大鼠血浆中活性寡肽RX 31的HPLC-MS/MS定量分析方法研究

目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定大鼠血浆中活性寡肽RX31的浓度。方法血浆样品经甲醇蛋白沉淀后,以0.1%甲酸-甲醇为流动相梯度洗脱,CapcellMGⅢCl8柱分离。采用电喷雾电离源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z640.3→m/z623.3（RX31）和m/z596.1→m/z287.1（内标,RX20）。结果在本实验条件下,血浆中RX31的线性范围为3.91～500ng/ml,定量下限为3.91ng/ml,日内、日间精密度（相对标准差,RSD）均小于12%,准确度（相对误差,RE）在-11%～5%。结论该法快速、灵敏、准确,可用于RX31的药代动力学研究。     

莫达非尼R-和S-对映体的LC-MS/MS定量检测以及在Caco-2单层细胞模型上的转运特性

目的建立准确、灵敏、可靠的LC-MS/MS法,定量测定莫达非尼对映体,考察其在Caco-2细胞单层模型上的转运。方法选用资生堂C8(50 mm×2.1 mm,3μm)色谱柱及API4000液相色谱-质谱联用仪,用于定量分析的离子反应分别为m/z 274.4→165.1(莫达非尼)和m/z 391.2→265.1(CS55)。结果在本实验条件下,建立范围为1～1000 ng/ml的定量方法,批内、批间精密度<15%(n=5)。结论建立一种快速、准确、灵敏度高、专属性好,可用于莫达非尼对映体在Caco-2单层细胞模型转运研究的方法。     

丹酚酸B药动学动物实验研究

 目的 采用液相色谱-串联质谱法进行丹酚酸B药动学动物实验研究。方法 比格犬静脉滴注丹酚酸B后不同时间经前腿静脉采血。血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-水（含0.5%甲酸）：70-30（V/V）作为流动相,采用Symmetry C18（2.0 mm×50 mm,3 μm）柱分离,通过ESI源电离在负离子方式下进行检测,以选择反应监测（SRM）方式。用于定量分析的离子分别为 m/z 717.2→m/z 519.2（丹酚酸B）和 m/z 364.0→m/z 189.0(吲达帕胺,内标)。结果 在该测定条件下丹酚酸B和内标物的保留时间分别为1.03、1.24 min。丹酚酸B的线性范围为10.24～1.200×10⁴ ng/ml;定量下限为10.24 ng/ml,批内、批间精密度（RSD）均小于15%,准确度（RE）在-2.8%～1.9%之间。结论 所建立的LC-MS/MS法专属性强、灵敏度高,已成功用于丹酚酸B血药浓度测定和药动学研究。血中丹酚酸B半衰期较短,体内代谢呈一级线性动力学,符合三室模型。     

LC/MS/MS分析方法测定人血浆中匹多莫德的浓度

目的建立LC/MS/MS测定人血浆中匹多莫德的浓度。方法以舒巴坦为内标,采用甲醇-1%甲酸水溶液(10∶90,v/v)为流动相,以SymmetrySheildC18(3.5μm,20cm×2.1mm)色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以正离子多离子反应监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z245.2→m/z134.0(匹多莫德),m/z234.0→m/z124.2(舒巴坦)。结果匹多莫德线性范围0.010~20.0mg·L-1,定量下限为0.010mg·L-1(n=5)。日内、日间的RSD均<6.7%,平均回收率>90%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于匹多莫德临床药动学研究。     

莫达非尼R-和S-对映体的LC-MS/MS定量检测以及在Caco-2单层细胞模型上的转运特性

目的建立准确、灵敏、可靠的LC-MS/MS法,定量测定莫达非尼对映体,考察其在Caco-2细胞单层模型上的转运。方法选用资生堂C8（50 mm×2.1 mm,3μm）色谱柱及API4000液相色谱-质谱联用仪,用于定量分析的离子反应分别为m/z 274.4→165.1（莫达非尼）和m/z 391.2→265.1（CS55）。结果在本实验条件下,建立范围为1～1000 ng/ml的定量方法,批内、批间精密度〈15%（n=5）。结论建立一种快速、准确、灵敏度高、专属性好,可用于莫达非尼对映体在Caco-2单层细胞模型转运研究的方法。     

采用LC-MS/MS检测人尿中睾内脂方法研究

目的:建立人尿中睾内脂的LC-MS/MS检测方法。方法:采用Agilent Zorbax XDB-C18柱(2.1×50mm,3.5μm),流动相采用pH3.5甲酸铵缓冲液(A)和乙腈(B)进行梯度洗脱,离子检测方式为多反应离子检测(MRM);离子极性为正离子,定量的离子对为m/z301→121,定性的离子对为m/z301→225。结果:测定人尿中内源性物质不干扰样品和内标,样品分析时间为7分钟,睾内脂线性范围为0.1~50μg/ml,提取回收率大约为60%,日内和日间的RSD均小于10%。结论:本方法经考察符合国际反兴奋剂机构(WADA)的要求,可以应用于常规的兴奋剂检测工作。     

自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法分析比格犬血浆中的葛根素含量

目的:建立自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法测定犬血浆中葛根素的含量,研究葛根素制剂在比格犬体内的药代动力学.方法:分析流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸溶液(25:25:50,v/v/v),流速为0.2 ml/min,分析色谱柱为Grace Vydac C8柱.在线固相萃取流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(5:95,v/v),流速为2.0 ml/min,固相萃取柱的填料为Zobax C18(50 μm).配有电喷雾离子源(ESI)的线性离子阱 LTQ 质谱仪用于定量分析葛根素,采用选择离子反应监测(SRM)方式,用于定量分析的离子反应分别为m/z 415.2→m/z 195.2(葛根素).结果:线性范围0.39～400 ng/ml(r2＞ 0.999) ,最低定量限为0.39 ng/ml.日内、日间精密度(RSD%)分别小于7.6% 和6.4%,低、中、高3个浓度的QC样品准确度分别平均为 -0.51%,1.20%,-2.31%.单样品分析时间为6.5 min.结论:所建立的在线固相萃取HPLC / MS / MS 法样品处理简便、分析测试速度快、灵敏度高、线性范围宽、精密度和准确度满足药代动力学研究的需要,可用于非临床和临床药代动力学研究.     

HPLC-MS／MS联用技术测定人血浆中9-硝基喜树碱的含量

目的建立HPLC-MS—MS法测定人血浆中9-硝基喜树碱浓度。方法以喜树碱为内标，流动相为乙腈-2％甲酸水溶液（55：45，V／V），色谱柱为Agilent C18（3．5μm，2．1mm×150mm），电喷雾离子源（ESI），正离子多反应监测（MRM）方式进行检测。用于定量分析的离子对分别为[M＋H]^＋m／z 394．2→m/z 350．0（9-硝基喜树碱），[M＋H]^＋m／z 349.1→m/z 305．3（喜树碱）。结果9-硝基喜树碱线性范围1～300μg·L^-1内呈良好线性关系（r=0．9990），定量下限为1μg·L^-1。日内、日间精密度的RSD均〈15％，平均回收率为76.02％，RSD为5．7％。结论本方法专属性强，生物样品处理方便，灵敏度高，适用于9-硝基喜树碱临床药动学研究。     

衍生化LC-MS/MS测定大鼠血浆中新型抗流感药物帕拉米韦及其在药代动力学研究中的应用

目的：建立灵敏、可靠的衍生化LC-MS/MS新方法测定大鼠血浆中帕拉米韦的浓度。方法：血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用盐酸（10mol/L）-甲醇（10：90,体积比）为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用LC-MS/MS。通过电喷雾电离源以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z343→284（帕拉米韦衍生物）和m/z299→152（内标Ro64-0802衍生物）。色谱分离采用ZorbaxRX-C8柱（2.1mm×150mm,5μm）,以乙腈-水-甲酸（30：70：0.1,体积比,0.2ml/min）为流动相。结果：测定帕拉米韦的线性范围为10～10000ng/ml,相关系数r2为0.9940,定量下限为10ng/ml,批内和批间RSD%分别在5.0%和7.1%以内,准确度控制在89.9%～106.1%。结论：本方法通过衍生化反应,使帕拉米韦保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高。该方法成功应用于帕拉米韦非临床和临床研究中。     

LC-MS/MS法检测小鼠静注水溶性紫杉醇偶合物后血浆中的药物浓度

目的建立灵敏、特异的LC-MS/MS方法测定小鼠血浆中紫杉醇浓度,并应用于小鼠静注水溶性多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物的药物动力学研究。方法用甲基叔丁基醚提取小鼠血浆样品,以多西紫杉醇为内标,在BetaBasicC18色谱柱上以流动相乙腈-水-甲酸（65∶35∶0.1,体积比）分离,流速为0.2ml/min;采用液相色谱-质谱-质谱联用仪,通过电喷雾离子化电离源,以选择反应监测方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z854.2→286.1（紫杉醇）和m/z808.3→527.2（多西紫杉醇）。结果测定紫杉醇的线性范围为0.5～1000ng/ml,相关系数r为0.9995,定量下限为0.5ng/ml,日内日间精密度分别小于11.52%和13.11%,准确度控制在87.05%～100.87%,提取回收率为85.04%～93.63%。结论该法快速、灵敏度高、专一性好,成功应用于小鼠静注10mg/kg水溶性多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物的药物动力学研究。     

LC-MS/MS法测定裸鼠肝脏中6＇-羟基爵床定A的浓度

目的建立测定裸鼠肝组织中6＇-羟基爵床定A浓度的LC-MS/MS法,并用于裸鼠的组织分布研究。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱;流动相为水（含0.1%甲酸）-乙腈（含0.1%甲酸）,梯度洗脱,流速0.5 ml.min-1,柱温为室温。采用ESI源,以多反应监测方式分别监测离子对m/z 410.8→136.9（6＇-羟基爵床定A）和m/z 386.1→122.0（内标丁螺环酮）。肝组织匀浆后采用蛋白沉淀法进行预处理。结果 6＇-羟基爵床定A在裸鼠肝组织中的线性范围为1.0～2000ng.ml-1,日内精密度RSD小于8.61%;日间精密度RSD小于8.15%,回收率在89.3%～98.3%范围内。结论该方法简单、灵敏、准确,适用于裸鼠肝组织中6＇-羟基爵床定A的浓度测定及其组织分布研究。     

旋毛虫感染对过敏性哮喘小鼠血清总IgE、IL-4、IL-5的影响

目的研究旋毛虫感染对过敏性哮喘小鼠血清TIgE、IL-4、IL-5的影响。方法随机将20只BALA/c雌性小鼠分为4组,每组5只,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为单纯过敏性哮喘组,Ⅲ组为感染旋毛虫后哮喘组,Ⅳ组为单纯感染旋毛虫组。首先,将200～300条旋毛虫囊包幼虫经口感染Ⅲ、Ⅳ组小鼠,建立旋毛虫感染模型。28 d后,用卵清白蛋白分别对Ⅱ组和Ⅲ组小鼠进行致敏激发,建立过敏性哮喘模型。56 d后,取小鼠血清,用ELISA法检测TIgE、IL-4、IL-5水平。结果 4组小鼠总IgE水平分别为:(61.79±25.79)ng/ml、(437.08±75.68)ng/ml、(251.64±107.27)ng/ml和(446.12±74.32)ng/ml;IL-4水平分别为:(136.49±31.17)pg/L、(209.80±21.57)pg/L、(162.79±17.69)pg/L和(182.71±12.08)pg/L;IL-5水平分别为:(7.31±1.86)ng/L、(16.00±2.28)ng/L、(9.24±1.73)ng/L和(11.41±2.11)ng/L;与Ⅱ组相比较,Ⅲ组血清中总IgE、IL-4及IL-5水平明显降低(P<0.05)。结论旋毛虫感染可以抑制过敏性哮喘小鼠血清TIgE、IL-4及IL-5的表达。     

LC/MS/MS法测定家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物含量及其药代动力学研究

目的建立准确、灵敏、可靠的LC/MS/MS方法,定量检测家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物浓度,并用于家兔给予咪哒酚衍生物滴眼后血浆及房水中药代动力学研究。方法血浆及房水样品经蛋白沉淀前处理,内标选用Amms,液相色谱柱为TOSOHTSKgel Amide,流动相为含0.1%甲酸的甲醇∶水（80∶20,体积比）,仪器选用Finni-gan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源（ESI）,选择反应离子监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 381→308（咪哒酚衍生物）和m/z 285→138（Amms）。结果在本实验条件下,咪哒酚衍生物与内标Amms分离良好,保留时间分别为1.48和1.55 min,血浆和房水中药物浓度分别在5~2000和10~10 000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数（r2）分别为0.9971和0.9999,定量下限分别为5和10 ng/ml,回收率均大于80%,日内、日间精密度均小于15%（n=5）。结论该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于咪哒酚衍生物在家兔体内的药物代谢动力学研究。     

癌胚抗原测定的临床意义

测定了220例血清癌胚抗原(CEA)浓度,其中包括健康组36例,肺癌组35例,消化道肿瘤组31例,良性疾病(肺、肝、胃等病)组118例。检测结果,各组CEA均值和阳性率分别为:健康组3.69ng/ml、肺癌组13.4ng/ml(62.9％)、消化道肿瘤组14.13ng/ml(80.6％)、良性疾病组除16例肝病(6.69ng/ml)有轻微升高外,为3.96ng/ml。其中肺癌组、消化道肿瘤组与健康组比较差异非常显著(P<0.001),而良性疾病组与健康组比较无显著差别(P>0.05)。     

LC-MS法检测大鼠血浆中酒石酸美托洛尔的方法学研究

目的：建立准确、灵敏、可靠的LC-MS法检测大鼠血浆中酒石酸美托洛尔的浓度。方法：血浆样品用乙酸乙酯液-液萃取,内标选用盐酸普萘洛尔,液相色谱柱为ThermoODS-C18（5.0μm,100mm×2.1mm）,流动相为含0.1%甲酸的乙腈：甲醇：水（20：20：60,体积比）,流速为0.2ml/min;仪器选用Agilent公司1100LC/MSDSL型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源（ESI）,选择性离子监测（SIM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z267→268（美托洛尔）和m/z259→260（普萘洛尔）。结果：在本实验条件下,美托洛尔与内标盐酸普萘洛尔分离良好,保留时间分别为1.79和4.01min,0.1～50ng/ml范围内线性关系良好（r2=0.99411）,提取回收率均大于80%,日内日间精密度均小于15%（n=5）。结论：该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于酒石酸美托洛尔在大鼠体内药物代谢动力学的研究。     

多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物的稳定性研究

目的建立测定紫杉醇含量的液相色谱-串联质谱联用方法,以此考察多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物在各种缓冲液和血浆中的稳定性。方法色谱条件：色谱柱：BetaBasicC18column（150mm×2.1mm,5μm）,流动相：乙腈-水-甲酸（65：35：0.1）,流速：0.2ml/min;质谱条件：电喷雾离子源,选择离子反应监测,正离子检测模式,前体药物-产物离子转换选择离子反应监测得出紫杉醇的质荷比m/z为854.2→286.1,内标多西紫杉醇的质荷比m/z为808.3→527.2。结果该检测方法的最低定量下限为0.5ng/ml,线性范围0.5～5000ng/ml,r=0.9980;多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物在醋酸盐缓冲液中的稳定性高于在磷酸盐中的稳定性,多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物在血浆中释放出紫杉醇的量明显高于其在醋酸盐和磷酸盐缓冲液中释放出紫杉醇的量。结论该方法特异性强、灵敏度高,成功应用于紫杉醇含量测定及多聚（L-谷氨酸）-丙氨酸-紫杉醇偶合物稳定性评价。     

GC／MS法测定人血浆中地芬尼多药物浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的建立GC/MS法测定人血浆中地芬尼多的含量,用于药代动力学研究中血药浓度的测定。方法液-液萃取法进行血样前处理,分析采用（15 m×0.25 mm×0.25μm）DB-17MS毛细管柱,载气为氦气,载气流速为1.0 ml/m in;进样口温度250℃,炉温升程：100℃→280℃（按25℃/m in的速度升温,且在280℃保持1 min）再升至300℃（按50℃/min的速度升温,且在300℃保持1.6 m in）;MS源温度230℃,四级杆温度150℃,电子轰击能量为70 eV。结果地芬尼多及内标的保留时间分别为7.8 min及7.97 min,其定量碎片基峰分别为m/z98和138。地芬尼多在1300 ng/ml浓度范围内,浓度与响应呈良好的线性关系（r2=0.999）;定量下限为1 ng/ml,准确度在82%104%范围内;地芬尼多的提取回收率为72.7%90.0%;批内和批间RSD分别在2.7%和3.9%以内,准确度在101.5%114.1%范围内;地芬尼多人血浆样品在-20℃保存10 d及在室温放置24 h稳定;其甲醇溶液在4℃冰箱保存21 d稳定。结论本研究建立的GC/MS方法测定人血浆中地芬尼多浓度,特异性好、灵敏度高,适用于盐酸地芬尼多口崩片在健康受试者体内的药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定莪红片制剂中羟基红花黄色素A的含量

目的建立复方制剂莪红片中羟基红花黄色素A含量测定的方法。方法采用高效液相色谱法测定制剂中羟基红花黄色素A的含量。C18反相色谱分析柱,以甲醇-乙腈-0.7%磷酸（26：2：72）为流动相,流速：1.0 ml/min,柱温：30℃,波长：403 nm。结果羟基红花黄色素A在2.0070.00μg/m l浓度范围内线性关系良好,r=0.9994。回收率为98.67%,RSD为1.48%（n=9）。结论本法简单易行,结果准确可靠,适用于莪红片中羟基红花黄色素A的含量测定。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中拉米夫定浓度

 目的 试图建立测定人血浆中拉米夫定浓度的液相色谱-串联质谱法.方法 以吉西他滨为内标,内标法定量.流动相:甲醇-10 mmol/L乙酸铵(12: 88,v/v);质谱采用离子喷雾离子源,扫描方式为多反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 230m/z 111.9(拉米夫定)和m/z 263.8m/z 111.9(吉西他滨);药动学参数采用DAS2.0软件处理获得.结果 拉米夫定和内标吉西他滨的保留时间分别为2.9 min和2.4 min;拉米夫定的线性范围为0.0100~2.0000 μg/ml ,r=0.9996,回归方程:Y=0.0032X+0.0003,最低检测浓度为0.0100 μg/ml;提取回收率为95%～105%范围内;日内日间精密度RSD<6%.结论 此法适合人体血浆拉米夫定浓度的监测及生物利用度研究,结果准确、可靠.     

液质联用法测定龙胆水煎剂中三种环烯醚萜的含量

目的利用液质联用（LC／MS／MS）方法测定龙胆水煎剂中环烯醚萜类化合物龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和马钱苷的含量。方法色谱柱为J’Sphere ODS-H80（150mm×2．0mm，4μm）；流动相为甲醇-10mmol·L^-1醋酸铵溶液（30：70）；流速为200μl／min。样品经电喷雾离子源（ESI）正离子化后，通过三级四极杆串联质谱仪，采用多反应离子监测方式测定样品中龙胆苦苷（m／z 357．2-195．3）、獐牙菜苦苷（m／z 392．1→195．2）和马钱苷（m／z 408．4→229．1）浓度。结果在该分析条件下，3种化合物能够同时进行检测。龙胆苦苷浓度在200～5000ng·ml^-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=1．26×10^3X＋2．27×10^3，r=0．9983；獐牙菜苦苷浓度在20-500ng·ml^-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=360X＋144，r=0．9991；马钱苷浓度在20-500ng·ml^-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=782X＋42．6，r=0．9994。对照品峰面积精密度RSD分别为龙胆苦苷2．52％，獐牙菜苦苷2．77％和马钱苷2．89％；平均加样回收率分别为龙胆苦苷98．2％，獐牙菜苦苷99．1％和马钱苷99．7％。结论该方法灵敏、准确、特异性强。