呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立能稳定分泌抗呼吸道合胞病毒（RSV-long株,国际标准株）单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法：杂交瘤技术制备单抗,鉴定各项特性。结果：培育出稳定分泌抗RSV蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。杂交瘤细胞株染色体数目在89～104条之间,其分泌的抗体分别属于鼠IgG1、IgG2a、IgG2b亚类,各种腹水单抗的荧光效价在1∶4000～1∶16000之间。一种单抗识别RSV基质蛋白（M）,两种单抗识别RSV融合蛋白（F）,另两种单抗识别RSV核衣壳蛋白（N）。单抗中和效价最高达1∶64。相加指数证实5种单抗识别不相关的抗原表位。用硫氰酸铵洗脱法比较了五种单抗相对亲和力的大小,依次为：1#〉2#〉4#〉3#〉5#。所有杂交瘤细胞株,经连续3个月培养及冻存半年后复苏,细胞生长良好,检测上清,其分泌抗体效价稳定。结论：已获得抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及进一步研究奠定了基础。     

呼吸道合胞病毒 L 蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备人呼吸道合胞病毒L蛋白单克隆抗体,并对其进行性质鉴定。方法：选取RSV-A2 L蛋白上具有亲水性可能的loop区段,将这些目的片段展示在HBc149上进行原核表达并纯化。重组蛋白免疫6~8周BALB/c雌性小鼠,根据免疫后血清的ELISA和WB分析结果选择L3935和L4099组小鼠进行脾脏免疫。融合后,用间接ELISA法筛选和多次克隆化,获得稳定分泌抗L蛋白单克隆抗体细胞株,并结合ELISA、免疫荧光和免疫印迹对所获得的单抗进行鉴定。结果：获得11株L蛋白特异性单克隆抗体,亚类鉴定结果IgG1、IgG2a和IgG3单抗各3株,IgG2b单抗2株。结论：成功制备了L蛋白特异性单克隆抗体,也为RSV感染的免疫和发病机制研究奠定基础。     

小鼠抗人呼吸道合胞病毒磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗人类呼吸道合胞病毒(HRSV)磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法以原核表达系统表达的HRSV P蛋白重叠肽段作为免疫原,采用杂交瘤技术筛选P蛋白单克隆抗体,Western blot法验证筛选获得的单克隆抗体与P蛋白的结合活性,免疫荧光细胞化学染色确定获得的单克隆抗体能否用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的检测。结果筛选出反应性好、特异性识别HRSV P蛋白的单克隆抗体P181-15A3、 P211-16D8。获得的单克隆抗体通过Western blot法验证可与P蛋白结合,并可用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的免疫细胞化学检测。结论成功制备了小鼠抗HRSV P蛋白的单克隆抗体。     

应用单克隆抗体确定汉坦病毒囊膜糖蛋白抗原决定簇的特性(文摘)

应用一组24种抗汉坦病毒囊膜糖蛋白G_1和G_2的单克隆抗体(McAb)来检测抗原位点的表面分布和功能特性。用竞争结合法证明其中9种抗原位点性质不同,部分位点有重迭,有2个在G_1上,7个在G_2上。用血凝抑制试验和空斑减少中和试验分析表明,所有     

用单克隆抗体免疫过氧化物酶染色快速检测细胞培养中呼吸道合胞病毒和甲型流感病毒(文摘)

由于在呼吸道合胞病毒(RSV)和甲型流感病毒的治疗中特异性抗病毒疗法的有效性,使得对这些病毒的快速诊断显得十分重要。本文建立了一种单克隆抗体(McAb)免疫过氧化物酶染色(IPS)法,用以快速诊断RSV和甲型流感病毒感染,并与免疫荧光技术(TR-FIA)及常规病毒分离法做了比较。 在RSV和甲型流感病毒流行期间(1987.12～1989.1)收集急性呼吸道疾病患儿的鼻     

呼吸道合胞病毒（RSV）F和G糖蛋白抗体反应与RSV肺…

采用重组痘苗病毒表达的呼吸合胞病毒和Ｇ糖蛋白抗原，应用间接ＥＬＩＳＡ法对１２０名１４岁以下的正常儿童及４４例ＲＳＶ肺炎患儿血清中ＲＳＶ－Ｆ和Ｇ糖蛋白特异性ＩｇＧ抗体水平进行了检测。研究结果表明，正常儿童血清中两种抗体水平随年龄增长而逐渐增高，３岁以内组与３岁以上组的抗体水平有蚶性差异，２岁以上ＲＳＶ肺炎患儿急性期血清ＲＳＶ－Ｆ和Ｇ抗体平均水平明显低于２岁以上正常儿童的水平、以上说明婴幼儿易发生ＲＳ     

呼吸道合胞病毒(RSV)感染预防的研究进展

人类呼吸道合胞病毒是严重威胁婴幼儿健康的重要因素这一.该病霉主要引起下呼吸道的感染,导致婴幼儿中气管炎和支气管炎的流行.本文就其近年来国内外对该病毒感染预防研究进展作一综述.     

抗人IL-5单抗的制备、特性及其在ELISA中的应用(文摘)

IL-5是一种对于不同的靶细胞具有不同免疫调节活性的细胞因子,它在B细胞以及其他造血细胞(如T细胞和嗜酸性粒细胞)的生长和分化过程中起着重要的作用。Harada(1987)和Schumacher等(1988)曾报道抗小鼠IL-5的大鼠单克隆抗体(McAb)与人IL-5有交叉反应性。本文报告抗人IL-5的小鼠McAb的制备。这种小鼠McAb可用于免     

人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白非复制型重组腺病毒的构建和表达

目的 构建含有A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)融合糖蛋白(Fusion glycoprotein,F)基因的非复制型第一代重组腺病毒(First generation odenovirns vector,FGAd),并研究F基因在重组腺病毒中的表达.方法 利用限制性内切酶Xho Ⅰ和HindⅢ从质粒pGEM3zf-F中切下目的 基因F,克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV,再与pAdeaRy-1在大肠埃希菌BJ5183中进行同源重组,鉴定正确后,用脂质体法转染293细胞,Western Blot鉴定目的 基因表达.结果 获得了表达RSV F基因的非复制型重组腺病毒FGAd/F,Western Blot检测到F基因的表达.结论 获得一株可表达A亚型BSV F的非复制型重组腺病毒FGAd/F,可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用.     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备(文摘)

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb),探讨HCMV感染的早期临床诊断。 作者将HCMV用moiI法感染人胚肺纤维母细胞(HEL)后分离细胞核,与Freund氏佐剂一起免疫BALB/c小鼠,每隔2周追加免疫一次,共4个月。腹腔内追加注入后,将脾细胞和鼠骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附法筛选,经过克隆化获得杂交瘤细胞纯株后,     

人呼吸道合胞病毒F基因的克隆、真核表达与鉴定

目的 克隆人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus,HRSV）F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）/F,并进行表达和鉴定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然后克隆到pGEM-3zf载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）,行酶切鉴定,脂质体法转染COS-7细胞,应用Western blotting方法分析F基因表达情况。结果测序证实得到HRSVF基因序列,序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blotting方法检测到了F蛋白的特异性条带。结论成功克隆HRSVF基因,并在真核细胞中获得表达。     

人源抗呼吸道合胞病毒基因工程单克隆抗体Fab段基因的筛选和表达

目的采用噬菌体表面呈现和重组抗体技术构建人噬菌体抗体基因库，筛选获得人源抗呼吸道合胞病毒（RSV）Fab段基因并在原核细胞中表达。为研制安全、有效的预防和治疗RSV感染的制剂奠定基础。方法从RSV感染患儿恢复期外周血淋巴细胞中提取细胞总RNA，用一组人IgGF出特异性引物，通过RT—PCR扩增得到一组轻链（κ和λ）和重链Fab段基因，并将此轻链和重链基因片段克隆于pComb3噬菌体载体，电转化XL1-Blu菌构建成抗RSV噬菌体抗体基因库。用纯化病毒颗粒作抗原对此抗体库进行了富集筛选，得到了特异性针对RSV的人源单克隆抗体Fab段基因，并在大肠杆菌中获得有效表达。用ELISA方法检测了此Fab抗体的抗原特异性，并对阳性克隆进行了基因序列分析。结果所构建的抗体库库容为108，从此抗体库中筛选得到的阳性克隆所表达的Fab抗体能与RSV纯化抗原特异性结合，保留了对RSV的抗原特异性。核苷酸序列分析证实，所获得的阳性克隆基因为人源IgG基因。结论本实验获得了特异性抗RSVFab抗体基因并在大肠杆菌中获得表达，表达产物能与RSV抗原特异性结合。     

HI_(47),一种抗人成熟B细胞单克隆抗体制备、鉴定及其生物学特性研究

用人扁桃腺细胞免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与小鼠NS_1骨髓癌细胞融合,得到一种单克隆抗体HI_(47)(IgG_3),能够结合家兔补体,主要与分化后期的人B细胞反应,还可与巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞及部分激活T细胞结合。HI_(47)识别抗原的分子量为37/35KD,其分布与CD_(20)相似。第四届国际人类白细胞分化抗原会议将HI_(47)命名为CD_(20)+X。本文还初步探讨了HI_(47)抗体抑制SAC诱导B细胞活化增殖的作用。     

抗K物质单克隆抗体的制备(文摘)

本文报道速激族肽,包括K物质、P物质、神经素B等都具有神经递质的功能,它们越来越引起人们的关注。免疫方法诸如:放射免疫测定法、免疫组化法等对神经肽的分布、定位和生物学功能等方面的研究提供了极大的方便。作者以K物质-甲状腺球蛋白偶联物免疫动物,Wistar大鼠对K物质-甲状     

抗癌胚抗原(CEA)鼠/人嵌合单克隆抗体在体外和体内的活性(文摘)

本文通过重组DNA技术制备了抗人CE-A的鼠/人嵌合单抗,从分泌IgG1抗人CEA单抗的鼠杂交瘤系2.7.1G.10细胞中提取高分子量DNA。经限制性内切酶消化,蔗糖密度梯度离心,得到含重排的2、7、1G、10V_(11)和-V_K基因片段,重组入EMBL-3噬菌体中。用~(32)P标记的鼠1.5kb的Hind Ⅲ-EcoR Ⅰ J_(H)4探针和0.7kb Aval-Pstl Ju4-5探针筛     

梨形鞭毛虫滋养体的单克隆抗体产生及其特性(文摘)

梨形鞭毛虫是一种寄生于鼠小肠中的原生动物寄生虫,梨形鞭毛虫感染鼠可构成人贾第氏虫病的动物模型以及探讨鞭毛虫滋养体抗原的肠免疫应答的实验途径。鼠单克隆抗体(McAb)是由梨形鞭毛虫滋养体表面抗原来生产的,经非肠道免疫后的BALB/c鼠脾淋巴细胞与P3/NS1/1-Ag4-1骨髓瘤细胞融合而得到B-细胞杂交瘤。梨形鞭毛虫     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞，制备抗原，锣疲BALB／c小鼠，．取其脾细胞与Sp2／0-Ag14细胞融合，建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B0杂交瘤细胞株。3B0McAb经鉴定属于IgG3亚娄。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B0McAb在加有豚鼠血清后可阻止HcMV感染后细胞病变的出现。3B0McAb经间接免疲荧光法检测中，晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原，在68例标本中有一例为阳性，阳性率为1．47％。该法方便，快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

抗幽门弯曲菌单克隆抗体的制备(文摘)

作者将培养出的幽门弯曲菌菌体用福尔马林灭活,分3次注射到6周龄BALB/c小鼠的腹腔内进行免疫。取脾细胞,同骨髓瘤细胞X 63-Ag8.653进行细胞融合,获得杂交细胞瘤。为筛选抗体和探讨其特异性,将幽门弯曲菌、空肠弯曲菌和大肠杆菌超声波破碎可溶性抗原,变成固体,用酶联免疫吸附测定法测定。再将幽门弯曲菌的可溶性抗原用10％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,在硝化纤维素膜上转录,使其与各种单克隆抗体反应,充分洗净后,再与过氧化物酶标记的鼠免疫球蛋白抗体反应,然后以氯萘酚为基质染色鉴定。     

猪瘟病毒C株E~(rns)/E2嵌合基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

目的:制备抗猪瘟病毒(CSFV)C株 E~(rns)/E2嵌合基因表达蛋白的单克隆抗体(mAb),探讨~(rns)/E2蛋白的分子结构和生物学功能.方法:在大肠杆菌 Rosetta~(TM)2(DE_3)中表达了猪瘟病毒(CSFV)C株 E~(rns)、E2蛋白主要抗原域的嵌合基因CSFV E~(rns)/E2蛋白;以纯化复性后的CSFV E~(rns)/E2为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗CSFV E~(rns)/E2 mAb;利用间接ELISA 、Western blot、Dot blot方法鉴定mAb生物学特性.结果:获得了1株稳定分泌抗CSFV Erns/E2融合蛋白的单克隆杂交瘤细胞系C8株,该株mAb的细胞培养上清效价为 1:6 400,小鼠腹水效价 1:2×10~5.其免疫球蛋白亚类为IgG1.间接ELISA和Western blot结果显示该株mAb不与猪瘟C株细胞毒、pET-32a标签蛋白反应,仅与融合表达的 CSFVE~(rns)/E2蛋白存在特异性反应.Dot blot结果表明其识别的抗原表位为E2蛋白的 RSGLCPFDTSPV氨基酸序列.结论:获得了一株能特异识别E2蛋白抗原表位的 mAb,为进一步研究 CSFV 的分子结构及功能奠定了物质基础.