人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1表达与氟伐他汀的影响

背景：血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1作为氧化型低密度脂蛋白的特异性受体,参与血管性炎症和粥样斑块的发生发展过程。近年发现他汀类药物调脂外抗炎症作用可能是其抗动脉粥样硬化机制之一。 目的：验证氟伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。 设计、时间及地点：对比观察,实验于2006-08/2007-05在中南大学湘雅医学院附属第二医院医学实验中心完成。 材料：人脐静脉内皮细胞株购自美国ATCC公司。氟伐他汀原粉购自北京诺华制药有限公司。 方法：培养人脐静脉内皮细胞株,按以下方法处理：①用氧化型低密度脂蛋白刺激细胞(终浓度分别为25,50,100 mg/L)。②以氧化型低密度脂蛋白受体1中和抗体干预后,再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。③以核因子кB抑制剂PDTC干预后,再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。④以不同浓度(0.01,0.1,1 μmol/L)氟伐他汀干预后,再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。⑤空白组为对照。 主要观察指标：采用反转录-聚合酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达水平。 结果：在氧化型低密度脂蛋白各剂量组(25,50,100 mg/L)均可上调人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达,在25~50 mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系(P < 0.01)。预先分别给予氧化型低密度脂蛋白受体1中和抗体和核因子кB抑制剂PDTC干预,氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达均下调。予以不同浓度氟伐他汀干预呈浓度依赖性降低氧化型低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达。 结论：氟伐他汀呈浓度依赖性降低氧化型低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1的表达,可能与其抑制核因子кB的表达,减轻内皮细胞炎症反应,从而发挥其独立于降脂外的抗炎效应。     

三七总皂苷对急性脑梗死患者血清sICAM-1的影响

目的观察不同的药物治疗对急性脑梗死患者血清可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）的影响。方法84例患者分为治疗组44例和对照组40例，治疗组应用三七总皂苷，对照组应用维脑路通，采用双抗体酶联免疫吸附法（ELISA）分析。结果2组患者治疗后血清sICAM-1含量均降低，治疗组下降更显著。结论三七总皂苷对急性脑梗死患者血清中异常升高的sICAM-1有明显降低作用，其疗效优于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。     

三七总皂苷对急性脑梗死患者血清sICAM-1的影响

目的观察不同的药物治疗对急性脑梗死患者血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响。方法84例患者分为治疗组44例和对照组40例,治疗组应用三七总皂苷,对照组应用维脑路通,采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)分析。结果2组患者治疗后血清sICAM-1含量均降低,治疗组下降更显著。结论三七总皂苷对急性脑梗死患者血清中异常升高的sI-CAM-1有明显降低作用,其疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。     

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞株ICAM-1表达的影响

目的　观察氧化修饰低密度脂蛋白 (OX LDL)对血管内皮细胞表达细胞间粘附分子 1(ICAM 1)的影响 ,以探讨其在动脉粥样硬化和缺血性脑血管病发病过程中的作用。方法　在血管内皮细胞的培养基中分别加入 2 5μg mL的低密度脂蛋白 (LDL)和OX LDL ,37℃下温育 2 4h ,应用定量免疫细胞化学分析技术检测血管内皮细胞ICAM 1蛋白的表达。结果　OX LDL组血管内皮细胞ICAM 1蛋白的表达显著增加 ,而LDL组只有轻微增加。结论　OX LDL可能通过刺激血管内皮细胞ICAM 1的表达而参与动脉粥样硬化及缺血性脑血管病的发生和发展过程     

普伐他汀对急性脑梗死患者血清中氧化修饰低密度脂蛋白、转化生长因子β1、血管细胞间黏附分子-1和血脂水平的影响

目的探讨普伐他汀对急性脑梗死(ACI)患者血清中氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)和血脂水平的影响。方法将114例ACI患者随机分为普伐他汀联合阿司匹林治疗组(56例)和阿司匹林治疗组(58例)。分别在发病72h内和治疗后3个月检测血清中ox-LDL、TGF-β1、VCAM-1和血脂浓度,并进行比较,同时取门诊体检者(50名)设为健康对照组。结果普伐他汀联合阿司匹林治疗组和阿司匹林治疗组的患者发病72h内血清ox-LDL、VCAM-1、血胆固醇和LDL的浓度高于健康对照组(均P<0.05),TGF-β1的浓度低于健康对照组(P<0.05)。与治疗前及阿司匹林组相比,普伐他汀联合阿司匹林治疗组在治疗第3个月时血清ox-LDL、VCAM-1、血胆固醇、血LDL浓度明显下降,血清TGF-β1明显升高(均P<0.05)。结论普伐他汀有利于降低血清ox-LDL的浓度,调节免疫功能,抑制炎症反应,从而进一步稳定动脉粥样斑块,可作为治疗ACI患者的联合药物。     

脑出血患者血清细胞间黏附分子-1与血管细胞黏附分子-1含量变化

目的观察脑出血患者1d、3d、7d、14d血清中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管细胞黏附分子-1(sV-CAM-1)含量变化,探讨临床意义。方法采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中sICAM-1、sVCAM-1含量。结果脑出血患者sICAM-1、sVCAM-1含量第1d开始升高,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);第3d、7d含量显著升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);第14d含量开始下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);重型脑出血组与轻型脑出血组比较,第3d、7d差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论ICAM-1、VCAM-1参与脑血肿周围脑组织炎症反应及继发性脑组织损伤。     

氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞环氧化物酶-2表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞(VSMC)环氧化物酶-2(COX-2)表达的影响。方法采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成的平滑肌源性泡沫细胞模型,RT-PCR及Western印迹法观察不同浓度和时间点的ox-LDL处理对细胞COX-2表达的影响。结果12.5、25、501、00 mg/L四种不同浓度的ox-LDL与VSMC共同孵育24 h4、8 h、96 h后均可使VSMC COX-2表达上调(P<0.05),且浓度越高,上调越显著,在24 h的时间点开始显著上调,96 h达高峰。结论在ox-LDL诱导体外培养的血管平滑肌细胞形成泡沫细胞的过程中,存在COX-2的表达上调,可能与平滑肌源性泡沫细胞炎性反应有关。     

烟草烟雾对大鼠脑血管内皮细胞细胞间黏附分子-1表达及脑梗死体积的影响

目的　研究烟草烟雾对大鼠脑血管内皮细胞超微结构 ,细胞间黏附分子 1(ICAM 1)mRNA、ICAM 1表达及大脑中动脉梗死体积的影响。方法　建立大鼠吸烟模型 ,原位杂交及免疫组化检测大鼠脑血管内皮细胞ICAM 1mRNA、ICAM 1的表达 ;建立大鼠左侧大脑中动脉梗死模型 ,测定梗死灶体积占同侧大脑半球体积百分比 ;电镜观察内皮细胞超微结构的改变。结果　 (1)吸烟大鼠脑血管内皮细胞ICAM 1mRNA、ICAM 1表达增加 ,脑梗死灶体积增加 (长期大量吸烟组为4 3 7%± 3 7% ,对照组为 2 7 9%± 1 5 % ,P <0 0 5 ) ;内皮细胞超微结构改变显著。 (2 )戒烟大鼠脑血管内皮细胞ICAM 1mRNA、ICAM 1表达及脑梗死灶体积减小 ,内皮细胞超微结构病理改变明显恢复。结论　烟草烟雾使大鼠脑血管内皮细胞ICAM 1mRNA、ICAM 1表达及大鼠脑梗死灶体积增加 ,二者间存在剂量 效应关系。     

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞损伤作用的观察

目的：观察氧比修饰低密度脂蛋白（OX－LDL）对血管内皮细胞的损伤作用。方法：在人脐静脉内皮细胞体外培养的基础上,通过采用3H胸腺嘧啶校苷（3H－TdR）掺入DNA技术和硫代巴比妥酸比色法,分别分析了OX－LDL对内皮细胞DNA合成及脂质过氧化物的代谢产物丙二醛（MDA）含量的影响。结果：当内皮细胞暴露于OX-LDL（50～200μg／ml）24小时后,其3H－TdR掺入量明显减少,但MDA含量显著增加。结论：OX－LDL能够明显抑制内皮细胞DNA合成,并显著增加内皮细胞的脂质过氧化物含量。     

大鼠骨髓间充质干细胞血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1的表达

背景：骨髓间充质干细胞系统性输注后,何种因素促使其迁移到正确部位尤为关键,目前认为黏附分子在介导骨髓间充质干细胞向缺血或损伤组织迁移过程中起重要作用。 目的：观察血管细胞黏附分子1与细胞间黏附分子1在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。 方法：采用直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,免疫细胞化学染色检测血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1蛋白的表达,应用免疫荧光直标法在流式细胞仪上检测血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1抗原的表达率,RT-PCR半定量分析血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1 mRNA的表达。 结果与结论：免疫细胞化学染色结果显示,骨髓间充质干细胞血管细胞黏附分子1呈弱阳性表达,细胞间黏附分子1呈强阳性表达。流式细胞仪检测结果显示,血管细胞黏附分子1表达率为6%,细胞间黏附分子1表达率为100%。RT-PCR检测结果显示,血管细胞黏附分子1 mRNA呈微弱表达,细胞间黏附分子1 mRNA呈高度表达。提示在生理状态下,体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞低表达血管细胞黏附分子1,高表达细胞间黏附分子1。     

纤维蛋白(原)及其降解产物对共培养人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1表达的影响

目的探讨纤维蛋白原(Fg)、纤维蛋白(Fb)及其降解产物(FDPs)对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)/兔平滑肌细胞(SMCs)共培养模型中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法建立原代HU-VECS与兔SMC共培养体系,根据干预物及其浓度的不同分为Fg、Fb、FDPs组及相应的0 mg/ml、0.5 mg/ml、3.0 mg/ml和6.0 mg/ml亚组。应用核因子B抑制蛋白(I-B)拮抗剂BAY 11-7082、蛋白激酶C(PKC)拮抗剂Staurosporine分别对0.5 mg/ml、3.0 mg/ml和6.0 mg/ml亚组进行干预。采用反转录(RT)-PCR法检测HU-VECS内ICAM-1 mRNA水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液的ICAM-1蛋白含量。结果 Fg 3.0mg/ml和6.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著高于0 mg/ml亚组及相应浓度Fg+BAY 11-7082亚组(均P<0.05);Fg 3.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著高于3.0 mg/ml+Staurosporine亚组(均P<0.05)。Fb 6.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平显著高于0 mg/ml、6.0 mg/ml+BAY11-7082和6.0 mg/ml+Staurosporine亚组(均P<0.05),但Fb 6.0 mg/ml亚组ICAM-1蛋白含量显著高于0 mg/ml亚组(P<0.05)。FDPs 6.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著高于0 mg/ml、相应浓度BAY11-7082和Staurosporine亚组(均P<0.05)。结论中、高浓度Fg、Fb、FDPs能上调血管内皮细胞ICAM-1的表达。     

Platelet/endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1) expression by human brain microvessel endothelial cells in primary culture

PECAM-1 expression was investigated in primary cultures of human brain microvessel endothelial cells (HBMEC). HBMEC constitutively express PECAM-1 along their apical cell surface, advancing processes and on the basal surface at points of contact with the extracellular matrix. Surface expression is not altered by cytokine or lipopolysaccharide treatment. This distribution may mediate cell-cell contact and migration during angiogenesis and HBMEC-leukocyte interactions in CNS inflammation.     

二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

背景：大量实验表明，中药何首乌有效活性成分二苯乙烯苷具有降血脂、抗动脉粥样硬化和保护心血管等作用。在许多病理过程中，活性氧可引起细胞脂质过氧化，引起细胞转运功能和酶的性质发生改变，丧失了对细胞离子的调节功能。 目的：观察二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧/复氧损伤是否具有保护作用。 设计、时间及地点：以血管内皮细胞为观察对象的随机对照实验，于2006-04/10在九江学院医学院分子生物实验中心完成。 材料：人脐静脉血管内皮细胞株。 方法：采用人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型，干预实验分为8组，每组重复6次。对照组为人脐静脉血管内皮细胞常氧条件下培养；缺氧复氧组为人脐静脉血管内皮细胞缺氧3 h后分别复氧2 h；10，5，2.5 ng/L二苯乙烯苷治疗组分别在缺氧复氧损伤前及缺氧复氧损伤后给予相应剂量的二苯乙烯苷；10，5，2.5 ng/L二苯乙烯苷预处理组分别在缺氧复氧损伤前给予相应剂量的二苯乙烯苷。 主要观察指标：应用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞活力；用UV-1206紫外光分析光度计检测乳酸脱氢酶、总抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮。 结果：二苯乙烯苷能剂量依赖性的提高缺氧复氧血管内皮细胞的存活率，降低乳酸脱氢酶活性及丙二醛浓度，提高总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性及一氧化氮浓度(P < 0.01)，且治疗组比预处理组作用更明显(P < 0.01)。 结论：二苯乙烯苷对血管内皮细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用，而且其治疗作用优于预防作用。     

Differential expression of intercellular adhesion molecule-1 and vascular cell adhesion molecule-1 in chronic murine retroviral encephalitis

The cell adhesion molecules, intercellular adhesion molecule (ICAM)-1 and vascular cell adhesion molecule (VCAM)-1, are important mediators of immune interactions within the central nervous system (CNS). A wide variety of pro-inflammatory insults to the brain, including viral infection, result in upregulation of these molecules on brain endothelial cells, astrocytes, and microglia. This study investigated the expression of ICAM-1 and VCAM-1 in chronic encephalitis induced by infection with a temperature sensitive (ts-1) strain of Moloney murine leukaemia virus (MoMuLV), an ecotropic murine retrovirus. During the late stages of disease, viral antigen was present in both endothelial cells and microglia, but not astrocytes, in regions of spongiform change and gliosis. In these areas, ICAM-1 staining was detected on activated microglia, but not on endothelial cells or astrocytes. In contrast, no cells showed increased VCAM-1 expression in the CNS. These findings demonstrate that there is cell-specific, differential expression of these adhesion molecules in ts-1 retroviral encephalitis. The lack of endothelial cell expression correlates with the characteristic lack of lymphocytic infiltrate in this chronic retroviral encephalitis and suggests that increased microglial ICAM-1 expression may play a role in the pathogenesis of MoMuLV (ts-1)-mediated neurodegeneration.     

Oxidized lipoprotein(a) enhanced the expression of P-selectin in cultured human umbilical vein endothelial cells

Lipoprotein(a) [Lp(a)] has been demonstrated to be an independent risk factor for coronary heart disease. However, the precise mechanism by which it contributes to the development of atherosclerosis remains unclear. P-selectin is one of the major adhesion molecules to mediate the interaction between monocytes, platelets and endothelial cells. Increased expression of P-selectin has been frequently found in atherosclerotic lesions. The present study assessed the effects of native and oxidized LDL (n-LDL and ox-LDL) and Lp(a) (n-Lp(a) and ox-Lp(a)) on the expression of P-selectin in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Cell ELISA was used to measure the expression of P-selectin in HUVECs and monocyte adhesion assay was used to detect whether the P-selectin expressed in HUVECs was functional. P-selectin mRNA expression in HUVECs was determined by Northern blot. Results showed that P-selectin protein expression was not influenced by n-LDL, but was moderately increased by ox-LDL and n-Lp(a). ox-Lp(a) was the most potent stimulus for P-selectin expression, increasing it in HUVECs by 144±10% at 10 nmol/l and 202±22% at 20 nmol/l. In addition, it showed that dose dependency induced monocyte adherence to endothelial cells after incubation of HUVECs with ox-Lp(a). Northern blot analysis demonstrated that the amount of P-selectin mRNA was markedly increased after treatment with ox-Lp(a) but not with n-LDL, ox-LDL and n-Lp(a). These results demonstrate that ox-Lp(a) can induce P-selectin expression in HUVECs, which may thereby influence the pathogenesis of athersclerosis.     

可溶性血管内皮细胞生长因子受体1真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

背景：研究表明,可溶性血管内皮生长因子受体Flt-1(sflt-1)基因在多种组织中表达,但其在内皮细胞中的表达尚待证实。 目的：获取人sflt-1基因,构建sflt-1基因真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1重组质粒,检测其在人脐静脉内皮细胞中的表达。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-05/12在南昌大学第二附属医院分子中心完成。 材料：pEGFP-N1真核表达载体为南昌大学第二附属医院分子中心保存,人脐静脉内皮细胞株购至南京基凯生物技术公司。 方法：从含有目的基因的质粒克隆模板中,利用酶切的方法获得目的基因,将目的载体进行酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,PCR鉴定为阳性的克隆,证明目的基因已经定向连入目的载体。再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确的即为构建成功的融合蛋白表达质粒载体。用脂质体法将pEGFP-N1/sflt-1重组质粒转染人脐静脉内皮细胞。 主要观察指标：①重组质粒的酶切鉴定结果。②重组质粒的测序鉴定结果。③荧光显微镜及蛋白免疫印迹检测sflt-1基因在人脐静脉内皮细胞中的表达。 结果：①对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,与sflt-1基因片段全长2 063 bp理论值相符,证实pEGFP-N1/sflt-1重组质粒构建成功。②重组质粒送至上海捷瑞生物技术公司进行通测,测序结果证实插入片段序列与理论值完全一致。③荧光显微镜下可见重组质粒转染人脐静脉内皮细胞发绿色荧光,蛋白免疫印迹检测表明sflt-1基因能在人脐静脉内皮细胞中表达。 结论：实验成功构建了携带人血管内皮生长因子受体Flt-1的重组pEGFP-N1/sflt-1真核表达质粒,并证实其在人脐静脉内皮细胞中的表达。     

转化生长因子β1对长波紫外线照射皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响*☆

背景：研究认为衰老和光老化状态下生长因子的表达不一定一致,生长因子与皮肤老化的关系越来越受到重视。 目的：验证转化生长因子β1对长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响 。 设计、时间及地点：以体外培养细胞为观察对象,随机重复实验,于2006-07/2008-03在解放军第四军医大学全军整形外科研究所进行。 材料：成纤维细胞来自解放军第四军医大学整形外科门诊患者包皮,采用组织块法培养获得。 方法：通过酶联免疫法(ELISA)使用不同剂量长波紫外线 (0,5 ,10,20 J/ cm2)照射体外培养的皮肤成纤维细胞,测定上清液中胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、 血管内皮细胞生长因子的质量浓度;以长波紫外线15 J/ cm2为照射剂量,选择不同剂量转化生长因子β1即小剂量组(0.1 μg/L)、中剂量组(1 μg/L)、大剂量组(10 μg/L)对培养的皮肤成纤维细胞进行干预。 主要观察指标：不同剂量长波紫外线照射、以及转化生长因子β1处理后皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、角质形成细胞生长因子的表达。 结果：长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子分泌水平下降,血管内皮细胞生长因子分泌升高;转化生长因子β1处理后,转化生长因子β1剂量依赖性地提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌的3种细胞因子的水平。转化生长因子β1大剂量组胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子含量明显高于长波紫外线照射组(P < 0.01)。 结论：长波紫外线照射抑制体外培养成纤维细胞中胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子表达, 促进血管内皮细胞生长因子表达。转化生长因子β1可提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子3种细胞因子的水平,有利于真皮内结构的恢复和重建。     

辛伐他汀抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡

背景：他汀类药物对血管内皮细胞的凋亡是否有影响目前尚不明确。 目的：探讨辛伐他汀对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。 方法：用DMEM细胞培养液培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分成空白对照组、高糖组和高糖+辛伐他汀组,用四甲基偶氮唑蓝比色法测定人脐静脉内皮细胞的存活率,流式细胞仪和Western blot分别检测细胞早期凋亡率及P53蛋白表达。 结果与结论：高糖组及高糖+辛伐他汀组细胞增殖率较空白对照组明显降低(P < 0.01),而高糖组细胞增殖率较高糖+辛伐他汀组亦降低(P < 0.01);高糖组P53蛋白表达量及凋亡率较空白对照组及高糖+辛伐他汀组明显增加(P < 0.01),高糖+辛伐他汀组P53蛋白表达及凋亡率亦明显高于空白对照组(P < 0.01)。表明高糖可通过促进促凋亡蛋白P53的表达进而促进人脐静脉内皮细胞的凋亡,而辛伐他汀可抑制此作用。