晚期氧化蛋白产物对血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的研究晚期氧化蛋白产物对血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应技术和酶联免疫吸附试验测定细胞中单核细胞趋化蛋白-1mRNA的表达量及蛋白的含量。观察晚期氧化蛋白产物对平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。结果晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达的作用(P<0.01)。结论晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达可能是其致动脉粥样硬化机制之一。     

晚期氧化蛋白产物的制备及纯化

背景:晚期氧化蛋白产物是血液透析患者免疫功能紊乱、加速性动脉粥样硬化、透析相关性淀粉样变等长期并发症的重要致病环节.但是对于晚期氧化蛋白产物的基础性研究相对较少.主要原因之一就是不能获得高纯度且具有生物学活性的晚期氧化蛋白产物.目的:制备及纯化晚期氧化蛋白产物,并对其进行鉴定,以寻求一种制备高纯度且具生物活性的晚期氧化蛋白产物的方法.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-09/10在解放军第三军医大学检验系临床生化教研室完成.材料:人血白蛋白为成都容生有限公司产品,Hitrap 26/60 sephacryl S-300为GE Healthcare产品.方法:首先纯化人血白蛋白,将纯化的人血白蛋白与次氯酸体外孵育法制备晚期氧化蛋白产物一人血白蛋白,经Hitrap26/60sephacryl S-300分离纯化.并经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量,经单核细胞肿瘤坏死因子α分泌实验鉴定其结构特征和生物学活性.主要观察指标:①人血白蛋白的纯化及电泳结果.②晚期氧化蛋白产物纯化及电泳结果.③晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白促单核细胞肿瘤坏死因子α分泌的量效关系.结果:经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量为670 000,能够显著刺激单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌,时间效应显示AOPPs-HSA(1 g/L)刺激6 h,单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌量就已显著性升高,12 h升至最高水平.结论:采用上述方法能够制备及纯化晚期氧化蛋白产物,且纯化后的晚期氧化蛋白产物具有生物学活性,为晚期氧化蛋白产物的进一步研究奠定了基础.     

间歇性缺氧/复氧对结肠癌SW480细胞晚期氧化蛋白产物表达的影响

目的:研究间歇性缺氧/复氧对体外培养SW480细胞生长形态及晚期氧化蛋白产物(AOPP)表达的影响,探讨结肠癌SW480细胞间歇性缺氧/复氧的氧化应激现象.方法:将SW480细胞体外培养48 h后传代,随机分为四组:A组持续缺氧15 min,B组间歇性缺氧/复氧120 min,C组持续缺氧60 min,D组为常氧组,检测细胞培养液中的AOPP含量.结果:A、D组细胞形态无明显改变,B、C组细胞两端突起明显,A、B组和B、C组间AOPP差异显著(P＜0.05),B、D组间AOPP存在非常显著差异(P＜0.01).结论:相同缺氧方法、不同缺氧时间SW480细胞生长形态发生改变,且间歇性缺氧/复氧使SW480细胞中的AOPP含量明显升高,发生明显的氧化应激.     

滋养细胞与妊娠高血压综合征发病的关系

滋养细胞具有分化、增殖、浸润和凋亡的功能 ,并通过细胞的自分泌和子宫旁分泌调节 ,胎盘功能与滋养细胞的生物学特性密切相关。滋养细胞分化和功能异常是妊高征发病的重要环节。现总结近年来研究 ,就滋养细胞与妊高征发病的关系综述如下。1　分化功能与妊高征发病　　胚胎植入母体蜕膜后 ,滋养细胞即开始分化。分化包括 3种途径 :(1)细胞滋养层细胞融合为绒毛合体滋养层细胞 ,合体滋养细胞能分泌HCG及其他妊娠必需的激素 ;(2 )细胞滋养层细胞穿过绒毛合体滋养层细胞 ,聚集成细胞柱 ,与子宫壁连接 ,成为绒毛外滋养层细胞 ,这些细胞位于胎…     

糖尿病肾病患者晚期氧化蛋白产物与超氧化物歧化酶检测的临床意义

目的：研究糖尿病肾病患者血清蛋白氧化损伤指标晚期氧化蛋白产物的改变及其与超氧化物歧化酶的关系，探讨蛋白氧化损伤与糖尿病肾病氧化应激状态的关系。方法：糖尿病患者134例，根据尿微量白蛋白排泄率和肌酐水平分为无肾病组（A组）、早期肾病组（B组）、临床肾病组（C组）、终末期肾病组（D组）。分别测定各组的血清晚期氧化蛋白产物和超氧化物歧化酶。结果：D组和C组血清晚期氧化蛋白产物显著高于A组（P〈0．01）；B组血清晚期氧化蛋白产物与A组比较差异无统计学意义。结论：临床糖尿病肾病患者的血清蛋白氧化较无糖尿病肾病患者增强，并且与糖尿病肾病氧化应激状态有关。     

子痫前期患者血浆晚期氧化蛋白产物与肾功能生化指标的相关性

目的：探讨子痫前期（PE）孕妇血浆中晚期氧化蛋白产物（AOPP）水平与 PE严重程度的相关性,同时分析AOPP水平对PE患者肾脏功能的影响。方法选取2009年4月至2013年4月南京市妇幼保健院收治的PE患者72例,分为轻度PE组（40例）和重度PE组（32例）,同时选取入住本院的足月分娩的健康孕妇70例作为对照组。常规方法检测血浆中胱抑素C（CC）、尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）等肾功能指标,免疫比浊法检测24 h尿蛋白,分光光度计法检测AOPP ,并进行比较分析。结果重度 PE组患者的 AOPP水平明显高于轻度PE组和对照组孕妇,且轻度PE组患者的AOPP水平明显高于对照组孕妇,差异均有统计学意义（P＜0．05）;重度PE组的CC、UA、Cr和BUN水平明显高于对照组和轻度组,差异均有统计学意义（P＜0．05）;比较轻、重度PE组间24 h尿蛋白定量,差异有统计学意义（P＜0．05）;PE患者AOPP与24 h尿蛋白、CC明显相关,相关系数分别为0．682和0．601（P＜0．05）。结论 AOPP与24 h尿蛋白和CC明显相关性,可以推断PE患者体内AOPP水平对患者肾功能有一定影响。     

腹膜透析对终末期糖尿病肾病患者高敏C反应蛋白及晚期氧化蛋白产物的影响

目的:观察腹膜透析对终末期糖尿病肾病患者高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)及晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)的影响。方法:检测终末期糖尿病肾病非透析患者36例(A组)、持续性非卧位腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)时间≤1 a患者40例(B组)、CAPD时间>1 a患者36例(C组)血清hs-CRP及AOPP水平,并进行比较。结果:B,C组血清hs-CRP水平高于A组(P<0.01);C组血清hs-CRP水平高于B组(P<0.01);C组血清AOPP水平高于A,B组(P<0.01),A组血清AOPP水平高于B组(P<0.01)。结论:CAPD治疗<1 a终末期糖尿病患者血清AOPP水平降低,此后呈增高趋势,hs-CRP水平呈持续增高趋势。     

腹膜透析对终末期糖尿病肾病患者高敏C反应蛋白及晚期氧化蛋白产物的影响

目的:观察腹膜透析对终末期糖尿痛肾病患者高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)及晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)的影响.方法:检测终末期糖尿病肾病非透析患者36例(A组)、持续性非卧位腹膜透析(continuous ambulatory pentoneal dialysis,CAPD)时间≤1 a患者40例(B组)、CAPD时间>1 a患者36例(C组)血清hs-CRP及AOPP水平,并进行比较.结果:B,C组血清hs-CRP水平高于A组(P<0.01);C组血清hs-CRP水平高于B组(P<0.01);C组血清AOPP水平高于A,B组(P<0.01),A组血清AOPP水平高于B组(P<0.01).结论;CAPD治疗<1 a终末期糖尿病患者血清AOPP水平降低,此后呈增高趋势,hs-CRP水平呈持续增高趋势.     

晚期氧化蛋白产物模拟表位的初步研究

目的利用噬菌体展示肽库筛选技术获得模拟人晚期氧化蛋白产物（advanced oxidation protein products,AOPP）表位的序列,探索该表位的分布与表达。方法以抗晚期氧化蛋白产物多克隆抗体为靶,对噬菌体随机12肽库进行免疫亲和筛选,ELISA鉴定阳性噬菌体克隆特异性;对阳性克隆进行DNA测序并推导其氨基酸序列,利用生物信息学技术检索其分布与相似性。结果经3轮亲和筛选获得18株与靶分子特异结合的阳性噬菌体克隆,阳性率为62.07%。竞争ELISA结果表明,AOPP可有效抑制阳性噬菌体克隆与抗体结合,其中对No.6克隆的IC50达到0.2ug/ml,提示其能模拟AOPP表位。经DNA测序并推导氨基酸序列,得到LXDMLXD保守序列（X为任意氨基酸）;发现该序列不存在于正常人与哺乳动物的蛋白分子,但与某些真菌及寄生虫蛋白分子有同源性。结论通过噬菌体肽库筛选技术获得模拟AOPP表位并具良好抗原性的短肽序列;证实该结构不存在于正常人与哺乳动物蛋白分子,正如AOPP并非正常组织蛋白。     

妊娠滋养细胞疾病治疗体会

妊娠滋养细胞疾病包括葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌,是来源于胎盘绒毛滋养细胞,并从良性到恶性逐渐转化的一组疾病.……     

晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的表达

目的探讨晚期氧化蛋白产物（AOPP）诱导体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）对转化生长因子（TGF-β1）表达的影响及内源性活性氧（ROS）在此过程中的调节机制。方法体外制备AOPP-HSA模型，原代培养人腹膜间皮细胞。采用ELISA法检测TGF-β1蛋白水平，采用RT-PCR半定量分析HPYCs中TGF-β1 mRNA的基因表达水平，同时应用流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平。结果AOPP-HSA能显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，同时增加细胞内ROS的生成，呈时间与剂量依赖关系（P〈0．01），不同浓度的抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸预处理细胞，可明显地降低细胞内ROS的生成量，同时显著地抑制AOPP-HSA诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，呈剂量依赖关系（P〈0．01），其中维生素E（50μmol／L）组和NAC（10mmol／L）组抑制更加显著。结论体外制备的AOPP可显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，部分可能通过内源性ROS介导细胞内信号转导途径调节此过程，抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸可显著降低细胞ROS的生成量和显著抑制TGF-β1的分泌与基因表达。此研究揭示抗氧化剂在防治腹膜纤维化发生过程也许是一种可行的治疗策略。     

胎儿窘迫母血、脐血中AOPP水平与新生儿窒息的关系

目的探讨胎儿窘迫母血、脐血中晚期氧化蛋白产物（AOPP）水平与新生儿窒息的关系,为临床预防和早期处理胎儿窘迫和新生儿窒息提供实验室依据。方法应用Witko—Sarsat法加以改进检测胎儿窘迫组和对照组母血、脐血中AOPP水平,观察各组新生儿窒息的发生情况。结果①胎儿窘迫组母血及脐血中AOPP水平分别为139．89±12．82μmol／L,139．52±17．28μmol／L,对照组分别为104．67±11．63μmol／L,109．56±11．67μmol／L,胎儿窘迫组显著对照组,差异有显著性（P〈0．05）;②胎儿窘迫持续时间≥30min与持续时间〈30min相比较,脐血中AOPP有显著差异（158．38±8．03μmol／L vs131．43±13．36μmol／L,P〈0．05）;母血在胎儿窘迫不同持续时间段差异无显著性;③胎儿窘迫组新生儿窒息发生11例,其中轻度窒息9例,重度窒息2例,与脐血中AOPP的变化密切相关。结论氧化应激损伤与胎儿窘迫及新生儿窒息关系密切,检测脐血AOPP水平有助于评估胎儿窘迫和新生儿窒息。母血中AOPP水平与胎儿缺氧的关系有待进一步研究。     

晚期蛋白质氧化产物(AOPP)对血液透析患者单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响

目的探讨不同透析膜对维持性血液透析(MHD)患者晚期蛋白质氧化产物(AOPP)及单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响.方法通过高效液相色谱法和流式细胞术测定长期采用铜仿膜(CU)和聚砜膜(PSU)透析患者外周血晚期蛋白质氧化产物(AOPP)及单核细胞趋化因子受体CXCR2表达.结果 MHD 患者血浆 AOPP 水平明显增加 (P<0.05), 其中 CU 组为 (81.7±7.1) ng/ml; PSU 组为 (64.5±7.3)ng/ml,与正常对照组(49.3±6.1)ng/ml相比均有显著差异(P<0.01,P<0.05);而PSU组与CU组相比,外周血AOPP水平明显下降(P<0.05).CXCR2在正常人外周血单核细胞中无表达,而在尿毒症未透析组及血液透析组均有表达,其中未透析组表达较低,而血液透析组表达较高,CU膜血液透析组较PSU血液透析组表达要高(P<0.05).经相关分析结果显示:CU组与PSU组内AOPP水平与CXCR2表达均呈现良好的相关性(r=0.6409与0.583,P<0.05).结论血液透析通过血液-透析膜间相互反应,导致细胞内环境处于"氧化应激"状态,外周血AOPP水平明显增高;而增高的AOPP水平可活化单核细胞,表达CXCR2增多.然而不同透析膜对MHD患者AOPP及单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响有所不同,这些变化可能与透析膜的生物相容性有关.     

慢性阻塞性肺疾病患者血清晚期氧化蛋白产物水平变化的临床研究

目的 检测慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清晚期氧化蛋白产物（AOPP）的水平,探究AOPP与COPD的相关性及其临床意义.方法 纳入2011年4月至2013年11月来我院就诊的54例轻、中度COPD患者（COPD组）;同期收集30名健康志愿者作为健康对照组,两组一般情况相匹配.分别检测血清AOPP、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平.结果 健康对照组血清AOPP为（45.78±12.54） μmol/L、MDA为（2.96±0.55） μmol/L、SOD为（78.40±8.37） kU/L,COPD组血清AOPP为（68.93±10.62） μmol/L、MDA为（6.07±2.44） μmol/L、SOD为（53.66 ±5.99） kU/L,两组比较差异均有统计学意义（t值分别为-8.57、-9.14、14.38,P均＜0.01）.轻度COPD组患者血清AOPP为（65.56±9.65） μmol/L、MDA为（4.21±1.83） μmol/L、SOD为（62.97 ±6.28） kU/L,中度COPD组血清AOPP为（71.79±11.37） μmol/L、MDA为（7.43 ±3.12） μmol/L、SOD为（41.25 ±5.89） kU/L,两组比较差异均有统计学意义（t值分别为-2.17、-4.80、13.00,P＜0.05或P＜0.01）.结论 血清AOPP水平增高是COPD患者的重要病理变化,可能参与COPD的发生及发展过程,是反映COPD患者氧化应激损伤的早期敏感指标.     

急性心肌梗死患者血清晚期氧化蛋白产物水平的测定意义

目的:探讨血清晚期氧化蛋白产物水平在急性心肌梗死中的意义。方法:选择急性心肌梗死患者共50例,稳定型心绞痛50例,正常对照组40例;采用分光光度计法检测所有入选者的血清晚期氧化蛋白产物浓度。结果:两组冠心病患者血清晚期氧化蛋白产物水平均明显高于正常对照组(P<0.05),急性心肌梗死组血清晚期氧化蛋白产物水平高于稳定型心绞痛组(P<0.05)。结论:血清晚期氧化蛋白产物与急性心肌梗死的发生有关。     

尿毒症患者血清氧化蛋白产物水平及不同透析方式的清除效果

目的分析尿毒症患者血清氧化物蛋白产物水平与不同血液透析方式的清除效果。方法将尿毒症患者120例随机分成3组:HD组(单纯的血液透析)、HD+HP组(血液透析+血液灌流)、HD+HDP组(血液透析+血液透析过滤),每组各40例患者,同时以同期健康人、尿毒症没有进行透析者各40例作为参照。对尿毒症患者和健康组的D-二聚体、FIB(纤维蛋白原)、CRP(C反应蛋白)等指标进行检测。同时记录尿毒症患者血液透析前后血清氧化蛋白产物与颈动脉粥样斑块的变化。结果血液透析组与尿毒症没有透析组的D-二聚体、FIB、CRP、氧化蛋白产物指标明显高于健康组(P均0.05),且血液透析组患者的指标高于尿毒症没有透析组(P0.05)。1年后,HD+HP组与HD+HDP组患者血清氧化蛋白产物比HD组更低(P均0.05),且粥样斑块面积更小(P均0.05),颈动脉内膜厚度增加值更少(P均0.05)。结论 HD+HP和HD+HDP模式均能有效清除血清氧化蛋白产物和D-二聚体、FIB、CRP等指标,且HD+HDP模式清除氧化蛋白产物的效果更佳,有利于动脉粥样硬化的延缓。     

Advanced oxidation protein products play critical roles in liver diseases

There is a complex oxidant and antioxidant system that maintains the redox homoeostasis in the liver. While suffering from exogenous or endogenous risk factors, the balance between oxidants and antioxidants is disturbed and excessive reactive oxygen species are generated, resulting in oxidative stress. Oxidative stress is prevalent in various liver diseases and is thought to be involved in their pathophysiology. Advanced oxidation protein products are generated under conditions of oxidative damage and are newly described protein markers of oxidative stress. Previous studies have underscored the universal pathogenic roles of oxidation protein products in various diseases. However, investigations into how these products participate in the development of liver diseases have been superficial and insufficient. In this review, we highlight the current understanding of the roles of advanced oxidation protein products in liver disease pathogenesis and the underlying mechanisms. Moreover, we summarize the current studies on advanced oxidation protein products in infectious and noninfectious, acute and chronic liver diseases. Different strategies for targeting these advanced oxidation protein products and future perspectives, which may pave the way for developing new therapeutic strategies, will also be discussed here.