粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的 观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS（1 μg/mL）刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB（NF-κB）核转运的作用,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）的变化。结果 当Tet浓度＜1 μmol/L时,单独或与1 μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度＞10 μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞（红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状）为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响

目的观察脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响。方法体外培养单核巨噬细胞RAW264.7细胞株,分别用0.5、1.0、2.0、5.0、10g/mL脂多糖刺激RAW264.7细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞活力。结果脂多糖刺激RAW264.7细胞24、48h后,细胞生长均受到抑制,并且与浓度和时间呈正相关。结论 LPS在0.5、1、2、5、10μg/mL时,浓度依赖性地抑制RAW264.7细胞的生长。     

防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用研究

目的 研究中药防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用及其作用机制。方法 建立LPS诱导小鼠RAW264.7细胞体外炎症模型,采用MTT比色法测定不同浓度(160、80、40、20、10μmol/L)5-O-甲基维斯阿米醇苷对小鼠RAW264.7细胞活性的影响;实验分空白组,LPS组,阳性对照组(吲哚美辛,10μmol/L),5-O-甲基维斯阿米醇苷低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量组,空白组、LPS组加入空白培养基,其余给药组加入相应药物,2h后加入LPS(10μg/mL),采用格里斯试剂法检测小鼠RAW264.7细胞上清液的一氧化氮(NO)的分泌,酶联免疫吸附试验法检测小鼠RAW264.7细胞中的前列腺素E₂(PGE₂)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,RT-qPCR检测小鼠RAW264.7细胞核因子-κB(NF-κB)p65、白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)的mRNA表达,Western b...     

臭苜蓿根提取物对脂多糖诱导急性炎症中核因子-κB表达的影响

目的探讨核因子-κB（NF-κB）在LPS诱导急性炎症中的表达及臭苜蓿根提取物的干预作用。方法通过脂多糖干预RAW264．7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化。结果免疫细胞化学法结果显示干预时,巨噬细胞胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核且表达增强。臭苜蓿根提取物干预时NF—κB多分布在胞质未被激活。结论臭苜蓿根提取物通过抑制NF-κB的激活发挥抗炎作用。     

胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制.方法 RAW264.7细胞经LPS(10 μg/mL)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预.分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组.药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2 ',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P＜0.05).AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化.结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤.     

不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：观察不同相对分子质量的一年生膜荚黄芪多糖（APSⅠ）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型分泌促炎因子和抗炎因子的影响,探讨APSⅠ的抗炎作用。方法：体外培养RAW264.7细胞,APSⅠ作用于未经刺激的RAW264.7细胞及LPS（1 mg/L）刺激后RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、APSⅠ组及LPS+ APSⅠ不同相对分子质量组(APSⅠ-A,APSⅠ-B,APSⅠ-C),采用CCK-8法检测不同相对分子质量、不同浓度的APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）的分泌量。结果：与空白对照组比较,APSⅠ单独处理组RAW264.7细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）,NO及IL-10表达水平明显增加（P<0.05）,TNF-α的分泌量降低（P<0.05）;与LPS模型组比较, LPS+APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,NO、TNF-α的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10的分泌增加（P<0.05或P<0.01）;3种不同相对分子质量APSⅠ之间比较,APSⅠ-C对NO、TNF-α的抑制更为明显,且APSⅠ-C促进IL-10分泌的作用强于APSⅠ-A及APSⅠ-B。结论：APSⅠ　可以拮抗LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应;不同相对分子质量APSⅠ的抗炎作用有差异,APSⅠ的生物活性与其相对分子质量存在一定的关联性。     

原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制

目的：观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法：放射免疫法（RIA）检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫（RIA）法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应（RT-PCR）法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹（western blot）法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析（EMSA）法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果：0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF—κB活化。结论：原花青素显著抑制LPS诱导RAW264．7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF—κB／p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。     

葛根素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨葛根素（puerarin, PUE）在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞中的抗炎作用,并揭示其分子机制。方法 采用CCK-8比色法分别设置不同浓度的LPS和PUE,观察对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出合适的LPS造模浓度及PUE的给药浓度。将细胞分为正常对照组、模型组（1μg/mL）、PUE给药组（12.5、25、50μmol/L）。Griess法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）释放量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的含量;qRT-PCR法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2) mRNA水平;Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, i NOS）、COX-2、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平。结果 与正常对照组比...     

夏枯草总三萜对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的 探讨夏枯草总三萜(TTP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的调节及对Jak/Stat通路的影响.方法 培养RAW264.7细胞系,体外用LPS(2 μg/ml)刺激,ELISA法检测不同质量浓度的TTP(12.5、25、50、100、200 μg/ml)分别作用24、48、72 h后对细胞分泌前列腺素E2(PGE2)的影响,选取质量浓度为25、50、100 μg/ml的TTP,进一步用RT-PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、Jak2和Stat3 mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清中TNF-α、IL-6蛋白的表达.结果 TTP可以抑制细胞分泌PGE2,并且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.01),TTP可以抑制LPS刺激的RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6(P<0.01),并且明显抑制Jak2、Stat3的基因表达(P<0.01).结论 TTP可以抑制RAW264.7细胞分泌炎症因子,调节细胞炎症因子网络的平衡,具有一定的抗炎作用,且这一作用的产生可能与Jak/Stat通路有关.     

IL-37对脂多糖诱导AR42J细胞炎症反应及p38MAPK/NF-κB通路的影响

目的 探究白细胞介素-37(IL-37)对脂多糖(LPS)诱导AR42J细胞炎症反应的影响及可能的作用机制.方法 体外培养AR42J细胞,将细胞分为空白组(细胞不进行任何处理)、阴性对照组(转染pcDNA3.1质粒)与IL-37过表达组(转染pcDNA3.1-IL-37重组载体),转染后在培养液中添加10μg/mL L...     

灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症介质分泌的影响

[目的] 研究灯盏乙素对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症的影响,初步探讨其抗炎作用机制。[方法] 用噻唑蓝（MTT）法检测灯盏乙素对RAW264.7细胞活力的影响;用Griess法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮（NO）生成的影响;用荧光素酶报告质粒法检测灯盏乙素对LPS诱导的核转录因子（NF-κB）转录活性的影响;用实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB靶基因肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。[结果] 0.01～10 μmol/L的灯盏乙素处理24 h后对RAW264.7活力无显著影响;1、10 μmol/L的灯盏乙素可以显著抑制LPS诱导的NO的生成及NF-κB转录活性;灯盏乙素可以不同程度的抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB靶基因TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的上调作用。[结论] 灯盏乙素可能通过抑制NF-κB的活化及炎症因子的表达发挥一定的抗炎作用。     

脂氧素对巨噬细胞RAW264.7的抗炎实验研究

目的 研究脂氧素(LX) A4和叔丁氧羟基-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(BOC-2)对LPS作用巨噬细胞RAW264.7存活的影响.方法 取对数生长期的巨噬细胞RAW264.7为研究载体,实验用不同浓度的脂多糖(LPS)在不同时间点处理细胞,观察LX A4和BOC-2对LPS作用巨噬细胞RAW264.7后的存活率.CCK-8法观察LPS对各组巨噬细胞RAW264.7的不良反应,Western blot法检测LX A4和BOC-2对LPS处理后巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(TLR4)和pNF-κB p65蛋白水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测LX A4和BOC-2对LPS处理后巨噬细胞RAW264.7培养上清液中白细胞介素6(IL-6)水平.结果 在1 000 ng/mL浓度LPS组,作用时间6h,巨噬细胞RAW264.7内TLR4蛋白水平和pNF-κB p65蛋白水平显著高于其余各组(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组细胞存活率显著高于对照组(P＜0.05);BOC-2组在LPS作用后巨噬细胞RAW264.7的存活率显著低于无LPS作用(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组pNF-κB p65蛋白水平低于对照组及BOC-2组(P＜0.05),BOC-2组pNF-κB p65蛋白水平高于其余各组(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组IL-6的水平低于对照组及BOC-2组(P＜0.05).结论 LX A4能够抑制LPS对巨噬细胞RAW264.7的作用及TLR4/NF-κB信号通路的激活,有助减轻炎性反应.     

淫羊藿黄酮的分离鉴定及其对前破骨细胞株增殖的影响

目的观察淫羊藿中单体黄酮的抗骨质疏松作用。方法利用硅胶和凝胶柱色谱分离淫羊藿中单体黄酮成分,根据化合物光谱数据(ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR)鉴定其结构,通过MTT法观察其对体外培养的前破骨细胞株RAW264.7增殖的影响。结果从淫羊藿地上部分的醋酸乙酯萃取物中分离得到5个化合物,分别为淫羊藿苷()、宝藿苷()、朝藿素B()、宝藿苷()及金丝桃苷()。活性结果表明,0.1~100μmol/L化合物对前破骨细胞RAW264.7的生长有一定程度的促进作用;浓度为0.1~100μmol/L的化合物对前破骨细胞RAW264.7的生长有一定的抑制作用,但随着浓度的升高,转而表现为轻微的促进作用;浓度为1.0和10μmol/L的化合物对该细胞的增殖基本上没有什么影响,而其他浓度下,则对前破骨细胞RAW264.7的增殖表现出明显的抑制作用;除个别浓度外,化合物和均对前破骨细胞RAW264.7的生长表现出相当程度的抑制作用。结论黄酮类化合物对RAW264.7的生长是促进还是抑制依赖于其自身的化学结构以及作用浓度,淫羊藿可能是通过黄酮类化合物抑制前体破骨细胞的增殖,进而抑制前体破骨细胞分化形成破骨细胞而发挥抗骨质疏松作用的。     

5-LO真核表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达的初步研究

目的构建5-LO真核表达载体并初步研究其在RAW264．7细胞中的表达,为建立5-LO高表达转基因小鼠模型提供表达载体。方法从人全血标本中提取细胞总RNA,以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增5-LO基因,分别构建5-LO目的基因的克隆载体与表达载体,提取质粒,进行酶切、PCR和DNA测序鉴定,将重组融合表达载体pEGFP-5-LO稳定转染RAW264．7细胞,RT-PCR、western blot方法检测pEGFP-5-LO的表达情况。结果构建了重组克隆载体pUCm-5-LO和真核表达载体pEGFP-5-LO,经酶切、PCR及测序鉴定正确;转染细胞后,在荧光显微镜下观察到pEGFP-5-LO融合蛋白的表达,RT—PCR和Westemblot结果表明转染pEGFP．5-LO的RAW264．7细胞中有5-LO的表达。结论成功克隆了5-LO基因,构建的表达载体pEGFP-5-LO在RAW264．7细胞中表达5-LO蛋白,为进一步5-LO高表达转基因鼠模型的建立和临床应用奠定了基础。     

甘草次酸及其衍生物TY501对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响

目的 探究甘草次酸及其衍生物TY501对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。方法 以小鼠巨噬细胞RAW264.7为靶细胞,设置空白组,脂多糖（LPS）1 μg/mL处理组（模型组）,LPS 1 μg/mL加80、40、20、10 μg/mL药物处理组（受试药物TY501,对照药物泼尼松龙、甘草次酸、吡罗昔康）,每组设置4个复孔在给药刺激24 h后按照CCK-8试剂盒说明测定各药物对细胞增殖抑制率。结果 TY501半数抑制浓度（IC₅₀）为233 μg/mL,泼尼松龙IC₅₀为1 571 μg/mL,甘草次酸IC₅₀为31 μg/mL,吡罗昔康IC₅₀为14 187 μg/mL。结论 甘草次酸对RAW264.7巨噬细胞的增殖具有明显的抑制作用,甘草次酸衍生物TY501也可抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖,在同等质量浓度条件下其对小鼠巨噬细胞增殖的抑制程度强于泼尼松龙,弱于甘草次酸,表明甘草次酸及其衍生物TY501对于小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的抑制作用可能是其发挥抗炎作用的机制之一。     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

Inhibitory Mechanisms of Water Extract of Oplopanax elatus on Lipopolysaccharide-Induced Inflammatory Responses in RAW 264.7 Murine Macrophage Cells

Objective:To study the anti-inflammatory action and cellular mechanism of Oplopanax elatus.Methods:A hot water extract of OE (WOE) was prepared and a major constituent,syringin,was successfully isolated.Its content in WOE was found to be 214.0μg/g dried plant (w/w).Their anti-inflammatory activities were examined using RAW 264.7 macrophages and a mouse model of croton oil-induced ear edema.Results:In lipopolysaccharide (LPS)-treated RAW 264.7 cells,a mouse macrophage cell line,WOE was found to significantly and strongly inhibit cyclooxygenase-2 (COX-2)-induced prostaglandin E_2 (PGE_2) production[half maximal inhibitory concentration (IC_(50))=135.2μg/m L]and inducible nitric oxide synthase (i NOS)-induced NO production (IC_(50)=242.9μg/m L).In the same condition,WOE was revealed to inhibit NO production by downregulating i NOS expression,mainly by interrupting mitogen activated protein kinases (MAPKs)/activator protein-1(AP-1) pathway.The activation of all three major MAPKs,p38 MAPK,extracellular signal-regulated kinase(ERK),and c-Jun N-terminal kinase,was inhibited by WOE (50–300μg/m L).On the other hand,WOE reduced PGE_2 production by inhibiting COX-2 enzyme activity,but did not affect COX-2 expression levels.In addition,WOE inhibited the production of proinflammatory cytokines such as interleukin-6 and tumor necrosis factor-α.In croton oil-induced ear edema in mice,oral administration of WOE (50–300 mg/kg) dose-dependently inhibited edematic inflammation.Conclusion:Water extract of OE exhibited multiple anti-inflammatory action mechanisms and may have potential for treating inflammatory disorders.     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。