原发性肝癌信号转导途径相关抑癌基因

原发性肝癌(HCC)的发生发展是多基因参与、多基因相互作用的结果。抑癌基因通过信号途径发挥作用,其中包括:p53、Wnt、mTOR、RAS、Hedgehog等途径。30%～60%的肝癌中发现有p53突变,p53与p21、p27、p16等抑癌基因相互交叉,共同发挥抑癌作用。Wnt途径中,APC、Axin1及E-cadherin的编码基因在HCC中分别因高甲基化、突变、启动子超甲基化而失活。多数肝癌中都发现有mTOR的过度表达,mTOR途径受几个抑癌基因产物调控。RASSF1基因转录产物RASFF1A能与癌蛋白Ras相结合而影响细胞凋亡。     

应用寡核苷酸芯片并行检测肝细胞癌p53基因突变类型

目的：并行检测原发性肝癌p53基因突变类型。方法：参照国际公共p53突变数据库资料发生频率最高的7个突变类型作为检测探针设计寡核昔酸芯片，应用该项技术检测肝癌抑癌基因p53上对应的7个常见突变位点的突变频率及形式。结果：检测高发区及低发区肝癌石蜡包埋标本各14例，p53突变发生率分别为64．3％及14．3％(P＜0．05)，高发区组p53突变热点为249编码区，占该组突变的77．8％，突变形式为^249ser突变。结论：本研究发现高发区组肝癌p53基因突变热点为^249ser突变，应用寡核昔酸芯片技术可并行、高效、多位点检测肿瘤的基因突变。     

原发性肝细胞癌与乙型肝炎病毒X蛋白和p53

原发性肝细胞癌作为我国最常见的恶性肿瘤之一,其发生机制非常复杂,其中乙型肝炎病毒感染是其发生发展的重要原因,而乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)在其中的作用尤为重要。HBx作为一种反式激活因子,其主要通过反式激活作用影响信号转导,抑制细胞DNA修复,影响细胞凋亡等导致肝癌发生;而p53基因作为抑癌基因,当发生突变时,突变型p53基因就可能导致肿瘤发生。近年来的研究也表明,HBx和p53之间的相互作用在肝癌的发生发展中也起到非常重要的作用。     

腺病毒介导的野生型p53基因治疗肿瘤研究进展

恶性肿瘤的发生与基因突变有密切关系。抑癌基因p53编码转录因子P53蛋白在调控癌基因表达、DNA合成和损伤修复以及细胞凋亡中起关键作用。已证实50％以上肿瘤细胞存在p53基因突变，p53被认为在肿瘤形成中起非常重要作用。p53基因治疗的目的是纠正恶性细胞中突变的p53基因功能，在多种肿瘤的体内外试验中显示出明显疗效。作者就这方面研究进展作一综述，重点讨论腺病毒介导的p53基因治疗。     

胃癌组织中癌基因激活和抑癌基因失活的研究

本文采用Southern杂交技术分析了42例胃癌及癌旁组织中癌基因c-Ha-ras、K-ras、N-ras、c-myc、N-myc、hst、EGFR、c-erbB-2和抑癌基因p53和Rb的变化;使用PCR-RFLP方法分析了p53基因第248和249位密码子的点突变。结果显示,胃癌组织中有多种癌基因激活和抑癌基因失活,但多集中在c-Ha-ras、c-erbB-2、hst、EGFR和p53基因。这些结果表明,多种癌基因和抑癌基因可能参与了胃癌的发生和发展。     

阳性对照PCR-SSCP法检测肝癌中特异性p53基因点突变

用人肝癌细胞系PLC/PRF/5 DNA作阳性对照,通过聚合酶链式反应—单链构象多态分析(PCR-SSCP分析),检测五种人肝癌细胞系及6例原发性肝癌组织中p53基因点突变。在被检标本中未检出PLC/PRF/5中存在的肝癌特异性p53基因点突变,即249位密码子第3碱基G→T颠换。因此,这种特异性p53基因点突变并不是肝癌中的普遍现象。     

p53基因与卵巢癌的研究现状

随着肿瘤遗传学和分子生物学技术的迅猛发展，人们已经认识到肿瘤的发生是多步骤、多基因现象的结果，癌基因的激活及抑癌基因的失活是细胞癌变的分子基础。迄今为止，已被分离和鉴定的与人类肿瘤有关的癌基因达100多种，而抑癌基因只有12种。P53基因过去一直认为是一种癌基因，直至1989年才发现真正起癌基因作用的是突变的p53，而野生型p53基因是一种抑癌基因。许多肿瘤中存在P53的突变或等位基因缺失，而在妇科肿瘤中以卵巢癌p53突变的发生率为最高。目前，国内外对卵巢癌P53基因突变和基因治疗等研究越来越深入，本文将就这一研究现状…     

人原发性肝癌中p16基因缺失突变研究

目的 探讨p16基因缺失和突变在人原发性肝癌分子发病机理中所起的作用。方法 采用多重PCR和PCR-SSCP对31例人原发性肝癌、31例癌旁肝硬化组织以及8例正常人白细胞中p16基因第一、二外显子和部分第一，二内含子缺失和突变进行了研究。结果 在31例人原发性肝癌中发现4例p16基因第一外显子和部分第一内含子区域缺失，缺失率为13%，第二外显子和外部分第二内含子区域未见缺失；SSCP分析发现在肝癌和癌旁肝硬化组织中p16基因第一内含子及其下游第二外显子18bp区域存在三种单链构象。结论 在人原发性肝癌中p16基因缺失频率较低，罕见突变。     

肿瘤抑制基因p53的研究进展

随着肿瘤发病分子机制的逐步揭示和分子生物学技术的发展，肿瘤基因及其治疗已成为研究热点。现在人们知道，所有肿瘤的发生都是由于一些肿瘤相关基因的改变而产生，为了使癌变细胞能逃避机体免疫机制的控制，最终发展成肿瘤，通常需要积聚5—9次基因改变。这些基因的改变通常发生于细胞发育、细胞增殖、细胞分化、细胞存活、细胞休止以及遗传学修复有关的基因中。其中一些涉及细胞生长正调节的基因通常称之为癌基因，而涉及细胞负调节的基因则称之为抑癌基因。一旦癌基因与抑癌基因之间的平衡被打破，控制细胞增殖的癌基因持续或过高表达，同时抑癌基因不表达或失活，会导致各种人类肿瘤的形成和发展。常见的抗癌基因有p53，p21，p27，p16，FTEN，FHIT，BRCA1／BRCA2等。其中p53基因最受瞩目，这是因为在人类恶性肿瘤中至少有50％发生了p53基因的变化。现就将p53基因与肿瘤关系的研究进展综述如下。     

肿瘤相关基因蛋白及颗粒酶在肝癌中的表达及临床意义

恶性肿瘤的发生是内外环境因素引起体细胞多个癌基因激活以及抑癌基因失活等长期累加的复杂过程.我们于2002年5月至2003年12月用免疫组化方法联合检测了72例原发性肝癌(HCC)组织的肿瘤相关基因蛋白p53、p21WAF1、nm23/NKPK及颗粒酶B(granzyme B,GrB)的表达,并探讨其临床意义,报告如下.     

MDM2蛋白过度表达致p53功能失活在原发性肝细胞癌发生中的作用

目的 :研究p5 3基因突变及p5 3,MDM2蛋白表达在原发性肝细胞癌 (HCC)发生中的作用。方法 :应用免疫组织化学SP法检测 6 1例原发性肝细胞癌及 5 9例相应癌旁肝组织中p5 3蛋白和MDM2蛋白的表达 ;用PCR -SSCP-银染技术对其中 2 1例HCC的p5 3基因第 5～ 8外显子的突变情况进行研究。结果 :p5 3和MDM2蛋白在HCC中的表达明显高于癌旁肝组织 (P <0 .0 1)。HCC中p5 3与MDM2蛋白表达无明显相关性 (P >0 .0 5 )。新鲜HCC组织中p5 3基因第 5～ 8外显子的突变率为 42 .86 % (9/ 2 1) ,且均位于第 7外显子 ,癌旁组织中未发现p5 3基因突变。突变病例中 6 6 .6 7% (6 / 9)有p5 3蛋白高表达 ,11.11% (1/ 9)有p5 3及MDM2蛋白的过度表达 ,无突变病例中MDM2过度表达率为 2 5 % (3/ 12 )。结论 :p5 3基因突变及由MDM2过度表达导致的p5 3功能失活在HCC发生中起重要作用。p5 3基因突变和其它机制引起的MDM2蛋白高表达可能在HCC中共同发挥致癌作用。     

MDM2蛋白过度表达致p53功能失活在原发性肝细胞癌发生中的作用

OBJECTIVE: This paper was to evaluate the role of p53 mutation, and p53 and MDM2 proteins expression in hepatocarcinogenesis. METHODS: Using streptavidin-peroxidase conjugation method (SP), the expression of p53 and MDM2 proteins was observed in 61 cases of primary hepatocarcinomas (HCC) and 59 cases of corresponding paracancerous tissue, among which p53 mutations in exons 5-8 were detected in 21 cases by polymerase chain reaction single-strand confirmation polymorphism analysis (PCR-SSCP). RESULTS: Positive nuclear p53 and MDM2 immunostainings were demonstrated in 57.38% (35/61) and 26.23% (16/61) of HCC, and 1.69% (1/59) and 3.39% (2/59) of corresponding paracancerous tissue, respectively. The expressions of p53 and MDM2 proteins in HCCs were significantly higher than those in paracancerous tissues (P < 0.01). The expressions of p53 and MDM2 were not significantly correlated (P > 0.05). There were 42.86% (9/21) mutations in exon 7 of p53 gene and no mutation was observed in exons 5, 6, 8 in HCCs and in paracancerous tissues. In cases of p53 mutations, there were 66.67% (6/9) of p53 overexpression and 11.11% (1/9) of overexpression of both p53 and MDM2. MDM2 overexpression also appeared in 25% (3/12) of cases without mutation. CONCLUSIONS: Mutation of p53 gene and functional inactivation of p53 resulting from MDM2 overexpression play an important role in carcinogenesis of HCC. It is possible that p53 mutations and MDM2 overexpression induced by other mechanisms are involved in carcinogenesis of HCC.     

食管上皮癌前期病变细胞p53基因的突变

目的 比较p53基因的突变在食管癌前期病变和正常食管上皮中的差异，了解癌前期病变细胞中p53基因的突变与癌变的关系。方法 应用PCR－SSCP方法和PCR－RFLP方法对四川盐亭县1982年施行食管癌普查的食管拉网脱落细胞，进行p53基因第5外显子及第7外显子的突变检测。结果 48例标本p53基因检测均得成功；食管上皮重度不典型增生细胞中发现有5例突变发生均为p53基因第7外显子，而第5外显子未发现突变。检测到的5例突变中，有3例分别在为查后10年，12年和14年后转变为食管癌。正常食管上皮拉网脱落细胞中均未发现突变。结论 p53基因保持正常状态是食管上皮维持正常的前提条件；p53基因的突变歙良管上皮癌前期病变细胞具有了癌变趋势。     

银染PCR-SSCP法检测52例白血病患者p53基因点突变

目的通过检测白血病患者p53基因点突变,了解其与白血病的发展、治疗及预后的关系。方法用银染PCR-SSCP法检测52例不同类型白血病p53基因第5、6、7、8外显子的点突变。结果在45例急性白血病患者中有5例发生p53基因突变,其中3例对化疗不敏感;6例慢性粒细胞白血病中1例有p53基因突变,此例患者在住院1个月内死亡,1例毛细胞白血病发生p53基因点突变。结论p53基因点突变的检测对指导临床治疗及判断预后有一定价值。     

不同浓度中药柴胡提取物对人肝癌细胞内Ca2+和p53表达的影响

目的：测定不同浓度中药柴胡（Bupleurun Chinese DC,BCDC）提取物对BEL-7402细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）和p53表达的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法：用Fura-2／AM作为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计测定不同浓度柴胡提取物作用下BEL-7402细胞内[Ca^2＋]i及其剂量-效应关系;用免疫组化法检测不同条件下BEL-7402细胞的p53表达。结果：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降（P〈0．001）,但不具有剂量-效应关系;BEL-7402细胞呈p53天然突变。结论：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂（calcium channel blocker,CCB）,提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一;BEL-7402细胞呈p53天然突变也可直接或间接影响肿瘤多药耐药性的表达。     

Evaluation of p53 gene mutation and loss of heterozygosity of 3p, 9p and 17p in precancerous lesions of 29 lung cancer patients

To assess the multiple steps involved in carcinogenesis we evaluated p53 gene mutation frequencies, and loss of heterozygosity (LOH) of chromosomes 3p, 9p and 17p in hyperplasia, squamous metaplasia, dysplasia, squamous cell carcinoma in-situ and early squamous cell carcinoma of the bronchial epithelium, using immunohistochemical, polymerase chain reaction-single strand conformational polymorphism (PCR-SSCP) and microsatellite analysis. Overexpression of p53 oncoprotein was observed in 31% of mild dysplasia, 50% of moderate and 67% of severe dysplasia. Mutation of the p53 gene, however, was confirmed only in 2 severe dysplasias. LOH of 3p, 9p and 17p were detected in 8% of mild and 6% of moderate dysplasias. Among other types of bronchial lesions, two columnar cell hyperplasias showed LOH of 3p and 17p, respectively. These results suggest that LOH of 3p or 9p may be a rare but early event in the development of squamous cell carcinoma of the lung. In particular, deletion of 3p21.3 is a relatively common event in premalignancy. The results also suggest that p53 gene abnormalities occur during the following stage of carcinogenesis.     

p53和C-Ha-ras基因在胃癌发生中的作用

目的　探讨 p5 3和C Ha ras基因突变在胃癌发生中的作用。 方法　用PCR SSCP和直接测序检测胃癌组织中C Ha ras(12、13密码子 )和 p5 3(外显子 7)基因的突变。 结果　胃癌组织中C Ha ras和 p5 3基因突变发生率显著高于浅表性胃炎和正常胃黏膜组织 ,基因的联合突变在部分胃癌组织中表达。结论　基因联合突变可能是胃癌发生的机制之一。     

肾癌p53蛋白表达与临床病理指标及预后的关系

采用免疫组化法对５３例肾癌组织中ｐ５３蛋白进行检测，其中ｐ５３蛋白表达阳性１６例（３０．２％），发现肾癌组织ｐ５３蛋白表达与细胞类型、分期、分级及预后均无相关。结果提示：肾癌的发生发展可能是一个多基因变化过程，ｐ５３基因在其发生发展过程中并不起主导作用或只是多种因素之一。     

朗格罕细胞和 p53 蛋白与喉癌中人乳头瘤病毒感染的关系

目的：研究喉癌的发生机理。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法对３０例喉鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）、ｐ５３蛋白、朗格罕细胞（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓｃｅｌ，ＬＣ）进行了染色。结果：ＨＰＶ感染的癌旁粘膜内ＬＣ的数量明显少于无感染者，ｐ５３蛋白表达率（３７３％）也明显低于无感染组（８３３３％）。结论：ＨＰＶ、ＬＣ、ｐ５３是与喉癌发生有关的三个重要因素，且三者相互影响。喉癌的发生机理可能是由于ＨＰＶ感染引起ＬＣ减少，局部免疫功能降低和其它改变；ＨＰＶ感染还可能通过表达的某种肿瘤蛋白使ｐ５３失活而致癌。     

Expression of hMSH2 gene and mutant p53 in sporadic digestive tract tumors

ＴｈｅｈｕｍａｎＤＮＡｍｉｓｍａｔｃｈｒｅｐａｉｒｓｙｓｔｅｍ (ＭＭＲＳ)ｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆａｓｅｒｉｅｓｏｆｅｎｚｙｍｅｓｔｈａｔｃａｎｃｏｒｒｅｃｔｍｉｓｔａｋｅｓｄｕｒｉｎｇＤＮＡｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇｔｈｉｓｓｙｓｔｅｍ ,ｍｕｔａｔｉｏｎｓｃａｎｂｅａｖｏｉｄｅｄ ,ａｎｄＤＮＡｃａｎｂｅｋｅｐｔｗｈｏｌｅａｎｄｓｔａｂｌｅｄｕｒｉｎｇｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ＳｉｘｇｅｎｅｓｏｆＭＭＲｈａｖｅｂｅｅｎｄｅｆｉｎｅｄ :ｈＭＳＨ2 ,ｈＭＬＨ1,ｈＭＳＨ6,ｈＭＳＨ3,ｈＰＭＳ1ａｎｄｈＰＭ…