葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:培养成骨细胞MC3T3-E1并分为对照组及10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组,处理24小时后检测成骨细胞标志基因、凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因的mRNA表达量。结果:10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组细胞ALP、Runx2、OC。Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量均显著高于对照组,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05);且葛根素剂量越大,细胞中ALP、Runx2、OC、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量越高,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量越低(P<0.05)。结论:葛根素能够有效促进成骨细胞的增殖及Wnt/β-catenin通路的活化。     

百里醌抑制皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13增殖和诱导凋亡机理研究

目的:探讨百里醌对体外培养人皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13的影响及其机制。方法:选取人皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13进行培养,采用MTT法检测SCC13细胞增殖,流式细胞术检测SCC13细胞凋亡,RT-PCR法检测SCC13细胞Cyclin D1和Survivin mRNA表达,Western blot法检测SCC13细胞β-catenin、Cyclin D1和Survivin蛋白表达。结果:百里醌可降低SCC13细胞增殖率,降低Cyclin D1 mRNA和Survivin mRNA水平以及β-catenin、Cyclin D1和Survivin蛋白表达,增加SCC13细胞凋亡率,且呈剂量依赖性。结论:百里醌能抑制SCC13细胞增殖和诱导凋亡,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin传导通路实现的。     

青蒿琥酯对人子宫颈癌细胞株HeLa凋亡与增殖的影响

目的研究青蒿琥酯（artesunate,ART）对人子宫颈癌细胞HeLa凋亡与增殖的影响。方法通过MTT法观察ART对HeLa细胞的生长抑制作用;荧光染色观察ART作用前后细胞形态的改变;免疫组化检测HeLa细胞caspase-3表达;流式细胞术观察ART对细胞周期的影响,并检测细胞线粒体膜电位△ψm。和细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的改变。结果ART对HeLa细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖关系;荧光染色观察见凋亡小体形成;透射电镜见细胞染色质凝聚,边集呈新月形;免疫组化检测细胞质caspase-3呈阳性表达;流式细胞术检测ART可引起HeLa细胞周期S期阻滞;细胞内ROS明显升高（P〈0．01）,△ψm显著降低（P〈0．05）。结论ART作用于人子宫颈癌HeLa细胞,可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,探讨As2O3 对子宫颈癌的临床应用意义。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3 作用1、2、3、4 d后HeLa细胞的存活率,并进行形态学观察;采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果:2.0μmol/L As2O3 处理HeLa细胞48 h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05),处理96 h后,细胞的存活率进一步降低(P<0.01),经5.0μmol/L As2O3 处理的HeLa细胞24 h后就明显可见细胞的存活率降低;As2O3 作用后,HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变;TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论:As2O3 可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,随着As2O3 浓度增加,作用时间延长,效果越明显,其作用具有浓度和时间依赖性。     

葛根素通过抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路诱导人肾癌786-O细胞凋亡的研究

目的 研究葛根素对人肾癌786-O细胞凋亡的影响及其机制。方法 分别以DMSO(空白对照组)、不同浓度葛根素10、20、40 mg/L和LY294002(PI3K抑制剂)15 mg/L干预对数生长期人肾癌786-O细胞48 h，采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(Tyr317) [p-PI3K(Tyr317)]、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(Ser473)[p-Akt(Ser473)]、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β (Ser21)[p-GSK-3β(Ser21)]、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、激活型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax）表达。结果 与空白对照组比较，葛根素10、20、40 mg/L组和LY294002 15 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(17.04±2.92)%、(26.48±4.77)%、(42.79±6.81)%、(35.73±6.12)%比(3.47±0.53)%，P<0.01]、凋亡率升高[(13.72±2.38)%、(30.41±4.05)%、(55.39±6.72)%、(36.08±4.32)%比(2.64±0.51)%，P<0.01]；。与空白对照组比较，葛根素20、40 mg/L组和LY294002 15 mg/L组786-O细胞p-PI3K(Tyr317)、p-Akt(Ser473)、p-GSK-3β(Ser21)、Bcl-2表达下调[p-PI3K(Tyr317)：(0.58±0.13)、(0.32±0.07)、(0.38±0.08)比(1.03±0.24)；p-Akt(Ser473)：(0.25±0.06)、(0.09±0.03)、(0.11±0.03)比(0.51±0.12)；p-GSK-3β(Ser21)：(0.12±0.03)、(0.07±0.02)、(0.09±0.03)比(0.58±0.13)；Bcl-2：(0.31±0.08)、(0.18±0.05)、(0.21±0.07)比(0.48±0.12)，P均<0.01]，Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Caspase-9：(0.37±0.08)、(0.66±0.13)、(0.58±0.11)比(0.17±0.04)；Cleaved Caspase-3：(0.25±0.06)、(0.72±0.16)、(0.43±0.12)比(0.11±0.03)；Bax：(0.36±0.08)、(0.62±0.12)、(0.20±0.05)比(0.08±0.02)，P均<0.01]，PI3K、Akt、GSK-3β磷酸化率降低[PI3K磷酸化率：(0.55±0.15)、(0.29±0.08)、(0.34±0.09)比(0.92±0.28)；Akt磷酸化率：(0.24±0.07)、(0.09±0.03)、(0.11±0.04)比(0.53±0.14)；GSK-3β磷酸化率：(0.14±0.04)、(0.08±0.03)、(0.10±0.04)比(0.62±0.15)，P均<0.01]，Bax/Bcl-2比值升高[(1.16±0.27)、(3.41±0.65)、(0.95±0.22)比(0.17±0.04)，P<0.01]。与LY294002 15 mg/L组比较，葛根素40 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(42.79±6.81)%比(35.73±6.12)%，P<0.05]、凋亡率升高[(55.39±6.72)%比(36.08±4.32)%，P<0.01]，Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Cleaved Caspase-3：(0.72±0.16)比(0.43±0.12)；Bax：(0.62±0.12)比(0.20±0.05)，P均<0.01]，Bax/Bcl-2比值升高[(3.41±0.65)比(0.95±0.22)，P<0.01]，两组间其他指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 葛根素具有诱导人肾癌786-O细胞凋亡的作用，其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。     

大黄酸通过Wnt/β-catenin信号通路抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨大黄酸对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 利用低、中、高浓度（6、12、24μmol/L）大黄酸处理喉癌Hep-2细胞,通过MTT法、划痕实验、Transwell法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测β-catenin、Dvl2、GSK-3β和p-GSK-3β在Hep-2细胞中的表达水平。结果 随着大黄酸浓度的增大,喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著减弱（P <0.05）。大黄酸可降低喉癌细胞Dvl2、p-GSK-3β和β-catenin蛋白的表达水平（P <0.05）,增加GSK-3β蛋白的表达（P <0.05）。使用SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,能够逆转大黄酸对Hep-2细胞迁移和侵袭的抑制作用（P <0.05）;使用XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,能够降低Dvl2、p-GSK-3β和β-catenin的蛋白表达水平（P <0.05）,进一步加强大黄酸对Hep-2细胞迁移的抑制作用（P <0.05...     

四溴苯三唑对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨四溴苯三唑（TBB）对人宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用,阐明其对相关信号转导通路的作用机制。方法：选取处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,将其分为对照组（未给予TBB）和实验组（给予TBB）。采用MTT比色法检测HeLa细胞存活率,采用倒置显微镜观察人宫颈癌HeLa细胞形态表现,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法及流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞中凋亡相关蛋白p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3和Pro-caspase-3表达水平。结果：MTT法检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞存活率明显降低（P<0.01）,且呈浓度依赖性;倒置显微镜下观察,实验组HeLa细胞出现体积缩小、细胞核皱缩等细胞凋亡的形态变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法和流式细胞术检测,与对照组比较,实验组各时间段（3、6、12和24 h）细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;Western blotting检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞中抗凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达水平逐渐降低,促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3表达水平逐渐升高,Pro-caspase-3表达水平逐渐降低（P<0.05或P<0.01）。结论：TBB可能通过抑制Akt信号通路的活性进而有效促进HeLa细胞凋亡。     

二十二碳六烯酸对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对人胆管癌QBC 939细胞增殖、凋亡和周期的影响,并初步探讨可能的分子机制.方法 采用MTT法检测DHA和花生四烯酸(AA)对QBC 939细胞增殖的影响;流式细胞术检测DHA对QBC 939细胞凋亡和周期的影响;免疫印迹法检测DHA作用于QBC 939细胞后β -catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白表达量的变化.结果 作用浓度为80和100μg/mL的DHA可显著降低QBC 939细胞存活率,且呈一定的剂量、时间效应(P＜0.05),AA无明显作用.经80μg/mL DHA作用24 h后,QBC 939细胞早期凋亡率明显增加(P＜0.05),G0/G1期细胞显著增多(P＜0.05),G2/M、S期细胞减少(分别P＜0.01及P＜0.05).β-catenin、c-myc、cyclin D1表达量均下调.结论 DHA可抑制人胆管癌QBC939细胞增殖,促进其凋亡,部分作用机制可能是下调Wnt/β -catenin信号传导通路中β-catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白的表达.     

桦褐孔菌醇对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的：研究桦褐孔菌醇（Inotodi01）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：以不同浓度的Inotodiol处理HeLa细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,透射电镜观察细胞超微结构变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测caspase-3蛋白的表达。结果：Inotodiol能抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系（P〈0．05,P〈0．01）;超微结构观察可见细胞体积缩小、核固缩、核内异染色质增多并边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;TUNEL法显示,经50μg/ml的lnotodiol处理48h,HeLa细胞发生凋亡;免疫细胞化学结果表明,与对照组相比,Inotodiol组HeLa细胞中caspase-3蛋白表达上调（P〈0．01）。结论：在一定浓度范围内,Inotodiol可在体外抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调easpase-3蛋白的表达有关。     

干扰CXCR4基因抑制胰腺癌经典Wnt通路活化的体外实验研究

目的观察CXCR4 shRNA转染胰腺癌细胞后经典Wnt通路的活性变化.方法构建CXCR4 shRNA表达载体转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,通过Realtime-PCR、WesternBlot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;通过PGL3-OT/OF荧光素酶检测方法观察CXCR4基因沉默后对胰腺癌Wnt/β-catenin经典通路活性的影响,并通过Realtime-PCR、Western Blot实验观察CXCR4 shRNA对Wnt/β-catenin通路下游靶基因的影响.结果特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70%以上,同时,特异性CXCR4干扰后能够显著抑制PGL3-OT转染后的荧光素活性（P〈0.05）以及Wnt/β-catenin下游靶基因的mRNA及蛋白的表达.结论CXCR4基因沉默能抑制Wnt/β-catenin经典通路在胰腺癌中的活性,阻遏Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达,为CXCR4作为胰腺癌治疗的分子靶点提供依据.     

茯苓酸抑制TRIM29表达通过Wnt信号通路调控宫颈癌细胞存活和凋亡

【目的】观察茯苓酸对宫颈癌细胞Caski存活、凋亡的影响及潜在作用机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察茯苓酸处理或转染的Caski细胞生存能力,流式细胞术观察茯苓酸处理或转染的Caski细胞凋亡情况,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测茯苓酸处理或转染的Caski细胞三基序蛋白29(TRIM29)mRNA的表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测茯苓酸处理或转染的Caski细胞TRIM29、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、细胞周期调节蛋白Cyclin D1及Wnt通路蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、c-Myc的表达。【结果】茯苓酸能够降低Caski细胞存活率,促进细胞凋亡,升高Caspase-9、β-catenin表达量,降低Cyclin D1、GSK-3β、c-Myc表达量,抑制TRIM29的mRNA和蛋白表达。沉默TRIM29可降低Caski细胞存活率,促进细胞凋亡,促进Caspase-9表达,抑制Cyclin D1表达。过表达TRIM29可通过上调Wnt通路活性部分逆转茯苓酸对宫颈癌Caski细胞存活和凋亡的作用。【结论】茯苓酸通过抑制TRIM29表达下调Wnt通路活性从而抑制宫颈癌Caski细胞存活,促进细胞凋亡。     

紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:观察紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用。方法:体外培养HeLa细胞。ELISA法测定细胞培养液组蛋白/DNA碎片。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析Sub-G1细胞百分率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:CAS以浓度依赖方式增加HeLa细胞组蛋白/DNA碎片的渗漏(P<0.05),同时显著升高HeLa细胞Sub-G1百分率(P<0.05)。CAS以Caspase依赖方式激活HeLa细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:CAS能有效诱导HeLa细胞凋亡。     

葛根素糖苷生物合成及对乳腺癌细胞增殖抑制的影响

目的 研究约氏不动杆菌G2菌株对葛根素糖苷生物合成的最佳转化条件，以及葛根素糖苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖抑制作用。方法 考察生物合成体系中转化温度、pH和蔗糖浓度对转化率的影响；并以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）观察不同浓度的葛根素及葛根素糖苷对MDA-MB-231细胞生长的影响。结果 葛根素糖苷的最佳转化条件为温度30 ℃，pH 7.38，蔗糖浓度60 g/L，在此条件反应24 h，转化率为85%。MTT法显示，不同浓度的葛根素及其糖苷对MDA-MB-231细胞均有抑制作用，并随浓度升高而抑制作用增强;其中200 μmol/L浓度葛根素及葛根素糖苷作用MDA-MB-231细胞48h后，其抑制率分别为61.91%和59.42%。结论 约氏不动杆菌G2菌株可有效催化葛根素合成葛根素糖苷；葛根素及其糖苷均能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖。     

姜黄素诱导卵巢癌细胞株A2780细胞周期阻滞和凋亡

目的 探讨姜黄素对卵巢癌细胞株A2780的生长抑制作用及其机制。方法 10一50μmol/L姜黄素作用6—24h后，MTT比色法检测细胞生长活性，流式细胞仪测定细胞周期时相变化，末端TdT酶标记技术和DNA Ladder检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞超微结构变化。结果 姜黄素能显著抑制卵巢癌细胞株A2780的体外生长，呈时间与剂量依赖性；细胞周期阻滞于G0／Gl期；部分细胞出现凋亡形态学改变，凝胶电泳可见“梯形”条带，凋亡率为6．41％一28．48％(P＜o．01)。结论 姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制，能显著地抑制卵巢癌细胞的体外生长。     

芹菜素增强TRAIL诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究芹菜素(API)与重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析sub-G1百分率。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。结果:API(20μmol/L)和TRAIL(20ng/mL)以及两者合用作用48h的人宫颈癌HeLa细胞sub-G1百分率分别是3.56%±0.20%、6.69%±0.40%和59.8%±4.20%;DNA琼脂糖凝胶电泳显示:20μmol/LAPI与20ng/mL的TRAIL联合处理,展示出典型DNA梯形条带图谱。结论:芹菜素具有增强TRAIL诱导HeLa细胞凋亡作用。     

白花蛇舌草对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白花蛇舌草提取物对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:不同浓度(0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、1 g·L-1)白花蛇舌草提取物作用人前列腺癌DU145细胞24 h、48 h、72 h后,使用CCK-8法检测白花蛇舌草提取物对DU145细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;实时定量PCR检测COX-2 m RNA和PCNA m RNA的表达;Western bloting法检测Bcl-2、Bax、Caspase3、Cyclin D1蛋白表达。结果:随着作用时间的延长和剂量的增加,白花蛇舌草提取物对DU145细胞增殖抑制率明显提高,呈时效和量效依赖效应。白花蛇舌草提取物作用48 h后,可明显提高细胞凋亡率,下调DU145细胞COX-2 m RNA、PCNA m RNA及Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达,上调Bax、Caspase3蛋白表达,呈量效依赖效应。结论:白花蛇舌草提取物能降低人前列腺癌DU145细胞增殖能力,并诱导其凋亡,其机制可能与改变细胞周期和影响凋亡相关基因表达有关。     

鞘氨醇-1磷酸盐对宫颈癌HeLa细胞生长及细胞侵袭的影响

目的探讨鞘氨醇-1磷酸盐（S1P）对宫颈癌HeLa细胞生长和侵袭能力的影响。方法分别应用S1P（实验组）和无脂肪型牛血清白蛋白（BSA）载体溶液（对照组）处理宫颈癌HeLa细胞,采用噻唑蓝和5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记法细胞增殖分析法检测肿瘤细胞活力和增殖变化,趋化小室和侵袭小室检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力变化。结果与对照组细胞相比,实验组HeLa细胞活力及细胞增殖、HeLa细胞迁移和侵袭能力显著增强（P〈0.05）。结论 S1P可以导致宫颈癌HeLa细胞生长和侵袭能力增强,提示S1P蛋白在宫颈癌进展中可能发挥重要作用。