients with STEMI (<12 h), 24 patients with CAD and 15 control subjects were enrolled in this study. The patients were matched in age, 2-CAD, ejection fraction (45%) and end-diastolic volume index (70 ml/m²). The number of stem cells and the expression of adhesion molecules were quantified by use of flow cytometry. Inflammatory cytokines [interleukin-6 (IL-6), granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF), vascular endothelial growth factor] and chemotactic factors as stromal cell-derived factor-1 (SDF-1), hepatocyte growth factor (HGF) were determined by ELISA. Results  The amount of circulating progenitor cells including CD34⁺/CD117⁺ and CD34⁺/KDR⁺ cells was significantly higher in patients with STEMI than in patients with CAD (CD34⁺/CD117⁺ 433 ± 128 vs. 100 ± 17, P = 0.012; CD34⁺/KDR⁺ 253 ± 41 vs. 128 ± 24, P = 0.02). The mobilization of CD34⁺ progenitor cells expressing CXCR4-receptor, lymphocyte function-associated antigen-1 (LFA-1), very late antigen-4 (VLA-4) and ICAM-1 into PB was significantly higher in patients with STEMI compared to CAD (CD34⁺/CXCR4⁺ 740 ± 327 vs. 136 ± 23, P = 0.006; CD34⁺/LFA-1 976 ± 227 vs. 329 ± 41, P = 0.025; CD34⁺/VLA4⁺ 830 ± 161 vs. 330 ± 31, P = 0.007; CD34⁺/ICAM⁺ 387 ± 66 vs. 144 ± 26, P < 0.001). Additionally, the cytokines G-CFS, IL-6 and HGF were upregulated and significantly increase in the STEMI group compared with controls and CAD (G-CSF 50.6 ± 6.8 vs. 23 ± 3 vs. 23.8 ± 2, P ^{Co vs. STEMI} < 0.001, P ^{Co vs. CAD} = n.s., P ^{STEMI vs. CAD} < 0.001; IL-6 8.4 ± 0.6 vs. 3.8 ± 1.9 vs. 2.6 ± 1, P ^{Co vs. STEMI} < 0.001, P ^{Co vs. CAD} = n.s., P ^{STEMI vs. CAD} < 0.001; HGF 4,502 ± 461 vs. 686 ± 195 vs. 1,746 ± 461, P ^{Co vs. STEMI} < 0.001, P ^{Co vs. CAD} = n.s., P ^{STEMI vs. CAD} < 0.001), while the level of SDF-1 was increased in patients with CAD compared to controls and patients with STEMI (3,035 ± 286 vs. 2,028 ± 76 vs. 2,154 ± 234, P ^{Co vs. STEMI} = n.s., P ^{Co vs. CAD} = n.s., P ^{STEMI vs. CAD} = 0.005). Conclusions  The study demonstrates in patients with STEMI an increased mobilization of progenitor cells like CD34⁺/CD117⁺ and CD34⁺/KDR⁺ compared to CAD. Furthermore, we could shown that in patients with STEMI the mobilization of CD34⁺ progenitor cells with expressed CAM was increased. It is to speculate that an enhanced expression of adhesion molecules may increase the transmigration and implantation of progenitor cells into ischemic myocardium for myocardial repair.     

The kinetics of G-CSF mobilization of CD34+ cells in healthy people

When healthy people are given granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) for 10 days the number of CD34+ cells in the peripheral blood begins to increase on the fourth day, reaches a maximum on the sixth day and then decreases. In this study, we further define the time and variability of peak mobilization of CD34+ cells. Twenty-two healthy people were given G-CSF (7.5 or 10 μg kg^?1 day^?1) subcutaneously each morning for 5 days and peripheral blood CD34+ cell counts were analysed immediately prior to the fourth (day 4) and fifth (day 5) G-CSF injection and 24 h after the fifth injection (Day 6). White blood cell (WBC) and neutrophil counts were greatest on day 6 [WBC = 43.8 ± 13.9 × 10⁹ L^?1 (mean ± 1 SD) and neutrophils = 36.6 ± 12.8 × 10⁹ L^?1]. In contrast the CD34+ cell counts on day 6 (107 ± 104 × 10⁶ L^?1) were less than on day 5 (128 ± 136 × 10⁶ L^?1) (P= 0.048) but still greater than on day 4 (60.7 ± 40.2 × 10⁶ L^?1) (P < 0.0001). The CD34+ cell counts of 10 donors were measured 2, 4 and 6 h after the fifth injection to determine if the counts increased further between days 5 and 6. The number of CD34+ cells in the blood on day 5 2 h after the fifth injection (193 ± 277 × 10⁶ L^?1) was greater than the number prior to the injection (158 ± 190 × 10⁶ L^?1), 4 h post-injection (139 ± 158 × 10⁶ L^?1) and 6 h post-injection (170 ± 236 × 10⁶ L^?1), but the differences were not significant (P= 0.29, 0.25 and 0.45). The number of CD34+ cells in the blood of 12 people were measured before and after the fourth G-CSF dose. Prior to the day 4 injection the CD34+ count was 61 ± 40 × 10⁶ L^?1. At 2, 4 and 6 h the counts were 60 ± 40, 61 ± 29 and 64 ± 30 × 10⁶ L^?1, respectively, and the differences were not significant (P= 0.99, P= 0.98, and P= 0.73). In conclusion, when healthy volunteers are given daily G-CSF injections, the number of mobilized CD34+ cells was the greatest on day 5, slightly less on day 6 and the least on day 4. If only one PBSC component is needed, PBSCs can be collected on day 5 after only 4 days of G-CSF. If PBSC components are collected on both days 5 and 6, the fifth dose can be given either before or after the collection of the first PBSC component.     

Tempo of hematologic recovery correlates with peripheral blood CD34+ cell level in patients undergoing stem cell mobilization

This study was undertaken to evaluate the relationship between the time to recovery of peripheral blood counts and CD34+ cells in the peripheral blood (PB) and apheresis collections of patients undergoing intensive chemotherapy followed by rhG-CSF. Twenty-three patients with a median age of 42 years (range 17–64) with malignancies underwent peripheral blood stem cell (PBSC) collection after cyclophosphamide (CY) 4 g/m² and etoposide (600 mg/m²) followed by rhG-CSF (10 μg/kg/day). The WBC, platelet counts, CD34+ cell counts per ml of PB, and CD34+ cells in apheresis products were followed in all patients. The relationship of the time to recovery of WBC >1,000/μl, >3,000/μl, >10,000/μl and platelets >20,000/μl and 50,000/μl was compared to the average daily CD34+ cells/ml in each patient using the Spearman Correlation test. The tempo of recovery of WBC and platelets were highly correlated with the average CD34+ cell count in blood. In order to derive some useful guidelines for the timing of apheresis, the patients were divided into two groups, early recover (ER) and late recover (LR) based on the median time (day 10) to reach WBC count greater than 1,000/μl. ER patients had an average daily PB CD34+ cell count of 9.04 × 10⁴/ml (range 0.44–17.5) and a median yield of CD34+ cells of 10.43 × 10⁶/kg (range 0.60–25.95) compared to LR patients, who had 1.87 × 10⁴/ml (range 0.32–5.44) in the PB (P = .001) and a yield 3.20 × 10⁶/kg CD34+ cells (range 0.037–9.39) (P = .001). Patients recovering their WBC to 1,000/ml within 10 days of completing this regimen may undergo PBSC collection and achieve minimum-target cell doses of >2.5 × 10⁶ CD34+ cells/kg—100% of the time. J. Clin. Apheresis 13:1–6, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.     

microRNA在人脐血CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞中的差异性表达

为进一步探讨microRNA（miRNA）在造血调控中的作用奠定基础,比较了miRNA在人脐血CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞中的差异性表达。从人脐血中分离单个核细胞（MNC）,应用FACSVantage分选流式细胞仪分选CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞;抽提miRNA后与miRNA芯片杂交,应用生物信息学技术分析miRNA芯片的表达结果。结果发现,miRNA在人脐血CD34^＋CD38^＋细胞的表达水平比在CD34^＋CD38^-细胞的表达水平降低至1／2以下者共11个,表达水平升高至2倍以上者共73个,以上84个miRNA被称为“干细胞性”miRNA。经比较Georgantas等和芯片表达结果,发现有12个（14、29％,12／84）相同的miRNA。部分miRNA经历了类似于CD34在造血细胞表面的发展历程。应用生物信息学技术可寻找到新的与造血调控相关的miRNA簇及miRNA的下游靶基因。结论：“干细胞性”miRNA在正常造血中发挥着重要作用,即miRNA的系统表达模式一造血干／祖细胞基因表达谱一造血干／祖细胞的自我更新和系列定向分化。     

脐血CD34+细胞与单个核细胞的体外扩增特性研究

目的　探讨CD34+ 富集细胞和单个核细胞 (MNC)的体外扩增特性。方法　利用Min iMACS系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批MNC进行对照培养 ;观察了再次富选和MNC培养上清 (MNC SN)对CD34+ 富集细胞扩增的影响 ;并尝试了MNCCD34- 细胞的培养。结果　虽然CD34+ 富集细胞具有很高的扩增潜力 ,但在培养过程中 ,其集落密度和CD34 + 细胞含量却始终呈下降趋势 ,而MNC在培养中却出现了一个上升的趋势 ,集落密度和CD34+ 细胞含量分别由第 0天的 (4 12± 16 7) 10 5细胞和 (1.12± 0 .4 2 ) %增至第 7天的 (116 2± 5 6 6 ) 10 5细胞和 (4 .17± 1.4 4 ) % ;再次富选可以使培养过的CD34+ 富集细胞的总细胞和CD34+ 细胞扩增能力大大提高 ;MNCCD34- 细胞具有集落形成和转化为CD34+ 细胞的能力 ;MNC SN对CD34+ 富集细胞的集落形成有促进作用 ,而同时又对CD34+ 细胞有促分化作用。结论　CD34+ 富集细胞在体外大量扩增的同时存在大量分化 ,其在培养过程中产生的CD34-细胞对CD34+ 细胞的扩增有抑制作用 ;脐血MNC中大量的CD34- 细胞含有造血干 祖细胞 ,其分泌的细胞因子有促进CD34+ 细胞向较为成熟的集落形成祖细胞分化的作用。     

化疗联合G-CSF动员的骨髓及外周血CD34+细胞表达粘附分子的变化

探讨化疗合G－CSF动员前，后患骺髓及外周血CD34^ 细胞表达CD44，CD49d，CD62L及趋化因子CXCR4的动态变化，用免疫荧光直接三角标记和流式细胞术测定G－CSF动员前，后骨髓及外周血CD34^ 细胞的CD44，CD49d，CD62L及趋化因子CXCR4的表达，观察输注各表达亚群细胞数与移植后造血重建的关系。结果发现，动员后骨髓中CD34^ CD44^ 和CD34^＋CD49d^ 细胞的百分比较动员前明显降低, 而外周血中二的比例则显升高；动员前，后骨髓中CD34^＋CD62L^＋和CD34^＋CXCR4^ 细胞的变化并不明显，而外周血中前明显增加，后则显减少。输入CD44^＋，CD49d^ ，CD62L^ 及CXCR4^ 的CD34^＋细胞的量与移植后血中中性粒细胞和血小板恢复的时间未表明有显的相关，结论：G－CSF动员可下调骨髓CD34^＋细胞的CD44，CD49d，CD62L及CXCR4的表达，从而进入外周血循环，输注这些细胞的临床意义有待累积更多病例的分析。     

不同标记法及去红细胞法对检测微量脐血CD34+造血干细胞含量的影响

目的 采用ISHAGE(international society of hematotherapy and graft engineering)法和常用的CD34^ 造血干细胞流式检测方法对同一脐血样品进行比较实验，确定更适用于微量脐血CD34 ^ 造血干细胞含量检测的方法。方法 分别采用ISHAGE造血干细胞计数协会推荐方法、低渗NH4C1去红细胞CD45／CD34双色标记法(NH4C1双标法)、OptilyseC溶血剂去红细胞CD34单色标记法(OptilyseC单标法)、低渗NH4C1去红细胞CD34单色标记法(NH4C1单标法)、羟乙基淀粉沉淀去红细胞CD45／CD34双色标记法(HES双标法)检测脐血造血干细胞含量，并比较不同方法测得数据的差异。结果 8份脐血标本用ISHAGE方法测得CD34^ 造血干细胞含量的中位数为0．278％，NH4C1双标法测得结果为0．297％，与ISHAGE方法相比差异无显性。用HES双标、OptilyseC单标法和NH4C1单标法测得的结果分别为5．715％，0．391％和0．741％，与ISHAGE方法相比差异有显性。结论 ISHAGE方法是一种公认的准确性高，重复性好的检测造血干细胞方法。OptilyseC单标法、NH4C1单标法和HES双标法测定结果比实际值偏高。     

双份脐血间CD34^＋细胞与CD3^＋细胞相互作用对分化增殖能力的影响

目的双份脐血移植的植入动力学机制目前尚无定论,推测双份脐血中的淋巴细胞与优势份脐血的产生相关。本实验将双份脐血的CD34^＋细胞与CD3^＋细胞混合培养,观察CD3^＋细胞对CD34^＋细胞的增殖分化有无影响。方法建立液体和半固体培养体系,将免疫磁珠分选纯化的双份脐血间的CD34^＋细胞和CD3^＋细胞混合培养6d和14d。以流式细胞计数观测CD34^＋细胞培养后的分化指标（CD33,CD41,CD71）;计数集落形成单位（GM—CFU、BFU-E、GEMM—CFU）分析CD34^＋细胞的增殖情况。结果液体共培养后各份CD34^＋细胞表面分化指标的变化。脐血CD34^＋细胞分选富集的纯度为（98．70±0．72）％。3d实验组和对照组的各项分化指标无差异（P〉0．05）;6d的CD33、CD71实验组明显低于对照组,而CD41明显高于对照组（P〈0．05）。半固体共培养后CD34^＋细胞增殖能力的变化。实验组的红系集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（GM—CFU）数低于对照组（P〈0．05）,而混合细胞集落形成数（GEMM—CFU）高于对照组（P〈0．05）。结论将两份脐血的CD34^＋细胞和CD3^＋细胞体外混合培养对CD34^＋细胞的增殖分化能力有影响,推测双份脐血间的相互作用可部分地通过CD3^＋细胞介导。