香加皮杠柳苷对结肠癌细胞SW480体内外生长的影响

背景与目的： 观察香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae, CPP)对人结肠癌细胞SW480体内外生长的抑制作用。 材料与方法： 应用MTT法检测CPP不同浓度(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 μg/ml)处理SW480细胞后,对细胞增殖的影响;并于CPP (0.5 μg/ml)处理SW480细胞24 h 后用光学显微镜及透射电镜观察细胞凋亡形态学变化;免疫细胞化学检测细胞Survivin蛋白表达变化。采用裸鼠移植瘤模型进行体内移植瘤抑制实验。以上各实验均设立对照组。 结果： 与对照组比较,CPP对SW480细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量和时间依赖效应;CPP 处理SW480细胞后,细胞出现典型的细胞凋亡形态学改变;CPP可明显下调SW480细胞survivin蛋白表达阳性率和表达水平(P<0.01);以30 mg/kg CPP对SW480细胞裸鼠移植瘤进行治疗后,荷瘤小鼠的肿瘤重量和体积均被明显抑制,抑瘤率为61.41％(P<0.01)。CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化。 结论： CPP对人结肠癌细胞SW480的体内外生长均具有明显抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞survivin蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

槲皮素抗肿瘤作用与Wnt/β-catenin信号转导关系的研究

目的:探讨槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖的影响及对细胞Wnt/β-catenin信号转导的调控作用。方法:以不同浓度的槲皮素处理SW480细胞,采用MTT比色法分析槲皮素对细胞增殖的抑制作用,利用报告基因方法研究槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导的影响,用RT-PCR及蛋白质印迹法观察槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导通路的下游关键因子Cyclin D1和Survivin转录水平和蛋白表达水平的影响。结果:(40～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞的增殖,P<0.01,抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;(10～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞TCF-4报告基因TOPflash活性,P<0.05,抑制作用呈剂量依赖性。槲皮素可显著下调β-catenin/TCF下游靶基因CyclinD1和Survivin的mRNA表达和蛋白表达水平,呈剂量依赖性。结论:槲皮素可抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt／β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的：Wnt／β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷（periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP）对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。方法：MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT—PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c—myc和cyclin D1mRNA的表达。结果：CPP明显抑制SW480细胞增殖（P〈0．01）,并呈时间和浓度依赖性;0．5μg／mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的B—catenin表达均明显降低（P〈0．01）,细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降（P〈0．01）,而β-cateninmRNA表达未见明显改变。结论：CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt／β-catenin信号转导通路有关。     

二烯丙基二硫对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞增殖,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少.本实验旨在研究DADS对裸鼠体内人结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为DADS组及对照组.观察DADS作用后移植瘤体积和重量的变化,通过光镜和电镜观察移植瘤细胞形态学变化,通过免疫组织化学和形态定量图像分析系统检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化,用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布.结果:DADS在体内能明显抑制移植瘤的生长,相对肿瘤增殖率为49.85%;组织学分析显示DADS组瘤细胞异型性降低,核质比下降,胞浆内细胞器丰富,部分胞核呈退行性变,可见凋亡小体;免疫组化示两组移植瘤组织PCNA蛋白均有阳性表达,DADS组(149.02±4.26)与对照组(178.86±7.69)比较,裸鼠移植瘤组织内PCNA蛋白表达明显减弱(P＜0.05);流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞中G2/M期细胞为18.8%,与对照组比较,DADS组G2/M期细胞(38.6%)显著增多.结论:DADS可体内抑制人结肠癌SW480细胞增殖,使癌细胞阻滞于G2/M期.     

细丝蛋白A抑制荷人结肠腺癌细胞SW480裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨细丝蛋白A(fi lamin A,FLNa)基因对人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:将重组载体质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa通过脂质体介导的方式转染到SW480细胞中,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW480/FLNa细胞中FLNa mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的体外增殖能力。将SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况,计算抑瘤率,HE染色观察移植瘤组织的形态学变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达水平。结果:FLNa基因在SW480细胞中获得稳定表达,SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞的体外增殖能力相似;SW480/FLNa组移植瘤的生长速度和质量低于SW480组,抑瘤率为(88.7±3.5)%(P=0.000);SW480/FLNa组移植瘤组织出现退变坏死,MMP-9mRNA和蛋白的表达水平(0.11±0.02和0.02±0.00)均低于SW480组(1.12±0.02和1.25±0.05),差异均有统计学意义(P=0.012,P=0.025)。结论:FLNa基因具有抑制人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内的生长作用,其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。     

流式细胞术分析胃泌素对人结肠癌SW480裸鼠移植瘤的影响

目的：探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤的影响。方法：建立人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型,实验动物分为5肽胃泌素（PG）组及对照组,观察PG对移植瘤体积、重量的影响并进行流式细胞术分析。结果：移植瘤的体积重量、细胞内DNA、蛋白质含量、S期、G2M期细胞数、增殖指数PG组显著高于对照组,而G0／G1期细胞数则显著低于对照组。结论：胃泌素在体内具有促进人结肠癌SW480细胞分和增殖的作用,为结肠癌患者施行内分泌治疗提供了实验依据。     

沉默LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化

目的:研究沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）的影响。方法:RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测沉默LIMK1对EMT相关分子表达的影响。裸鼠实验检测沉默LIMK1对移植瘤生长的影响。结果:RT-PCR检测显示,沉默LIMK1可下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA表达(P<0.05)。Western blot显示,沉默LIMK1可明显下调SW480细胞Snail及Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin表达(P<0.05)。免疫荧光显示,LIMK1沉默细胞Snail与Vimentin阳性信号较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强。裸鼠实验结果显示,沉默组肿瘤生长速度较SW480组明显减慢(P<0.05)。沉默组移植瘤瘤重（0.16±0.079）g较SW480组（0.86±0.165）g明显减少,瘤重抑制率为97.7%(P<0.05)。LIMK1沉默组移植瘤较对照组的Ki-67、Vimentin、Snail与CD34阳性表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增加。结论:沉默LIMK1可体外抑制人结肠癌SW480细胞EMT。     

长程缺氧对结肠癌细胞增殖的影响

目的:体外观察长程缺氧环境对结肠癌细胞SW480和HCT116增殖能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法:缺氧培养结肠癌SW480和HCT116细胞14～28d,采用MTT法和平板克隆法检测缺氧条件下2种结肠癌细胞增殖能力的改变;激光共聚焦显微镜下观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin的表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、Ser9被磷酸化的GSK-3β[phospho-glycogen synthase kinase-3β(Ser9),pGSK-3β(Ser9)]以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。以常氧下培养的这2种细胞作为对照。结果:细胞生长曲线和平板克隆检测结果均显示,长程缺氧适应后SW480和HCT116细胞的增殖能力较常氧下明显增强(P<0.01);激光共聚焦显微镜下观察发现,HCT116细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达部位发生改变;蛋白质印迹法检测发现,与常氧组比较长程缺氧组细胞中HIF-1α(P<0.05)、β-catenin(P<0.05)和pGSK-3β(Ser9)(P<0.01)蛋白的表达均上调,而总GSK-3β的表达无明显变化,PCNA在缺氧条件下表达上调(与常氧组比较,在SW480细胞中P<0.05,在HCT116细胞中P<0.01)。结论:缺氧适应可促进结肠癌细胞SW480和HCT116的增殖,这可能是HIF-1α与Wnt/β-catenin信号转导通路共同作用的结果。     

七氟烷通过抑制PI3K磷酸化抑制结肠癌SW480 细胞的增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤的生长

目的：探讨七氟烷（sevoflurane）通过调控PI3K磷酸化对结肠癌SW480 细胞增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法：采用七氟烷处理结肠癌SW480 细胞,将细胞随机分为对照组、0.5%七氟烷组、1.0%七氟烷组和2.0%七氟烷组进行后续实验。用克隆形成实验检测SW480 细胞的增殖能力,RT-PCR 检测细胞中MDM2、survivin mRNA表达水平,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,Western blotting 检测细胞中MDM2、survivin、VEGF、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白的表达水平。并加入PI3K激活剂740 Y-P 进行验证。建立裸鼠SW480 细胞移植瘤模型,称取肿瘤质量,免疫组化检测移植瘤组织中MDM2 和VEGF阳性表达率。结果：与对照组和低剂量组比较,1.0%和2.0%七氟烷组SW480 细胞的克隆形成率显著降低（均P<0.01）;细胞中MDM2 mRNA和蛋白水平显著升高（均P<0.01）,survivin mRNA和蛋白水平显著降低（均P<0.01）;SW480 细胞侵袭数显著降低（P<0.01）,VEGF、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 蛋白水平显著降低（均P<0.01）。740Y-P 可逆转七氟烷对SW480 细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。2.0%七氟烷组小鼠移植瘤质量显著降低（P<0.01）,瘤组织中MDM2 阳性表达率显著升高（P<0.01）、VEGF阳性表达率显著降低（P<0.01）。结论：七氟烷抑制结肠癌SW480 细胞的增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制PI3K磷酸化实现的。     

Enhancement of the Anti-tumor Effect of 5'-Deoxy-5-fluorouridine by Transfection of Thymidine Phosphorylase Gene into Human Colon Cancer Cells

Thymidine phosphorylase (dThdPase) is an enzyme that converts 5'-deoxy-5-fluorouridine (5'DFUR) to the toxic substance 5-fluorouracil (5-FU); it is also known to be a platelet-derived endothelial cell growth factor. In order to investigate the feasibility of suicide gene therapy against colorectal cancer by means of the combination of 5'DFUR and the converting enzyme dThdPase, we transfected the dThdPase gene into the human colon cancer cell line SW480 and analyzed the growth pattern as well as the sensitivity to 5-FU or 5'DFUR of the dThdPase-transfected cells. The 50% inhibition (IC₅₀) values of 5-FU against the SW480 parental cells, control vector-transfected cells SW480/V1, and dThdPase-transfected cells SW480/dThdPase were approximately 4.9, 6.3, and 2.9 μ M , respectively. The IC₅₀ of SW480/dThdPase was lower than that of SW480 or SW480/V1, although the differences were not statistically significant. The IC₅₀ values of 5'DFUR for SW480, SW480/V1, and SW480/dThdPase were approximately 300, 330, and 3.2 αM, respectively. The sensitivity to 5'DFUR of SW480/dThdPase was increased by about 100-fold compared with that of SW480 or SW480/V1. With only 10% transfection efficacy, a high enough sensitivity to 5'DFUR was obtained to suppress the cell growth, indicating that a strong bystander effect was induced by this system. The in vivo growth of the s.c. transplanted SW480/dThdPase tumor in nude mice was significantly suppressed by i.p. injection of 5'DFUR compared with that in control mice that received phosphate-buffered saline (PBS) treatment. These results suggest that gene therapy using the combination of 5'DFUR and the dThdPase gene may be a useful approach for treatment of colon cancer.     

Enhancement of the anti-tumor effect of 5'-deoxy-5-fluorouridine by transfection of thymidine phosphorylase gene into human colon cancer cells.

Thymidine phosphorylase (dThdPase) is an enzyme that converts 5'-deoxy-5-fluorouridine (5'DFUR) to the toxic substance 5-fluorouracil (5-FU); it is also known to be a platelet-derived endothelial cell growth factor. In order to investigate the feasibility of suicide gene therapy against colorectal cancer by means of the combination of 5'DFUR and the converting enzyme dThdPase, we transfected the dThdPase gene into the human colon cancer cell line SW480 and analyzed the growth pattern as well as the sensitivity to 5-FU or 5'DFUR of the dThdPase-transfected cells. The 50% inhibition (IC50) values of 5-FU against the SW480 parental cells, control vector-transfected cells SW480/V1, and dThdPase-transfected cells SW480/dThdPase were approximately 4.9, 6.3, and 2.9 microM, respectively. The IC50 of SW480/dThdPase was lower than that of SW480 or SW480/V1, although the differences were not statistically significant. The IC50 values of 5'DFUR for SW480, SW480/V1, and SW480/dThdPase were approximately 300, 330, and 3.2 microM, respectively. The sensitivity to 5'DFUR of SW480/dThdPase was increased by about 100-fold compared with that of SW480 or SW480/V1. With only 10% transfection efficacy, a high enough sensitivity to 5'DFUR was obtained to suppress the cell growth, indicating that a strong bystander effect was induced by this system. The in vivo growth of the s.c. transplanted SW480/dThdPase tumor in nude mice was significantly suppressed by i.p. injection of 5'DFUR compared with that in control mice that received phosphate-buffered saline (PBS) treatment. These results suggest that gene therapy using the combination of 5'DFUR and the dThdPase gene may be a useful approach for treatment of colon cancer.     

胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内cAMP含量的影响

目的 :探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内环磷酸腺苷 (cAMP)含量的影响。方法 :建立人结肠癌SW4 80 裸鼠移植瘤模型 ,实验动物随机分为 5肽胃泌素 (PG)组及对照组 (生理盐水 ) ,观察移植瘤的体积、重量及细胞内cAMP含量的变化。结果 :移植瘤的体积、重量、细胞内cAMP含量 ,PG组均显著高于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 :胃泌素在体内使人结肠癌移植瘤细胞内cAMP含量增加 ,从而促进移植瘤的生长     

结肠癌血性腹腔积液动物模型的建立

目的 建立结肠癌血性腹腔积液的动物模型,用于恶性腹腔积液防治的实验研究.方法 以BALB/c雌性裸鼠为实验对象,采用脾脏注射细胞数为5×106/ml的人结肠癌SW480细胞悬液100μl,观察裸鼠腹腔积液产生情况、腹腔瘤体制作病理标本检测.结果 11只小鼠15天存活率为100%,30天存活率为72.72%(8/11),出现腹腔积液率为100%,肉眼观察腹腔积液呈暗红色,质浑浊.病理结果示腹膜转移瘤细胞符合低分化腺癌的特征,检测腹腔积液中红细胞数进一步证明为血性腹腔积液.结论 经脾脏接种人结肠癌SW480细胞可成功建立结肠癌血性腹腔积液的动物模型,具有操作简单、可控性强、存活率高等特点,是研究结肠癌血性腹腔积液的理想动物模型.