肺癌MDM2蛋白表达与p53基因突变的关系

目的研究肺癌ＭＩＤ２蛋白表达与ｐ５３突变之间的关系。方法：用免疫组化检测１２５例肺癌ｐ５３和ＭＤＭ２蛋白表达，以聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测ｐ５３基因第５￣８外显子的突变。结果：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测阳性的５２例肺癌ＭＤＭ２阳性率为１９．２％，而阴性的７３例肺癌ＭＤＭ２蛋白阳性率为３５．６％，统计学检验显示肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与Ｐ５３突变之间呈负相关（Ｘ＾２＝３．９８，Ｐ     

慢性宫颈炎组织内P53突变的检测

目的：通过对慢性宫颈炎组织内Ｐ５３基因５－９外显子突变的研究，探讨慢性宫颈炎的发生是否与Ｐ５３的突变有关，并为临床妇科实验室建立一种分子生物学的基因检测方法。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对慢性宫颈炎活检组织内Ｐ５３ ５－９外显子的突变进行了检测。结果：在１８例慢性宫颈炎组织中，仅有１例在ＰＣＲ后初步判断为可疑结果，但ＳＳＣＰ结果显示无突变，其余１７例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测结果均无Ｐ５３ ５－９外     

P53肿瘤抑制基因突变分析的技术方法探讨

聚合酶链反应－单链构型多态分析－脱氧核糖核酸序列测定技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ技术），对正确检测和评价人食管癌和癌前病变组织肿瘤抑制基因Ｐ５３的基因变化的影响进行了分析。结果：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ序列测定技术是分析肿瘤抑制基因Ｐ５３变化的较灵敏和可靠的方法。但是，肿瘤组织的取样误差和处理不当可造成对Ｐ５３基因突变的发生率和性质的错误结论。利用免疫组织化学技术定位检测Ｐ５３蛋白的变化，并据此在镜下组织切片中收集Ｐ５３蛋白免疫组化阳性细胞，然后进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ分析有助于提高Ｐ５３基因变化的检出率，阳性细胞浓集数量与Ｐ５３基因变化检出率呈正相关。     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

肺癌MDM2蛋白表达与p53基因突变的关系

目的：研究肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与ｐ５３突变之间的关系。方法：用免疫组化检测１２５例肺癌ｐ５３和ＭＤＭ２蛋白表达，以聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）方法检测ｐ５３基因第５～８外显子的突变。结果：ＰＣＲＳＳＣＰ检测阳性的５２例肺癌ＭＤＭ２阳性率为１９．２％；而阴性的７３例肺癌ＭＤＭ２蛋白阳性率为３５．６％。统计学检验显示肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与ｐ５３突变之间呈负相关（χ２＝３．９８，Ｐ＜０．０５）；ＭＤＭ２蛋白阳性与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、临床分期和ｐ５３蛋白表达无显著相关性。结论：ＭＤＭ２过度表达可能在ｐ５３基因没有突变肺癌的发生过程中起重要作用     

应用改进的PCR—SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变？…

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５￣９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带，卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例，突变率在临     

胸腔积液中脱落细胞p53基因突变的检测及其意义

探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测胸胸液脱落细胞Ｐ５３基因突变在恶性胸腔积液（ＭＰＥ）诊断中的可行性及价值。方法用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分别检测了１９例ＭＰＥ及１２例结核性胸腔积液中新鲜脱落细胞标本的抑癌基因－Ｐ５３基因５－８外显子的突变情况,并与正常胸膜组织进行对照。结果７例ＭＰＥ有Ｐ５３基因突变,突变率为３６．８４％。其中５例发生在第５外显子,２例发生在第７外显子,第６、８     

腺病毒介导的野生型p53基因表达对入胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨恢复野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）基因表达对胰腺癌细胞生长的影响。方法构建一个Ｅ１区缺失但能表达ｗｔｐ５３基因的５型腺病毒载体Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３，该载体含有人ＣＭＶ启动子、人野生型ｐ５３基因和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号。载体经腺病毒包装细胞２９３细胞包装、扩增后，转染人胰腺癌ＰＣ－２细胞。ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析证实，转染的细胞有外源ｗｔｐ５３基因的表达。结果与对照组相比，转染有Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３的ＰＣ－２细胞生长速度减慢、增殖率降低，软琼脂集落形成能力丧失。结论以腺病毒为载体恢复野生型ｐ５３在胰腺癌细胞的表达，可抑制癌细胞的生长和部分逆转其恶性表型。     

应用改进的PCR-SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变的研究

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５～９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带；卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例；突变率在临床各期、组织学分级和组织学类型之间无明显差异；卵巢上皮交界瘤仅１例ｐ５３基因第７外显子发生突变，良性卵巢瘤无１例发生突变。结论：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因点突变准确率高，有助于区分卵巢上皮肿瘤的良恶性     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白—2基因克隆及其在大肠杆菌中 …

目的：克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白２全基因,并在大肠杆菌中进行表达。方法：采用ＰＣＲ扩增恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＰ２基因,克隆插入ｐＵＣ１９,并重组人表达质粒载体中,转化大肠杆菌,诱导重组质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ／ｍｓｐ２表达ＭＳＰ２蛋白抗原,对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｗｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增出８２４ｂｐＤＮＡ片段,经酶切鉴定和部分序列测定证实为Ｍ     

P53肿瘤抑制基因突变分析的技术方法探讨

聚合酶链反应－单链构型多态分析－脱氧核糖核酸序列测定技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ技术），对正确检测和评价人食管癌和癌前病变组织肿瘤抑制基因Ｐ５３的基因变化的影响进行了分析。结果：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ序列测定技术是分析肿瘤抑制基因Ｐ５３变化的较灵敏和可靠的方法。但是，肿瘤组织的取样误差和处理不当可造成对Ｐ５３基因突变的发生率和性质的错误结论。利用免疫组织化学技术定位检测Ｐ５３蛋白的变化，并据此     

动脉粥样硬化病变中P53抑癌基因结构突变的研究

本文应用灵敏、高特异的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，首次系统研究中国成人ＡＳ病变组织中Ｐ５３ａｎｔｉｏｎｃｏｇｅｎｅ的突变。结果发现：受检的８９例ＡＳ组织中的９例有Ｐ５３基因的突变（有ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的异常），其中６例经测离确定了Ｐ５３基因突变的具体位眯。结论：在人类的ＡＳ病变中有Ｐ５３ａｎｔｉ－ｏｎｃｏｇｅｎｅ的突变，此可能为ＡＳ形成过程中新的主要机制之一。     

应用PCR—SSCP方法检测肺癌,肠癌中p53基因突变

目的 研究ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测肺癌、肠癌中Ｐ５３基因突变的方法改进及突变率。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,银染技术检测４例肺和７例大肠癌组织标本中Ｐ５３基因外显子５－８。结果 肺癌Ｐ５３基因突变率为７５％,肠癌Ｐ５３基因突变率为４２．９％。结论Ｐ５３基因突变与肺癌、肠的发生密切相关,ＰＣＲ－ＳＳＣ 染技术简便快速、灵敏安全的基因突变检测方法,可应用于肿瘤的临床基本诊断 。     

器官移植HLA—Ⅱ类基因分型研究及应用

目的：提高ＨＬＡ－Ⅱ类基因ＤＲ、ＤＱ位点分型的准确性，选择合适的供受者对，延长移植物的存活时间。方法：对４２９例肾移植供受者ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型进行了研究。ＰＣＲ－ＳＳＰ（聚合酶链式反应－序列特异性引物），全过程耗时３小时。结果：（１）用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法可同时、同条件进行ＩＬＡ－Ⅱ类ＤＲ、ＤＱ基因分型。（２）１７２例次供受者ＨＬＡ－ＤＲ位点０个错配（０ＭＭ），其移植肾１年存活率为１００％；１个错配（１ＭＭ）为９２６％；２个错配（２ＭＭ）为８６５％。（３）在与疾病相关的研究中发现，尿毒症患者ＤＲ１０比例明显高于正常人。供受者ＤＲ、ＤＱ位点基因频率及单倍型连锁不平衡参数与国内外报道大致相同。结论：初步建立起一套完整的ＨＬＡ分型手段，为进一步研究ＨＬＡ打下了基础。     

hMSH2基因在散发卵巢癌中突变研究

目的：研究卵巢癌患者ＤＮＡ错配修复基因ｈＭＳＨ２（ＨｕｍａｎｍｕｔＳｈｏｍｏｌｏｇ）基因突变，同时检测其基因组微卫星Ｄ２Ｓ１２３序列变化。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ序列分析方法检测了１５例卵巢癌患者正常细胞和肿瘤细胞中的ｈＭＳＨ２基因突变。结果：３例患者存在ｈＭＳＨ２基因生殖细胞或体细胞突变，序列分析表明有碱基置换的同义突变，有碱基丢失产生的无义突变。有３例患者基因组表现Ｄ２Ｓ１２３变化，其中１例检测到ｈＭＳＨ２突变。结论：ｈＭＳＨ２基因突变和卵巢癌发生有关。机理可能为其突变引起基因组不稳定，而引起一系列基因变化，导致细胞恶性转化     

鼻咽癌P^53,C—myc,EGFR基因表达的研究

目的：Ｐ＾５３，Ｃ－ｍｙｃ及ＥＧＦＲ基因在鼻咽癌（ＮＰＣ）的发生、发展中可起重要作用，基因的研究结果可能为ＮＰＣ的预防及诊疗提供科学的依据。方法：用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测了３０例ＮＰＣ组织、１０例无瘤鼻咽癌（ＮＰ）组织的Ｐ＾５３、Ｃｍｙｃ及ＥＧＦＲ基因的异常表达情况。结果：①三种基因在ＮＰＣ组织中均有较高水平的表达，Ｐ＾５３蛋白阳性率为８６．７％（２６／３０），Ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦＲ蛋白阳性率均为７０     

应用mRNA差异显示技术克隆人成骨肉瘤转移相关基因

目的：筛选与成骨肉瘤转移抑制相关的基因,探讨成骨肉瘤转移的分子机制。方法：应用改良的mＲＮＡ差异显示,比较成骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７及其高转移亚系统ＳＯＳＰ－Ｍ的mＲＮＡ表达差异。克隆差异片断,进行测序。根据测序结果设计牧民性引物,ＲＴ－ＰＣＲ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证实其表达特异性。结果：从低转移细胞ＳＯＳＰ－９６０７中分离出２条特异性表达的片断ＭＳＰ２和ＭＳＰ３,经ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒ     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

p53基因抑制口腔粘膜鳞癌细胞株生长的实验观察

ｐ５３基因抑制口腔粘膜鳞癌细胞株生长的实验观察陈谦明彭文珍傅继梁杨光华李秉琦白少槐张旋波为了探讨野生型ｐ５３基因能否抑制聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）异常的口腔鳞癌细胞株的生长，从而求证银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析ｐ５３基因遗传...