孕妇外周血胎儿有核红细胞在产前诊断中的作用

目前对遗传性疾病的产前诊断有数种方法。根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等，虽然诊断精确度较高，但可导致流产等并发症，只能在高危孕妇中实施；后者的优点是既能行产前诊断又无危险性，适用于低风险的孕妇大群体筛选，尽早发现和杜绝异常胎儿，达到优生目的。许多学者致力于利用胎儿细胞进行产前诊断。利用孕妇外周血的胎儿细胞进行产前基因诊断三个关键性技术为：(1)证实母血中存在胎儿细胞和DNA。(2)建立可靠稳定的方法分离胎儿细胞和DNA。(3)应用灵敏性、特异性强的技术以微量胎儿细胞和DNA为模板诊断遗传性疾病。这是最具潜力的非侵入性产前诊断方法之一。     

应用流式细胞技术富集孕妇外周血中胎儿有核红细胞

从孕妇外周血中分离胎儿细胞并进行遗传性疾病的检测 ,具有十分重要的临床价值。为了避免大量的母血细胞对胎儿细胞检测的干扰 ,必须对母血中的胎儿细胞进行分离富集。本研究采用流式细胞技术对 36例孕妇外周血中的有核红细胞 (ＮＲＢＣｓ)进行分离纯化 ,初步探讨ＮＲＢＣｓ在母血中的含量及与孕周的关系。一、资料与方法1.标本来源 :选择 1997年 10月至 1998年 6月在我院行产前检查的健康妊娠妇女 36例 (妊娠组 ) ,年龄 2 1～ 2 8岁 ,孕周 12～ 2 7周 ,均为第 1次妊娠 ,无严重贫血 (血红蛋白>90ｇ/Ｌ)等妊娠合并症或并发症。对照组分别选择…     

孕妇外周血富集分离胎儿细胞进行产前诊断

１９６９年,Ｗａｌｋｎｏｗｓｋａ首次报道在母血循环中可能存在胎儿细胞,随后一些学者相继证实了这一发现,但由于其含量极其稀少故很难用于产前诊断。到了１９９０年,随着分子生物学和细胞生物学等技术的完善,使得从母血循环中检测、分离胎儿细胞并用于产前遗传学诊...     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集方法的比较

目的 从孕妇外周务右分离胎儿有核红细胞（ＮＲＢＣＳ）,并对富集的方法进行比较,搪塞利用此法进行无创性前前诊断的可行性。方法 对５７例５－４０孕周的妇女外周血分别通过单密度梯度离心、免疫细胞化学检测、以及在此基础上流式细胞术分选第三种方法,富集ＮＲＢＣＳ。结果 密度梯度离心后的２７６例样本中,１４例以１－１０个ＮＲＢＣＳ,占５１．８５％。细胞化学检测到ＣＤ７１细胞。流式细胞仪分选出包含ＮＲＢＣＳ的Ｃ     

从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行产前诊断的研究进展

孕妇外周血中存在的微量的胎儿细胞是进行非创伤性产前诊断最理想的样本来源之一。目前常用的分选胎儿细胞方法有流式细胞术、磁激活细胞分离法等 ,其中单细胞分离法的建立是一个新的途径。利用分析胎儿细胞的遗传信息 ,可以进行遗传病的产前诊断 ,如诊断多种染色体病和基因病等     

胎儿血红蛋白用于分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究

目的研究胎儿血红蛋白(HbF)对单个核细胞的标记情况,并用于孕妇外周血中胎儿有核红细胞(NRBCs)的分选,同时探讨NRBCs的比例与孕周的关系。方法2003-10-2004-04深圳市人民医院选用胎儿特异性抗体HbF对90例正常孕妇外周血、15例未孕妇女和15例胎儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞技术(FACS)对胎儿有核红细胞进行分选。结果孕8~41周的孕妇外周血中HbF阳性标记率为(4·62±3·42)%,与未孕组及胎儿脐血组比较,差异均有极显著性意义(P<0·01)。经流式细胞仪分选出的孕妇外周血中的胎儿NRBCs数在孕12~18周、19~23周最高,分别为412·4±135·5和454·2±153·4。结论早、中、晚期孕妇外周血中均存在胎儿有核红细胞,单抗HbF可以有效地进行识别,利用该细胞进行无创伤性产前诊断的最佳时间宜在妊娠12~23周左右。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集纯化及在产前诊断中…

孕妇外周血中的胎儿细胞主要有三种：滋养叶细胞、有核红细胞和淋巴细胞，最适于富集纯化用于产前诊断的是胎儿有核红细胞，密度梯度离心富集结合胎儿有核红细胞特异性抗原标记ＣＤ７１，γ株蛋白阳性选择和白细胞抗原ＣＤ４５阴性选择纯性是目送目前从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞的理想方法。已用于产前诊断胎儿性别和一些疾病。     

孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿DNA的检测

目的　建立从孕妇外周血中分离有核红细胞 (NRBC)及DNA的可靠方法 ,并鉴定其来源。方法　对88例孕妇外周血分别通过密度梯度离心法 ,流式细胞术 (FCM )和荧光激活细胞分离技术 (FACS)分离NRBCs。应用套式PCR技术对 6 5例孕妇血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果　①NRBCs:2 7例样品经密度梯度离心 ,其中 14例分选到 1～ 10个NRBCs。FACS技术对 6 1例样品进行转铁蛋白受体阳性细胞 (CD71+ )分选 ,所有样品均有CD71+ 细胞 ,其浓度为 (0 35± 0 2 5 )× 10 -2 。②胎儿DNA :4 6例怀男胎孕妇血浆DNA中SRY基因检测出率为 6 5 2 2 % (30 / 4 6 ) ,怀女胎的 19例样品SRY基因未检出率为 94 74 % (18/ 19)。结论　从孕妇外周血中分选胎儿NRBCs和血浆中胎儿DNA的方法已取得较大进展。利用母血中胎儿细胞及DNA诊断遗传性疾病可望成为最佳非创伤性产前诊断技术     

孕妇外周血胎儿细胞的分离及其在产前诊断中的应用

孕妇外周血中存在一定数量的胎儿细胞已为许多学者证实,为非侵入性产前诊断提供了一个有广泛应用前景的途径。本文对孕妇外周务胎儿细胞的种类以及胎儿有核红细胞的特点、分离纯化的方法及其在产前诊断中的应用作了简要介绍,并对其中存在的问题进行了探讨。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集纯化及在产前诊断中的应用

孕妇外周血中的胎儿细胞主要有三种:滋养叶细胞、有核红细胞和淋巴细胞。最适于富集纯化用于产前诊断的是胎儿有核红细胞。密度梯度离心富集结合胎儿有核红细胞特异性抗原标记CD71,γ珠蛋白阳性选择和白细胞抗原CD45阴性选择纯化是目前从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞的理想方法。已用于产前诊断胎儿性别和一些疾病。     

应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究

由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少，Hahn，Holzgreve和Bianchi等报道，孕妇每毫升外周血中仅有1～2个完整胎儿细胞。所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记，并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术，是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的最佳手段。但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体，故不同学者选用的标记性抗体也有所不同。本研究采用荧光激活细胞分离技术（fluorescence-activated cell sorting，FACS），通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体（transferrin receptor，CD71）单标记染色和胎儿血红蛋白（fetal haemoglobin，HbF）单标记染色与双标记染色情况的比较，探讨CD71与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值。     

用孕妇外周血胎儿细胞进行产前诊断研究进展

目前对遗传性疾病的产前诊断有数种方法。根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等,虽然诊断精确度较高,但易导致流产等并发症,只能在高危孕妇中实施;后者的优点是既能行产前诊断又无危险性,适用于低风险的孕妇大群体筛选,尽早发现和杜绝异常胎儿,达到优生目的。利用孕妇外周血的胎儿细胞进行产前基因诊断即是最具潜力的非侵入性产前诊断方法之一,近年来研究十分活跃,临床医师应注意这一领域的进展。一、孕妇外周血胎儿细胞的类…     

运用流式细胞技术分析孕妇外周血中胎儿有核红细胞的比例与孕周的关系

目的 :探讨母亲外周血中胎儿有核红细胞 (NRBCs)的比例与孕周的关系。方法 :对 6 1名孕龄为 11～ 34周、年龄为 2 1～ 35岁的妇女的外周血中的胎儿细胞进行分离纯化 ,采用荧光激活细胞分离技术 (FACS)分选表达转铁蛋白受体的阳性细胞 (CD71+细胞 )。将孕妇组、未孕组及新生儿脐血组进行对照。结果 :孕 11～ 34周的孕妇外周血中 CD71+细胞的比例为 (0 .35± 0 .2 5 )× 10 - 2 ,与未孕组及新生儿脐血组均有极显著性差异。CD71+细胞在外周血中的比例在孕 17～18周达峰值 ,分别为 (0 .6 4± 0 .2 5 )× 10 - 2和 (0 .5 4± 0 .35 )× 10 - 2。结论 :早、中、晚期孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞。利用母血循环中的胎儿细胞进行产前诊断的最佳时间应在妊娠 17～ 18周     

孕妇外周血中胎儿细胞分选法在产前诊断中应用的研究进展

在母体外周血循环中，胎儿有核红细胞是最理想的研究指标，其相应的单克隆抗体中，以血型糖蛋白Ａ（ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎＡ，ＧＰＡ）特异性最强。目前常用的分选胎儿细胞方法有流式细胞技术、磁性分离法、抗体结合柱法、显微操作分离法、细胞培养等，前两者已广泛使用。通过多聚酶链反应，荧光原位杂交技术可将所得胎儿细胞进行性别预测及染色体异常的产前诊断     

运用流式细胞术分析孕妇外周血中胎儿有核红细胞的比例与孕周的关系

目的 :探讨母亲外周血中胎儿有核红细胞 (NRBCs)的比例与孕周的关系。方法 :分离纯化孕 11～ 34周、2 1～ 35岁的 6 1例孕妇外周血中的胎儿细胞 ,采用荧光激活细胞分离技术 (FACS)分选表达转铁蛋白受体的阳性细胞 (CD71+ 细胞 )。将孕妇组、未孕组及新生儿脐血组进行对照。结果 :孕 11～ 34周孕妇外周血中CD71+ 细胞的比例为 (0 .35± 0 .2 5 )× 10 -2 ,与未孕组及新生儿脐血组差异均有高度显著性 (P <0 .0 1)。CD71+ 细胞在外周血中的比例在孕 17、18周达峰值 ,分别为 (0 .6 4± 0 .2 5 )× 10 -2 和 (0 .5 4± 0 .35 )×10 -2 。结论 :早、中、晚期孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞。利用母血循环中的胎儿细胞进行产前诊断的最佳时间应在妊娠 17～ 18周     

孕妇外周血中胎儿细胞的分选富集及其在无创伤性产前诊断中的应用

20世纪90年代以来，随着单克隆抗体技术、流式细胞计数技术以及聚合酶链反应(polymerase chain reaction，WR)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术的发展，已使从孕妇外周血中分离、纯化胎儿细胞，并进行无创伤性产前诊断成为可能，但目前对这一问题还存在不少争论。我们复习了国内外有关文献，对这方面的进展综述如下。     

孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及应用研究

从1997年首次在孕妇外周血中发现胎儿DNA以来,众多学者致力于将其应用于无创性的产前诊断。荧光定量PCR实现了胎儿游离DNA浓度的检测,目前研究发现,正常孕妇血浆胎儿DNA浓度稳定于某一水平,有望成为产前诊断和孕期检测的一项新指标。有学者认为,子痫前期母循环中胎儿DNA可有异常增高,而且子痫前期的孕妇在有临床症状前,孕妇血浆胎儿DNA水平异常增高,这与较多胎儿DNA释放到母血中,和肝肾功能异常导致胎儿DNA在母血中清除紊乱有关。此外许多妊娠合并症和并发症都伴有母外周血DNA水平的异常增高,例如:性连锁疾病、Rh血型不合、父系遗传性疾病、染色体非整倍体胎儿、早产等。现就孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及临床应用作一综述。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的出现频率及其与孕周的关系

目的 探讨用检测孕妇外周血中的胎儿有核红细胞（ＮＲＢＣ）进行无创性产前诊断的最佳时间。方法 对４４名孕龄６～４０周的孕妇外周血进行不连续密度梯度离心,将分离后的细胞进行制片,显微镜下行有核红细胞计数,然后用显微操作法一一获取,进行Ｙ染色体特异性ＤＹＺ１基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）,以确定其胎儿来源。结果 ４４名孕妇中有１７例其外周血中检出有ＮＲＢＣ,分布于妊娠第９～２６周,其中以妊娠第１１～２０周     

孕妇外周血中胎儿细胞及DNA分离方法的比较

产前非创伤性诊断技术是国内外围生学关注的重要课题。近 10年来 ,由于相关分子生物学、流式细胞学技术的进展 ,人类对研究母亲外周血中胎儿细胞的工作迈进了一大步。但由于母血中胎儿细胞甚微 ,分离及纯化胎儿细胞的技术难点尚未解决 ,使该技术还无法在临床上广泛应用。本研究旨在探索可靠稳定的分离胎儿细胞和ＤＮＡ的方法 ,为产前诊断奠定基础。一、材料和方法1.材料来源 :(1)研究对象 :选择 1997年 10月至 1999年6月在武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科进行产前检查的健康孕妇 15 3例。年龄 2 1～ 35岁 ,孕 5～ 41周 ,血红…