微小RNA-1291对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA-1291(miR-1291)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 通过公共数据库分析miR-1291在胃癌组织、正常胃组织中的表达。培养人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜上皮细胞GES-1,比较miR-1291表达水平。将miR-1291 mimic、miR-NC、miR-1291 inhibitor、miR inhibitor质粒分别转染至SGC-7901细胞,设为miR-1291组、miR-NC组、miR-1291 inhibitor组、miR inhibitor组。将BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI) mimic质粒、Vector质粒、sh-BAMBI质粒、sh-NC质粒分别转染至SGC-7901细胞中,设为BAMBI组、Vector组、sh-BAMBI组、sh-NC组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1291和BAMBI mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测BAMBI、转化生长因子-β(TGF-β)...     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的　探讨下调微小核糖核酸（ miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法　实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）法检测 miR-572,第 10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因 (phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶 2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（ HGC-27, AGS和 SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞 GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株 AGS细胞中加入 miR-572 inhibitor后, CCK8检测细胞活力; Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例; qPCR检测 miR-572, PTEN和 AKT2的表达量。结果　miR-572和 AKT2在胃癌细胞系 HGC-27（6.97±1.62,4.98±1.34）,AGS（7.21±1.32, 5.39±1.14）和 SGC-7901（5.97±1.44,4.02±1.02）中较正常胃黏膜上皮细胞 GES-1表达升高（ 1.00±0.24,1.00±0.21）, PTEN表达降低（ 0.49±0.16,0.39±0.11,0.54±0.33 vs 1.00±0.13）,差异均有统计学意义 (t=2.727~3.197,均 P＜ 0.05);与对照组比较,转染 miR-572 inhibitor后,miR-572和 AKT2在 AGS中表达下调 (P＜ 0.05),PTEN表达上调 (P＜ 0.05); CCK8实验结果显示转染 miR-572 inhibitor后,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞活力降低 (P＜ 0.05);Transwell实验发现,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞的侵袭和迁移能力降低 (P＜ 0.05);流式细胞实验结果表明,与对照组相比 miR-572抑制剂组细胞的凋亡比例降低 (P＜ 0.05)。结论　下调 miR-572可抑制胃癌细胞的凋亡、侵袭和迁移,其机制可能是通过 PTEN/AKT2信号通路。     

miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路调控甲状腺乳头状癌细胞凋亡

目的探讨miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的调控作用。 方法选取2015年7月至2017年11月新疆维吾尔自治区人民医院手术切除所得甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁组织冻存标本各60份。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测60例甲状腺乳头状癌组织及60例癌旁组织中miRNA-224-5p的相对表达量,二者比较采用配对资料t检验。将miRNA-224-5p（miRNA-224-5p组）与miRNA-224-5p抑制剂（miRNA-224-5p抑制剂组）分别转染到甲状腺乳头状癌细胞株GLAG-66中,通过RT-PCR检测两组中GLAG-66细胞内miRNA-224-5p的相对表达量,应用流式细胞仪检测两组GLAG-66细胞转染48 h后凋亡率,应用Western blot实验检测两组GLAG-66细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、TGF-β1、Smad4蛋白的相对表达量,并采用两个独立样本t检验进行比较。 结果miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量与癌旁组织比较明显升高,差异具有统计学意义［（4.175±0.523）vs（1.236±0.236）,t=9.675,P=0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞中miRNA-224-5p的相对表达量与miRNA-224-5p组比较明显下降,差异具有统计学意义［（0.381±0.078）vs（1.000±0.023）,t=19.785,P<0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞转染48 h后的凋亡率与miRNA-224-5p组比较明显增高,差异具有统计学意义［（18.66%±0.98%）vs（3.78%±0.36%）,t=17.561,P<0.001］。miRNA-224-5p抑制剂组和miRNA-224-5p组比较,GLAG-66细胞中Bcl-2、TGF-β1和Smad4蛋白的相对表达量明显降低,差异具有统计学意义［（0.197±0.008）vs（0.278±0.013）,t=8.259,P=0.001;（0.117±0.013）vs（0.227±0.012）,t=13.269,P<0.001;（0.268±0.012）vs（0.439±0.016）,t=9.897,P=0.001］;Bax、Cleaved-Caspase3蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义［（0.286±0.011）vs（0.159±0.009）,t=12.569,P<0.001;（0.128±0.009）vs（0.083±0.010）,t=7.693,P=0.002］。 结论miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,下调miRNA-224-5p可以促进甲状腺乳头状癌细胞的凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。     

紫杉醇联合miR-200a对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

目的观察紫杉醇联合应用 miR-200 a 对胃癌 SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法体外应用50 nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞或联合应用脂质体转染miR-200 a模拟物（miR-200a mimics）,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平和周期分布,克隆形成试验观察细胞的增殖能力,Tr-answell实验和细胞划痕试验观察细胞的侵袭迁移能力。通过以上实验比较单独应用紫杉醇与联合应用miR-200 a对胃癌细胞增值侵袭能力影响的差异,并探讨可能的作用机制。结果流式细胞凋亡检测表明50 nmol/L紫杉醇联合应用 miR-200a 细胞早期凋亡率高于单独用药组[（22.79±0.43）％ vs．（11.76±0.64）％,P＜0.05],联合组阻滞于G2/M期细胞比例（63.74±1.76）％高于单独应用紫杉醇组的（51.75±2.01）％,结果具有统计学差异（ P＜0.01）;细胞克隆形成实验显示联合用药组克隆形成率与紫杉醇组相比[（4.03±0.25）％vs．（7.80±0.30）％]显著降低（P＜0.01）;Transwell侵袭实验表明联合用药组穿过小室的细胞数目少于紫杉醇组（22.00±2.00 vs．56.33±5.13,P＜0.01）;细胞划痕试验表明在划痕后48 h,联合组细胞迁移水平与单独用药组迁移率已有显著降低[21.43±2.34）％ vs．（54.26±2.49）％, P ＜0.01]。结论紫杉醇联合应用miR-200 a能增加紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用,为今后胃癌的化疗及基因靶向治疗提供新的思路。     

miR-29a在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘要：目的：检测miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平并探讨其对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。 方法：用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-29a的表达水平;用脂质体法将miR-29a mimic及miR-29a inhibitor分别转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过MTT实验和 Transwell实验观察miR-29a对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响;miRanda软件预测miR-29a的靶基因,western blot验证其表达结果。 结果：荧光定量RT-PCR检测结果表明,与癌旁组织（2.17±0.89）比较,miR-29a在乳腺癌组织（5.65±1.45）中的表达水平上调（t=3.94,P＜0.01）;MTT实验和Transwell实验结果显示,与mimics阴性对照组［（106.36±5.15)%,(216.70±7.20）个］相比,miR-29a mimics组［（133.32±6.31）%,(294.30±8.60)个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力增加（t分别为3.36和6.85,P均＜0.01）;与inhibitor阴性对照组［（105.35±3.42）%,(240.30±9.50）个］相比,miR-29a inhibitor组［（66.63±3.82）%,(156.30±7.80）个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力降低（t分别为8.18和6.81,P均＜0.01）。miRanda软件预测人第10号染色体缺失的同源性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）可能为miR-29a的靶基因。western blot结果显示,与mimics阴性对照组（0.55±0.01）相比,乳腺癌细胞转染miR-29a mimic后,其PTEN蛋白质的表达水平（0.22±0.01）下调（t=14.29,P＜0.01）;与inhibitor阴性对照组（0.49±0.02）相比,转染miR-29a inhibitor后,PTEN蛋白质的表达水平（1.25±0.02）上调（t=19.39,P＜0.01）。 结论：miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平增高,并可能通过下调PTEN蛋白的表达促进乳腺癌细胞的增殖和转移。     

上皮性卵巢癌患者血和组织miR-200b表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中微小RNA-200b(miR-200b)的表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性。方法回顾性选取解放军第九七医院44例经手术病理确诊的上皮性卵巢癌患者为上皮性卵巢癌组,另同期选取32例因子宫腺肌病、子宫肌瘤和其它非卵巢病变行手术切除者为对照组。通过实时荧光定量PCR法对两组患者血浆和卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平进行检测;将人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞分为空白对照组(未转染任何质粒)、阴性对照组(转染非特异序列siRNA)及实验组(转染miR-200b抑制物)。采用transwell细胞侵袭实验以观察肿瘤细胞的侵袭能力,并采用Western blot法测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,并用实时荧光定量PCR法对MMP-9 mRNA相对表达量进行检测。结果上皮性卵巢癌组血浆中miR-200b mRNA的表达水平较对照组明显升高,且卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平较对照组亦明显升高(P 0. 01)。miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组miR-200b mRNA表达水平较空白对照组、阴性对照组明显下降(P 0. 01)。Transwell细胞侵袭实验结果发现,miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组transwell小室下层细胞数量较空白对照组、阴性对照组明显减少(P 0. 01)。相比空白对照组、阴性对照组,干扰miR-200b基因表达后实验组SK-OV-3细胞中MMP-9蛋白和mRNA的表达水平均显著下降(P 0. 01)。结论 MiR-200b高表达于上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中,其可能通过调节MMP-9蛋白和mRNA的表达水平以诱导上皮性卵巢癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-1976在帕金森综合征中的作用

目的探讨miR-1976在帕金森综合征(PD)中的作用。方法选取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,随机将细胞分为四组,空白对照组、模型组、miR-1976抑制剂(inhibitor)转染组和空白转染组。空白对照组常规培养,不做处理,模型组采用1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型,miR-1976 inhibitor转染组转染miR-1976 inhibitor质粒,空白转染组转染空白质粒。采用MMT法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,荧光定量PCR检测自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅰ/ⅡmRNA表达,Western blot检测各组Beclin1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达。结果模型组和miR-1976 inhibitor转染组培养24 h、48 h和72 h时OD值明显低于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组细胞凋亡率分别为(14.221±2.816)%和(11.016±2.910)%,明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组Beclin1 mRNA和LC3Ⅰ/ⅡmRNA相对表达明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05),而miR-1976相对表达量明显低于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白相对表达明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05)。结论 miR-1976在PD中有重要作用,miR-1976低表达可抑制神经细胞增殖,促进细胞凋亡及自噬。     

下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响

目的 研究抑制miR-767-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法 体外培养乳腺癌细胞，将miR-767-5p inhibitor和inhibitor-NC转染到乳腺癌细胞中。细胞分为3组：空白对照组（Control组），miR-767-5p inhibitor组和inhibitor-NC组，采用CCK-8法、Transwell法、划痕实验检测miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和胰岛素样生长因子-1(IGF1)的靶向结合作用。RT-qPCR和Western blot实验检测IGF1 mRNA和蛋白的表达水平。采用Western blot检测EMT相关蛋白的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示，与Control组和inhibitorNC组相比，miR-767-5p inhibitor组显著抑制MCF-7细胞的增殖（P <0.05）。Transwell实验结果表明，与Contr...     

miR-155-5P在脓毒症急性肺损伤时调控肺泡巨噬细胞IL-6、MIP-2的表达对中性粒细胞迁移的影响

目的探讨脓毒症急性肺损伤（ALI）时miR-155-5P对肺泡巨噬（MH-S）细胞白介素6、巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）表达的调控作用及中性粒细胞迁移的影响。 方法培养小鼠MH-S细胞并将其分为对照组、脓毒症组和miR-155-5P抑制物组,miR-155-5P抑制物组预先通过miR-155-5P antagomir完成转染,采用脂多糖干预脓毒症组和miR-155-5P抑制物组12 h,应用RT-PCR检测3组MH-S细胞miR-155-5P、白介素6 mRNA和MIP-2 mRNA的表达,酶联免疫吸附实验检测细胞悬液中白介素6和MIP-2的浓度;再次将MH-S分为上述3组培养在transwell板的下室,CFSE荧光染料标记的中性粒细胞培养在上室,脂多糖干预后应用流式细胞术分别检测上室与下室细胞的荧光值,计算中性粒细胞的迁移率。 结果脓毒症组MH-S细胞的miR-155-5P（8.04±0.65）、白介素6 mRNA（57.05±6.88）和MIP-2 mRNA（52.98±2.58）较对照组（1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00）表达明显上调（P<0.05）;白介素6［（50.85±0.12）pg/ml］、MIP-2［（69.96±1.40）pg/ml］的浓度和中性粒细胞迁移率（64.36%）较对照组［（38.58±0.13）pg/ml、（56.00±0.29）pg/ml、30.98%］均显著增加（P<0.05）。而miR-155-5P抑制物组细胞的miR-155-5P表达（0.19±0.35）低于对照组（P<0.05）,白介素6 mRNA（39.66±3.65）、MIP-2 mRNA（31.01±2.88）的表达及白介素6［（42.45±1.08）pg/ml］、MIP-2［（59.01±1.63）pg/ml］的浓度也高于对照组（P<0.05）,而低于脓毒症组（P<0.05）。 结论脓毒症ALI时,肺泡巨噬细胞miR-155-5P基因高度表达,促炎因子白介素6 mRNA、MIP-2mRNA的表达均明显上调,其促进白介素6、MIP-2的产生,使中性粒细胞大量趋化迁移至肺内,造成肺损伤;而抑制miR-155-5P的表达,可以抑制白介素6、MIP-2的产生,从而减少中性粒细胞的趋化迁移,起到肺保护作用。     

miR-497在乳腺癌中的表达及其机制研究

目的检测miR-497在乳腺癌组织中的表达水平,探讨其在乳腺癌细胞中的作用机制。方法 qRT-PCR法检测36例乳腺癌患者癌组织及癌旁组织中miR-497的表达水平;采用脂质体法将miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor和inhibitor NC分别转入MDA-MB-231乳腺癌细胞系,通过MTT实验和细胞迁移实验分析miR-497对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响;采用靶基因预测软件Targetscan human release7.1预测miR-497的靶基因,western blot验证miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor和inhibitor NC对靶基因蛋白的影响。结果 qRT-PCR结果显示,与癌旁组织(7.76±1.58)比较,miR-497在乳腺癌组织中的表达水平(2.12±1.04)明显降低(t=17.85,P0.01);MTT实验结果显示,与mimics NC组[(104.36±3.25)%]比较,转染miR-497 mimics组[(67.56±4.11)%]的细胞增殖能力明显减弱(t=13.1,P0.01);细胞迁移实验证实,与mimics NC组比较,转染miR-497 mimics后的细胞迁移能力减弱(272.3±8.5 vs 173.6±7.1,P0.05);与inhibitor NC组比较,转染miR-497 inhibitor后细胞迁移能力增强(269.5±7.3 vs 346.1±13.5,P0.01);靶基因预测软件预测HSP40可能是miR-497的靶基因;western blot结果显示,与mimics NC组比较,miR-497 mimics转染后的HSP40蛋白表达水平下调(P0.01);而与inhibitor NC组比较,转染miR-497 inhibitor后其HSP蛋白的表达水平升高(P0.01)。结论 miR-497可能通过靶向HSP40抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移,从而对乳腺癌进程起到调节作用。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

微小RNA-142-3p在脓毒症患者血清中的表达及其临床意义

目的通过观察脓毒症患者血清中微小RNA-142-3p（miR-142-3p）的表达,探讨其与脓毒症的关系。 方法选取41例脓毒症患者作为研究对象,同期住院的非脓毒症患者20例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清中miR-142-3p的表达,酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测白细胞介素6（IL-6）和IL-10的表达。采用Spearman相关分析miR-142-3p与患者临床特点和实验室指标的相关性,受试者工作特征（ROC）曲线评价miR-142-3p、IL-6、IL-10、C反应蛋白（CRP）、前降钙素原（PCT）、白细胞计数和乳酸表达水平对脓毒症的预测价值。 结果脓毒症组患者的白细胞计数[（14.4 ± 7.8）× 10⁹/L vs.（8.4 ± 2.1）× 10⁹/L,t = 4.571,P < 0.001]、CRP [（127 ± 80）mg/L vs.（80 ± 45）mg/L,t = 2.436,P= 0.018]、乳酸[（2.3 ± 1.8）mmol/L vs.（1.5 ± 0.6）mmol/L,t = 2.421,P = 0.019]、PCT [5.70（1.49,26.37）μg/L vs. 0.25（0.10,0.63）μg/L,Z= 75.500,P < 0.001]、IL-6 [342.33（64.98,2 618.44）ng/L vs. 14.95（3.21,54.51）ng/L,Z = 84.000,P < 0.001]、IL-10 [23.16（6.19,85.56）ng/L vs. 2.75（1.39,5.36）ng/L,Z = 198.500,P = 0.001]和miR-142-3p [95.74（23.19,278.23）vs. 25.64（18.59,56.05）,Z = 222.000,P = 0.004]均显著高于对照组。miR-142-3p与乳酸、IL-6、PCT均呈正相关（r = 0.427、0.340、0.309,P = 0.005、0.030、0.049）。根据脓毒症患者28 d生存情况分为存活组（29例）和死亡组（12例）。存活组的急性病生理学与长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分[（14 ± 6）分vs.（25 ± 6）分]、序贯性器官衰竭估计（SOFA）评分[（6.0 ± 2.8）分vs.（10.7 ± 3.5）分]和乳酸[（1.6 ± 1.0）mmol/L vs.（3.8 ± 2.6）mmol/L]水平均显著低于死亡组（t = 5.406、4.482、2.835,P均< 0.05）。ROC曲线分析结果显示,miR-142-3p [曲线下面积（AUC）= 0.729,95%CI（0.602,0.856）,P = 0.004]、IL-6 [AUC = 0.898,95%CI（0.820,0.975）,P < 0.001]、CRP [AUC = 0.698,95%CI（0.566,0.831）,P = 0.013]、PCT [AUC = 0.908,95%CI（0.835,0.981）,P < 0.001]、IL-10 [AUC = 0.758,95%CI（（0.631,0.885）,P = 0.001]和白细胞计数[AUC = 0.776,95%CI（0.659,0.893）,P = 0.001]对脓毒症均有预测价值。 结论脓毒症患者血清中miR-142-3p的表达升高,且与乳酸、IL-6、PCT呈正相关,其在脓毒症发生发展中可能发挥着重要作用。     

SH2B1沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的研究沉默SH2B1基因表达对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,采用SH2B1 siRNA转染SGC-7901细胞作为研究组,采用国际通用的与所有基因均无同源序列的non-target siRNA转染作为阴性对照组(NC组),以未经处理的胃癌SGC-7901细胞作为空白对照组(BC组),48h后收集各组转染成功细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SH2B1 mRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SH2B1蛋白表达情况;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-9、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果研究组SGC-7901细胞SH2B1蛋白及mRNA表达量较BC组和NC组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染后,siRNA组SGC-7901细胞增殖明显受到抑制、平板克隆形成率较BC组和NC组明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC和NC组比较,研究组SGC-7901细胞PI3K、p-AKT蛋白、Ki67及PCNA蛋白呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),Caspase-9蛋白呈高表达,AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默SH2B1基因表达可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制SGC-7901细胞增殖,促进凋亡。     

微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究

目的研究微小RNA（microRNA）在体外循环（CPB）诱导的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者中表达,并初步探讨其机制。 方法设定体外循环转流开始前（T1）、转流结束后4 h（T2）、术后8 h（T3）、术后16 h（T4）等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术加以验证。酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数。Pearson相关性分析研究microRNA-320（miR-320）与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分的相关性。体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8（CCK-8）法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响。 结果在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义（t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均< 0.001）,其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度（0.28 ± 0.09）最为显著,而miR-320的增高程度（1.62 ± 0.12）最为显著（P均< 0.05）。qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平（1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08）逐渐升高,差异有统计学意义（F=20.648,P < 0.05）。CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[（110 ± 10）ng/L vs.（254 ± 16）ng/L]、IL-6[（86 ± 8）ng/L vs.（165 ± 11）ng/L]、呼吸指数[（0.182 ± 0.021）vs.（0.381 ± 0.032）]均增高,氧合指数[（350 ± 22）vs.（245 ± 18）]下降,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关（r=0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P均< 0.05）,而与氧合指数呈负相关（r=-0.745,P < 0.05）。pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率[（82% ± 8%）vs. 100%]、凋亡率[（20.0% ± 1.1%）vs.（9.4% ± 0.8%）]相比,差异均具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能。     

免疫性血小板减少症患者的细胞免疫功能研究

目的探讨免疫性血小板减少症（ITP）患者免疫功能状态。 方法选取2016年5月至2017年2月在中国中医科学院西苑医院与北京中医药大学东方医院门诊就诊的ITP确诊患者40例,其中慢性22例（慢性组）、新诊断9例（新诊断组）、持续性9例（持续性组）,24名健康者作为对照（对照组）。应用流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17、Treg、Breg细胞的表达。ITP组与对照组比较采用Wilcoxon检验,多组之间的比较采用Kruskal-Wallis检验。 结果ITP患者Th1、Th1/Th2高于健康对照组[（16.88±9.02）% vs（8.83±5.30）%、（10.9±9.08）% vs（4.61±3.13）%],差异具有统计学意义（Z=-3.753,P=0.001;Z=-3.596,P=0.001）,Th17、Breg、Th17/Treg低于对照组[（1.02±0.37）% vs（1.41±0.38）%、（1.35±1.37）% vs（2.07±0.86）%、（1.01±0.37）% vs（0.3±0.05）%],差异具有统计学意义（Z=-3.141,P=0.002;Z=-5.963,P=0.001;Z=-1.693,P=0.009）。新诊断组、持续性组和慢性组3组的Th1、Th1/Th2均高于健康对照组[（16.12±7.72）% vs（13.11±3.83）% vs（18.75±10.38）% vs（8.83±5.3）%、（11.63±8.77）% vs（7.77±3.43）% vs（12.03±10.65）% vs（4.61±3.13）%],差异具有统计学意义（Z=14.83,P=0.002;Z=13.363,P=0.004）;3组的Th17、Breg、Th17/Treg均低于健康对照组[（0.91±0.28）% vs（0.98±0.54）% vs（1.07±0.33）% vs（1.41±0.38）%、（1.77±1.58）% vs（1.14±0.52）% vs（1.26±1.54）% vs（2.07±0.86）%、（0.15±0.07）% vs（0.16±0.09）% vs（0.18±0.01）% vs（0.3±0.05）%],差异具有统计学意义（Z=10.04,P=0.018;Z=35.731,P=0.001;Z=3.200,P=0.030）;3组Th2细胞和Treg细胞与健康对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3组之间Th1、Th1/Th2、Th17、Breg、Th17/Treg等指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论ITP免疫发病机制包括T和B细胞功能紊乱,T细胞表现为Th1/Th2与Th17/Treg失衡。不同分型ITP患者免疫细胞表现差异性不明显。     

老年2型糖尿病患者肠道菌群多样性及其炎症因子与胰岛素抵抗的相关性研究

目的探讨老年2型糖尿病（T2DM）患者肠道菌群多样性及其炎症因子的变化与胰岛素抵抗的相关性。 方法选取80例老年T2DM患者作为T2DM组,另选取80例健康体检者作为对照组,检测两组患者肠道菌群拟杆菌、普雷沃氏菌、乳杆菌、双歧杆菌和肠杆菌数量。测定并计算两组患者的稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,同时比较两组患者的白细胞介素6（IL-6）、IL-10、IL-22、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ）水平。采用Pearson相关性分析老年T2DM患者肠道不同菌群与HOMA-IR相关性,肠道不同菌群与各炎症因子的相关性。 结果老年T2DM组的拟杆菌[（10.0 ± 0.3）logN/g vs.（8.1 ± 0.9）logN/g]和肠杆菌[（9.86 ± 0.27）logN/g vs.（7.05 ± 0.19）logN/g]的菌落数显著高于对照组（t = 3.162、3.016,P均< 0.05）,普雷沃氏菌[（7.22 ± 0.27）logN/g vs.（9.35 ± 0.39）logN/g]、乳杆菌[（5.12 ± 0.25）logN/g vs.（7.67 ± 0.43）logN/g]和双歧杆菌[（7.2 ± 0.4）logN/g vs.（11.0 ± 0.5）logN/g]的菌落数显著低于对照组（t = 5.230、4.163、7.115,P均< 0.05）。T2DM组的HOMA-IR[（6.4 ± 0.8）vs.（3.1 ± 0.4）]、IL-6[（154 ± 15）ng/L vs.（81 ± 10）ng/L]、IL-22[（628 ± 36）ng/L vs.（106 ± 11）ng/L]、TNF-α[（208 ± 23）ng/L vs.（118 ± 11）ng/L]和IFN-γ[（136 ± 15）ng/L vs.（76 ± 13）ng/L]的水平显著高于对照组（t = 7.156、3.167、5.026、3.557、2.134,P均< 0.05）,而IL-10[（127.7 ± 18.7）ng/L vs.（376.8 ± 1.8）ng/L]水平显著低于对照组（t = 2.272,P < 0.05）。相关性分析结果显示,普雷沃氏菌、肠杆菌与血浆HOMA-IR呈显著正相关（r =0.613、0.437,P均< 0.05）,拟杆菌、乳杆菌和双歧杆菌与HOMA-IR呈显著负相关（r = -0.617、-0.575、-0.616,P均< 0.05）。拟杆菌、普雷沃氏菌、乳杆菌和双歧杆菌数量与IL-6（r = -0.617、-0.526、-0.575、-0.616,P均< 0.05）、IL-22（r = -0.636、-0.587、-0.621、-0.573,P均< 0.05）、TNF-α（r = -0.593、-0.633、-0.476、-0.539,P均< 0.05）和IFN-γ（r = -0.475、-0.538、-0.602、-0.573,P均< 0.05）水平呈显著负相关性,与IL-10呈显著正相关性（r = 0.535、0.623、0.459、0.506,P均< 0.05）;肠杆菌与IL-6、IL-22、TNF-α和IFN-γ水平呈显著正相关性（r = 0.437、0.599、0.576、0.518,P均< 0.05）,与IL-10呈显著负相关性（r = -0.518,P < 0.05）。 结论老年T2DM患者肠道菌群与胰岛素抵抗具有相关性,推测其机制可能与炎症因子水平有关。     

尿胰蛋白酶抑制剂对重症结核病患者的免疫调节作用

目的探究尿胰蛋白酶抑制剂（UTI）对重症结核病患者的免疫调节作用。 方法选取杭州市红十字会医院2015年1月至2017年11月收治的84例重症结核病患者,采用随机数字表法分为UTI组和对照组,每组各42例。对照组给予常规治疗,UTI组在常规治疗基础上于入住ICU第2天给予UTI 10万单位静脉注射,每8小时1次,连续治疗7 d。比较两组患者的一般资料、急性病生理学和长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分和外周血液中白细胞介素2（IL-2）、IL-6、IL-10、IL-12、干扰素γ（INF-γ）、转化生长因子β（TGF-β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、Tregs细胞及诱导性共刺激分子（ICOS）⁺Tregs细胞表达水平。 结果治疗后,UTI组及对照组重症结核病患者APACHEⅡ评分[（22.5 ± 2.2）分vs.（25.8 ± 1.5）分,t = 2.025,P = 0.043]、IL-6 [（137 ± 33）ng / L vs.（116 ± 42）ng / L,t = 2.785,P = 0.045]、IL-10 [（29 ± 6）ng / L vs.（26 ± 5）ng / L,t = 2.143,P = 0.039]、IL-12 [（84 ± 26）ng / L vs.（65 ± 22）ng / L,t = 2.009,P = 0.043]、TGF-β [（8.5 ± 2.3）ng / L vs.（9.8 ± 2.8）ng / L,t = 1.613,P = 0.045]、CD8⁺T淋巴细胞[（43 ± 13）% vs.（38 ± 12）%,t = 1.856,P = 0.043]及Tregs细胞[（5.8 ± 1.1）% vs.（5.1 ± 0.9）%,t = 1.645,P = 0.045]比率比较,差异均有统计学意义;而IL-2[（835 ± 188）ng / L vs.（744 ± 324）ng / L,t = 0.656,P = 0.458]、INF-γ [（200 ± 88）ng / L vs.（203 ± 78）ng / L,t = 0.912,P = 0.061]、TNF-α [（854 ± 256）μg / L vs.（808 ± 213）μg / L,t = 0.956,P = 0.785]、CD4⁺T淋巴细胞[（48 ± 8）% vs.（49 ± 14）%,t = 0.756,P = 0.985]及ICOS⁺Tregs细胞[（1.0 ± 0.7）% vs.（1.0 ± 0.9）%,t = 0.956,P = 0.089]比率比较,差异均无统计学意义。 结论UTI能够调节危重症结核病患者的细胞免疫,减轻重症结核病患者体内炎症因子的释放,从而改善其APACHEⅡ评分及预后。