人参皂甙Rg1对帕金森病小鼠黑质JNK细胞凋亡通路的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1(ginsenoside Rg1)抗帕金森病(PD)小鼠黑质神经元凋亡的可能机制。方法 采用MPTP制备帕金森病(PD)小鼠模型，经人参皂甙Rgl预处理后，用尼氏染色、TH和活化型caspase-3组织化学染色及TUNEL染色法观察黑质神经元的损害情况，并计算神经元的凋亡率，同时应用蛋白免疫印迹法检测黑质神经元磷酸化．JNK(c—Jun氨基末端激酶)及磷酸化c—Jun蛋白表达水平。结果 人参皂甙Rg1预处理可减轻PD小鼠黑质致密带Niss1阳性神经元和TH阳性神经元的丢失现象，同时减少磷酸化．INK及磷酸化C-Jun蛋白表达水平，活化型caspase-3表达减少，降低黑质神经元的凋亡率。结论人参皂甙Rg1能减少MPTP诱导的小鼠黑质神经元凋亡，其机制与阻断．JNK细胞凋亡通路激活有关。     

Tactivin疗法对外伤后骨髓病人IL-1β,TNFα的调节

采用Tactivin疗法对5例下肢外伤后骨髓炎病人治疗前后IL-1β，TNFα的变化进行了观察，对照组为健康人。于Tactivin疗法治疗前后采病人血液，分别检测：①血清IL-1β,TNFα水平；②体外培养外周血单个核细胞自发性和经LPS刺激后分泌的IL-IB，TNFα水平（用免疫酶方法检测）；③外周血单个核细胞的1IL-1β，TNFαmRNA基因表型的检测，用N．Gough方法抽提外周血单个核细胞的mRNA，与用’‘P标记的IL－lpDNA探针、TNFaDNA探针分别进行杂交，用放射自显影方法检测。实验结果表明：①来治疗的骨髓病人血清IL－16水平升高的同…     

通痹灵总碱对LPS(脂多糖)刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子的影响

目的：观察中药通痹灵（TBL）的有效部位-总生物碱对LPS（脂多糖）刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的影响。方法：培养人类单核白血病细胞系——THP-1细胞，在PMA（Phorbol 12-mmstate 13-acetate）作用下分化为巨噬细胞。体外用LPS（Lipopolysaccharide）刺激分化的巨噬细胞，以MTX（甲氨喋呤）作为对照，培养有药物作用的细胞24小时后检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α含量并用PR-PCR（逆转录-聚合酶链式反应）半定量测定IL—1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结果：LPS刺激PMA分化后的THP—1细胞，其IL-1β、TNF—α含量明显升高（与正常组比较P〈0．01），不同浓度的通痹灵总碱（200、100、50、25mg／L）及MTX明显抑制IL—1β、TNF-α的产生（P〈0．01），并下调IL-1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结论：通痹灵总碱抑制巨噬细胞分泌炎性细胞因子IL-1β、TNF-α，进而抑制了一系列免疫炎症反应造成的病理损伤。     

ConA对巨噬细胞活性的影响

目的 探讨ConA对巨噬细胞（Mφ）活性的影响。方法 以不同剂量的ConA腹腔注射处理小鼠，48h后收集腹腔Mφ做体外培养。分别以扫描及透射电镜观察Mφ的形态变化。分别以MTT比色法和胸腺细胞增殖试验检测Mφ分泌TNF－α和IL－1β的水平，并用免疫细胞化学染色法检测这两种蛋白的表达强度。结果 ConA作用后的Mφ，表现为体积增大、指状突起增加和胞浆内线粒体等细胞器增加。ConA活化的腹腔Mφ分泌TNF－α和IL－1β的水平增加，其在Mφ胞浆内的表达增强。结论 ConA具有激活Mφ增强其产生TNF－α和IL-1β的作用。     

IL-1β对Hepa1-6细胞增殖、迁移及IFN应答的影响

目的:构建应用于小鼠肝脏内表达和研究的IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其对小鼠Hepal-6细胞体外增殖活性、迁移能力及干扰素增殖抑制效应等体外生物学行为的影响.方法:由C57BL/6小鼠腹腔液巨噬细胞扩增IL广1β基因,构建肝脏特异性pLIVE-IL-1β重组表达载体.利用transiT-LT1将鉴定后的pLIVE-IL-1β转染至Hepal-6肝癌细胞,RT-PCR及双抗体夹心ELISA法分析转染前后IL-1表达水平,MTT法分析IL-1对细胞体外增殖活性的影响;利用细胞划痕实验分析对其迁移能力的影响,并确定对IFN-α诱导的细胞增殖抑制效应的作用.结果:重组载体经限制性酶谱分析酶解出822 bp的条带,其序列与GenBank登录的小鼠IL-1β基因一致;转染后的Hepal-6细胞培养上清中IL-1β的表达明显增高,细胞体外增殖速度明显加快;给予IFN-α作用后,IL-1β的表达使细胞对于扰素的抵抗性明显增强.结论:小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1βp能够在小鼠肝癌细胞中高效表达IL-1β,并能够显著促进肿瘤的体外增殖和迁移能力,削弱IFN-α对Hepal-6细胞的增殖抑制作用.     

IL-1β和NF-κB在慢性内侧颞叶癫痫模型中的相互作用

目的:观察白介素1β(IL-1β)与核因子-κB(NF-κB)在大鼠内侧颞叶癫痫(mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)模型中的表达变化;体外培养的星形胶质细胞经IL-1β和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)预处理后,观察其增殖和NF-κB表达变化。方法:利用匹罗卡品诱导SD大鼠发作癫痫制成MTLE模型,根据自发发作出现和稳定时间分为急性期对照组(AC,制模后2 h)、急性期癫痫组(AS)、潜伏期对照组(LC,制模后3周)、潜伏期癫痫组(LS)、慢性期对照组(CC,制模后8周)和慢性期癫痫组(CS)。体外培养的星形胶质细胞分为对照组、IL组和PDTC+IL组,利用凝胶迁移电泳(EMSA)、免疫印迹(WB)、酶联免疫吸附(ELISA)和免疫组织化学(IHC)的方法观察IL-1β和NF-κB的表达变化;MTT检测星形胶质细胞的增殖活化程度。结果:匹罗卡品诱导的MTLE模型大鼠海马内IL-1β和NF-κB在急性期、潜伏期和慢性期表达均增加,但以急性期和慢性期明显;IL-1β可以促进体外培养的星形胶质细胞增殖、上调星形胶质细胞内NF-κB的表达,而PDTC可以明显抑制IL-1β的上述作用。结论:IL-1β通过NF-κB促进大鼠星形胶质细胞的活化增殖,这一改变可能与MTLE发病密切相关,探讨其机制可能为MTLE的治疗提供新的靶点。     

雷公藤甲素对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞IL-5等受体表达的影响

目的 观察哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中不同密度嗜酸细胞（Eos)上白介素－5受体α（IL－5Rα）、IL－3Rα、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子受体α（GM－CSFRα）及共同β链受体（βcR)mRNA表达及雷公藤甲素（TP）对它们的影响，探讨TP促进哮喘Eos凋亡的机制。方法 健康豚鼠18只随机分为正常组、哮喘组、TP组。以卵蛋白致敏激发制作豚鼠哮喘模型，分离BALF中的低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos)，TUNEL法检测细胞凋亡，原位杂交检测各受体mRNA表达，RT－PCR法检测Eos IL-5Rα、IL－3Rα相对含量。结果 哮喘豚鼠Eos凋亡明显减少，而细胞数明显高于正常组。用TP 24h后不同密度Eos数量明显低于哮喘组（P＜0．01），以HEos下降为明显（P＜0．05）；TP组Eos凋亡明显高于哮喘组（P＜0．01）。哮喘豚鼠Eos表达α受体mRNA明显低于正常组，而βcR表达明显增高；TP处理组Eos各α受体mRNA表达均明显增加，βcR表达明显下降。RT－PCR检测显示，TP组IL－5Rα、IL－3RαmRNA显著增加。结论 哮喘Eos存在凋亡抑制；TP可通过促进IL－5、IL－3、GMPCSF受体各自α链表达，抑制这3种受体的共同β链表达，减少其生物学功能，促进Eos凋亡。     

NF-kB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拈抗肿瘤坏步E因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL）-β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用不同浓度的LXA4预刺激，再加入TNF-α共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β,IL-6蛋白表达量；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA)测定核因子-kB(NF-KB)的DNA结合活性。结果发现，LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达，抑制NF-kB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-kB的DNA结合活性，拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

炎症因子对原代培养海马神经元CLC-3表达的影响

目的:研究不同浓度TNF-α、IL-1β、TGF-β刺激对原代培养海马神经元CLC-3(voltage-gated chloride channel 3)mRNA及蛋白质水平的影响。方法:取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为对照组、TNF-α组、IL-1β组和TGF-β组。TNF-α、IL-1和TGF-β组分别加入加入含有浓度为10 ng/ml的相应炎症因子培养液,每组分别在孵育6、12、24 h后分别收集细胞提取总RNA和蛋白采用实时定量PCR、Western Blot技术检测CLC-3 mRNA及蛋白水平的表达。结果:TNF-α、IL-1β处理12 h后培养海马神经元CLC-3在mRNA及蛋白水平开始上调,高峰持续从12 h至24 h(P0.05)。TNF-α刺激作用强于IL-1β。TGF-β处理海马神经元CLC-3 mRNA在6 h后即开始升高(P0.05),但在孵育6 h到24 h时下降至正常对平(P0.05)。结论:TNF-α、IL-1β、TGF-β可能通过刺激海马神经元CLC-3表达增加增强神经元存活能力。     

Bcl—2家族是人参皂甙Rg1抗黑质神经元凋亡的重要调控蛋白

目的：探讨Bcl-2，Bcl-x1和Bax蛋白在人参皂甙Rgl抗帕金森病（PD）小鼠模型黑质神经元凋亡过程中的可能作用。方法：PD模型组单纯以1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氢吡啶（MPTP）腹腔注射C57BL小鼠；预防组预先3d腹腔注射Rg1(2.5,5.0,10.0mg/kg)，再注射MPTP，以Nissl染色，TH组织化学染色，TUNEL染色观察黑质神经元的变化，免疫组织化学染色检测Bcl-2，Bcl-xl和Bax蛋白表达，结果：5．0和10．0mg/kg Rg1预处理PD模型鼠能使黑质致密带（SNc)部位的Nissl和TH染色阳性神经元增多，TUNEL染色阳性率降低，以及Bcl-2和Bcl0xl表达增加，Bax表达减少结论：Rgl预处理对PD模型鼠黑质神经元凋元有明显的保护作用。Bcl-2和Bcl-xl表达水平升高和Bax表达水平降低可能是Rg1抗凋亡的重要机制。     

IL-6表达增高及TNFα下调参与bcl-2反义寡脱氧核苷酸诱导的细胞凋亡的调控

目的 探讨bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODN)诱导细胞凋亡的调控机理。方法 合成bcl-2 AS－PS－ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI－H446，流式细胞仪DNA倍体分析和脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡；多重半定量逆转录－聚合酶链反应检测bcl-2 AS－PS－ODN处理前后bcl-2，c-myc,survivin,bax,s100A2,TNFα，TGFβ1及IL－6等基因mRNA表达的变化。结果 bcl-2 AS－PS－ODN能够诱导NCI－H446细胞凋亡，随着bcl-2 mRNA水平的下降，IL－6表达增高72．71％（P＜0．05），TNFα表达下调65．90％（P＜0．05），而c-myc,survivin,bax,s100A2,TGFβ1等基因的表达无明显变化。结论 IL－6表达增高及TNFα下调参与bcl-2反义寡脱氧核苷酸所诱导的细胞凋亡的调控。     

体外CIK细胞的细胞因子表达谱研究的初步探讨

目的：探讨CIK细胞的细胞因子表达谱。方法：Ficoll分层液分离人外周血得到非粘附性淋巴细胞，体外经IFN-γ、IL-1β、IL-2及抗CD3单抗诱导分化成CIK细胞。流式细胞术鉴定细胞表型，RT-PCR定性和半定量检测细胞因子的表达。结果：CD3^＋CD56^＋细胞百分率均可达50％以上，增殖活性随培养时间的延长而上升，最高集中在14-21天。该诱导条件下获得的CIK细胞不表达IFN-ω、IFN-κ和IFN-λ，其他IFN成员多集中在10-20天高表达，初期和末期都较低；IL家族多数成员在6—10（或20）天时稳定表达，后略有下调；TNT-β和TRAIL各时期组成性表达，表达水平变化很小或几乎不变。TNF-α第20天时高表达。TGF-β1。则集中在后期表达，个体差异小。结论：在体外CIK细胞能广泛表达多种类型的细胞因子。     

外源性黄体酮对Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞活化及其对海马神经元存活的影响

目的研究黄体酮对Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞激活和炎症因子的释放及其所致的海马神经元损伤的影响。方法通过Aβ_(1-42)诱导体外培养的小胶质细胞(BV2细胞)活化,并予以外源性黄体酮处理。应用Aβ_(1-42)诱导的BV2细胞的上清液处理海马神经元(HT22细胞)。应用ELISA法检测各组BV2细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β的含量;CCK8法检测Aβ_(1-42)-BV2小胶质细胞条件培养基对HT22海马神经元细胞的存活率。结果与对照组相比,Aβ_(1-42)组的TNF-α、IL-1β的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性。外源性黄体酮能降低Aβ_(1-42)诱导的BV2细胞IL-1β、TNF-α的释放;Aβ_(1-42)诱导BV2细胞炎症因子的释放,可导致HT22细胞死亡,而外源性黄体酮可通过抑制活化的胶质细胞炎性因子的释放而减轻神经元的死亡。结论黄体酮能够抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞的激活并减轻其导致的神经死亡。     

神经钙调蛋白介导IL-1β诱导的NF-κB p65的表达及神经毒性

目的：探讨神经钙调蛋白在白细胞介素-1β(IL-1β)和兴奋性氨基酸（NMDA）诱导皮层神经元NF-κΒ表达及神经损伤机制的作用。 方法： 应用IL-1β或NMDA诱导原代培养的胎鼠皮层神经元损伤；通过MTT法、LDH释放率测定观察细胞生存力和损伤程度；通过Western blotting分析NF-κB p65的表达；通过膜联蛋白（Annexin V）和碘化丙啶（PI）免疫荧光法观察细胞凋亡或坏死程度。 结果： MTT和LDH释放率测定结果表明， IL-1β和NMDA都可分别引起神经细胞的生存力明显下降，并呈量效依赖关系。IL-1β和NMDA在引起细胞损伤的同时都可促进NF-κΒ p65的表达。应用神经钙调蛋白抑制剂CsA明显抑制IL-1β引起的细胞损伤，也明显抑制IL-1β诱导的NF-κB p65表达增加。但是，环孢菌素A(CsA)不能明显抑制NMDA诱导的细胞损伤（P>0.05），对NMDA诱导的NF-κΒ p65的表达的抑制作用也不明显。Annexin V 和 PI免疫荧光检测表明，IL-1β诱导的神经损伤以神经元凋亡为主，而NMDA则主要引起坏死。 结论： 神经钙调蛋白参与介导IL-1β诱导的NF-κΒ p65的表达及神经细胞凋亡，但对NMDA诱导的神经元坏死则不起主要作用。说明神经钙调蛋白是细胞凋亡信号通路中重要分子。     

NF-κB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拮抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL)-1β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用不同浓度的LXA4预刺激,再加入TNF-α共同孵育;或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β、IL-6蛋白表达量;用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)测定核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性。结果发现,LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达,抑制NF-κB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-κB的DNA结合活性,拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

Soman诱发惊厥后脑内信号物质及细胞程序死亡相关基因表达变化的定位研究

1．用Beckman－6300型高效氨基酸分析仪分析显示，谷氨酸和天门冬氨酸的水平在惊厥相关的大脑皮质、海马、嗅球、小脑等明显下降。2用ABC免疫组化法对Soman惊厥大鼠脑内Fos的表达变化显示：Soman诱发惊厥可引起大鼠脑内c－fos的广泛表达。惊厥和c－fos表达相伴出现。C-fos。S表达具有时相持异性和恒定的解剖学图布。3．研究了Soman惊厥后c－fos表达与NOS神经元在单个神经元的关系。结果：杏仁核片几乎所有的NOS神经元均表达。－fos双标记神经元约是C—fos表达神经元的1／10。在下丘脑视上核和室分核内短时表达c-fos，介几乎所有的NOS神经元也呈现FOS阳性。4．用ABC免疫络化法研究，Bcl－2、Bax、P53三个与细胞程序死亡密切相关的基因。结果在短时C-fos表达的脑区，惊厥2天后Bcl－2、Bax、P的表达增加；发生c－fos延时延迟表达的脑区，Bax的表达明显强于Bcl－2。Bax与Bcl—2的相互作用和比例决定细胞的生存。Bax－Bax同源二聚体占优势时，细胞发生程序死亡。因此，本文结果强烈支持：由Soman惊厥诱发的脑损伤是一种程序性细胞死亡，c－fos，P53，bcl－2、bax可能涉入其基因路径。详细的分子机制尚待进一步研究。     

IL-18对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的：研究IL-18对体外培养肾小管上皮细胞表型转化的影响，以明确IL-18在慢性肾脏疾病中的可能作用机制。方法：应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞侏（HK-2）。应用RT-PCR技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA水平，用免疫细胞化学方法（ICC）及Western blot技术分别检测IL-18对HK-2细胞表达仪-SMA蛋白的影响。结果：（1）IL-18可促进HK-2细胞表达α-SMA、TGF-β1 mRNA，且两者之间呈正相关（P〈0．05）。（2）IL-18增加α-SMA阳性HK-2细胞百分数（P〈0．05）。（3）IL-18使HK-2细胞α-SMA蛋白表达水平增加。结论：IL-18可剂量和时间依赖性地促进肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞，促进肾间质纤维化。     

rhIL-1β、rhIL-2和rhIL-6对体外培养海马神经胶质细胞c-fos表达的影响

采用免疫组织化学方法观察了重组人白细胞介素-1β、重组人白细胞介素-2和重组人白细胞介素-6对体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos表达的影响。结果证明，培养12d的海马神经胶质细胞与重组人白细胞介素-1β（100U／ml）、重组人白细胞介素-2（200U／ml）和重组人白细胞介素-（200U／ml）一起孵育2h后出现FOS-免疫反应阳性的细胞核，随着所给剂量的逐渐加大，FOS反应阳性胞核数量也逐渐增多．图象分析的结果显示，FOS反应阳性胞核的平均光密度亦随剂量的逐渐加大而逐渐增加．本研究的结果提示：重组人白细胞介素-1β、-2及-6均能诱导体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos的表达。说明三者对体外培养的海马神经胶质细胞具有生物学作用。推测c－fos表达可能是这些细胞因子发挥生物效应的重要中间途径。     

KLF5沉默通过抑制NF-κB信号通路减少氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌

目的研究沉默Krüpple样因子5(KLF5)对氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌的影响及机制。方法心肌H9c2细胞用过氧化氢处理,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达水平。用KLF5 shRNA慢病毒感染H9c2细胞,给予过氧化氢处理后,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5表达水平。MTT检测沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞活性的影响,同时用qRT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA水平,Western blot检测细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白水平。用NF-κB激活剂处理沉默KLF5的心肌细胞,MTT检测其在过氧化氢处理后细胞活性,qRT-PCR法检测过氧化氢处理后细胞中TNF-α、IL-1β水平。结果过氧化氢诱导H9c2细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达。KLF5 shRNA慢病毒感染可下调氧化应激条件下H9c2细胞中KLF5的表达。过氧化氢能够下调H9c2细胞活性,提高细胞分泌的TNF-α、IL-1β水平,促进细胞中NF-κBp65蛋白表达。沉默KLF5能够提高过氧化氢条件下H9c2细胞经活性,减少细胞分泌TNF-α、IL-1β,抑制细胞中NF-κBp65蛋白表达。NF-κB激活剂可以逆转沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞增殖活性、炎症因子分泌的影响。结论氧化应激诱导心肌细胞表达KLF5,沉默其表达可以通过抑制NF-κB通路减少心肌细胞中炎症因子表达。     

IL-1 β或IL-6对大脑皮质星形胶质细胞细胞周期的影响

为研究白细胞介素1β(Interleukin1β,IL1β)和白细胞介素6(Interleukin6,IL6)对培养新生大鼠的大脑皮质星形胶质细胞增殖的影响,本研究采用体外细胞培养方法获得新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞,然后在培养液中分别加入IL1β和IL6,在作用6、12及24h后,通过流式细胞仪检测IL1β、IL6对星形胶质细胞细胞周期的影响。结果显示IL1β、IL6作用于星形胶质细胞后,可引起细胞周期的显著变化,表现为G1期细胞数减少,S期、G2/M期细胞数增多,以作用12h时变化最明显。提示IL1β、IL6可促进体外培养的星形胶质细胞增殖。