Research of the relationship between liver cancer stem cells and vasculogenic mimicry

目的 研究肝癌血管生成拟态(VM)形成与肝癌干细胞的关系.方法 在体外分别建立肝癌细胞株HCC97H、SMMC7721以及正常肝细胞L02三维培养,观察它们各自形成VM的能力.利用激光捕获显微切割技术分离出形成VM的肝癌细胞,RT-PCR和Western blot分别检测内皮相关分子VE-cadherin、CD31及肝癌干细胞标志物CD133和CD34表达水平.结果 ① HCC97H细胞在三维培养下形成VM; SMMC7721和正常肝细胞L02不形成VM;②激光捕获显微切割成功捕获目的 细胞;③各组中VE-cadherin mRNA和蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.05).CD31在肝癌细胞中不表达.CD133 mRNA和CD34 mRNA在各组中表达差异有统计学意义(P＜0.05);CD133和CD34蛋白在各组间表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝癌干细胞表达与肝癌细胞VM的形成有关.     

MicroRNA-340在肝细胞肝癌中抑制细胞增殖并促进凋亡

目的 探讨微RNA-340(miR-340)在肝细胞肝癌中的表达特点及其对细胞生物学行为的影响.方法 收集重庆医科大学附属第一医院肝胆外科2015年3月至2016年9月收治的40例肝细胞肝癌患者手术后切除的癌组织和癌旁组织标本.通过qPCR检测组织标本中miR-340的表达,并分析miR-340表达与临床病理学指标的关系.分别培养肝癌细胞株Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721以及正常肝细胞株HL-7702,48 h后使用qPCR检测5种细胞中miR-340的表达水平.通过转染增加或抑制SMMC-7721细胞中miR-340的表达,然后分别于细胞培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.通过生物信息学软件预测miR-340的靶基因,并使用qPCR和蛋白质印迹法进一步验证miR-340对靶基因的作用.结果 癌组织中miR-340的表达低于癌旁组织(P＜0.01),并且miR-340的表达与乙肝表面抗原、HBV DNA载量、肿瘤大小以及临床TNM分期有关(P＜0.01).正常肝细胞HL-7702内miR-340的表达高于4种肝癌细胞Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721(P＜0.05,P＜0.01).增加miR-340表达可抑制SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01),而抑制miR-340的表达则促进SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01);增加miR-340的表达可促进SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01),而抑制miR-340则减少凋亡(P＜0.01).生物信息学分析显示S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因是miR-340下游的一个靶基因.qPCR和蛋白质印迹分析结果显示增加SMMC-7721细胞中miR-340的表达可抑制SKP2的mRNA和蛋白表达,抑制miR-340表达则增加SKP2的mRNA和蛋白表达.结论 miR-340的异常表达可能与乙肝病毒的感染有关,其异常表达有助于评价病情以及预后.在肝癌细胞系SMMC-7721细胞中,miR-340能够抑制细胞增殖并促进凋亡,这一作用结果可能是通过miR-340对SKP2的抑制而实现的.     

Expression of aquaglyceroporins in nonalcoholic hepatocyte steatosis and its significance

目的 研究水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins)AQP3、AQP7、AQP9基因在油酸钠诱导的脂肪变性肝细胞模型中的表达变化及其意义.方法 以常规培养的人肝癌HepG2细胞为对照,采用油酸钠诱导HepG2细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪变性肝细胞模型,利用油红O染色及细胞内甘油三酯含量测定检测肝细胞脂肪变性程度,并分别于0、12、24、48 h采用实时荧光定量PCR与Western blot方法检测水甘油通道蛋白AQP3、AQP7、AQP9基因的表达.结果 油红O染色观察及肝细胞内甘油三酯含量测定显示HepG2细胞在油酸钠处理12 h后即开始出现脂肪变性,随着刺激时间延长,脂肪变性程度逐渐加重,肝细胞内甘油三酯含量在48 h组(79.76±0.75)较0h组明显升高(P＜0.05).模型组中,AQP3mRNA水平12h时表达开始减低,48 h时(0.39±0.08)表达最低,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);AQP7mRNA表达与对照组相比略有升高,差异无统计学意义(P＞0.05);而AQP9 mRNA表达水平自12 h(1.59±0.11)即开始增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).模型组中,AQP3蛋白水平12 h时表达开始减低,24、48 h组[ (0.016±0.002),(0.012±0.001)]与对照组相比差异具有统计学意义(P ＜0.05);AQP7蛋白表达与对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05);AQP9蛋白水平12 h表达开始增高,24、48 h[(0.050 ±0.002)、(0.079 ±0.002)]组与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 肝细胞脂肪变性模型中水甘油通道蛋白AQP3表达下调、AQP9表达上调、AQP7表达无明显差异,提示不同亚型的水甘油通道蛋白可能通过不同的机制参与了肝细胞非酒精性脂肪变性.     

Mel-18在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨多梳基因Mel-18在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测原发性肝细胞癌及其癌旁组织192例中Mel-18的表达.结果 原发性肝细胞癌和癌旁正常肝组织的Mel-18蛋白阳性表达率分别是11.9％(23/192)和59.8％(115/192),两者差异有统计学意义(P＜0.05).Mel-18基因在不同年龄、性别、肿瘤大小和肿瘤分化程度间的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).Mel-18蛋白的表达与患者的淋巴结转移和临床分期呈负相关(P＜0.05).临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者的Mel-18蛋白的表达率分别为23.8％、17.6％、6.7％和2.2％,无淋巴结转移患者和有淋巴结转移患者分别为17.8％和4.7％,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Mel-18基因在肝癌的发生、发展中可能起重要作用,有可能成为预测肝癌预后的指标之一.     

凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响

目的 探讨凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响.方法 取对数生长期大肠癌CT26细胞制备凋亡、坏死肿瘤细胞.取Balb/c小鼠20只,分离T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞、获取巨噬细胞,并制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL).将小鼠CTL、NK细胞、巨噬细胞分别经相应肿瘤细胞处理后,均分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组,应用51 Cr释放实验测定各组CTL、NK细胞、巨噬细胞的活性,细胞计数(CCK-8)法检测各组CTL、NK细胞和巨噬细胞的增殖情况.另选取Balb/c小鼠分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组各10只,分别将凋亡、坏死、对数生长期CT26细胞按通过皮下及静脉输注小鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清可溶性Fas(sFas)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)4、IL-10、IL-12、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平.结果 与坏死肿瘤细胞组及肿瘤细胞对照组比较,凋亡肿瘤细胞组中不同效靶比的CTL、NK细胞及巨噬细胞活性均降低(P＜0.05).CCK-8法检测结果显示,凋亡肿瘤细胞组的CTL、NK细胞及巨噬细胞的A450值均低于坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组(P＜0.05).ELISA检测显示凋亡肿瘤细胞组sFas相对表达量低于坏死肿瘤细胞组和肿瘤细胞对照组(P＜0.05).凋亡肿瘤细胞组IL-4表达水平高于肿瘤细胞对照组(P＜0.05),IL-10、TGF-β表达水平则高于其他两组(P＜0.05),IL-12表达水平低于其他两组(P＜0.05).结论 凋亡大肠癌CT26细胞能够抑制小鼠特异性CTL、NK细胞、巨噬细胞增殖及其活性,影响大肠癌小鼠正常免疫功能.     

肝细胞肝癌组织中ET-1、MMP-2、CD31蛋白的表达及意义

目的:探讨内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、CD31在肝细胞肝癌组织中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法分别检测30例肝细胞肝癌组织及相应癌旁正常肝组织中ET-1、MMP-2、CD31的表达.结果:ET-1蛋白、MMP-2蛋白、微血管密度(MVD)在正常肝组织及肝细胞肝癌组织中的表达差异有统计学意义(P均＜0.01).肝细胞肝癌组织中ET-1、MMP-2、MVD的表达差异与肿瘤的临床分期、分化程度有关(P均＜0.05);但与患者的年龄及性别无关(P＞0.05).肝细胞肝癌组织ET-1、MMP-2阴性组的MVD值较阳性组明显降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论:ET-1、MMP-2的高表达及MVD的增加与肝细胞肝癌的发生和恶性发展有关,与肿瘤的临床分期、分化程度有关.     

NF-κB沉默联合苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡和相关分子的表达

目的 探讨NF-kB沉默联合苦参碱(matrine,MT)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及相关分子的表达.方法 构建NF-kB/P65 siRNA真核表达载体转染人肝癌细胞HepG2,RT-PCR检测NF-kB/P65基因沉默效果,并筛选出NF-kB/P65基因沉默稳定转染细胞株.将实验分为对照组、苦参碱组(1.5 g/L)、稳转细胞组和联合组(稳转细胞十苦参碱),流式细胞仪检测细胞凋亡率;分别用RT-PCR法和蛋白质印迹法检测细胞NF-kB/P65、CD95(Fas)、Smac、Survivin的mRNA和蛋白水平表达.结果 苦参碱组NF-kB/P65、CD95、Smac和Survivin的表达上调,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);稳转细胞组CD95和Smac的表达上调,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),NF-kB/P65和Survivin的表达下调,与对照组、苦参碱组比较差异有统计学意义(P＜0.05);联合组CD95和Smac的表达上调,与对照组、苦参碱组、稳转细胞组比较差异有统计学意义(P＜0.05),NF-kB/P65和Survivin的表达下调,与苦参碱组比较差异有统计学意义(P＜0.05).各组细胞凋亡率分别为3.21％、6.25％、11.82％、21.06％,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 NF-kB沉默联合苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡可能与CD95和Smac的表达上调及NF-kB/P65和Survivin的表达下调有关.     

A CASE-CONTROL STUDY ON THE EXPRESSION OF P21 GENE OF HEPATOCELLULAR CARCINOMA

目的:探讨抑癌基因P21表达与肝细胞肝癌的关系.方法:采用以医院为基础的病例对照研究方法,通过RT-PCR方法检测100例肝细胞肝癌病人和100例非肿瘤病人外周血白细胞中P21基因mRNA的表达.结果:P21 mRNA在肝细胞肝癌病人外周血白细胞中相对表达量为0.256 1±0.144 3,在非肿瘤病人的外周血白细胞中相对表达量为0.043 2±0.032 2,肿瘤病人P21 mRNA表达水平高于非肿瘤病人,差异有统计学意义(P＜0.05),P21 mRNA的表达水平与年龄、性别、HBV感染、肝癌家族史、吸烟、饮酒、AFP含量无关(P＞0.05).结论:P21基因的表达可能与肝细胞肝癌有一定关系,可为筛检肝细胞肝癌高危人群提供参考依据.     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

miR⁃1301对肝细胞肝癌增殖的影响及机制研究

目的：明确miR?1301在肝细胞肝癌组织以及细胞系中的表达情况,并探讨miR?1301对肝癌细胞增殖的影响及可能机制。方法：实时定量PCR检测肝癌、癌旁组织及肝癌细胞系中miR?1301的表达水平,并在肝癌细胞中转染miR?1301模拟物或抑制物,用CCK?8法和平板克隆法检测其对肝癌细胞增殖活性的影响;通过蛋白质印迹（Western blot）检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（p?AKT、AKT）蛋白的表达情况。结果：miR?1301在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平明显低于对应的癌旁组织和正常肝细胞。实时定量PCR证实转染了miR?1301模拟物或抑制物后,miR?1301的表达量明显升高或降低（P＜0.01）。 与对照组相比,降低miR?1301的表达能明显促进肝癌细胞Hep3B的增殖活性,差异有统计学意义（P＜0.05）;而过表达miR?1301则显著抑制Huh7细胞的生长,差异有统计学意义（P＜0.05）。 此外,miR?1301可显著抑制PI3K/AKT信号通路的活性。结论：miR?1301在肝细胞肝癌中低表达,并抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与miR?1301抑制PI3K/AKT通路的活性有关。     

自杀基因修饰内皮祖细胞对肝细胞癌体外作用的效应

目的：研究自杀基因胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转染的小鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）联合酶前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）对小鼠肝癌细胞株H22的体外抗增殖作用。方法：分离普通小鼠骨髓源性EPCs,培养鉴定,Polybrene技术转染含CD基因的慢病毒载体重组体plenti6．3-EGFP-CD至EPCs,Western blotting检测目的蛋白的表达。利用Transwell小室共培养体系,用转染CD基因的EPCs处理H22细胞。 CCK-8法检测H22细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果：成功转染CD基因至EPCs;CCK-8法检测显示随着5-FC浓度增加,细胞增殖逐渐下降,5-FC浓度达100 mg· L-1时,肿瘤细胞增殖抑制率达到（54．74±5．38）％（P＜0．05）,细胞平均凋亡率为（48．71±4．62）％（P＜0．05）。结论：CD基因修饰的EPCs 联合5-FC体外可明显抑制肝癌H22细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

极低频率电磁场对肝癌细胞SODD和Survivin基因表达的影响

目的研究极低频率电磁场（ELF）对肝癌细胞死亡结构域沉默子（SODD）和凋亡抑制基因Survivin基因表达的影响,探索ELF在肝癌治疗中的作用。方法应用RT-PCR和流式细胞仪（FCM）检测经ELF处理的肝癌细胞系BEL-7402的SODD和Survivin基因表达情况,并以L-02肝细胞为正常对照,分析ELF对肝癌细胞SODD和Sur-vivin基因表达的影响。结果经ELF处理后,BEL-7402细胞SODD和Survivin基因表达均明显下降（P〈0.05）,而对L-02细胞无影响（均P〉0.05）。结论 ELF能促进肝癌细胞凋亡,为临床应用ELF治疗肝癌提供了线索。     

慢病毒介导的FHIT基因过表达调控人肝癌细胞株生长实验研究

［摘要］目的　探讨过表达FHIT基因对FHIT基因含量不一致的人肝癌细胞株HepG2、Hep3B 和 Huh7的增殖、凋亡和细胞侵袭以及细胞周期的影响,以期证实FHIT基因在肝癌细胞株的表达差异与肝癌细胞的分化有密切相关性．方法　体外成功构建pLVX-IRES-FHIT慢病毒重组载体转染FHIT基因含量不一致的肝癌细胞株HepG2、Hep3B 和 Huh7,以MTT法、FCM法、Annexin V/PI双染色法、细胞周期检测技术和Transwell侵袭实验分析过表达的FHIT基因对三系肝癌细胞的增殖活性、凋亡、细胞侵袭性和细胞周期的影响机制及其生物学效应与时间梯度的关系．结果　体外成功构建重组慢病毒载体pLVX-IRES-FHIT转染FHIT含量不一致的肝癌细胞株HepG2、Hep3B 和 Huh7．（1）MTT法检测显示三系肝癌细胞株的pLVX-IRES-FHIT组细胞增殖活性明显降低,且随时间推移细胞增殖抑制效果更为显著,在48 h达到高峰,此后到72 h进入平台期,对照组细胞增殖抑制不明显（P＜0.05）．AnnexinV/PI双染色法检测发现pLVX-IRES-FHIT组三系肝癌细胞48 h凋亡率较对照组差异无统计学意义（P＞0.05）．三系肝癌细胞中对pLVX-IRES-FHIT组转染致FHIT基因过表达抑制增殖活性大小的顺序依次是HepG2＞Hep3B＞Huh7;（2）经过Transwell侵袭实验表明对FHIT基因过表达对三系肝癌细胞的pLVX-IRES-FHIT组侵袭性均有明显的抑制作用（P＜0.05）,而对照组未见明显差异（P＞0.05）．三系肝癌细胞的侵袭性顺序依次为HepG2＞Hep3B＞Huh7;（3）细胞周期检测发现pLVX-IRES-FHIT组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,增殖指数减低,在HepG2细胞中与对照组间有统计学意义（P＜0.05）,在HepB和Huh7细胞中与对照组间无统计学意义（P＞0.05）．FHIT基因的过表达对三系肝癌细胞的细胞周期影响为细胞周期停滞于S期,且G0/G1期细胞增多的顺序依次是HepG2＜Hep3B＜Huh7．结论　FHIT基因在肝癌细胞株中的表达差异可能与肝癌细胞的恶性分化有密切正相关性,FHIT基因有可能成为原发性肝癌的基因治疗的基因靶标之一．     

RMP在γ射线诱导的肝癌细胞凋亡中的表达

目的研究RPB5调节蛋白RMP在γ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达,探讨RMP在细胞凋亡及维系细胞DNA稳定性中的作用。方法不同剂量60Coγ射线照射SMMC-7721肝癌细胞和HL-7702正常肝细胞,观察细胞形态变化;PI染色观察细胞凋亡;流式细胞技术检测肝癌细胞周期变化及细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测RMP基因在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达以及凋亡相关基因bax、bcl-2在肝癌细胞中的表达。结果随着照射剂量增加,肝癌细胞形态发生明显改变;PI染色观察细胞凋亡增多;流式细胞仪检测结果显示随着照射剂量增加,细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞周期G1期增高,而S期降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;RMP基因相对表达量增加,bax/bcl-2增加,与未照射组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论γ射线照射可诱导人肝癌细胞凋亡,RMP基因可能在提高细胞DNA稳定性中起重要作用。     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞,同时设无义对照组(转染无义siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用MTT法检测...     

过表达Plk-1对gemcitabine诱导的胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的观察Plk-1基因过表达对gemcitabine诱导胰腺癌细胞AsPC-1化疗敏感性的影响。方法①将携带有人外源性Plk-1基因的真核表达质粒转染AsPC-1细胞系设为处理组,转染空载体设为对照组,无处理组设为空白组,转染24 h后,提取细胞总RNA和总蛋白,利用RT-PCR法及Western blot鉴定AsPC-1细胞内Plk-1基因和蛋白表达水平。②采用流式细胞术检测转染组细胞凋亡的改变。③不同浓度gemcitabine作用于转染细胞,MTT法测定转染48 h后细胞增殖能力。结果①测序结果表明成功的从AsPC-1细胞总RNA中扩增Plk-1基因。RT-PCR结果表明：未转染组AsPC-1细胞组、转染空载体pcDNA3.1组及pcDNA3.1/Plk-1组24 h各组细胞内Plk-1 mRNA相对量分别为（2.14±0.16）、（2.18±0.15）、（2.58±0.18）,转染pcDNA3.1/Plk-1组与其他各组相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。Western blot结果显示：未转染组AsPC-1细胞组、转染空载体pcDNA3.1及pcDNA3.1/Plk-1组24 h各组细胞内Plk-1基因的蛋白表达水平为（0.989±0.018）、（1.022±0.021）、（1.243±0.143）,转染pcDNA3.1/Plk-1组与其他各组相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。②在gemcitabine作用下,pcDNA3.1/Plk-1转染组细胞凋亡率明显低于未转染组及空载体转染组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。③AsPC-1/Plk-1转染组细胞的生长抑制率亦明显高于未转染组及空载体转染组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论胞浆过表达Plk-1活性分子可明显降低gemcitabine诱导的AsPC-1细胞凋亡,增强其对化疗药物的耐受性。     

核干细胞因子在肿瘤细胞中的差异表达及意义

目的: 通过检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)基因在多种肿瘤细胞中的差异表达情况,探讨NS基因与肿瘤细胞增殖调控的相关性。方法: 体外培养子宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)、肝癌细胞(HpeG2)与正常肝细胞,提取对数生长期肿瘤细胞总RNA,以RT-PCR方法检测NS在mRNA水平的差异表达;提取肿瘤细胞的总蛋白,以Western blot方法检测NS在翻译水平的差异表达。结果: 肿瘤细胞中NS基因均有较高水平的表达,尤其以乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)与肝癌细胞(HepG2)中NS基因表达量为最高,而正常肝细胞未检测到NS的表达。结论: NS在肿瘤细胞中的高表达具有普遍性,而在终末分化的细胞中不表达,判断NS基因参与了肿瘤细胞的增殖调控,其为肿瘤的基因治疗和基因诊断提供了一个新的途径和指标。     

酒精性肝纤维化及肝癌大鼠P53基因及ASPP蛋白的表达

目的：研究不同白酒引起的酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠肝组织中P53基因突变及其相关ASPP蛋白家族的表达。方法：运用A、B（分为低剂量D和高剂量G）2种白酒和黄曲霉素B,（AFB,）对大鼠进行处理,制备酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠模型,用PCR及DNA测序技术检测大鼠肝脏组织中P53基因第5、6、7、8外显子的突变情况;用免疫组织化学Envision法检测大鼠肝脏组织中P53、P53凋亡刺激蛋白1（ASPPl）、ASPP2、ASPP家族抑制因子（iASPP）的表达。结果：成功制备了酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠模型,不同白酒诱导大鼠肝纤维化、肝硬化合并肝癌的程度不同。免疫组化检测结果发现,P53及iASPP表达的阳性率在白酒B组（BD组和BG组）明显高于白酒A组（AD组和AG组）,差异有统计学意义（P〈0．05）;AS—PPl、ASPP2的阳性率在白酒B组（BD组和BG组）明显低于白酒A组（AD组和AG组）,差异有统计学意义（P〈0．05）;iASPP表达量高的酒精性肝病和肝癌中,ASPPl、ASPP2表达量降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;P53基因的突变检测显示P53的突变方式以碱基插入为主,其次为碱基突变及缺失;AD组和AG组突变率为42．3％,BD组和BG组突变率为78．3％,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：不同白酒对大鼠肝脏肝纤维化、肝硬化和肝硬化并肝癌的诱发程度不一样,可能与其对P53基因突变及P53相关蛋白（ASPPl、ASPP2、iASPP）表达影响不同有关。     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

RNAi干扰HMGB1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白1 (high mobility group box 1,HMGB1 )siRNA干扰后对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响.方法 构建靶向HMGB1 mRNA的质粒载体pRI-GFP-1、pRI-GFP-2以及阴性对照载体pRI-GFP-Neg,分别转染乳腺癌细胞MCF-7,48 h、72 h后免疫印迹法(Western blot)检测HMGB1基因蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测体外增殖活性.结果 转染后,与空质粒组pRI-GFP-Neg相比,pRI-GFP-1组、pRI-GFP-2组MCF-7细胞HMGB1蛋白表达下降,MTT显示干扰组细胞增殖速率与质粒对照及空白对照组相比显著降低.结论 应用RNAi技术可以显著干扰HMGB1蛋白的表达,进而有效抑制MCF-7细胞的增殖活性.