TH基因修饰的永生化神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为和多巴胺代谢的影响

 目的 评价脑内移植酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)基因修饰的温度敏感型永生化神经干细胞(immortalized neural stem cells, iNSCs)的生物学稳定性和安全性,探讨TH基因表达对帕金森病(Parkinson's disease, PD)大鼠旋转行为和多巴胺代谢的影响. 方法 6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD模型大鼠73只,随机分为3组.治疗组(36只,TG)脑内纹状体移植体外转染稳定表达TH基因的iNSCs株(RMN-TH),对照组(27只,CG)同部位植入未转染TH基因的RMN细胞株,余10只为模型组(MG).分别比较细胞移植后不同时间点实验大鼠肿瘤发生、排斥反应和阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、免疫组织化学染色观察TH表达;高效液相色谱电化学方法检测多巴胺(dopamine, DA)及其代谢产物3、4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)水平. 结果移植细胞在受体大鼠纹状体内存活均超过6个月,并广泛迁移、稳定表达TH,而未诱发肿瘤和排斥反应.RMN-TH TG组的APO诱导旋转行为得到明显改善,移植后第8周与CG组、MG组比较,旋转圈数分别下降64.17%和61.54%(P＜0.01);TG组大鼠移植侧纹状体内TH表达显著高于健侧(P=0.0029)、CG组移植侧和MG组(P=0.0031).TG组纹状体DA及其代谢产物水平明显高于CG组和MG组(P=0.0027).与MG组比较,CG组大鼠旋转行为、TH表达,以及DA,DOPAC和HVA水平均无统计学差异.结论 TH基因修饰的iNSCs细胞株RMN-TH可以在PD大鼠纹状体内长时间安全存活并稳定表达TH,显著增加内源性DA及其代谢产物水平,有效改善模型大鼠PD症状.     

雌激素对PD模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其机制探讨

目的研究雌激素（Estrogen）对6-羟基多巴（6-OHDA）制备的去卵巢（OVX）帕金森病（PD）模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其可能机制。方法应用6-OHDA两点注射单侧损毁内侧前脑束（MFB）制备OVXPD模型大鼠,侧脑室给予17-β雌二醇（17-βestradiol,1μg/5μl）,观察大鼠旋转行为、黑质酪氨酸羟化酶（TH）基因表达、黑质铁染色阳性细胞数量和纹状体内多巴胺（DA）及其代谢产物含量的变化。结果雌激素用药组可明显减少阿朴吗啡诱导的PD模型大鼠单侧旋转行为（P〈0.01）。在损毁侧黑质,雌激素用药组TH基因的表达较PD模型组明显增加（P〈0.01）;纹状体DA及其代谢产物亦较PD模型组显著升高（P〈0.01）。黑质铁染色阳性细胞数量较PD模型组明显减少（P〈0.01）。结论雌激素对PD模型大鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与降低铁负载有关。     

人参皂苷Rg1对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的研究人参皂苷Rg1（GinsenosideRg1,Rg1）对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetra—hydropyrldine,MPTP）致帕金森病小鼠黑质（substantla nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神经元变性的保护作用及其可能机制。方法C57BL6小鼠随机分为对照组（NS,ip）、MPTP组（30mg·kg^-1×5d,ip）及Rg,（5mg·kg^-1×8d,ip）预处理组。应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）、免疫组织化学染色等技术观察了SN Caspase-3mRNA、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）mRNA的表达水平和黑质致密带（substantia nigra zona compacta,SNzc）TH免疫反应阳性细胞数量等多项指标的变化,用高效液相色谱法检测小鼠纹状体（stfiatum,Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（dihydroxyphenylaceti cacid,DOPAC）和高香草酸（homovanillic acid,HVA）含量。结果MPTP组SN内TH阳性细胞数量、Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少,应用Rg1后可逆转上述改变（P〈0．01）。MPTP组SN Bcl-2、THmRNA的表达明显降低（P〈0．01）;Caspase-3、Bax mRNA的表达明显增加（P〈0．01）。应用Rg1后可逆转上述改变（P〈0．05）。结论Rg1对MPTP致帕金森病小鼠SNDA能神经元具有明显的保护作用,其机制可能与抗凋亡过程有关。     

热损伤对大鼠中枢D1受体及信号转导的影响

实验大鼠预先分别给予不同药物后置于相同的热环境中，实施热损伤，同时观察大鼠体温升高速率 伤后立即检测纹状体中Ｄ１Ｒ的平衡解离常数和最大结合容量，测定纹状体中ＣＡＭＰ的浓度。检测纹状体细胞中的钙调素的相对活性，从Ｄ１Ｒ及其信号转导的角度，探讨多巴胺受体影响体温调节的机制。     

实验性甲状腺功能亢进大鼠脑多巴胺转运蛋白及多巴胺含量的变化

目的研究甲状腺激素升高时脑纹状体多巴胺转运蛋白（DAT）、多巴胺（DA）及其代谢产物3,4二羟苯乙酸（DOPAC）的含量变化。方法将24只大鼠分为2组,其中一组采用灌胃法连续每天给予大鼠左甲状腺素钠（优甲乐,用量按大鼠体质量25μg／100g,溶于生理盐水中,体积1ml）造成实验性大鼠甲状腺激素增高状态;对照组仅采用灌胃法给予生理盐水1ml;于模型建立前后按随机数字表法抽取左甲状腺素钠组及对照组大鼠各6只,分别取尾静脉血1ml,采用放射免疫法测定TT3及,TT4水平。14d后将上述对照组及左甲状腺素钠组大鼠再各自平均分为2组,一组用于99^Tc^m-2β-[N,N’-双（2-巯乙基）乙撑二胺基]甲基-3β-（4-氯苯基）托烷（TRODAT-1）大鼠脑内分布研究,另一组用于高效液相-电化学检测器（HPLC-ECD）测纹状体DA及DOPAC含量,观察上述大鼠脑纹状体区DAT的分布及DA、DOPAC含量的变化。多组比较采用ANOVA分析,2组间比较采用均数t检验。结果左甲状腺素钠组大鼠在服用左甲状腺素钠后活动明显增加,体质量增长低于正常对照组[（223．90±8．40）与（261．60±14．20）g,t=6．98,P〈0．05]。甲状腺激素水平测定示：左甲状腺素钠组给药前后TT3,分别为（1．46±0．17）和（2．72±0．29）nmol／L（t=10．51,P〈0．0001）;TT4分别为（83．52±10．06）和（187．12±36．48）nmol／L（t=7．74,P〈0．0001）;对照组生理盐水注射前后TT3分别为（1．54±0．09）和（1．71±0．20）nmol／L（t=1．68,P〉0．05）,TT4分别为（98．38±9．77）和（88．38±6．76）nmol／L（t=1．36,P〉0．05）。99^Tc^m-TRODAT-1大鼠脑内分布（每克脑组织百分注射剂量率,％ID／g）研究示：左甲状腺素钠组纹状体为（2．80±0．25）％ID／g,明显低于正常对照组[（3．13±0．14）％ID／g,t=-3．62,P〈0．05]。经检测左甲状腺     

胍丁胺抑制中枢不同脑区单胺类神经递质释放

目的：观察胍丁胺对吗啡依赖大鼠不同脑区脑片单胺类神经递质戒断释放的抑制作用。方法：用ＨＰＬＣ法测定脑片单胺类神经递质浓度。结果：纳洛酮能使吗啡依赖大鼠出现戒断综合征;使其海马、纹状体和丘脑脑片单胺类神经递质释放增加。用胍丁胺和吗啡共同处理大鼠,纳洛酮的上述作用显著受到抑制。胍丁胺的此项药理作用可被咪唑克生阻断。结论：胍丁胺通过激活咪唑啉受体,抑制纳洛酮引起的吗啡依赖大鼠不同脑区单胺类神经递质释放,胍丁胺的此项作用与其抑制戒断综合征相关。     

吗啡引起大鼠纹状体抗坏血酸释放的谷氨酸能机制探讨

目的　观察谷氨酸能神经系统对吗啡引起大鼠纹状体抗坏血酸(AA)释放的影响,进一步探讨AA在脑内的作用机制。方法　应用脑微透析技术结合高效液相色谱 电化学法(HPLC ECD)检测。结果　(1)吗啡(2 0mg·kg-1,ip)显著增加大鼠纹状体抗坏血酸释放(P <0 .0 0 1) ;(2 )MK 80 1(1.0mg·kg-1,ip)显著降低大鼠纹状体抗坏血酸的基础释放(P <0 .0 0 1) ,同时MK 80 1可明显抑制吗啡引起的大鼠纹状体抗坏血酸释放(P <0 .0 0 1) ,两因素方差分析表明:MK 80 1与吗啡对大鼠纹状体抗坏血酸的释放有交互作用(P <0 .0 5 ) ;(3)大鼠去前额皮层后,吗啡对大鼠纹状体抗坏血酸释放的升高作用消失,两因素方差分析表明:去皮层与吗啡对大鼠纹状体抗坏血酸的释放有交互作用(P <0 .0 0 1)。结论　吗啡引起的抗坏血酸释放与中枢谷氨酸能神经系统有关,皮层-纹状体谷氨酸能神经通路的完整性,是吗啡引起的大鼠纹状体抗坏血酸释放的必要条件。     

热损伤对大鼠中枢D_1受体及信号转导的影响

实验大鼠预先分别给予不同药物后置于相同的热环境中,实施热损伤,同时观察大鼠体温升高速率。损伤后立即检测纹状体中 Ｄ_１Ｒ的平衡解离常数和最大结合容量,测定纹状体中ｃＡＭＰ的浓度,检测纹状体细胞中的钙调素（ＣＳＭ）的相对活性,从 Ｄ_１Ｒ及其信号转导的角度,探讨多巴胺受体影响体温调节的机制。结果表明,多巴胺受体激动剂左旋多巴能明显加快动物升温,而Ｄ_１Ｒ桔抗剂ＳＣＨ２３３９０则明显阻止升温;多巴胺两种受体分别具有相互桔抗的促进动物体温升高和阻滞体温升高的作用,神经活性物质神经节昔脂由于其稳定生物膜的作用,而在热损伤模型中同样具有损伤保护作用。     

0.7 Mpa高气压对大鼠脑突触体、神经细胞和神经胶质细胞释放及摄取γ-氨基丁酸的作用

目的研究0．7MPa（7ATA）氮氧混合气对大鼠纹状体、下丘脑、中脑和小脑突触体以及神经元和神经胶质细胞释放及摄取γ-氨基丁酸（GABA）的作用。方法同位素液体闪烁检测技术检测突触体和细胞释放标记GABA的量和摄取标记GABA的量。结果纹状体、下丘脑和中脑突触体释放GABA增加，小脑释放GABA无明显变化。纹状体、下丘脑、中脑和小脑突触体摄取GABA均增加。SKN-SH细胞释放和摄取GABA明显增加。C6细胞摄取GABA增加。结论0．7MPa氮氧混合气条件下GABA神经递质代谢加快，其抑制功能可能减弱。     

抑颤汤治疗帕金森病的作用机制研究

目的　探讨抑颤汤治疗帕金森病 (PD)的作用机制。方法　运用 6 羟基多巴诱发法建立大鼠PD模型 ,通过随机分组 ,观察抑颤汤对PD大鼠行为特征的影响 ;采用脑组织液微透析技术 ,用高效液相色谱法测定各组大鼠脑组织细胞外液中儿茶酚胺类物质含量的变化 ;用放免法测定各组大鼠双侧脑组织M、DA受体数量及亲和力的变化 ;用光镜和电镜观察各组大鼠脑黑质细胞形态学变化。结果　抑颤汤能明显改善PD模型大鼠的旋转行为(P <0 0 1) ;抑颤汤组PD大鼠损毁侧脑组织透析液中 3,4 二羟基苯酸 (DOPAC)、高香草酸(HVA)、多巴胺 (DA)、5 羟色胺(5 HT)水平以及脑组织DA和M受体最大结合量 (Bmax)和亲和常数 (KD)均明显高于生理盐水组 (P <0 0 5 )。病理学观察见抑颤汤组大鼠受损侧脑黑质神经细胞数量明显多于生理盐水组 ,且神经元体积较饱满 ,结构较清晰 ,细胞内高尔基体、线粒体等接近正常。结论　抑颤汤能减轻PD模型大鼠脑黑质细胞的受损程度 ,促进其修复 ,改善黑质纹状体系统的分泌功能 ,提高脑组织中内源性儿茶酚胺类物质的含量 ,刺激PD模型大鼠受体系统 ,使DA、M受体的亲和力和敏感性提高 ,从而改善PD大鼠的旋转行为。     

RP-HPLC法测定含碘复方苯甲酸醇溶液中苯甲酸和水杨酸的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定含碘复方苯甲酸醇溶液中苯甲酸和水杨酸的含量。方法采用AlltimaTMC18色谱柱,流动相：甲醇-0.15%乙酸铵溶液（10∶90）,检测波长：229 nm,流速：1.0 ml.min-1,柱温：25℃。结果苯甲酸、水杨酸分别在0.082～0.660μg、0.037～0.300μg范围内具有良好的线性关系,r=1.000;回收率分别为99.8%,99.3%,RSD为0.1%、0.4%。结论本法快速、简便、准确,可用于含碘复方苯甲酸醇溶液的质量控制。     

中和法测定复方硼酸软膏中硼酸的含量

目的建立复方硼酸软膏中硼酸的含量测定方法。方法中和法。结果硼酸在10.21～60.25mg范围内,取量与其消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol·L-1)的毫升数呈良好的线性关系,相关系数r=0.9999(n=5)。方法平均回收率为99.48%,RSD=0.37%,n=9。结论滴定终点灵敏,易于观察,能准确地测定硼酸的含量。     

清开灵注射液中非胆酸成分对胆酸和异去氧胆酸药代动力学影响

目的 研究清开灵注射液中非胆酸成分对胆酸（CA）和异去氧胆酸（HDCA）药代动力学过程及在主要脏器分布的影响,以阐明清开灵注射液的药理作用.方法 实验动物分2组,清开灵注射液（10ml·kg-1）组和单用相同剂量的CA/HDCA组,给药前小鼠禁食不禁水12h,眼眶微量采血20μl,直接沉淀蛋白振荡后离心,取上清进样检测.取心、肺、肾、脑清洗后用滤纸吸干称量,用1∶4匀浆后离心取上清,处理方法同血样进样检测.使用液相色谱/质谱联用法检测血和组织样品中的CA和HDCA的含量.结果 CA和HDCA在全血和组织中的药物浓度线性范围为4～4 000 μg·L-1,线性关系良好（r＞0.999）,最低检测浓度为2μg·L-1,日间和日内精密度的RSD均＜5%.比较复方中和单用时CA和HDCA的药代动力学参数和在主要组织（心、肺、肾、脑）中的分布,清开灵注射液中的CA和HDCA的AUC、MRT、T1/2β、V均明显高于单用时（P＜0.05）,CL明显低于单用时（P＜0.05）;清开灵注射液中CA和HDCA的分布明显优于单用CA/HDCA,CA和HDCA在组织中的分布特点为：C肺＞C肾＞C心＞C脑.结论 本方法灵敏度高,特异性好,适用于胆酸类化合物的体内过程研究;清开灵注射液中非胆酸成分可延长胆酸成分在体内的滞留时间和促进胆酸成分在组织中的分布;CA和HDCA在脑中浓度低说明其不易透过血脑屏障;复方制剂中多种成分存在相互作用.     

HPLC 法测定三酸散中苯甲酸和水杨酸的含量简

目的研究三酸散中苯甲酸和水杨酸的HPLC测定方法。方法色谱柱：C-18;紫外检测器波长：275nm;流速：1ml·min-1。流动相组成：甲醇-0．1％磷酸（50：50）。结果苯甲酸和水杨酸的线性范围分别为0．0578～0．4049mg·ml-1和0．1152～0．8066mg·ml-1回收率分别为100．0％和99．5％,RSD分别为0．97％和0．50％。结论本方法同时测定苯甲酸和水杨酸具有简便、准确和重复性好的特点,可用于三酸散的质量控制。     

HPLC 法同时测定四种复方制剂中苯甲酸和水杨酸的含量简

目的建立同时测定四种复方制剂（复方苯甲酸软膏、复方苯甲酸醇溶液、含碘复方苯甲酸醇溶液、复方土荆皮酊）中苯甲酸和水杨酸含量的方法。方法色谱柱：DiamonsilC-18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇-0．1mol·L。磷酸二氢钠（45：55）,检测波长：231nm;流速：1．0ml·min-1;柱温：35℃。结果苯甲酸、水杨酸与其它杂质峰分离良好。苯甲酸、水杨酸分别在23．92。239．20μg·ml-1（r=1．0000）、12．32～123．20μg·m1-1（r=1．0000）与峰面积呈良好的线性关系;苯甲酸、水杨酸在4种复方制剂中平均回收率分别为：复方苯甲酸软膏101．99％（RSD为0．51％）,100．55％（RSD为0．95％）;复方苯甲酸醇溶液100．02％（RSD为0．46％）,100．13％（RSD为0．50％）;含碘复方苯甲酸醇溶液100．33％（RSD为1．05％）,99．61％（RSD为1．05％）;复方土荆皮酊99．48％（RSD为0．99％）,99．72％（RSD为0．90％）。结论采用该方法测定4种复方制剂中的苯甲酸和水杨酸含量,简便易行,结果准确,可作为质量控制方法。     

HPLC法测定复方氨息香酊中苯甲酸和樟脑的含量

目的采用高效液相色谱法测定复方氨息香酊中苯甲酸和樟脑的含量。方法以XDB-C18为色谱柱,以甲醇-水（60∶40）为流动相;检测波长为288nm;流速为1.0ml/min;柱温为25℃。结果苯甲酸和樟脑分别在0.032～0.160mg、0.008～0.040mg范围内线性关系良好,r值分别为0.9997、0.9994,平均回收率分别为99.48%、99.69%,RSD分别为0.4%、0.9%。结论方法简单、结果准确、灵敏度高,可用于复方氨息香酊中苯甲酸和樟脑的含量测定。     

毛细管区带电泳法测定甘草浸膏粉中甘草酸和甘草次酸的含量

目的　建立测定甘草浸膏粉中甘草酸和甘草次酸含量的方法。方法　用毛细管区带电泳法 ,紫外检测波长 2 2 8nm ,电压 14kV ,以 5 0mmol·L-1硼砂溶液为背景电解质 ,氢氯噻嗪为内标 ,对甘草浸膏粉中的甘草酸和甘草次酸进行定量分析。结果　甘草酸和甘草次酸的相对峰面积 (氢氯噻嗪为内标 )与各自的质量浓度呈良好的线性关系 ,甘草酸和甘草次酸的平均回收率分别为 98.2 %、96 .8% .结论　该法操作简便、准确、快速     

Radical Yields in Some Nucleic Acid Constituents

Summary

Electron spin resonance spectroscopy has been used to measure the radical yields in some constituents of the nucleic acids. The yields are compared with those determined by other workers. Variations in experimental techniques are insufficient to explain the differences in some of the results obtained by various laboratories.     

Protein and amino Acid supplementation in athletes

Amino acid supplementation is practiced by numerous individuals with the hope of increasing muscle mass and function by increasing available proteins. Theoretically, this makes a great deal of sense; the scientific facts, however, fail to conclusively prove that ingesting more than the recommended dietary allowance of protein has any effect on otherwise healthy adults. Athletes may be the exception to this rule. This review examines the most current literature pertaining to amino acid supplementation, and reports on the potential benefits and risks of this common practice.