对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的几种保护作用的研究

目的　研究脑活素 (L ZCL )、胞二磷胆碱 (CDPC)及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的保护作用。　方法　应用新生 Wistar大鼠制备 HIBD模型 ,将 L ZCL、CDPC和 b FGF应用于这些模型中 ,观察它们对 HIBD模型鼠的体重增长、病死率、脑病变的影响 ,并用原位缺口末端标记法检测它们对缺氧缺血 (HI)后脑细胞凋亡的影响。　结果　 3种治疗均促进了 HIBD模型鼠体重的增长 ,明显减轻了脑水肿及脑病变 ,并减轻了 HI后脑细胞的凋亡。　结论　 L ZCL、CDPC及 b FGF对 HIBD的脑组织确有保护作用。     

缺氧缺血后新生鼠脑c-fos表达与脑海马迟发性神经元死亡

目的　探讨围产期脑缺氧缺血后 c- fos基因表达及与脑海马迟发性神经元死亡的相关性。　方法　采用原位末端标记、免疫组化、逆转录扩增法检测缺氧缺血后新生鼠脑海马细胞凋亡与c- fos基因转录、翻译情况。　结果　观察到脑海马 CA1～ 4区凋亡标记信号。 CA 1区出现早、持续久[细胞凋亡数 :CA1区 :1h:(14.6± 2 .3) ,2 4h:(5 1± 6 ) ,72 h:(17.4± 0 .3) ;CA 4区 :1h:(1.3± 1.6 ) ,2 4h:(4 7± 8) ,72 h:(2 1.6± 0 .6 )个 / mm2 )。与对照组比较 CA1区 P<0 .0 1,CA1区、CA4区 P <0 .0 0 1。FOS表达为缺氧后即刻 (0 h)脑海马组织中阳性率增高 ,1h明显升高 ,2 h高峰持续于高水平至 4h(各时间段实验组与对照组比较 P<0 .0 5 )。脑海马内 c- fos m RNA表达高峰时间较 FOS表达约早 1h。其中高表达部位主要以实验组 CA 4区齿状回细胞为主 ,而细胞凋亡以 CA1区锥体细胞较明显。正常对照组脑海马未检测到 c- fos m RNA表达。　结论　围产期脑缺氧缺血后存在 c- fos选择性表达和迟发性细胞凋亡现象。 c- fos基因表达参与调节细胞凋亡的发生 ,其表达与迟发性细胞死亡之间可能存在复杂的相关性     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑病的影响

目的　探讨神经生长因子（ＮＧＦ）对新生大鼠缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）的影响。　方法　选用７ 日龄Ｗｉｓｔａｒ 大鼠,在制成ＨＩＥ模型前后给予腹腔注射ＮＧＦ各一次,在缺氧缺血后按不同时间分期处死,测定脑组织兴奋性氨基酸（ＥＡＡｓ） 及一氧化氮（ＮＯ） 的含量和凋亡细胞数,并与丹参组、生理盐水组的测定值比较。　结果　ＨＩＥ组ＥＡＡｓ、ＮＯ含量及凋亡细胞数明显高于正常对照组的测定值;ＮＧＦ干预组的测定值明显低于ＨＩＥ组及生理盐水组的测定值,而与丹参组的测定值相比无明显差别。　结论　ＮＧＦ 具有和丹参类似的作用,能阻断ＥＡＡｓ、ＮＯ 的异常代谢,降低细胞凋亡数,对ＨＩＥ具有防治作用。     

窒息新生猪淋巴细胞凋亡与[Ca2+]i内流的实验研究

目的 探讨窒息新生儿T淋巴细胞亚群的变化是否由于淋巴细胞凋亡异常启动所致,以及缺氧缺血(HI)后[Ca2+]i内流对淋巴细胞凋亡的影响.方法 用琼脂电泳及流式细胞术(FCM)对HI新生猪淋巴细胞凋亡及淋巴细胞内游离钙(IFCa)水平作动态定量、定性分析.结果 HI新生猪淋巴细胞经体外培养24～72小时后,其最大凋亡率(MAR)较对照组及尼莫地平治疗组明显增加(n=15, 12, 12); (31.09±17.03)%, (5.52±6.17)%, (16.95±11.3)%; F=13.480, (P＜0.001);日平均凋亡率(DAR)较其它两组显著增高(24.08±10.44)%, (4.05±3.57)%, (13.20±6.79)%,F=22.406,P＜0.00 1); HI后4小时,72小时活体内淋巴细胞 IFCa水平明显增加,(293±72,176±43,100±43, F=33.514 9, P＜0.000 1; 240±113, 173±55, 137±50, F=5.909, P＜ 0.005 9); MAR及DAR与HI后4小时活体内IFCa呈显著正相关, (r= 0.361,P=0.024;r= 0.395,P=0.013);电泳观察到的DNA梯带与FCM结果一致.结论 HI新生动物外周血淋巴细胞凋亡加速;凋亡的发生与钙通道激活有关;钙通道阻滞剂的早期使用能在一定程度上抑制凋亡发生.     

缺氧、缺血对新生鼠大脑半胱氨酸蛋白酶活性的影响

目的探讨缺氧、缺血对新生鼠大脑组织天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3（简称caspase-3）活性的影响及意义。方法选择7d龄Sprague-Dawley大鼠33只,结扎左侧颈总动脉后,吸入8%氧气2h,制成缺氧、缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,HIBD后0.5、12、24、48h取两侧大脑组织制成组织匀浆,用显色底物天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-对硝基苯胺复合物测定caspase-3活性。结果缺氧、缺血侧大脑组织caspase-3活性逐渐增高,24h后吸光度值达1.0047±0.4390,48h后降至0.4569±0.2285,各时点间差异有极显著性（P<0.001）。对侧大脑组织各时间点caspase-3活性未见明显变化（P>0.05）。结论新生鼠大脑缺氧、缺血后caspase-3明显激活,支持细胞凋亡参与HIBD,应用caspases抑制剂或其他抗凋亡药物,有可能为HIBD的治疗开辟新的途径。     

新生大鼠脑缺氧缺血后纹状体组织中Par-4和BAD基因的表达及其相关性研究

缺氧缺血性脑病 (hypoxic ischemicencephalopathy ,HIE)是新生儿最常见的中枢神经系统疾病。本课题利用新生大鼠构建HIE的动物模型 ,研究了缺氧缺血对促凋亡基因Par 4(prostateapoptosisresponse 4,Par 4)和BAD(bcl XL ,bcl 2associateddeath ,BAD)在纹状体中表达的影响与意义 ,现报道如下。一、材料与方法1 试剂 :Trizol购自Gibco公司 ,MLV逆转录酶等购自Promega公司。兔抗Par 4多克隆抗体、兔抗BAD多克隆抗体等购于SantaCruz公司。2 .实验分组 :新生 7日龄SD大鼠 ,随机分成HIE模型组、假手术组和正常对照组。3 .HIE动物模…     

1-氨基-3,5甲基金刚烷盐酸对缺氧缺血损伤新生大鼠脑保护作用的病理研究

目的　通过脑形态学研究和病理量化评分 ,对非竞争性 N-甲基 D-天冬氨酸 ( NMDA)受体拮抗剂 1 -氨基 -3 ,5甲基金刚烷盐酸 [美金胺 ( Memantine) ]的缺氧缺血 ( HI)脑保护效果进行评估。　方法　在自行研制的新生大鼠缺氧实验装置基础上 ,对所建立的新生大鼠脑 HI模型对照应用美金胺 2 0 mg/ kg,并建立病理量化评分标准。　结果　 HI组的病理评分最高 ( 1 3 .3± 5.4 ) ,HI前用药组 ( 5.6± 2 .9,t=5.93 5,P<0 .0 0 1 )和 HI后用药组 ( 7.7± 3 .4 ,t=4 .3 1 4,P<0 .0 0 1 )的病理评分均较HI组明显降低 ,尤其是 HI前用药组的评分更接近于正常对照组 ( 4± 0 )。在 HI前或 HI后应用美金胺均能显著改善新生大鼠 HI后的脑损伤程度 ,尤其 HI前应用美金胺似有更明显的效果。　结论　美金胺对由 NMDA受体所介导的神经细胞兴奋毒作用有一定疗效 ,对于今后治疗新生儿脑缺氧缺血损伤可能具有一定的意义。对美金胺的作用机制以及临床应用的可行性 ,正从细胞和分子水平继续作进一步研究。     

丹参治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效研究

目的 研究丹参对缺氧缺血性脑病(HIE)的疗效.方法 在支持及对症治疗的基础上加用丹参注射液2 ml/(kg-1·d-1),对32例HIE患儿进行治疗,疗程平均12.7±3.3天,并与30例不用丹参组进行对照.观察两组患儿在治疗前后新生儿神经行为评分(NBNA);以Trans-link TM 9 000经颅多谱勒脑血流分析仪测量两组患儿双侧大脑中动脉血流收缩峰速度(Vs)、舒张末速度(Vd)、平均速度(Vm)及阻力指数 (RI),计算两侧的流速非对称指数(AI);并采用中科院心理所CDCC进行远期智测随访.结果 治疗组NBNA≥35分:第7、14天分别为17、28例,对照组8、19例(χ2= 4.504,P＜0.05).脑血流动力学检查示治疗组及对照组第1天大脑中动脉平均血流速度(cm/s)分别为21.2±4.5、16.1±5.1,阻力指数分别为0.71±0.11、0.82±0.21,(P＜0.05).第3、5天对照组先后6例出现脑血管痉挛,治疗组无一例发生;治疗组流速非对称指数(AI)也明显低于对照组(t=2.602、2.226,P＜0.05).经6～14个月随访,治疗组及对照组后遗症分别为2例、8例 (χ2=4.771, P＜0.05).结论 丹参对HIE有治疗作用.     

早产儿T淋巴细胞凋亡特性的初步观察

目的　探讨早产儿 T淋巴细胞凋亡特性及其影响因素。　方法　以健康足月新生儿(30例 )为对照组 ,采用凋亡细胞计数和片段 DNA分析技术观察早产儿 (19例 ) T淋巴细胞凋亡特性 ;免疫荧光法测定 T淋巴细胞 CD2 5和 CD38表达率 ;EL ISA法测定培养上清液中白细胞介素 2(IL- 2 )和白细胞介素 6 (IL- 6 )含量。　结果　早产儿组 T淋巴细胞经 p HA刺激培养 2 4、48h其凋亡率分别为 (2 7.2± 2 .7) % ,(34.8± 3.9) % ,显著高于足月儿组 (2 1.1± 1.4) % ,(2 7.9± 2 .3) % (t=10 .5 47、7.789,P<0 .0 1) ,且与胎龄皆呈显著负相关 (r=- 0 .5 1,- 0 .5 2 ,P<0 .0 5 )。两组新生儿 T淋巴细胞培养 48h时凋亡率与 CD38表达率皆呈正相关 (早产儿 r=0 .70 ,足月儿 r=0 .77,P<0 .0 1) ,而与 CD2 5表达率皆呈负相关 (早产儿 r=- 0 .6 2 ,足月儿 r=- 0 .88,P<0 .0 1)。早产儿组培养 48h上清液中 IL- 2和 IL- 6含量 [分别为 (6 5 5± 2 0 2 ) ng/ L,(486± 2 0 5 ) ng/ L],明显低于足月儿组 [分别为 (1371± 5 5 4) ng/ L,(849± 12 3) ng/ L](t=5 .40 1,7.749,P<0 .0 1) ;其中 IL- 6产生水平与 T淋巴细胞凋亡率呈明显负相关 (r=- 0 .45 ,P<0 .0 5 )。　结论　凋亡过剩是新生儿 ,尤其早产儿 T淋巴细胞功能不成熟的特征之一     

缺氧缺血新生鼠脑线粒体形态及功能改变的相关研究

目的　探讨缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ） 新生鼠急性期脑线粒体形态计量学改变及与功能的相关关系。　方法　７ 日龄Ｗｉｓｔａｒ 大鼠（ｎ ＝３３）随机分为ＨＩ１ 小时、ＨＩ２ 小时及假手术对照组,测定其脑线粒体形态特征参数及功能参数。　结果　ＨＩ１ 小时组线粒体平均截面面积、周长分别增加４８ ％ 、２４ ％ ,线粒体比表面、嵴膜面积分别减少１７％ 、３７％ ;ＨＩ２ 小时线粒体平均截面面积、周长、比表面无继续改变,嵴膜平均截线长与嵴膜密度分别较对照组减少６２ ％ 、６８％ ;线粒体密度三组无改变。线粒体嵴膜密度与线粒体呼吸控制比、最大呼吸速率及ＡＴＰ生成量呈正相关。　结论　ＨＩ１小时线粒体形态学的主要改变为肿胀,ＨＩ２ 小时为嵴膜的破坏。线粒体的肿胀与细胞核周质的肿胀变化始终相一致。缺氧缺血新生鼠嵴膜密度的减少与线粒体呼吸功能、能量合成功能障碍密切相关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的研究

目的　研究Ｂｃ１－２蛋白和Ｂａｘ 蛋白在新生儿缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）中的表达,以及与细胞凋亡的关系。　方法　将新生７日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠制成ＨＩＢＤ模型,应用免疫组织化学——ＳＰ法及原位缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）。　结果　新生大鼠ＨＩＢＤ时细胞凋亡与坏死并存,但以凋亡为主。Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ 在正常新生大鼠脑内广泛表达（＋ ～）;缺氧缺血（ＨＩ）后脑病变处Ｂｃｌ－２免疫强度明显下降（－ ～＋ ）;Ｂａｘ 的免疫强度也减弱,其中可见散在分布的阳性凋亡细胞;ＨＩ后Ｂｃｌ－２与Ｂａｘ 的比例下降。　结论　Ｂｃｌ－２可能抑制细胞凋亡,Ｂａｘ 可能诱发细胞凋亡     

对新生儿缺氧缺血性脑病头颅CT脑白质低密度评估的进一步探讨

目的　为比较正常新生儿和缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ） 患儿脑白质密度ＣＴ 值,并观察脑白质低密度形态改变与临床分度的关系。　方法　３０ 例正常新生儿及８１ 例ＨＩＥ 患儿作为研究对象。　结果　（１）３０ 例正常新生儿脑白质ＣＴ 值为１８ ～２８ Ｈｕ,ＨＩＥ３６ 例为５ ～１９ Ｈｕ,χ２ ＝ ６２ ．１ ,Ｐ＜ ０．０１。（２）４５ 例ＨＩＥ患儿中,轻度、中度及重度ＨＩＥ 其脑白质形态改变的发生率分别为３５－７％ ,９０ ％ 及１００ ％ 。１７ 例中、重度ＨＩＥ中有６ 例ＣＴ 值均大于１８ Ｈｕ,但均有中到重度的形态改变。　结论　只有将白质低密度的范围、程度（ＣＴ 值） 及脑白质低密度形态改变三者结合起来分析,ＣＴ 脑损害的诊断才能较客观地确立     

新生儿缺氧缺血性脑病十年回顾

目的　总结我院 10年来新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)的临床特点和预后 ,探讨改善预后的措施。　方法　对 115 0例 HIE患儿的临床资料和随访结果进行回顾性分析。　结果　 115 0例HIE中足月儿 942例 (81.9% ) ,早产儿 2 0 8例 (18.1% ) ,病因以宫内窘迫和产时窒息为主 ,75 .0 %合并颅内出血。病死率 7.0 % (重度 HIE32 .8% ,中度 4.2 % ,轻度 0 )。随访 85 2例 ,后遗症发生率 10 %(重度 HIE6 0 .7% ,中度 4.5 % ,轻度 0 )。早产儿 HIE预后差 ,中度预后不良占 37.0 % ,重度 10 0 %。改善预后的措施 :(1)早诊早治。 (2 )把维持机体内环境的稳定放在治疗 HIE的首位 ,坚持三个维持 ,三个对症原则。 (3)保护脏器功能 ,积极治疗多脏器损害。 (4 )对重度 HIE采用高压氧加长疗程 (4～ 6个月 )治疗 ,可使后遗症发生率降至 2 7.8% ,与常规疗法组比较 ,差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。 (5 )早随访 ,早干预。　结论　重度 HIE和早产儿 HIE预后差 ,坚持新生儿期后的继续治疗可改善预后     

新生儿缺氧缺血性脑病的免疫学研究

目的　研究新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)患儿的免疫学变化及其机制 ,为免疫学治疗提供理论依据。　方法　以 4 0例正常新生儿及 4 0例 HIE患儿为对象 ,分别检测脐血、生后 1、3、7、12～ 14 d及 2 6～ 2 8d外周血 T淋巴细胞亚群、血清可溶性白细胞介素 2受体、白细胞介素 (IL ) 6、8以及肿瘤坏死因子α、血浆一氧化氮、免疫球蛋白、补体、红细胞 C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率等免疫指标的变化 ,并于新生儿生后 2 4 h内取静脉血后即刻应用脉冲多普勒超声检测其大脑中动脉的血流动力学参数。　结果　窒息缺氧与 HIE患儿存在 :(1) T淋巴细胞亚群紊乱 ,如生后 1～ 3dHIE与对照组分别为 CD3 (6 2± 8) %、(6 5± 10 ) % ,CD4 (39± 7) %、(46± 8) % ,CD8 (2 3± 6 ) %、(19± 5 ) % ,CD4 / CD8 比值 1.8± 0 .7、2 .5± 0 .7。至生后 2 6～ 2 8d时上述各指标间差异均无显著性。(2 ) Ig M与 C3降低。(3)细胞因子表达异常。(4)血流动力学参数 RI与 IL- 6呈负相关 (r=- 0 .0 1,P<0 .0 1) ,与 IL- 8及 TNF- α呈正相关 (r=0 .80、0 .72 ,P<0 .0 1)。　结论　免疫功能紊乱参与了 HIE的发病过程 ,细胞因子对脑血流的异常影响可能是免疫因素导致脑损伤的原因之一。     

新生儿缺氧缺血性脑病时血小板活化因子水平的变化及临床意义

目的　研究新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)患儿外周血中血小板活化因子 (PAF)水平的变化 ,探讨 PAF与新生儿 HIE的关系及其在 HIE发病机制中的作用。　方法　采用放射免疫法测定新生儿 HIE患儿急性期 (生后 1～ 3d)和恢复期 (8～ 10 d)全血 PAF和超氧化物歧化酶 (SOD)的含量 ,并与对照组做同期比较。　结果　 HIE患儿急性期血 PAF水平较对照组明显升高 ,且血 PAF含量随病情程度的加重而升高 ;血 SOD水平及血小板计数在 HIE各组中显著降低 ,PAF与 SOD、血小板计数呈负相关 (r=- 0 .4 6 7、- 0 .35 9,P<0 .0 5 )。　结论　新生儿 HIE血 PAF水平变化与 HIE和脑损伤严重程度有关 ,PAF在新生儿缺氧缺血性脑损伤的发病机制中起重要作用 ,PAF受体拮抗剂能起到有效的神经保护作用 ,为 HIE的治疗提供新的途径和方法     

前脑动脉血流阻抗指数用于缺血缺氧性脑病的诊断

不得以连续波多普勒血流分析仪对１８２例正常新生儿（正常组）及６７例高危新生儿（异常组），分别进行了５３４次和２３０次前脑动脉血流阻抗指数（ＲＩ）测定。结果：正常组前脑动脉ＲＩ值分布范围为０．６２±０．０９（ｓ），其与日龄呈显著正相关（ｒ＝０．７２，Ｐ＜０．０５）；正常前脑动脉血流速度频谱图为规则图形。此外，在高危新生儿中，ＲＩ异常的标化发生率在有缺血缺氧性脑病（ＨＩＥ）病理基础的高危儿（甲组）中明显高于正常组（Ｐ＜０．００１），无ＨＩＥ病理基础的高危儿（乙组）则与正常组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；同时，甲组的ＲＩ异常的标化发生率也明显高于乙组（Ｐ＜０．００１）。特别在９例有严重ＨＩＥ并发症者中，前脑动脉不规则血流图的标化发生率显著高于其他高危儿（Ｐ＜０．００１）。提示：从新生儿预后方面看，前脑动脉ＲＩ极度异常，尤其是有不规则血流图出现时，ＨＩＥ的严重并发症发生率及新生儿死亡率均急剧增高（Ｐ＜０．００１）。因此，前脑动脉ＲＩ异常提示有新生儿ＨＩＥ存在，特别当有不规则血流图出现时，新生儿预后多不良。     

地塞米松对缺氧缺血新生大鼠脑内诱生型一氧化氮合酶基因表达的调节

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血后脑内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)基因表达的变化及地塞米松 (DEX)对其的调控作用 ,从而阐明 DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。　方法　建立新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)标准化的动物模型 ,应用快速竞争性逆转录 PCR技术 ,分别对缺氧缺血、DEX预处理后予缺氧缺血、缺氧缺血后即刻予 DEX、DEX加假手术及正常对照 5组新生大鼠的实验 ,对大脑组织中 i NOS m RNA的表达进行半定量分析。　结果　新生大鼠缺氧缺血后 ,缺血侧大脑 i NOS m RNA表达自 6 h开始 ,2 4h达高峰 ,7d时回至基线水平。DEX预处理可以抑制缺血侧大脑 i NOS m RNA的表达 ,而缺氧缺血后即刻注射 DEX对 i NOS m RNA的表达无明显调节作用。　结论　一氧化氮的产生可能在缺氧缺血后脑组织损伤的演变过程中起着重要的病理作用 ,EDX预处理对中枢神经的保护作用部分可能是通过抑制 i NOS m RNA的表达来实现的。