逍遥散抗慢性心理应激海马神经元凋亡的机理研究

目的 观察逍遥散抗慢性心理应激海马神经元凋亡及糖皮质激素受体(GR)表达的影响.方法 Wistar 大鼠按体重分为正常组、模型组、逍遥散组.正常组及模型组灌胃等量生理盐水,逍遥散组给予逍遥散7.02g/kg.观察实验前后大鼠体重及糖水偏爱度的变化,采用PI法检测大鼠海马神经元凋亡,原位杂交法检测GR mrRNA表达.结果 经过21 d慢性轻度不可预计应激(CMUS)造模后,模型组、逍遥散组体重及增重明显低于正常组(P<0.01),模型组的糖水偏爱度明显低于正常组(P<0.01),模型组大鼠海马神经元凋亡率明显增加(P<0.05),GR mRNA表达降低(P<0.01);逍遥散可显著降低大鼠海马神经元凋亡率(P<0.05),升高GR mRNA表达(P<0.01).结论 表明CMUS可引起大鼠糖水偏爱度下降,而逍遥散能逆转CMUS抑郁大鼠的糖水偏爱度的下降,可显著改善慢性心理应激所致大鼠海马神经元凋亡,其机理可能与调节GR mRNA表达有关.     

逍遥散对慢性应激大鼠海马突触体结构可塑性的影响

目的:观察逍遥散对多相性应激大鼠海马CA3区神经元结构的影响,探究逍遥散抗应激损伤大鼠海马神经突触结构可塑性的机制。方法:W istar大鼠随机分为空白组、模型1组、模型2组、治疗1组、治疗2组,每组10只。采用慢性多相性应激模型,透射电镜观测比较各组大鼠CA3区神经突触超微结构变化。结果:模型1组及模型2组大鼠海马神经元突触的数密度与面密度较空白组均有明显降低(P<0.01),突触连接带的平均面积则无明显变化(P>0.05),而治疗1组与治疗2组大鼠海马神经元突触的数密度与空白组相比则无明显差异(P>0.05);面密度与突触连接带的平均面积则均有所减小。与模型1组相比,两个治疗组大鼠海马神经元突触的数密度与面密度均明显增大。结论:多相性应激可以损伤大鼠的神经突触结构,影响突触间的相互连接。而逍遥散则能减少应激对原有的突触及突触连接的损伤,促进新的突触与突触连接的形成。     

慢性束缚应激大鼠海马BDNF TrkB NT3的变化及逍遥散对其影响

目的:观察慢性束缚应激时大鼠海马BDNF、TrkB、NT3的变化及逍遥散对其影响.方法:用束缚的方法建立了应激模型,用心脏灌流的方法固定海马,切片后用免疫组织化学结合图像分析的方法观察了海马CA1区BDNF、TrkB、NT3变化情况.结果:发现海马中BDNF和NT3的阳性细胞数和积分光密度下降,TrkB阳性细胞数和积分光密度明显上升.逍遥散能不同程度的抑制海马中BDNF和NT3阳性细胞数和积分光密度的下降以及TrkB阳性细胞数和积分光密度的上升.结论:BDNF、TrkB、NT3在慢性应激中发挥了重要作用,逍遥散可能正是通过它们的变化,作用于HPA轴引起机体免疫功能变化的.     

慢性束缚应激大鼠海马BDNF TrkB NT3的变化及逍遥散对其影响

目的：观察慢性束缚应激时大鼠海马BDNF、TrkB、NT，的变化及逍遥散对其影响。方法：用束缚的方法建立了应激模型。用心脏灌流的方法固定海马，切片后用免疫组织化学结合图像分析的方法观察了海马CA1区BDNF、TrkB、NT，变化情况。结果：发现海马中BDNF和NT3的阳性细胞数和积分光密度下降，TrkB阳性细胞数和积分光密度明显上升。逍遥散能不同程度的抑制海马中BDNF和NR阳性细胞数和积分光密度的下降以及TrkB阳性细胞数和积分光密度的上升。结论：BDNF、TrkB、NT3在慢性应激中发挥了重要作用，逍遥散可能正是通过它们的变化，作用于HPA轴引起机体免疫功能变化的。     

逍遥散对慢性心理应激大鼠海马BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的：观察逍遥散抗慢性心理应激海马神经元BDNF及其受体TrkB表达的影响,并探讨其可能的机制。方法：Wistar大鼠按体重分为正常组（不施加任何刺激）、模型组（慢性温和不可预知应激,CMUS）、逍遥散组（每次刺激前1h灌胃中药1次,每次2mL）。观察实验前后大鼠糖水偏爱度的变化,采用免疫组织化学法检测大鼠海马BDNF及其受体TrkB表达,Fura-2/AM法和Tillvision图像处理系统检测大鼠海马神经元细胞内游离Ca2＋浓度。结果：CMUS可引起大鼠糖水偏爱度下降,逍遥散组大鼠海马神经元BDNF及TrkB阳性细胞率均显著高于模型组,海马神经元内游离Ca2＋浓度显著低于模型组。结论：逍遥散可以通过上调海马BDNF及其受体TrkB的表达,降低胞内Ca2＋超载,从而防止海马神经元的进一步损伤。     

逍遥散对应激大鼠海马突触体内PKC活性及Ca2+浓度的影响

目的:探讨逍遥散对慢性心理应激大鼠海马突触体内Ca2+浓度及蛋白激酶C(PKC)活性的影响,进一步研究其对心理应激损伤学习记忆保护作用的机制。方法:Wistar大鼠随机分为五组,采用慢性多相性应激模型,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2+浓度,采用琼脂糖凝胶电泳法检测突触体内PKC活性。结果:两个模型组大鼠海马突触体内Ca2+浓度及PKC活性均有上升(P<0.01),而逍遥散组与模型组比较,突触体内Ca2+浓度及PKC活性则明显回落(P<0.05或P<0.01)。结论:慢性多相性应激可升高大鼠海马突触体内Ca2+浓度及PKC活性,逍遥散具有对抗应激升高大鼠海马突触体内Ca2+浓度及PKC活性的作用。     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区Cacnb4基因表达的影响

目的:本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况。方法:以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只。造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2m L/(只·d),连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化。结论:电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

慢性应激损伤对大鼠海马GABRD基因表达的影响及逍遥散干预机制的研究

目的:用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区GABRD基因的表达情况。方法:以45只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组15只。造模方法采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2 mL/只·d,连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。运用Agilent表达谱芯片筛选各组差异基因,并选取GABRD基因,采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法对各组大鼠海马区域GABRD基因mRNA及其蛋白表达情况加以验证。结果:Agilent表达谱芯片结果显示慢性应激模型组大鼠海马GABRD下调,逍遥散干预后有上调趋势,但无统计学意义。RT-PCR及免疫组化法验证结果显示:慢性应激模型组大鼠海马GABRD mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,中药复方逍遥散可从蛋白水平纠正这种下调的表达变化。结论:γ-氨基丁酸A受体δ亚型表达变化参与了慢性应激损伤的过程,逍遥散可能通过调控这一基因的表达而发挥对慢性应激损伤所致一系列神经、精神紊乱症状的保护性调节作用。     

穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下海马神经元结构的影响

目的:通过观察穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下海马神经元结构的影响,探讨慢性应激对衰老机体的促衰老作用及穴位埋线的抗衰机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、衰老组、应激组、埋线组,每组12只。采用D-半乳糖溶液腹腔注射制作衰老模型,采用长期制动应激造成慢性应激,埋线组分别于"百会""肾俞""内关""肝俞"交替埋线8次,1次/周。HE染色,于光镜下对大鼠海马锥体细胞进行计数,并于电镜下观察海马神经元细胞结构的变化。结果:光镜下空白组大鼠海马锥体细胞排列整体密集,形状规则;衰老组大鼠海马锥体细胞排列较稀疏;应激组海马锥体细胞排列稀疏,形态不规则;埋线组大鼠海马锥体细胞排列较密集。衰老组、应激组大鼠海马锥体细胞数量明显少于空白组(P0.05,P0.01),应激组与衰老组相比,其海马锥体细胞数量减少更为显著(P0.01),而埋线组海马锥体细胞数量明显升高(与应激组比较P0.01)。电镜下观察,空白组神经元形态正常,衰老组神经元体积明显缩小,应激组神经元呈现极度不规则形态,埋线组的神经元异常形态得到明显改善。结论:衰老模型大鼠的海马神经元数量和结构呈现增龄性老化现象,慢性应激可加重对海马神经元的损害,加速脑衰老;穴位埋线可拮抗应激性衰老机体海马神经元的进一步损害,从而延缓脑衰老。     

逍遥散对慢性应激复合阿尔茨海默病体外损伤模型的干预作用

目的建立慢性应激复合阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）体外损伤模型,并探究逍遥散含药脑 脊液（XYS）及空白脑脊液（Cerebro-Spinal Fluid,CSF）对该模型的干预作用。方法以叠氮化钠（NaN3）和皮质 酮对原代海马神经元进行药物干预建立模型,通过CCK8 实验筛选干预条件,利用线粒体膜电位和神经元存活 率评价模型特征。将神经元分为正常组,复合模型组,5%、10%、20%逍遥散含药脑脊液组,5%、10%、20% 空白脑脊液组,米非司酮组,并进行相应干预。以MAP-2 荧光强度、APP 和GR 蛋白表达为指标评价逍遥散 对该模型的干预作用。结果确定模型建立方法为先以30 mmol·L-1 的叠氮化钠干预12 h,再更换为 100 μmol·L-1 的皮质酮干预24 h。该模型特征符合预期,建立的方法稳定可靠。与正常组比较,复合模型组神 经元存活率、光密度比值、GR 表达均明显降低（P < 0.01）,APP 表达明显增加（P < 0.01）。与复合模型组比 较,5%空白脑脊液组和5%逍遥散含药脑脊液组APP 蛋白表达降低（P < 0.05,P < 0.01）;10%空白脑脊液组 神经元存活率增加且APP 蛋白表达降低（P < 0.05）;20%空白脑脊液组光密度比值增加（P < 0.05）,神经元存 活率增加且APP 蛋白表达降低（P < 0.01）;10%、20%逍遥散含药脑脊液组和米非司酮组神经元存活率及光密 度比值均明显增加（P < 0.01）,APP 蛋白表达明显降低（P < 0.01）;各用药组的GR 蛋白表达均明显增加（P < 0.01）。与相应浓度的空白脑脊液组比较,5%逍遥散含药脑脊液组APP 蛋白表达降低且GR 蛋白表达增加（P < 0.05）;10%、20%逍遥散含药脑脊液组神经元存活率增加（P < 0.05,P < 0.01）,光密度比值增加（P < 0.01）, APP 蛋白表达降低（P < 0.05）且GR 蛋白表达明显增加（P < 0.01）。结论逍遥散可有效缓解慢性应激复合阿尔 茨海默病体外模型的海马神经元细胞损伤,减少APP 蛋白表达,增加GR 蛋白表达,且其药理作用具有一定的 剂量依赖性,浓度为20%的高剂量逍遥散含药脑脊液组药效较佳。     

逍遥散对慢性应激状态下大鼠海马神经细胞内糖皮质激素受体表达的影响

探讨逍遥散治疗血清对慢性应激大鼠状态下海马神经细胞内糖皮质激素受体蛋白表达的影响。方法：采用免疫印迹法检测慢性应激大鼠模型血清以及逍遥散治疗血清干预体外培养的海马神经细胞后,其胞内糖皮质激素受体（iGR）表达情况。结果：慢性应激大鼠模型血清与谷氨酸（Glu）共同作用于大鼠海马神经细胞对iGR表达下调的作用最明显,MK-801未能完全阻断iGR的表达下调,逍遥散治疗血清能够明显对抗慢性应激引起的iGR表达下调,但与空白组比较还存在差异,当与MK-801共同作用时,这种对抗iGR含量降低的作用倾向更加显著。结论：模型血清中可能存在Glu-NR以外途径的其他信号通路下调GR表达,逍遥散治疗血清对维持海马神经细胞iGR表达量的稳定起到一定作用,与MK-801可能协同性地促进慢性应激状态下海马负反馈调节功能的恢复。逍遥散可能通过包括Glu-NR-Ca2＋-cAMP-iGR细胞信号传导通路在内的多种途径维持海马神经细胞iGR的稳态,以促进过度的应激反应尽快终止。     

背部循经推拿手法对束缚应激所致亚健康模型大鼠海马神经元的影响

目的:观察背部循经推拿手法对束缚应激模型大鼠海马神经元的影响。方法:将60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和推拿组,后两组给予连续21 d束缚筒束缚,推拿组每天另给予背部循经推拿。观察实验过程中3组大鼠的一般情况。实验结束当天处死大鼠后取材并制作标本,组织病理切片观察3组大鼠海马CA3区神经元形态学,原位末端标记法(TUNEL法)观测海马细胞凋亡情况。结果:模型组大鼠出现明显的疲劳状态,正常组外观无明显变化,推拿组大鼠一般情况介于模型组与正常组之间。正常组海马CA3区有大量排列规则整齐的锥体细胞,模型组锥体细胞数量减少,推拿组海马CA3区锥体细胞变化介于正常组与模型组之间。正常组海马CA3区可见TUNEL阳性细胞,但数量较少,模型组及推拿组TUNEL阳性细胞散布于整个海马组织。结论:亚健康主要症状的出现可能与海马神经元凋亡密切相关,海马神经细胞凋亡是亚健康状态器质性改变的病理基础。背部循经推拿作为一种良性刺激降低亚健康模型大鼠海马神经元损伤,是背部循经推拿调治亚健康有效性的作用机制之一。     

逍遥散对慢性应激损伤大鼠促肾上腺皮质激素 释放激素表达的影响

目的:观察逍遥散对慢性应激损伤大鼠下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)表达的影响。方法:以逍遥散(5.265 g.kg-1)和糖皮质激素受体(GR)阻滞剂RU-38486(12.5 g.kg-1)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给药。于第22天处死大鼠取材。采用原位杂交法测定各组大鼠下丘脑室旁核区CRHmRNA的表达。结果:逍遥散可显著下调慢性应激损伤大鼠下丘脑室旁核CRH阳性表达。结论:逍遥散可通过下调慢性应激损伤大鼠下丘脑室旁核区CRH mRNA表达而部分恢复慢性应激大鼠HPA轴负反馈功能。     

慢性束缚应激大鼠脑区BDNF的变化及逍遥散对其调节作用

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马与杏仁体BDNF的变化,以及逍遥散对其影响。方法:以慢性束缚应激塑造肝郁证候模型,运用免疫组织化学、Western blot分析及RT-PCR等方法,从蛋白和基因水平,定位与定量相结合,检测BDNF表达水平。结果:在慢性束缚应激条件下,BDNF的表达发生变化,海马和杏仁核往往结果相反。结论:可能是它们由不同的机制控制所引起,而逍遥散对其有一定程度的逆转作用。     

逍遥散抗慢性应激损伤研究进展

中药复方在治疗情志病方面具有简便廉验、副作用小的独特优势。逍遥散作为治疗郁证相关病证的经典代表名方,具有较高的研究和应用价值。近年开展的相关实验和临床研究为逍遥散广泛应用于治疗各科心身疾病提供了丰富的实验和理论依据。     

逍遥散对慢性应激损伤大鼠NR受体亚型表达的影响

目的:本研究用逍遥散和糖皮质激素受体(GR)阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其海马区NR受体亚型表达情况。方法:以逍遥散(5.265g/kg)和GR受体阻滞剂RU-38486(12.5g/kg)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给予实验药物,3周后停止刺激,于第22天处死大鼠取材。采用荧光免疫组织化学法,测定各组大鼠海马区NR表达。结果:GR受体阻滞剂RU-38486与中药复方逍遥散可显著下调慢性应激损伤大鼠海马区NR阳性表达。结论:逍遥散可以通过促进慢性应激损伤大鼠海马区NR表达下调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺(HPA)轴负反馈功能的作用,起到缓解诸应激症状的疗效。     

加味四逆散对慢性轻度不可预计性心理应激模型大鼠海马损伤的影响

目的观察加味四逆散(JWSND)对慢性轻度不可预计性心理应激大鼠海马损伤的影响。方法成年大鼠随机分为6组:雌性正常对照组,雌性模型组,雌性JWSND组,雄性正常对照组,雄性模型组,雄性JWSND组。建立慢性轻度不可预计性心理应激大鼠模型,比较造模前后糖水偏爱度;采用放射免疫方法检测大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色比色法测定大鼠海马脑片光密度(OD)值,流式细胞仪法检测海马神经元凋亡率。结果慢性心理应激大鼠糖水偏爱度明显下降(P<0.01或P<0.05),下丘脑-垂体轴功能亢进,海马脑片OD值明显低于正常对照组(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);JWSND能明显提高心理应激大鼠糖水偏爱度(P<0.01),明显提高心理应激大鼠海马脑片OD值(P<0.05或P<0.01),降低海马神经元凋亡率(P<0.01)。结论 JWSND可有效减轻海马神经元损伤,此作用可能是其抗应激损伤中枢作用的主要机制之一。     

加味四逆散对慢性心理应激抑郁症大鼠海马损伤的保护作用

目的观察加味四逆散对慢性心理应激抑郁症大鼠海马损伤的保护作用。方法采用多种应激源制作慢性心理应激抑郁症大鼠模型。30只Wistar大鼠分为正常组、模型组、中药组。观察各组大鼠海马神经元凋亡率，测定海马脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体TrkB蛋白含量及神经元内Ca^2＋浓度。结果模型组大鼠海马神经元凋亡率较正常组增加，海马BDNF及其受体TrkB蛋白表达降低，神经元内Ca^2＋浓度升高（P〈0．05或P〈0．01）。中药组可降低海马神经元凋亡率，增加BDNF与TrkB蛋白表达，降低神经元内Ca^2＋浓度。结论加味四逆散可能通过上调海马BDNF的表达，降低胞内Ca^2＋，实现抗抑郁的作用。     

逍遥散对慢性应激大鼠海马组织HSPA1A基因表达的影响

目的:探讨并比较中药复方逍遥散和抗抑郁药百忧解(盐酸氟西汀)对慢性应激大鼠海马组织中HSPA1A基因表达的干预作用.方法:将SPF级Wistar大鼠120只随机分为空白组、模型组、逍遥散组、百忧解组,除空白组外,采用足底电击、冰水游泳、禁食24h、禁水24h、束缚4h等应激源对大鼠进行慢性应激刺激.空白组和模型组每只大...     

逍遥散对应激大鼠海马神经元内Ca^2＋浓度及NR1 mRNA表达的影响

目的：研究逍遥散对慢性应激大鼠海马神经元内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达的影响,探讨逍遥散对应激损伤学习记忆保护的作用机制。方法：采用慢性多相性应激大鼠模型,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2＋浓度,RT-PCR法检测海马神经元内NR1 mRNA表达的变化。结果：模型组大鼠海马突触体内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达均明显上升（P〈0.01）,而与模型组比较,逍遥散组大鼠突触体内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达明显回落（P〈0.05,P〈0.01）。结论：抑制慢性应激所导致的大鼠海马神经元内NR1 mRNA的过度表达,减少神经细胞膜上NR的数量,从而减轻慢性应激状态下海马神经元内Ca2＋超载所致的细胞毒性损伤。这可能是逍遥散抗应激损伤的关键机制。