重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究

目的 建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段.方法 首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T391),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的 蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化.对纯化后的蛋白进行Western印迹分析.构建TACE信号肽+前肽结构域(T648)的真核表达质粒(pEGFP-N1/T648),将其瞬时转染HeLa细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达观察pEGFP-N1/T648转染后在细胞中分布情况.建立小鼠内毒素血症模型组,前肽重组蛋白治疗组和PRS对照组,通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞mTNF-a的表达,并取肝,肺,肾组织行HE染色,观察纯化的前肽蛋白对炎症的抑制作用.结果 成功构建了pEGFP-N1/T648真核表达载体,在体外转染HeLa细胞,可见荧光主要分布在细胞膜上.流式细胞技术证明重组前肽蛋白可明显对抗LPS诱发的sTNF-a分泌增加,使小鼠腹腔巨噬细胞膜表面mTNF-a增加,常规病理切片HE染色显示该蛋白可降低LPS诱发的小鼠肝,肾,肺组织的炎症反应.结论 TACE前肽重组蛋白降低了sTNF-a的分泌,对炎症有明显的抑制作用,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法.     

重组TACE前肽对自身TACE活性的抑制作用

目的 以脂多糖(LPS)刺激人单核细胞型淋巴瘤细胞株THP-1为模型,观察重组肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)前肽结构域对催化TACE结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段.方法 首先利用DNA重组技术分别构造含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法 扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T591),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的 蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化.对纯化后的蛋白进行Western blot分析.LPS分时相刺激THP-1细胞后,用细胞学技术观察纯化的T591在蛋白质水平上对TACE的表达和活性的影响.结果 TACE重组前肽蛋白能显著抑制TACE的活性,减少分泌型TNF-α(sTNF-α)分泌,抑制率达57%.结论 TACE重组前肽抑制了TACE的活性,降低了sTNF-α的分泌,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法 .     

羧胺三唑抑制肿瘤细胞诱导的巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α的释放

目的观察体外培养的肿瘤细胞对巨噬细胞炎症因子——肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的诱导作用;初步探索羧胺三唑(CAI)对肿瘤诱导的巨噬细胞中TNF-α释放的影响。方法利用transwell装置,建立Lewis肺癌细胞(LLC)与RAW264.7巨噬细胞共培养体系,采用荧光定量PCR方法和ELISA方法分别分析RAW264.7中TNF-α的表达和释放;用LLC条件培养基(LCM)诱导RAW264.7,同时给予CAI处理,采用CCK-8方法分析LCM和CAI对RAW264.7活力的影响,采用ELISA方法分析CAI对诱导后的RAW264.7中TNF-α释放的影响。结果与LLC共培养24 h可显著增加RAW264.7中TNF-α相对表达量[单独培养vs共培养,(1.00±0.12)vs(2.23±0.17),P<0.01]和释放[单独培养vs共培养,(65.21±12.76)vs(143.92±19.22)pg/ml,P<0.05];LCM和CAI在1 h和4 h对RAW264.7活力没有影响,CAI可以显著抑制LCM对RAW264.7中TNF-α释放的诱导(4 h,P<0.01)。结论 LLC肿瘤微环境可以诱导RAW264.7中TNF-α的表达增加;CAI对这种诱导的抑制使其在肿瘤环境中表现出一定的抗炎作用,可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

地塞米松对宫内感染致胎鼠脑TNF-α表达及脑损伤的影响

目的:早产儿脑损伤有很高的发病率且愈后很差,目前认为宫内感染、炎症反应是导致早产儿脑损伤的重要因素。本研究通过给予孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)制作宫内感染的动物模型,探讨地塞米松(Dex)对早产儿脑损伤是否具有保护作用。方法:将孕18d孕鼠随机分为盐水对照组、LPS组和Dex干预组,分别腹腔注射药物。采用免疫组化法及RT-PCR法观察腹腔注药4h后胎鼠脑肿瘤坏死因子(TNF)表达的变化;采用原位末端标记法检测注药48h后LPS组、对照组及干预组胎脑细胞凋亡的变化。结果:Dex干预组胎脑TNF-α蛋白水平及mRNA表达较LPS组明显减弱(P0.05),且与Dex的剂量呈负相关。Dex干预组凋亡细胞与LPS组相比较明显减少(P0.01)。结论:宫内注射LPS可导致胎鼠脑损伤,地塞米松可能通过抑制胎脑TNF-α的表达,降低脑细胞凋亡,对宫内感染致脑损伤具有保护作用。     

人胃癌转移鼠模型的构建及移植瘤的阶段性研究

目的：建立人胃癌的“转移鼠”模型,为研究胃癌转移打下基础。方法：将人胃低分化粘液腺癌ＭＧＣ－８０３细胞悬液先在裸小鼠皮下接种成瘤,再取瘤组织块分别接种到裸鼠的皮下、胃壁上（转移鼠模型）,分早（〈２０天）、中（２０～４０天）、晚（〉４０天）,４个阶段观察移植瘤的生长侵袭转移情况。结果：皮下组移植成瘤率为８２．１％（２３／２８）,早、中阶段未见转移,晚期肺转移率５７．１％（４／７）。胃壁组移植成瘤率为     

黏液瘤病毒对裸鼠子宫内膜癌移植瘤的抑瘤作用及机制

目的 探讨黏液瘤病毒对裸鼠皮下移植子宫内膜癌的抑瘤作用及其可能机制.方法 采用皮下注射子宫内膜癌HEC-IB细胞的方法建立裸鼠子宫内膜癌模型.瘤内注射黏液瘤病毒后,观察肿瘤生长变化,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中PI3K、Akt、GSK表达水平及活性的变化.同时通过瘤内注射灭活病毒和生理盐水作为对照组.结果 黏液瘤病毒对正常裸鼠不存在毒性及致病能力.黏液瘤处理组肿瘤大小较对照组缩小,差异具有统计学意义.经黏液瘤病毒处理的肿瘤组织中PI3K、Akt的表达水平较对照组显著降低.结论 黏液瘤病毒对裸鼠子宫内膜癌移植瘤具有抑瘤作用,其可能机制是通过调节PI3K/AKT（磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶）信号通路调控细胞凋亡.     

紫苏醇对肺癌A549 细胞增殖和侵袭的抑制作用机制的研究

目的:探讨紫苏醇(Perillyl alcohol,PA)对肺癌A549 细胞增殖和侵袭的抑制作用机制,并阐明其对肿瘤血管生成信号的影响。方法:不同浓度PA 和厄洛替尼加入到A549 细胞中,利用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定药物组对A549 细胞的抑制作用,Transwell 法检测PA 对A549 细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;分光光度法检测PA 对细胞凋亡蛋白Caspase-3 活性的影响,Western blot 法检测A549 中VEGF、HIF-1 及COX-2 的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验测定A549 细胞中NF-κB 活性。结果:与空白对照组比较,随着浓度的增加(10、50、100 g/ ml),PA 和厄洛替尼对A549 细胞生长的抑制率在不断地增加,差异均有统计学意义(P<0.05),A549 细胞侵袭能力呈现不断下降的趋势,差异均有统计学意义(P<0.05),A549 细胞内活性氧水平随厄洛替尼浓度的增加变化不大,而ROS 水平随着PA 的浓度的增加而增加,在100 g/ ml 浓度的PA 下引起的ROS 百分率达到了(80.43±6.92)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞活力检测结果显示,随着PA 和厄洛替尼浓度的增加和作用时间的延长,A549 细胞中凋亡蛋白Caspase-3 活性明显增加(P<0.05),随着紫苏醇浓度的增加,COX-2、VEGF 和HIF-1 的表达呈不断降低的趋势,EMSA 检测结果显示,随着PA 浓度的增加,NF-κB 的条带面积不断减少。结论:PA 可能参与并促进了ROS 的生成和Caspase-3 活性增加,最终诱导A549 细胞的凋亡,PA 可能通过降低NF-κB 的表达,进而诱导COX-2、VEGF 等的表达减少,使血管生成滞后,能够有效地使细胞的穿透能力下降和凋亡发生。     

人弥漫性大B细胞淋巴瘤移植瘤模型的建立及生长特性观察

目的 建立人弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株LY8裸鼠皮下移植瘤模型并观察其生长特性,为探讨淋巴瘤发病机制及治疗策略提供手段.方法 将人DLBCL细胞株LY8种植于裸鼠右前肢肩胛背侧皮下,成瘤后无菌套管针抽吸法抽取约1.5 mm×1.5 mm×1.5 mm大小组织块进行皮下种植,观察成瘤率和组织形态特点;用免疫组织化学EnVision法观察白细胞共同抗原(LCA)、CD20、CD79α、Ki-67、CD3、CD45RO、bcl-6、MUM-1、CD10、bcl-2等指标的表达;用聚合酶链反应(PCR)扩增检测移植瘤和LY8细胞株的IgH基因克隆性重排和针对3个微卫星位点(D14S68、D18S69、D20S199)的基因组DNA微卫星序列.结果 运用LY8细胞株成功进行了人DLBCL的种植,且生长稳定,已传至第9代,共移植裸鼠124只,其中114只成瘤,成瘤率达91.9%.每代移植瘤的生长特点均相似,于移植后约2周长出,约在3周左右长至最大径1.3 cm,随后即进入快速生长期,4周左右达2.0 cm大小.移植瘤形态符合DLBCL,肿瘤细胞免疫组织化学显色呈LCA、CD20、CD79α、bcl-6、MUM-1、CD10、bcl-2阳性;裸鼠移植瘤与LY8有相同的IgH基因克隆性重排,经3个位点的微卫星引物扩增后获得相同片段的产物.表明移植瘤与人DLBCL细胞相似,并证实了其生长的稳定性和可重复性.结论 建立了可稳定传代的DLBCL的裸鼠模型,为研究人DLBCL的生物学特性及试验治疗提供了较理想的动物模型.

Abstract：

Objective To establish a diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL)-mice model using human DLBCL cell line LY8, to investigate its characteristics of growth and to provide a model for in vivo study of DLBCL pathogenesis and treatment. Methods LY8 cells were injected subcutaneously into the right flank of nude mice. Harvested tumor tissues were cut into small pieces of 1.5 mm × 1.5 mm × 1.5 mm and implanted subcutaneously into nude mice. Tumor growth was visualized and the histologic characteristics were documented. Expression of LCA, CD20, CD79α, Ki-67, CD3, CD45RO, bcl-6, MUM-1, CD1O and bcl-2 were examined by using immunohistochemistry. IgH clonal rearrangement and status of three microsatellite loci (D14S68, D18S69, D20S199) in the xenografted tumor samples and the parental cell line LY8 were detected using PCR amplification followed by PAGE. Results The subcutaneous xenograft DLBCL model was successfully established by using cell line LY8, and a stable growth was achieved up to the 9th generation. The tumor in each generation showed similar growth characteristics and the rate of subcutaneous tumor formation was 91.9% (114/124). The tumor growth was observed from the 2nd week after implantation, reaching 1.3 cm in major diameter at the 3rd week and 2. 0 cm at the 4th week. The tumor had identical morphological characteristics with those of human DLBCL, and expressed LCA, CE0,CD79α, bcl-6, MUM-1, CD1O and bcl-2. The tumor of xenograft mice and cell line LY8 showed identical IgH rearrangement and microsatellite length. Conclusions A human DLBCL bearing mouse model was successfully established. The mice model is similar to human counterpart with high stability and repeatability. Therefore, it provides an ideal animal model for in vivo studies of the biological characteristics and treatment of DLBCL.     

血栓素A2、肿瘤坏死因子和地塞米松对兔气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、地塞米松（Ｄｅｘ）对气管平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增生的影响。方法：［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法及细胞计数检测上述因素作用下体外培养ＡＳＭＣ增生过程。结果：ＴＸＡ２可刺激ＡＳＭＣ增生,ＴＮＦ－α能抑制ＴＸＡ２的促增生作用,Ｄｅｘ又可使ＴＮＦ－α的抑增生作用消失。结论：ＴＸＡ２、ＴＮＦ－α在ＡＳＭＣ增生中起重要作用,Ｄｅｘ在治疗哮喘过程中,有可能加重ＡＳＭＣ的增生。     

地塞米松联合川芎嗪对肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α和转化生长因子-β1含量及肺纤维化程度的影响

目的探讨地塞米松联合川芎嗪对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)含量及肺纤维化程度的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为5组,即正常对照组(N组)、模型组(M组)、地塞米松治疗组(D组)、川芎嗪治疗组(L组)和地塞米松联合川芎嗪治疗组(DL组),N组大鼠气管内注入0.9%氯化钠溶液0.3 m L,其他4组大鼠气管内注入5 mg/kg博莱霉素(溶于0.3 m L 0.9%氯化钠溶液)进行肺纤维化造模,造模成功后N组、M组大鼠每天给予腹腔注射0.9%氯化钠溶液2 m L治疗,D组、L组和DL组大鼠分别每天给予腹腔注射地塞米松3 mg/kg(溶于2 m L 0.9%氯化钠溶液中)、川芎嗪50 mg/kg(溶于2 m L 0.9%氯化钠溶液中)和两种药物联合(地塞米松3 mg/kg、川芎嗪50 mg/kg溶于2 m L 0.9%氯化钠溶液中)治疗。各组大鼠在气管注入药物后第28天处死。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠BALF中TNF-α和TGF-β1的含量,用苏木精-伊红染色在光学显微镜下对大鼠肺组织病理标本进行观察并进行半定量评分。结果与M组相比,D组、L组和DL组大鼠BALF中TNF-α、TGF-β1含量均下降,差异有统计学意义(均P<0.05);与D组和L组相比,DL组大鼠BALF中TNF-α、TGF-β1含量(25.182±4.823)、(14.047±2.234)pg/m L均下降,差异有统计学意义(均P<0.05)。病理结果显示N组大鼠肺泡结构正常;M组大鼠肺泡结构消失,出现大量成纤维细胞;D组和L组大鼠可见肺泡间隔增宽,肺泡压缩变形,纤维化程度较M组减轻;DL组大鼠肺纤维化程度较D组和L组大鼠进一步减轻,部分区域可见肺泡结构。M组、D组、L组和DL组大鼠肺纤维化半定量评分分别为6(5.00,6.75)、5(4.00,5.75)、5(4.25,5.75)、4(4.00,5.00)分。与M组相比,D组、L组和DL组大鼠肺纤维化程度半定量评分均减少,差异有统计学意义(均P<0.05)。与D组和L组相比,DL组大鼠肺纤维化程度半定量评分减少,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论与单一药物相比,地塞米松联合川芎嗪治疗能更显著地降低大鼠BALF中TNF-α和TGF-β含量及减轻肺纤维化程度,两者联合应用可能适合肺纤维化治疗。     

抗人VEGF的单克隆抗体对乳腺癌生长及转移的影响

目的用具有中和活性的抗人血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）单抗进行抑瘤动物实验,探讨ＶＥＧＦ在肿瘤生长及转移中的作用。方法采用杂交瘤技术制备抗ＶＥＧＦ的单抗,经亲和层析纯化单抗,在ＩＶＴ２ＭＡ－８９１津白ＩＩ小鼠自发乳腺癌伴肺转移动物模型中进行实验研究。结果Ｄ７、Ｅ５、Ｇ１、Ｃ５、Ｄ１１及Ｈ５６株单抗都能显著地抑制肿瘤的肺转移,对肺转移灶数的抑制率分别为４４％,４５％,６２％,７０％,７２％和７４％。对肺转移灶大小的抑制率为７９％～１００％。其中Ｄ７、Ｃ５、Ｇ１、Ｄ１１４株单抗也能明显地抑制原发瘤的生长。其抑制率分别为４１％,４６％,５３％和８３％。结论ＶＥＧＦ单抗能阻断肿瘤血管的形成,显著地抑制原发瘤的生长和转移,在肿瘤的治疗中显示出潜在的应用价值。     

重型病毒性肝炎外周血单核细胞功能与超微结构的研究

采用间接免疫荧光法、双抗体夹心法及电镜技术对３０例重型病毒性肝炎（重型肝炎）患者外周血单核细胞膜ＨＬＡ－ＤＲ表达率、单核细胞培养上清α- 肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）及单核细胞超微结构进行了检测与观察。结果表明，重型肝炎患者单核细胞膜ＨＬＡ－ＤＲ表达率和培养上清ＴＮＦα含量明显增加，　后者在重型肝炎早期与极期患者之间存在显著差异，超微结构也显示明显异常。上述改变可能在重型肝炎发病机理中有重要意义。     

MNNG诱发新生大鼠腺胃癌模型的建立及其在胃癌发病机制研究上的应用

通过给新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠连续１０次（每日１次）１－甲基－３－硝基－１亚硝基肌（ＭＮＮＧ）灌胃，成功地诱发出腺胃癌、腺瘤和异型增生等病变。在０．４ｍｇ／只剂量组，这三种病变的诱发率分别为３９％、５０％和１００％，腺胃癌的诱发率与ＭＮＮＧ剂量成正比，雄性大鼠高于雌性（Ｐ＜０．０２），７０％病变发生在胃窦部。本模型具有致癌物用量小、易定量、给药期短、省时省力和不易污染环境等优点。研究还发现６个腺胃癌中有４个ＤＮＡ具有使ＮＩＨ／３Ｔ３发生恶性转化的作用，这种转化表现为对Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠有致瘤性，提示在这种腺胃癌ＤＮＡ中存在转化基因。     

利用光学成像系统非侵入性监测乳腺癌细胞在骨环境内的生长情况

目的应用稳定表达红色荧光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231SArfp细胞系,建立乳腺癌骨移植瘤动物模型,并应用活体成像技术检测肿瘤的生长情况。方法注射MDA-MB-231SArfp细胞于BALB/c雌性裸小鼠胫骨髓腔,应用活体光学成像系统,连续观察肿瘤细胞在体内的生长情况,同时测量肿瘤体积的变化;4周和7周时拍摄X线片并做组织学检查,评估肿瘤对骨组织的影响。结果利用活体光学成像系统监测发现,至第3~4周期间,肿瘤进入对数生长期;肿瘤大小与荧光信号强度呈线性正相关。X线片和组织切片显示MDA-MB-231SArfp细胞形成溶骨性的骨破坏。结论成功建立了可非侵入性监测的乳腺癌骨移植瘤模型,利用活体光学成像系统结合X线片及组织学检查能够直观、连续、准确地检测肿瘤细胞在骨环境内的生长情况,为后续抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具。     

复方鱼油对糖尿病大鼠主动脉粥样硬化早期病变的影响

雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４２只，随机分为：正常对照组（１２只）；糖尿病对照组（１８只）；复方鱼油治疗组（１２只）。后两组静脉内注射链菌霉素导致ＤＭ，治疗组于注射ＳＴＺ第３周末开始灌饲复方鱼油。结果表明：复方鱼油可显著降低血脂水平，抑制血小板聚集，增强心房肽基因表达的降低血压，抑制主动脉粥样硬化早期病变形成。对糖尿病大鼠ＡＳ具有防治作用。     

小鼠肺腺癌体内外生长、运动和侵袭与细胞外基质相关性的研究

利用小鼠肺腺癌（ＬＡ＿（７９５））肾包膜下移植模型，采用间接免疫酶标和间接免疫荧光方法，观察了肿瘤发展过程的不同时期纤维粘连蛋白（ＦＮ），层粘连蛋白（ＬＮ）和ＩＶ胶原的分布情况。结果表明，随着肿瘤移植后时间的延长，间质ＦＮ量不变，ＬＮ和ＩＶ型胶原量增多，且三种成分各自的分布图象在不同时期也存在差异，瘤细胞侵袭基底膜处ＬＮ和ＩＶ型胶原缺失。通过体外实验，观察到ＬＡ＿（７９５）细胞母系有内源性ＦＮ和ＬＮ的产生，无ＩＶ型胶原ｍＲＮＡ的表达，ＦＮ、ＬＮ或ＩＶ型胶原尤其是ＬＮ能促进瘤细胞的运动，ＦＮ或ＬＮ能加快瘤细胞集落的生长，表明ＦＮ、ＬＮ和ＩＶ型胶原与恶性肿瘤的侵袭和转移有关。     

联合FEV1/FEV3与血清IL-6、TNF-α对轻中度慢性阻塞性肺疾病诊断和预后评估的研究

目的评估第1秒用力呼气容积(FEV1)/第3秒用力呼气容积(FEV3)联合血清白介素6(IL- 6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)对轻中度慢性阻塞性肺疾病(COPD)的诊断及预后评估价值。方法收集我院2011年1月至2013年10月140 例轻中度COPD患者为病例组,与同期在我院行体检的健康人群150 例为对照组,对两组研究对象进行肺功能检查与血清IL- 6、TNF-α检测。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析FEV1/FEV3、IL- 6、TNF-α对COPD的诊断价值。依据患者纳入研究的时间依次进行40个月的随访,统计随访期间COPD急性加重(AECOPD)的发生次数与死亡人数,采用Kaplan- Meier法和对数秩检验(log- rank test)进行生存分析。结果 COPD患者的FEV1/FEV3显著低于健康人群,而血清IL- 6、TNF-α水平则显著高于对照组,差异具有统计学意义( P <0.05)。ROC分析结果表明,FEV1/FEV3、IL- 6、TNF-α诊断COPD的曲线下面积(AUC)分别为:0.786(95% CI :0.702~0.871, P <0.001)、0.518(95% CI :0.421~0.616, P =0.708)和0.684(95% CI :0.592~0.776, P <0.001);灵敏度/特异性分别为:86.1%/67.4%、58.1%/57.7%和58.4%/78.4%;联合三项指标的AUC为0.901(95% CI :0.840~0.963, P <0.001),在“并联”时,“PRE- 1值”约登指数为最大值时的灵敏度和特异性分别为90.6%和64.2%,对应的FEV1/FEV3、IL- 6和TNF-α的判断值分别为73.95%、10.13 ng/L和2.26μg/L;在“串联”时,“PRE- 1值”约登指数为最大值时的灵敏度为78.2%,特异性为98.1%,对应的FEV1/FEV3、IL- 6和TNF-α的判断值分别为72.32%、9.73 ng/L和2.21μg /L。随访及生存分析结果表明,低FEV1/FEV3组及高IL- 6、高TNF-α组的COPD患者AECOPD的平均发生次数及发生率均增高,而低FEV1/FEV3组及高TNF-α组生存时间均降低,差异具有统计学意义( P <0.05)。结论 FEV1/FEV3联合血清IL- 6、TNF-α检测对轻中度COPD具有较高的诊断和预后评估价值,可考虑在临床推广使用。     

Antihyperalgesic and antiallodynic effect of sirolimus in neuropathic pain and the role of cytokines in this effect

Recent studies have revealed that T lymphocytes play a role in neuropathic pain following nerve injury in rats through releasing several cytokines. Sirolimus is an immunosuppressive antibiotic inhibiting T cell activation. This study aimed to determine the effect of sirolimus on hyperalgesia and allodynia and on serum and spinal cord TNF-α, IL-1β and IL-6 levels in rat neuropathic pain. Neuropathic pain was induced by loose ligation of the sciatic nerve and evaluated by tests measuring the mechanical hyperalgesia and allodynia. Sirolimus (0.75 and 1.5 mg/kg) was administered intraperitoneally once every 3 days for 2 weeks (7 doses totally). This dosing regimen revealed acceptable blood concentrations in neuropathic rats. Chronic constriction injury of the sciatic nerve resulted in hyperalgesia and allodynia. Serum levels of cytokines remained unchanged in neuropathic rats. However, TNF-α, but not IL-1β or IL-6, protein level was increased in the spinal cord tissue as evaluated by Western blotting analysis. Treatment with sirolimus resulted in antihyperalgesic and antiallodynic effects and prevented the increased spinal cord TNF-α level. It seems that sirolimus could be a promising immunosuppressive agent in the treatment of neuropathic pain.     

地塞米松对大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响

目的探讨地塞米松对体外培养大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的地塞米松处理BRL-3A细胞,于12、24、48、72、120 h后用MTT检测地塞米松对BRL-3A细胞活性的影响,同时分别用Annexin V-FITC双染法、PI单染色法、实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)等方法检测地塞米松对BRL-3A细胞周期和凋亡的影响。结果 MTT检测表明,地塞米松能够抑制BRL-3A细胞的活性;Annexin V-FITC双染法分析显示,地塞米松具有显著促进BRL-3A细胞凋亡的效果;PI单染色法检测细胞周期分布情况表明,地塞米松处理后的细胞与对照组相比增殖能力减弱;用Real-time PCR检测促细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和促增殖基因Ccnd1和Jun的mRNA表达情况,结果显示,用地塞米松处理后的细胞中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均表达上调,而Ccnd1和Jun均表达下调,说明地塞米松能促进BRL-3A细胞的凋亡。结论地塞米松可以促进BRL-3A细胞的凋亡,并抑制其增殖。     

ISO-1对结直肠癌生长和微血管形成的影响

目的 观察选择性巨噬细胞移动抑制因子(MIF)互变异构酶活性抑制剂ISO-1对结直肠癌生长及其微血管形成的影响,并探讨其可能机制.方法 MTT法检测不同浓度ISO-1(0.01-100umol/L)在不同时间点(24、48和72 h)对CT26细胞增殖的影响.盲肠造疝原位移植瘤块术建立小鼠结直肠癌模型.将30只成功建模小鼠随机分为3组,分别每周两次腹腔注射相同体积ISO-1(0.2 ml,20 mg/kg)、5%DMSO和无菌生理盐水(NS).治疗后每周两次观察小鼠盲肠肿瘤大小,第4周时处死小鼠.ELSIA法测定小鼠血清中VEGF浓度;CD31染色标记血管内皮细胞测定肿瘤微血管密度(MVD).结果 在体外,ISO-1明显抑制CT26细胞增殖.在体内,ISO-1明显抑制小鼠肿瘤生长,第4周ISO-1组和DMSO组的抑瘤率分别为25.22%和9.65%,差异有统计学意义(P<0.01);并且,ISO-1组移植瘤质量明显小于DMSO组[(1.50±0.14)g比(1.80±0.14)g,P=0.017];与DMSO组比较,ISO-1降低小鼠血清中VEGF的水平[(14.62±6.49)ng/L比(63.34±10.22)ng/L,P<0.01]及肿瘤组织MVD[(16.6±3.7)比(35.8±7.3),P=0.002].结论 ISO-1抑制结直肠癌细胞增殖及原位移植瘤生长,其机制可能为LSO-1抑制MIF生物学活性,从而抑制肿瘤细胞增殖、下调VEGF表达与MVD.