墨旱莲抗环磷酰胺诱导的胸腺细胞凋亡的实验研究

目的 研究中药墨旱莲(Eclipta Prostrata L)对环磷酰胺(CY)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的影响。方法 小鼠腹腔注射CY，建立胸腺细胞凋亡模型，同时用墨旱莲灌胃进行治疗。应用电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳，研究墨旱莲对环磷酰胺(CY)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的影响。结果 电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳显示环磷酰胺组出现典型的细胞凋亡表现，墨旱莲组较环磷酰胺组有一定程度的改善。结论 墨旱莲能不同程度抑制CY诱导的小鼠胸腺细胞凋亡。     

实验性体内外胸腺细胞凋亡的超微结构研究

目的对糖皮质激素诱导的大鼠体内、外胸腺细胞凋亡进行系统超微结构观察。方法在培养的胸腺细胞中加入糖皮质激素,分别作扫描和透射电镜观察;对大鼠进行腹腔内氢化可的松注射,对胸腺组织进行透射电镜观察。结果胸腺细胞显示了细胞凋亡各阶段的超微结构改变。结论糖皮质激素诱导胸腺细胞发生凋亡,体外培养细胞出现典型的凋亡小体,而组织内主要改变是凋亡细胞或凋亡小体被上皮性网状细胞或巨噬细胞吞噬、降解。     

实验性糖尿病诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

目的：探讨糖尿病诱导大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化,从而了解其引起胸腺萎缩的可能机制。方法：采用四氧嘧啶诱导复制的大鼠实验性糖尿病动物模型,在电镜下观察了糖尿病大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化。结果：在糖尿病大鼠胸腺皮质中发现了大量凋亡的胸腺细胞,主要表现为细胞皱缩变小,表面形成许多皱突,似发泡状,细胞质浓缩,电子密度增强,线粒体肿胀,嵴减少与紊乱,空泡化细胞核染色质固缩边聚,核变成花瓣状,黑环状与黑洞状,核与细胞发生裂解形成凋亡小体,被巨噬细胞和上皮细胞吞噬清除。此外,在凋亡细胞与小体的周围还聚着许多浆细胞,结论：实验性糖尿病可诱导大鼠脑腺细胞发生大量凋亡,这可能是导致胸腺细胞大量减少及胸腺萎缩的主要机制之一。     

脂多糖体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡的研究

研究脂多糖（ＬＰＳ）体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡的,发现胸腺细胞ＤＮＡ凝胶电泳可出现凋亡特征的梯状带,并且胸腺细胞的凋亡与ＬＰＳ剂量呈依赖关系,苏木精、伊红染色后镜下可见胸腺皮质部分出现大量凋亡细胞,但难以计数;终末脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧三磷酸腺苷原位缺口末端标记法可计数胸腺皮质凋亡的细胞,该法观察ＬＰＳ体内诱导胸腺细胞的凋亡的动力学特征表明,在注射ＬＰＳ后１２￣１８ｈ胸腺细胞凋亡的百分率迅速     

胸腺凋亡细胞DNA裂解的TUNEL原位标记

运用末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＥＮＬ）对糖皮质激素诱导的实验性胸腺细胞凋亡的组织切片进行标记，选择性地显示了凋亡细胞，表明ＴＵＮＥＬ可在细胞水平对组织切片中的凋亡进行检测，对细胞凋亡的判定，需结合细胞的形态结构特点，与坏死进行鉴别。     

S-nitrosoglutathione诱导胸腺细胞凋亡的机制

目的 研究NO供体亚硝酰谷胱甘肽(GSNO)诱导胸腺细胞凋亡与p53表达的相互关系。方法 体外培养：BALB／C小鼠胸腺细胞，用地塞米松(DXM)作为阳性对照，再分别加不同剂量GSNO及NO抑制剂，孵育3h。用透射电镜观察胸腺细胞形态；用琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯型带纹；采用末端脱氧核酸转移酶(TdT)介导的末端标记在流式细胞仪上检测胸腺细胞凋亡；用RT-PCR的方法分析抑癌基因p53的表达在此过程中的变化及作用。结果胸腺细胞在无巯基S-77培养液中孵育可产生自然凋亡，用不同处理后在透射电镜下可见各组早、中、晚期不同阶段的凋亡细胞的形态，琼脂糖电泳显示DXM组出现较多中、晚期凋亡的胸腺细胞，有明显的DNA梯形条纹，加不同剂量的NO和NO抑制剂组则较弱，NO浓度愈高则梯形条纹愈不明显，0．3mmol／L和0．6mmol／L GSNO呈早中期凋亡形态学变化，1．2mmol／LGSNO主要呈早期改变；PCR结果同DNA电泳结果基本一致；流式细胞仪检测各组的凋亡率也有相同的趋势，各组之间差异有显性。结论 胸腺细胞在无巯基培养液内孵育3h会产生自然凋亡，GSNO诱导胸腺细胞凋亡随浓度增加反而抑制胸腺细胞凋亡，NOS抑制剂可抑制凋亡，NO供体GSNO通过p53的表达来诱导细胞凋亡是NO引起细胞凋亡的可能机制之一。     

陆皂苷甲对小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的；研究商陆皂苷甲（EsA)对小鼠胸腺细胞的凋亡效应的影响，方法：采用电镜，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪三种分析方法，测定EsA对小鼠胸腺细胞的凋亡效应的影响。结果：EsA在2．5－10μg/ml的浓度范围内，对小鼠胸腺细胞自发出现的细胞凋亡无影响，但能显著地促进ConA活化的胸腺细胞的凋亡，结论：EsA有促进ConA活化的胸腺细胞凋亡的作用，显示商陆皂陆甲对细胞免疫有调节作用。     

糖皮质激素对体内外胸腺细胞apoptosis影响的再探讨

采用抗ＳＳ－ＤＮＡ抗体免疫细胞化学以及ＦＡＣＳ等方法，观察糖皮质激素对体内胸腺细胞ａｐｏｐｔｏｓｉｓ的影响，结果表明糖皮质激素在体内诱导胸腺细胞ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，在体外抑制胸腺细胞ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，提示糖皮质激素可能是通过间质细胞诱导胸腺细胞ａｐｏｐｔｏｓｉｓ。     

氯化镧对内毒素攻击后小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的 探讨氯化镧对内毒素(LPS)攻击后小鼠胸腺细胞凋亡的影响。方法 通过观察氯化镧对LPS(12．5mg／kg)攻击后小鼠胸腺细胞DNA片段百分率、胸腺细胞凋亡百分率和胸腺细胞DNA片段琼脂糖凝胶电泳结果的影响，探讨其对小鼠胸腺细胞凋亡状况可能作用。结果 10mg／kg氯化镧能显降低内毒素血症小鼠胸腺细胞DNA片段百分率、胸腺细胞凋亡百分率．抑制胸腺细胞的凋亡。结论 LPS攻击后，可导致小鼠胸腺细胞发生凋亡．而氯化镧对LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡具有一定的抑制作用。     

前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用

目的 研究前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用. 方法体外培养BALB/c小鼠胸腺细胞,终浓度1 μmol/L地塞米松诱导细胞,透射电镜、AnnexinV/PI双染流式细胞术、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR半定量法分析1 μmol/L地塞米松作用不同时间以及不同浓度地塞米松作用1 h小鼠胸腺细胞Bim mRNA表达. 结果①1 μmol/L地塞米松作用4 h小鼠胸腺细胞出现特征性DNA梯状条带和细胞凋亡典型形态特征,流式细胞术检测显示在不同时间点(2 h,4 h,8 h)实验组细胞凋亡率较对照高;②1 μmol/L地塞米松作用1/2 h后小鼠胸腺细胞Bim mRNA三个异构体表达即明显升高,以BimL最为明显,其中BimL、BimEL mRNA表达在1 h达高峰,较对照组高峰前移11 h,且各时间点(0 h、24 h除外)表达水平与同时点对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);BimS mRNA表达高峰较对照组提前4 h,但各时间点表达水平与同时点对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);③不同浓度(0,10-2,10-1,1,10 μmol/L)地塞米松作用胸腺细胞1 h时,其活细胞率和凋亡细胞百分率在不同浓度组间的差异无统计学意义,而Bim mRNA表达随地塞米松终浓度增加而升高,也以BimL mRNA表达增高最明显. 结论 Bim参与了地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程,Bim三个异构体中以BimL作用为主;Bim mRNA表达发生在细胞凋亡早期,其表达水平随作用时间变化,并在一定地塞米松浓度范围内呈剂量依赖性.     

Alterations of Thymic Epithelial Cells in Lipopolysaccharide-induced Neonatal Thymus Involution

Background:

Vascular endothelial growth factor (VEGF) in the thymus was mainly produced by the thymic epithelial cells (TECs), the predominant component of the thymic microenvironment. The progression of TECs and the roles of VEGF in the neonatal thymus during sepsis have not been reported. This study aimed to explore the alterations of TECs and VEGF level in the neonatal thymus involution and to explore the possible mechanisms at the cellular level.

Methods:

By establishing a model of clinical sepsis, the changes of TECs were measured by hematoxylin-eosin staining, confocal microscopy, and flow cytometry. Moreover, the levels of VEGF in serum and thymus were assessed based on enzyme-linked immunosorbent assay and Western blotting.

Results:

The number of thymocytes and TECs was significantly decreased 24 h after lipopolysaccharide (LPS) challenge, (2.40 ± 0.46)×10⁷ vs. (3.93 ± 0.66)×10⁷ and (1.16 ± 0.14)×10⁵ vs. (2.20 ± 0.19)×10⁵, P < 0.05, respectively. Cortical TECs and medullary TECs in the LPS-treated mice were decreased 1.5-fold and 3.9-fold, P < 0.05, respectively, lower than those in the controls. The number of thymic epithelial progenitors was also decreased. VEGF expression in TECs was down-regulated in a time-dependent manner.

Conclusion:

VEGF in thymic cells subsets might contribute to the development of TECs in neonatal sepsis.     

细胞凋亡与视网膜病变

目的：了解细胞凋亡在某些视网膜病变中的作用以及研究进展和发展方向。方法：收集近年有关细胞凋亡与某些视网病变发生发展机制的研究资料并加以归纳综合。结果细胞凋亡与某些视网膜病变的发生发展密切相关。结论：细胞凋亡的研究对视网膜病变的防治有可观的前景     

黄芪和何首乌抗环磷酰胺诱导胸腺细胞凋亡

研究了黄芪和何首乌单用和联用对环磷酰胺诱导朱细胞凋亡改变的影响。环磷酰胺对照组的胸腺细胞呈现明显的凋亡改变,与ＡＭ、ＰＭ和ＡＭＰＭ组比较,结果表明流式细胞仪检测所出现的反映凋亡细胞数量的亚Ｇ１峰－Ａｐ峰,各组的高低不一,依次为ＡＭＰＭ组〈ＡＭ组〈ＰＭ组〈Ｃ组;     

天花粉蛋白对A549细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的 观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响和在体外诱导A549肺腺癌细胞凋亡的效果.方法 应用MTT法检测栝萎中提取的天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响,DNA Ladder凝胶电泳及流式细胞术检测天花粉蛋白对A549细胞的诱导凋亡作用.结果 经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑,并呈一定的剂量时效依赖性;流式细胞仪直方图出现明显的亚二倍体峰,经TCS(40 μg/ml)处理48 h、72 h后A549细胞的凋亡率分别为(27.00±2.08)%和(39.43±4.92)%,均高于顺铂组(2 μg/ml)(P＜0.01).结论 天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖,并能诱导该细胞发生凋亡.     

黄芪对诱发性小鼠胸腺细胞凋亡的调节作用

以氢化可的松致小鼠胸腺细胞凋亡 ,同时注射黄芪注射液 ,用 Td T缺口末端标记法检测小鼠胸腺石蜡切片内凋亡细胞。结果显示 ,黄芪可防止氢化可的松所致的小鼠胸腺重量减轻及细胞凋亡的增加。     

二氯化钴诱导A549细胞凋亡及机制的研究

目的探讨二氯化钴(CoCl2)诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法应用不同浓度CoCl2作用A549细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导细胞凋亡的实验模型;应用MTT法检测细胞生长抑制率;应用AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡情况;应用Western blotting法检测总Akt(total-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和survivin蛋白表达情况。结果 300、400μmol/L CoCl2作用24、36、48h后A549细胞的生长受到不同程度的抑制,并呈现比较明显的剂量和时间依赖关系;通过荧光显微镜下能观察到细胞呈新月形、核质体绿色、染色质浓缩,呈现凋亡显著特征,200、300、400μmol/L CoCl2处理24、48h后的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Western blotting检测结果显示300、400μmol/L CoCl2作用48h后细胞内p-Akt、survivin蛋白表达量较对照组显著减少(P<0.01),300μmol/L CoCl2作用36、48h较对照组能显著下调p-Akt、survivin蛋白表达量(P<0.01),而总Akt蛋白表达量均无显著变化。结论 CoCl2可能是通过抑制p-Akt和survivin的蛋白表达,从而诱导A549细胞凋亡。     

适度低氧微环境对体外培养脑胶质瘤干细胞生长的影响

目的 探讨低氧微环境对脑胶质瘤干细胞(GSCs)凋亡及增殖的影响.方法 原代培养脑胶质瘤干细胞,特殊培养基筛选;将GSCs分常氧组(21％02)和低氧组(3％02),给予不同的氧浓度,倒置显微镜下观察细胞形态、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡、MTT法检测细胞增殖情况.结果 倒置显微镜下可见低氧组细胞较常氧组生长更好;荧光显微镜下2组细胞的胞核形态完好,无凋亡像;流式细胞仪检测,与常氧组相比,低氧组细胞凋亡率无差异(P＞0.05);MTT示:于72 h、96 h及120 h时低氧组较常氧组明显增殖(P＜0.05).结论 适度低氧不会诱导脑胶质瘤干细胞凋亡;适度低氧微环境对胶质瘤干细胞有促增殖作用.     

酵母提取物对小鼠免疫细胞凋亡的调节作用

目的 探讨酵母提取物（Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ，ＹＥＥ）对由药物引起的免疫细胞凋亡的调节作用。方法 用地塞米松（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）和放线菌酮（Ａｃｔｉｄｉｏｎｅ，ＡＣＴ）腹腔注射小鼠，造成小鼠胸腺细胞和脾脏淋巴细胞凋亡，建立免疫损伤动物模型，再经ＹＥＥ灌胃治疗后，用细胞形态观察、二苯胺检测法和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳法进行检测结果 ＤＥＸ处理的小鼠胸腺细胞和ＡＣＴ处理的小鼠脾脏淋巴     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲细精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２～１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测发现结扎组的亚单倍体峰增高，亚单倍体细胞百分率升高；ＴＵＮＥＬ法则显示结扎后总的生精细胞凋亡数较假手术后明显增加（Ｐ＜０．００１）。结扎后不同时间组与同期假手术组比较，２周、６周、１０周组精原细胞和初级精母细胞凋亡数前者均高于后者（Ｐ均＜０．０５），１２周组精原细胞凋亡数前者高于后者（Ｐ＜０．０５）。结果表明输精管结扎会导致生精细胞凋亡增加。