双青豆凝集素的纯化与部分性质研究

经抽提，盐析，亲和层析分离纯化得到双青豆凝集素，其使新鲜兔红细胞产生的血凝作用所需最低浓度为０．５μｍ／ｍｌ其溶液用苯酚－硫酸显色证明为糖蛋白，含糖量为４．９％（Ｗ／Ｗ），亚基分子量为３２ｋｄ，双青豆凝集素的专一结合的糖为Ｎ－乙酰半糖胺，蜜二糖，棉子糖，半乳糖和乳糖，无血型专一性，双青豆凝集素有较高的热稳定性，去金属离子可使其活性丧失。     

番茄凝集素的甲壳素亲和层析纯化

番茄果实经中性盐溶液提取,硫酸铵沉淀,甲壳素柱亲和层析和CM-纤维素离子交换层析,得纯番茄凝集素;对其化学组成及细胞凝集作用进行了实验研究。     

红芸豆红细胞凝集素单体的分离纯化和性质研究

目的 研究一种从红芸豆中提取红细胞凝集素单体(PHA-E)的新方法.方法 红芸豆经过浸提,离子交换树脂分离,分子筛层析纯化后得到PHA-E样品.采用电泳法测定其纯度、分子量和等电点.用2%人细胞悬液测定样品凝集红细胞的能力和影响凝血的因素,使用硫酸苯酚法测定其糖含量.结果 经PAGE分析PHA-E样品为单带电泳纯,SDS-PAGE上显示亚基分子量为32 kD,等电点为6.5.样品使人红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg/ml左右.单糖不影响PHA-E凝血活力,EDTA抑制其凝血活力,Zn2+促进其凝血.糖含量为8.1%.     

一种新的凝集素——棕榈树凝集素的分离纯化及理化性质的研究

凝集素是具有高度特异性的糖结合蛋白,除了其特有的生物学功能外,凝集素在生物医学中有着广泛的用途,寻找和纯化新的凝集素对生物医学研究有重要的意义。本研究在发现了棕榈树凝集素的基础上,用亲和层析法从棕榈树中纯化了这种新的凝集素,并对其理化性质和生物学特性进行了研究。     

苍耳子凝集素的分离纯化和某些性质研究

苍耳子仁粉碎后用０．１５ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ、０．００１ｍｏｌ·Ｌ－１ｐＨ７．０磷酸缓冲液抽提，硫酸铵沉淀及乳糖－淀粉凝胶柱亲和层析，分离纯化得到苍耳子凝集素。经聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝Ｒ２５０染色，显示一条蛋白带，其溶液用苯酚－硫酸显色证明是糖蛋白。苍耳子凝集素使新鲜兔红细胞产生血凝作用所需最低浓度为６．８μｇ·ｍｌ－１。苍耳子凝集素的专一结合的糖为２－乙酰氨基－２－脱氧－Ｄ－半乳糖、棉子糖、乳糖和半乳糖。它对人Ａ、Ｂ、Ｏ型血和人精子均有凝集作用。苍耳子凝集素具有较强的耐热性，反复冻融对其活性影响甚小。     

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 ,可用于实验室中细胞膜受体的研究     

沙克沙豆凝集素的分离纯化及其性质的研究

用PBS抽提、硫酸铵分段沉淀及猪甲状腺球蛋白—Sepharose 4B亲和层析可从腰点沙克沙(phaseolus vulgaris L)中分离得沙克沙凝集素,达到电泳纯。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳得出一条带,分子量为30.26×10~3u,表明该凝集素由单一亚基组成。其含糖量为5%。该凝集素能凝集兔、小鼠、鸡、人A、B、O红细胞,其凝集作用可被猪甲状腺球蛋白明显抑制。该凝集素可有效地促进淋巴细胞转化和分裂;体外实验表明,它可凝集Sp 2/0骨髓瘤细胞。     

猪脑钙调素的分离、纯化及鉴定

作者用苯-琼脂糖(Phenyl-Sepharose)亲和层析等方法从猪大脑组织中分离纯化出钙调素。经鉴定,PAGE板电泳呈现一条带;产率:4.2mg/100g大脑;分子量,经SDS-PAGE测定为14.1±1.0kd(含1mmol/L CaCl_2)和164.9±1.2kd(含1mmol/L EGTA),pI=4.35;对猪脑依赖钙调素磷酸二酯酶激活6.5倍,其激活作用被三氟拉嗪抑制。     

钉螺凝集素的分离纯化及免疫活性的研究

目的:探讨湖北钉螺体内凝集素的提取纯化方法及其免疫活性。方法:钉螺原浆用30%硫酸铵进行粗提,Sepharose-4B亲和层析,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酸胺(SDS-PAGE)凝胶电泳对纯化后的凝集素进行浓度测定,并计算相对分子质量。用纯化后的凝集素行促血淋巴细胞吞噬杀菌实验、抑菌实验,并检测2.5 mg.ml-1的D-葡萄糖、蔗糖、D-半乳糖、EDTA对凝集素免疫活性的影响。结果:Sepharose-4B亲和层析对钉螺凝集素的纯化具有特异性,钉螺亚基相对分子质量约为57 kD;凝集素能促使血淋巴细胞吞噬和杀灭细菌,对细菌生长有抑制作用,上述免疫活性能被D-半乳糖和EDTA抑制。结论:钉螺体内存在半乳糖凝集素,并有促噬杀、抑菌活性,能为EDTA所抑制。     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药堂叶半夏（Ｐｔｎｅｌｌｉａ ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ Ｓｅｈｏｔｔ）中通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝生的凝信要素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ｐｉｎｅｌｌｉａ ｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａ ｌｅｃｔｉｎ Ａ，ＰＰＬ－Ａ）ｄ ＰＡＧＥ＇ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定     

双青豆凝集素的纯化与部分性质研究

经抽提、盐析、亲和层析分离纯化得到双青豆凝集素，其使新鲜兔红细胞产生血凝作用所需最低浓度为０．５μｇ／ｍｌ。其溶液用苯酚－硫酸显色证明为糖蛋白，含糖量为４．９％（Ｗ／Ｗ），亚基分子量为３２ｋｄ。双青豆凝集素的专一结合的糖为Ｎ－乙酰半乳糖胺、蜜二糖、棉子糖、半乳糖和乳糖。无血型专一性。双青豆凝集素有较高的热稳定性。去金属离子可使其活性丧失。     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药掌叶半夏（ＰｔｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａＳｃｈｏｔｔ）中通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝活性的凝集素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａｌｅｃｔｉｎＡ，ＰＰＬ－Ａ）。在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其Ｍｒ为１６．３×１０３，用等电聚焦电泳测得其等电点为５．８，经ＤＮＳ－Ｃｌ分析法分析其氨基末端为丙氨酸。对所含的１８种氨基酸作了定量分析。通过Ｓｃｈｉｆｆ试剂电泳染色法鉴定ＰＰＬ－Ａ为糖蛋白，用酶标凝集素结合法分析了糖链的结构，糖链部分含有甘露糖，岩藻糖和乙酰氨基葡萄糖。     

严重冷凝集素致血型鉴定困难

在配血工作中,我们遇到1例患者因严重冷凝集素所致血型鉴定困难,现报告如下。1病例简介患者,男,52岁,因临床诊断为溶血性贫血入院治疗。经化验检查:Hb 60 g/L,RBC 2.10×1012/L。因患者贫血较重,需输血治疗。医院血库人员给患者检验血型,在正定型和反定型中均出现明显凝集,无法     

人血浆中MBL-MASP复合物的纯化与分离

目的从人血浆中分离纯化甘露聚糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)。方法用非活化Sepharose 4B两步亲和层析纯化MBL-MASP复合物．再以Sephacryl S-300柱凝胶过滤将MBL和MASP分离。在纯化MBL—MASP复合物的整个过程中，除凝胶过滤缓冲液外，均加入丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲磺酰氟(PMSF)和金属蛋白酶抑制剂1．10-邻二氮杂菲(1，10-phenanthroline)．并控制温度在4℃。结果获得高度纯化的MBL和酶原形式的MASP。SDS—PAGE和Western blotting表明所纯化的MBL相对分子质量为28000和32000肽链构成的功能性多聚体；配体结合测定和酵母菌凝集试验证实所纯化的MBL具有生物学活性：结论建立了一种比较简便的同时分离纯化MBL和MASP酶原的方法。