移植周围神经修复脊髓损伤

脊髓损伤后的修复仍是当今医学领域的一大难题。脊髓损伤后神经再生和功能修复的研究虽然已进行了百年,但还存在许多问题。近年来,人们试图通过周围神经或其他组织移植,以改善脊髓损伤部位的微循环,促进损伤的脊髓再生修复,已取得了一定进展〔１～７〕。但较功能恢复...     

周围神经移植修复脊髓损伤的实验研究

目的：探讨自体坐骨神经移植修复脊髓损伤的可行性。方法：将58只雌性Wistar大鼠分为二组，实验组：采用显微外科技术，将50只大鼠于T13水平切除左半侧脊髓10mm，再取右侧坐骨神经10mm移植到脊髓缺损处，近端接脊髓，远端接马尾，分别于术后2、4、6、8、12、22周在光镜和电镜下观察移植处坐骨神经、吻合口远端马尾神经、左后肢坐骨神经再生情况，并用摄像机记录患肢功能恢复情况。对照组：8只大鼠，于13水平切除左半侧脊髓10mm，不移植坐骨神经，观察脊髓缺损远端马尾神经和左右肢坐骨神经再生情况。结果：对照组坐骨神经的轴突及髓鞘部分崩解，密度降低，无再生轴突形成。实验组术后4周电镜下偶见移植处坐骨神经髓鞘及轴突形成，术后8周光镜及电镜下可见较多细的有髓神经纤维，22周时接近正常；同时观察到左后肢坐骨神经再生；大鼠后肢功能部分恢复，肌力达3级。结论：大鼠脊髓损伤后有再生能力，周围神经移植修复脊髓损伤是可行的。     

周围神经不同移植方式修复治疗损伤脊髓的实验研究

目的：探讨自体肋间神经不同移植术式对治疗损伤脊髓疗效的影响。方法：采用SD大鼠，经T8、T9平面切除4mm长的半侧脊髓制成脊髓半切伤模型，用6～8条纤细的肋间神经节段按近端白质-远端灰质和近端白质-远端白质两种桥接术式填充缺损处，对照组用明胶海绵填充脊髓半切残腔。饲养4～6周，观察其后肢活动功能、斜板试验及运动功能，光镜下观察植入区的组纵结构。结果：两种术式受试鼠的后肢功能部分恢复，镜下见移植组织存活、充填于缺损处，部分与脊髓组织融合。组织、功能的恢复均明显优于对照组，但两种术式间无明显差别。结论：自体肋间神经的植入对损伤脊髓有一定的疗效，但不同的桥接术式之间无明显差别。     

周围神经移植联合神经营养因子修复脊髓传导束的实验研究

目的探讨周围神经移植联合神经营养因子修复脊髓传导束的可行性并观察其再生的情况。方法121只Wistar雄性大鼠被随机分成5组,A组(实验组,n=25):在T9水平横行切断脊髓并切除5mm,植入肋间神经和含酸性成纤维因子(acidicfibroblastgrowthfactor,aFGF)纤维蛋白凝胶;B组(水平对照组1,n=25):同法制备脊髓横断模型,断端间由含aFGF的纤维蛋白凝胶填充;C组(水平对照组2,n=25):同法制备脊髓横断模型,断端间植入肋间神经和不含aFGF的纤维蛋白凝胶;D组(水平对照组3,n=25):同法制备脊髓横断模型,断端间旷置;E组(空白对照组,n=21):仅行椎板切除术。通过BDA顺行神经示踪、FG逆行神经示踪、运动诱发电位(MEP)和大鼠BBB后肢运动功能评分,观察脊髓传导束再生的情况。结果A组在损伤区有BDA标记的神经纤维通过,在颈髓背角和腹侧角、脑干中缝核和红核、网状结构、前庭侧核以及在大脑运动皮层的第V层均发现FG标记阳性的神经细胞数。A组大鼠MEP的平均潜伏期和波幅以及BBB功能评分明显提高,与B、C和D组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论周围神经移植联合神经营养因子能部分修复脊髓传导束。     

周围神经移植修复脊髓损伤的研究现状及进展

目前脊髓损伤(spinal cordinjury,SCI)呈高发生率(美国为3.0～3.5/10万),高致残率(全身瘫痪占67%),高耗费,低病死率(5%)的新特点,加强其研究具有重要的理论价值和临床意义。近年来,在动物实验中通过周围神经移植已取得的一些令人鼓舞的进展为SCI的修复带来了希望。现就周围神经移植修复SCI的研究现状及进展作一综述。1周围神经移植治疗SCI的机制周围神经移植的提出已有几十年历史,但是,真正能提出形态学证据,证明其能促使损伤神经元轴突再生,是在20世纪70年代后。其中最具标志性的研究是Cheng等[1]的报道。其将肋间神经移植于大鼠脊髓…     

兔胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的实验研究

目的：对用胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的可行性进行研究。方法：将36只新西兰家兔制成兔双侧坐骨神经缺损模型。按脊髓桥接长度分为3组,每组两侧神经桥接长度不同。第1组桥接长度为坐骨神经直径的4倍,第2组为8倍,第3组为16倍;左侧选用胎兔脊髓桥接,右侧为自体神经桥接。于术后1、2、3个月任选2只动物行辣根过氧化物酶（HRP)逆行示踪,另外10只取移植段中、远段组织作透射电镜观察。结果：在兔脊髓前角3组均发现被标记的神经元细胞。扫描电镜下见到胚胎脊髓移植段及远段有大量的正常神经纤维,其轴突直径、髓鞘厚度与对照侧相比,差异均无显著性意义（P＞0．05）。结论：用兔胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的方法是可行的。     

周围神经移植修复脊髓损伤的进展与展望

近百年来许多学者为脊髓损伤后神经再生和功能恢复的研究不懈努力，取得了很大的进展，但与应用到临床还有相当的距离。从最初认为脊髓不能再生，到目前认为中枢神经系统有很强的再生能力，经历了一个漫长过程。目前，脊髓损伤尚无有效的治疗方法，其研究仍停留在实验阶段，较成功的实验方法是利用组织移植促进功能恢复，组织移植理论上具有：a)连接损伤的脊髓，为神经元生长穿过损伤部位提供化学及力学诱导；b)连接损伤的脊髓，提供额外的细胞修复损伤的反射弧；c)提供活性因子，挽救将死亡的神经元或调节中枢反射弧改善其功能。     

周围神经移植联合aFGF治疗急性脊髓损伤的实验研究

目的:探讨周围神经移植联合酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)治疗大鼠脊髓损伤(SCI)的可行性及效果.方法:雌性Sprague-Dawley大鼠115只;随机分为4组.A组(自体肋间神经移植组;n=30):在T9水平横行切断脊髓并切除3mm;植入自体肋间神经;B组(自体肋间神经联合aFGF移植组;n=30):同法制备脊髓横断模型;脊髓缺损处植入自体肋间神经和含aFGF的纤维蛋白凝胶;C组(脊髓横断组;n=30):同法制备脊髓横断模     

脉冲电磁场对带血供周围神经移植修复脊髓损伤的作用

目的：探讨脉冲电磁场对带血供周围神经移植修复脊髓损伤的作用。方法：将４０只雌性Ｗｉｓｔａｒ成年鼠分为Ａ、Ｂ２组,Ａ组为单纯用带血供的正中神经移植修复脊髓损伤,Ｂ组为带血供正中神经移植后给予脉冲电磁场治疗,术后６０ｄ进行大体、组织学（光、电镜）观察、电生理检测及移植神经内再生轴突形态计量分析。结果：在组织学,神经传于单纯带血供周围神经移植的Ａ组。结论：带血供周围神经是修复脊髓损伤较为理想的移植材料,     

脊髓损伤两种修复方法的比较研究

目的：比较脊髓损伤后两种修复方法的效果。方法：损伤成鼠胸髓左后术,移植孕１４ｄ３胚胎脊髓（Ｆ组）,胚胎脊髓加自体带蒂正中神经（Ｖ＋Ｆ组）及不移植（对照组）,观察胚胎脊髓的生长、分化情况及对宿主的修复能力。结果：Ｖ＋Ｆ组胚胎脊髓体积增长速度、神经纤维数量和神经元密度显著高于Ｆ组（Ｐ〈０．０１）,细胞分化较好,突触较成熟,界面区无明显的胶质增生。Ｖ＋Ｆ组ＳＥＰ的Ｐ１、Ｎ１波潜伏期显著缩短（Ｐ〈０．０１     

应用胚胎脊髓前角细胞移植修复大鼠神经损伤的实验研究

目的　观察鼠胚胎脊髓前角细胞移植入胫神经远断端后的变化及作用。方法　将 2 4只SD大鼠随机分为移植组和对照组 ,每组 12只。切断大鼠右侧胫神经形成失神经腓肠肌实验模型。分离并制备孕 14～ 18d大鼠胚胎脊髓前角运动神经元 ,植入已切断的胫神经远断端。对照组在相同部位注射等量的培养液。术后 3个月 ,对移植细胞进行组织学观察、Nissl染色和辣根过氧化物酶 (horseradishperoxidase ;HRP)逆行示踪检测。行胫神经再生纤维计数 ,并检测腓肠肌电生理变化、肌湿重和肌动蛋白表达。结果　植入细胞能在胫神经远端存活 ,呈现Nissl阳性染色并被HRP逆行示踪所标记。移植组胫神经的再生率、腓肠肌肌湿重和肌动蛋白含量均明显高与对照组 (P <0 .0 5 )。电刺激移植组胫神经可记录到腓肠肌的诱发动作电位 ,能引起肌肉收缩和踝关节运动。结论　同种异体胚胎脊髓前角细胞移植到外周神经内可使靶肌肉获得神经支配并延缓其失神经萎缩的变化。     

Vascularized peripheral nerve trunk autografted in the spinal cord：a new experimental model in adult rats

ＦＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃＳｕｒｇｅｒｙ ,ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｒｇｅｒｙ,ＤａｐｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ,ＴｈｅＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ,Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ 40 0 0 42 ,Ｃｈｉｎａ (ＷａｎｇＡＭ)ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃＳｕｒｇｅｒｙ ,ＱｕｅｅｎＭａｒｙＨｏｓｐｉｔａｌ,ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｏｎｇＫｏｎｇ ,ＨｏｎｇＫｏｎｇ (Ｓ .Ｐ .Ｃｈｏｗ)ｒｅｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｒｖｅｔｒｕｎｋａｕｔｏｇｒａ…     

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液植入促进大鼠脊髓损伤修复的研究

目的从转基因角度探讨治疗脊髓损伤的有效性。方法用改良Allen打击法制作脊髓损伤动物模型,1周后将神经生长因子nervegrowthfactorNGF和脑源性神经营养因子brainderivedneurotrophicfactorBDNF基因修饰的雪旺细胞(Schwanncells,SCs)和胚胎脊髓细胞悬液(fetalspinalcordcellsuspension,FSCS)移植联合植入脊髓损伤部位,1个月和3个月后用免疫组化方法观察神经丝蛋白NF、胶质纤维酸性蛋白GFAP、髓基质蛋白MBP、5-羟色胺5HT、NGF和BDNF的变化,并根据图像分析各实验组的免疫阳性反应变化;通过光电镜观察脊髓组织形态学改变。结果将转NGF和BDNF基因的SCs与FSCS联合植入脊髓损伤部位有以下优点:1移植物能很好地与宿主融合和存活,2能发挥FSCS的“桥接”、“中介”作用,3SCs可以起到神经轴突的“导管”、“导向”作用,4神经营养因子(neurotrophicfactors,NTFs)NGF和BDNF可以刺激轴突的生长和挽救受损的神经元。结论将NGF和BDNF基因修饰的SCs和FSCS移植联合起来,让局部释放的NTFs不断刺激、引导宿主纤维和移植物的整合与联系,以促进脊髓损伤的修复。此方法为将来治疗脊髓损伤提供线索。     

cAMP诱导大鼠脊髓损伤后神经再生

目的观察在体给入环磷酸腺苷(cyclic adinosine monophosphate,cAMP)对大鼠脊髓损伤后神经再生的作用。方法56只SD大鼠制成脊髓T10背侧半切断损伤模型,随机分为六组。各组分别在脊髓损伤局部、大脑运动皮层和T6蛛网膜下腔内给入cAMP或生理盐水。动物存活6周后处死,制作脊髓组织切片,通过免疫组化染色观察损伤区局部神经丝的分布;通过皮质脊髓束和脊髓顺行追踪观察皮质脊髓束和脊髓神经纤维的再生;通过动物后肢运动BBB评分观察后肢运动功能恢复的程度,并以此来评价治疗措施的脊髓损伤修复效果。结果用三种方式给入cAMP,损伤区神经丝沿脊髓纵轴延伸分布,但未与尾端重新连接。在蛛网膜下腔给入cAMP无明显的脊髓神经再生;在损伤区局部和大脑运动皮层给入cAMP,损伤区可见大量脊髓再生纤维,包括部分皮质脊髓神经纤维再生。各组动物在术后4～5周均恢复正常行走,BBB评分超过20分。结论在脊髓损伤局部和在大脑运动皮层给入cAMP能诱导大鼠脊髓损伤后神经再生,但尚不能达到有效促进实验动物后肢运动功能的效果。     

脊神经前根吻合重建大鼠脊髓损伤后肢体运动功能的实验研究

目的 探讨利用脊髓损伤平面以上正常的脊神经前根与支配股四头肌的优势腰神经前根吻合,重建脊髓损伤大鼠的股四头肌神经通路,恢复脊髓损伤大鼠肢体部分运动功能的效果.方法取4周龄SD大鼠20只,体重120～150 g;左侧为实验侧,右侧为对照侧.将大鼠左侧L1～L5脊神经根分别进行电刺激,根据股四头肌肌电图的检测结果,得出支配股四头肌优势神经根.将左侧L1神经前根与股四头肌优势脊神经前根通过尾神经桥接吻合,重建大鼠股四头肌的神经通路,右侧不作任何处理.术后6个月,在切断左侧L2脊髓水平制备大鼠脊髓损伤模型前后,分别进行电生理检测,饲养4周后进行电刺激大鼠股四头肌运动情况观察,BBB评分及后肢运动观察.结果 16只大鼠存活至术后6个月,10只大鼠成功分离出吻合的神经根,获得实验结果.实验侧截瘫前、后,单相方波(2.5 mA,0.2ms,1 Hz)刺激神经吻合段,均可记录到股四头肌动作电位,波幅分别为(7.63±1.86)mV和(6.00±1.92)mV,差异无统计学意义(P＞0.05);对照侧截瘫后电刺激L3脊神经根,引出的股四头肌动作电位波幅为(15.87±1.16)mV,均大于实验侧截瘫前后股四头肌动作电位波幅(P＜0.05).截瘫后饲养4周,观察大鼠实验侧后肢平地能完成爬行动作,登高时能完成攀高动作;截瘫后1、3、7、14、21、28 d观察后肢运动功能的BBB评分,BBB评分值在伤后1、3、7 d时间点差异均有统计学意义(P＜0.05),在14、21、28 d时间点差异无统计学意义.结论 利用截瘫平面以上健存的脊神经根,通过尾神经桥接吻合股四头肌优势支配神经根,可建立股四头肌新的脊髓旁神经通路,有望实现截瘫患者下肢部分的运动功能.

Abstract：

Objective To establish a paraspinal neural pathway of quadriceps femoris by end-to-end anastomoses between the spinal ventral root after spinal cord injury(SCI) in rats. Methods Twenty-fourweek old SD rats, with the weight of 120 g to 150 g, were included. The left side was the experimental side, while the right side served as a control. Electrostimulating of L1-L5 ventral root was done respectively to decide the predominant nerve of quadriceps femoris. The lumbar 1 ventral root was reveal to little innervation of quadriceps femoris, and the lumbar 3 ventral root was predominant innervation. End-to-end anastomosis between the left L1 and L3 ventral root was done. After axona regeneration, the new paraspinal neural pathway of quadriceps femoris was established. At 6 months postoperatively, the early function of the new pathway was observed by electrophysiological examinations, hindlimb locomotion and BBB (basso, beattie and bresnahan)scale at 1,3,7, 14,21,28 d after SCI. Results Sixteen rats survived for 6 months after operation and only ten rats got good results because of tissue adhesion postoperatively. Single stimuli (2.5 mA,0.2 ms, 1 Hz) of the left anastomoses nerve resulted in action potential recorded from the left quadriceps femoris before and after the spinal cord hemisection horizontally between L2 segmental levels. The amplitudes of the action potentials were (7.63 ± 1.86) mV and (6.00 ± 1.92)mV, respectively, and there was no significant difference (P ＞ 0.05). The left quadriceps femoris contraction was initiated by single stimuli (2.5mA, 0.2 ms, 1 Hz) of the left anastomoses nerve. After paraplegia, when the right L3 ventral root was stimulated, the amplitude of the action potential was (15.87 ± 1.16) mV. Locomotion of the left hindlimb was partially restored after spinal cord hemisection while creeping and climbing. According to BBB scale, there was significant difference at 1, 3, 7 d, and little difference at 14, 21, 28 d after SCI. Conclusion Spinal ventral roots cross-ananstomosis to reconstruct the paraspinal pathway of quadriceps femoris after SCI is efficient reinnervation of hindlamb muscles in a rat model and may have potential in clinical application.     

大鼠脊髓损伤后NgR在巨噬细胞中的表达对其吞噬作用及神经再生的影响

【摘要】 目的 体外研究大鼠脊髓损伤后表达Nogo蛋白受体（Nogo receptor, NgR）的巨噬细胞的吞噬作用及其对损伤神经元再生的作用。 方法 将髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein, MBP）分别加入表达NgR的巨噬细胞、空载巨噬细胞及正常巨噬细胞中,应用Western blot比较这3组巨噬细胞的吞噬作用。将3组巨噬细胞加入损伤神经元中培养,采用MTT法及测定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）的含量,比较3组巨噬细胞对损伤神经元轴突再生的作用。 结果 Western blot结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。MTT比色法及LDH含量测定结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。 结论 NgR的表达在体外可增强巨噬细胞的吞噬作用,表达NgR的巨噬细胞可促进神经损伤后的轴突再生。     

大鼠脊髓损伤后NgR在巨噬细胞中的表达对其吞噬作用及神经再生的影响

目的体外研究大鼠脊髓损伤后表达Nogo蛋白受体（Nogo receptor,NgR）的巨噬细胞的吞噬作用及其对损伤神经元再生的作用。方法将髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）分别加入表达NgR的巨噬细胞、空载巨噬细胞及正常巨噬细胞中,应用Western blot比较这3组巨噬细胞的吞噬作用。将3组巨噬细胞加入损伤神经元中培养,采用MTT法及测定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的含量,比较3组巨噬细胞对损伤神经元轴突再生的作用。结果Western blot结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT比色法及LDH含量测定结果显示表达NgR的巨噬细胞组吞噬作用与其他2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NgR的表达在体外可增强巨噬细胞的吞噬作用,表达NgR的巨噬细胞可促进神经损伤后的轴突再生。     

Rerouting peripheral nerves for spinal cord lesions

To provide control of paralyzed limb muscles following spinal cord lesions, peripheral nerves containing motor axons from motoneurons located above a spinal cord lesion could potentially be rerouted to nerves containing motor axons located below the spinal cord lesion. To test this hypothesis in rats, the distal end of a cut tibial nerve, innervated by the L4-6 spinal level, was anastomosed or rerouted to the central end of the cut femoral nerve, innervated by the L3-4 spinal level. Appropriate controls were used. Recovery of lower hind limb motor function was followed at regular intervals, measuring the twitch tension of toe flexion (innervated by the tibial nerve) induced by transcutaneous stimulation of nerve rootlets exiting the spinal cord. After 4-6 months, 54% of motor function returned in the experimental group. Retrograde transport of horseradish peroxidase from the gastrocnemius muscles to spinal motoneuron cell bodies confirmed that the innervation of this group was at a higher level. Furthermore, after an L4 spinal transection, twitch tension responses to spinal cord outlet stimulation remained only in the experimental group. Therefore, a peripheral nerve containing motor axons from above the lesion was rerouted to a distal peripheral nerve to control muscles that would have otherwise been denervated.     

Effect of nerve growth factor on neuronal apoptosis after spinal cord injury in rats

OBJECTIVE: To explore the molecular mechanism of the protective effect of nerve growth factor (NGF) on injured spinal cord. METHODS: The posterior T(8) (the 8th thoracic segment) spinal cords of 60 Wistar rats were injured by impacts caused by objects (weighing 10 g) falling from a height of 2.5 cm with Allen's way. Solution with nerve growth factors (NGF) was given to 30 rats (the NGF group) through a microtubule inserted into the subarachnoid cavity immediately, and at 2, 4, 8, 12 and 24 hours after spinal cord injury (SCI) respectively. Normal saline (NS) with same volume was given to the other 30 rats (the NS group) with the same method. And 5 normal rats were taken as the normal controls. The expression of bcl-2 and bax proteins in spinal cord was detected with immunohistochemistry. The apoptotic neurons in spinal cord were measured with terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling of DNA fragments (TUNEL) staining. RESULTS: The positive expression of bcl-2 protein was strong in the normal controls, but decreased in the NS group, and increased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). The positive expression of bax protein was also strong in the normal controls, but increased in the NS group, and decreased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). Apoptotic neurons were found in the NS group, and they decreased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). CONCLUSIONS: NGF can protect the injured nerve tissues through stimulating the expression of bcl-2 protein, inhibiting the expression of bax protein and inhibiting the neuronal apoptosis after SCI.