青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及机制探讨

目的研究青蒿琥酯(ART)对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及其可能机制。方法收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞。用0、75、150、300、600μmol·L-1ART干预24 h,MTT法检测青蒿琥酯的细胞增殖抑制作用,荧光定量RT-PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶1(MMP1)和Ⅰ型前胶原α2链(proCOL1A2)mRNA的表达,Western blot法检测CTGF及Ⅰ型胶原的蛋白表达。结果各测试浓度ART均可抑制成纤维细胞增殖。和对照组相比,CTGF和proCOL1A2mRNA表达降低,而MMP1表达明显升高。Western blot法检测发现CTGF及Ⅰ型胶原表达明显下调。结论 ART能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并下调其CTGF及Ⅰ型胶原表达,同时上调MMP1的表达;通过抑制CTGF,并促进MMP1表达而减少胶原沉积可能是ART抑制增生性瘢痕的机制之一。     

几丁糖对成纤维细胞增殖及Ⅲ型前胶原信使核糖核酸表达的影响

目的 :研究几丁糖对成纤维细胞增殖及Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响 ,阐明其抗纤维化的作用机制。方法 :用四唑盐 (MTT)比色法及RNA斑点杂交分别检测NIH /3T3细胞增殖及Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果 :几丁糖能明显抑制成纤维细胞增殖及Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,并呈剂量依赖性。结论 :几丁糖可通过抑制成纤维细胞增殖及Ⅲ型前胶原mRNA的表达而起到抗肝纤维化作用     

雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的：探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（cardi-acfibroblasts,CFb）增殖及α1（Ⅰ）型前胶原合成的影响。方法：建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α1（Ⅰ）型前胶原mRNA及蛋白表达。结果：雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α1（Ⅰ）型前胶原合成。结论：雷公藤甲素可以通过抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α1（Ⅰ）型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。     

人参皂苷Rb1对皮肤胶原代谢的影响

目的 将人参皂苷Rb1作用于人成纤维细胞,观察其对皮肤胶原代谢的作用.方法 人成纤维细胞在不同浓度的Rb1中的增殖情况,结果 用MTT法测定.消化法检测羟脯氨酸含量.酶联免疫吸附测定法测定细胞分泌Ⅰ型前胶原、基质金属蛋白酶-1(Matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制酶-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的蛋白表达情况.结果与空白组比较,人参皂苷Rb1能显著提高细胞增殖水平,羟辅氨酸含量、Ⅰ型前胶原及TIMP-1的蛋白质表达量(P<0.05),显著降低MMP-1蛋白质表达量(P<0.05).结论 皮肤胶原代谢受人参皂苷Rb1调节.这表现在能促进HSF增值;通过影响成纤维细胞的蛋白质的表达促进胶原合成并抑制胶原降解,结果提高胶原蛋白总量.     

氧化苦参碱对成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的：研究氧化苦参碱对成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,阐明其抗肝纤雏化的作用机制．方法：用甲基噻哇基四哇MTT(metyl thiazolyl tetronzolium)色法和免疫细胞化学染色技术分剐检潮小鼠皮肤成纤雏细胞(NIH3T3)增殖和Ⅰ型胶原的合成。结果：氧化苦参碱能明显抑制成纤雏细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,并呈剂量依赖性．结论;氧化苦参碱可通过抑制成纤维细胞增殖及Ⅰ型肢原合成而起到抗肝纤雏化作用。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对I／Ⅲ型胶原比值的影响,从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸,用羟脯氨酸法测定胶原量,MTT比色法检测细胞增殖情况,SDS-PAGE电泳测胶原I／Ⅲ型比值。结果 100mmol／L、200mmol／L牛磺酸用药24h和48h及50mmol／L用药72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成,I／Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,降低I／Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。     

芦荟大黄素对硬皮病成纤维细胞增殖的影响

目的探讨芦荟大黄素对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法以不同浓度的芦荟大黄素处理体外培养的成纤维细胞,显微镜下观察成纤维细胞生长状况并摄片;用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定芦荟大黄素对成纤维细胞增殖的影响。结果荟大黄素对硬皮病成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用。结论芦荟大黄素可显著的抑制硬皮病成纤维细胞的生长,降低成纤维细胞的增殖指数并诱导其调亡。     

丹酚酸B抗心肌纤维化的机制研究

目的:研究丹酚酸B(Sal B)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖、Ⅲ型胶原分泌及基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Smad2/3、Smad7蛋白表达的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:将细胞分为空白对照组(培养液)、AngⅡ模型组和Sal B低、中、高浓度组(12.5、25、50μmol/L),用空白或含药培养液培养细胞1 h后,除空白对照组外的其余各组均加入1μmol/L的AngⅡ诱导细胞增殖,共同作用24 h。分别采用MTT法和苏木精-伊红染色法考察Sal B对细胞增殖的影响;采用Western blot法检测Sal B对细胞Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3、Smad7蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,AngⅡ模型组细胞明显增殖,Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3蛋白表达明显增强,Smad7蛋白表达明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);与AngⅡ模型组比较,Sal B各浓度组细胞的增殖均受到抑制,Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3蛋白表达均减弱,Smad7蛋白表达均增强,除Sal B低、中浓度组细胞Ⅲ型胶原与Sal B高浓度组细胞Smad2/3蛋白表达变化不显著外,其余各指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Sal B抗心肌纤维化的作用可能与抑制心肌成纤维细胞的增殖,下调Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3蛋白表达和上调Smad7蛋白表达有关。     

枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响

目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。     

aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长及蛋白酶活化受体1的影响

目的比较酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用以及对蛋白酶活化受体1(PAR1)的影响,探讨PAR1与促进成纤维细胞增殖的关系。方法取出生3周体质量为15~20 g的NIH小鼠皮肤进行成纤维细胞培养,采用MTT法测定细胞数和活度,免疫细胞学XTT法检测aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的影响,RT-PCR法检测小鼠皮肤成纤维细胞中PAR1 mRNA的表达。结果小鼠皮肤成纤维细胞健康生长,aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的促进作用在实验组与对照组间有显著性差异(P<0.05),其对成纤维细胞作用浓度梯度较为明显;小鼠皮肤成纤维细胞存在PAR1 mRNA的表达,且三种生长因子对其表达的影响有差异,以aFGF组表达最显著。结论aFGF、bFGF和EGF均能促进成纤维细胞增殖,以aFGF的促进作用最强,PAR1可能参与成纤维细胞的增殖。     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1(P27)蛋白的表达。结果:(1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFBG0/G1期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β1的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论:Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

双苯氟嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制研究

目的研究双苯氟嗪(d ipfluzine,D ip)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(card iac fibrob lasts,CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用MTT法检测D ip对CFB增殖的影响;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪技术检测细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;免疫组织化学染色方法,观察心肌成纤维细胞经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1)蛋白的表达。结果①在一定浓度范围内,D ip能明显抑制AngⅡ诱导CFB的增殖和胶原合成(P<0.05或P<0.01)。②CFB细胞G0/G1期百分率随D ip浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随D ip浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。③D ip能降低PCNA蛋白表达,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.01)。④D ip能够明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。⑤免疫组化结果显示D ip(10、100μmol.L-1)组ERK1和cPKCα阳性表达低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论D ip通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原的增加而起到了抗心肌纤维化的作用,其抗纤维化作用与其降低TGF-β1基因表达以及抑制cPKCα、ERK1通路有关。     

Methylparaben‐induced decrease in collagen production and viability of cultured human dermal fibroblasts

Parabens owing to their many advantageous properties are widely applied in cosmetics, food products and pharmaceuticals. However, recent research results have shown that they possess the ability to accumulate in the human body and exert many adverse effects. In this study, the impact of methylparaben (MP) as the most frequently used preservative in cosmetics, on human dermal fibroblasts and collagen production was evaluated. In cells treated with 0.01, 0.03 and 0.05% MP a dose‐dependent decrease in collagen biosynthesis was revealed, which was positively correlated with the activity of prolidase responsible for the recovery of proline. Consequently, the concentration of total collagen secreted into the medium was markedly diminished. A similar reduction in expression of the major skin collagen type I at both the protein and mRNA level as well as collagen type III and VI at the mRNA level was also detected. The decrease in the collagen level may result not only from the reduced synthesis but also increased degradation owing to MP‐induced activation of pro‐MMP‐2 (72 kDa). The increase in activity of MMP‐2 (66 kDa) was accompanied by a reduction in the inhibitory activity of TIMP‐2. In addition, an inhibitory effect of MP on cell survival and proliferation was revealed in this study. The increased expression and nuclear translocation of caspase‐3 as well as increased Bax and decreased Bcl‐2 expression may suggest MP‐induced cell apoptosis. In summary, we have provided new data on the adverse effects of methylparaben on human dermal fibroblasts and the main structural protein of the skin. Further studies on the mechanisms responsible for its action are in progress. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

钩藤提取物抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的探讨钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管成纤维细胞(VAF)增殖及胶原沉积的抑制效应及相关机制。方法建立AngⅡ诱导VAF增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、扫描电镜技术、流式细胞术、天狼猩红染色法和逆转录聚合酶链反应等观察钩藤碱和异钩藤碱对其增殖活性、细胞形态、细胞周期、细胞凋亡率、细胞c-myc蛋白表达、细胞培养液中羟脯氨酸含量、细胞间胶原蛋白含量、细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA的影响。结果AngⅡ刺激VAF增殖,钩藤碱和异钩藤碱抑制AngⅡ诱导VAF增殖;在钩藤碱和异钩藤碱作用下VAF处于G0/G1期的细胞数增多、S期的细胞数减少、细胞凋亡率增加、细胞c-myc蛋白表达降低、细胞培养液中羟脯氨酸含量降低、细胞间胶原表达降低、细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA转录也降低。结论钩藤碱和异钩藤碱对AngⅡ诱导VAF增殖和胶原沉积有抑制效应,部分机制与其阻滞VAF G0/G1期向S期转化、诱导细胞凋亡、下调细胞c-myc蛋白表达和细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA转录有关。     

维甲酸对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞胶原表达的调控机制

目的　研究维甲酸 (RA)对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞胶原表达的影响及机制。方法　正常组、纤维化组和RA治疗组 3组大鼠分别于肺纤维化模型制备后d 2 8处死 ,取肺组织进行肺成纤维细胞的原代培养。用Northernblot方法检测原代培养肺成纤维细胞前胶原α1(Ⅰ )mRNA表达 ,[3 H] 脯氨酸参入法测定胶原蛋白合成 ,凝胶迁移率法检测核因子AP 1活性 ,RT PCR方法测维甲酸受体的mRNA表达。结果　RA可诱导肺成纤维细胞RXRαmRNA的表达 ,使肺纤维化时增高的AP 1活性下调 ,并抑制前胶原α1(Ⅰ )mRNA表达及胶原蛋白合成。结论　肺纤维化时肺成纤维细胞AP 1活性增高可能是导致胶原过度表达的重要机制。RA可能通过诱导肺成纤维细胞RXRα的表达使增高的AP 1活性得以抑制 ,从而下调胶原基因的表达。     

ERK1/2及JNK通路在AcSDKP抑制PDGF诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及C-Jun氨基末端激酶(JNK)通路在N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达中的作用。方法将新生Wistar大鼠心脏成纤维细胞分为对照组(A组)、10ng/ml PDGF刺激组(B组)、10-9 mol/L AcSDKP+10ng/ml PDGF干预组(C组)、25μmol/L PD98059+10ng/ml PDGF干预组(D组)和10nmol/L SP600125+10ng/ml PDGF干预组(E组)。MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的变化,Western blot法检测大鼠心脏成纤维细胞中ERK1/2、JNK及磷酸化-ERK1/2、磷酸化-JNK蛋白表达和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与A组相比,B组心脏成纤维细胞代谢活性、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达、磷酸化-ERK1/2及磷酸化-JNK蛋白表达均增强(P<0.05);而C、D、E组能明显逆转B组上述各观察指标的增加过程(P<0.05)。结论 AcSDKP能够通过阻断PDGF介导的ERK1/2及JNK通路的激活,进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达。     

Lapachol suppresses cell proliferation and secretion of interleukin-6 and plasminogen activator inhibitor-1 of fibroblasts derived from hypertrophic scars

Objectives The pathogenesis and therapy of hypertrophic scar have not yet been established. Our aim was to investigate the antiproliferative and antisecretory effects of lapachol, isolated from the stem bark of Avicennia rumphiana Hall. f., on hypertrophic scar fibroblasts. Methods The effects of lapachol on hypertrophic scar fibroblast proliferation were measured using the MTT assay, cell‐cycle analyses and lactate dehydrogenase assays. The type I collagen α‐chain (COL1A1), interleukin‐6 (IL‐6) and plasminogen activator inhibitor‐1 (PAI‐1) mRNA and/or protein levels of hypertrophic scar‐fibroblasts were quantitated by real‐time PCR and ELISA. Key findings Lapachol at 25 and 50 µm significantly inhibited the in vitro proliferation of hypertrophic scar fibroblasts, but not fibroblasts from non‐lesional skin sites. In addition, lapachol had no apparent effect on cell cycle and lactate dehydrogenase activity in conditioned medium from lapachol‐treated hypertrophic scar fibroblasts was nearly equal to that in medium from vehicle‐treated cells. Lapachol treatment also inhibited COL1A1 and PAI‐1 mRNA levels in hypertrophic scar fibroblasts, but did not affect IL‐6 mRNA levels. The protein levels of IL‐6 and PAI‐1 in conditioned medium from hypertrophic scar fibroblasts treated with 50 µm lapachol were lower than those from vehicle‐treated hypertrophic scar fibroblasts. Conclusions Lapachol decreased the proliferation rate of hypertrophic scar fibroblasts. As IL‐6 and PAI‐1 secretion was also lowered in lapachol‐treated hypertrophic scar fibroblasts, our findings suggested that lapachol may have suppressed extracellular matrix hyperplasia in wound healing and possibly alleviated the formation of hypertrophic scar.     

SD 大鼠抗青光眼滤过术后热休克蛋白47表达的动态观察

目的：探讨 SD 大鼠采用抗青光眼滤过术处理后热休克蛋白47（heat shock protein 47,HSP47）在滤过泡中的表达变化及其意义。方法选取健康成年 SD 大鼠24只,雌雄各半,采用随机数字表法分为2 d 组、4 d 组、6 d组、10 d 组、14 d 组、正常组6组（每组4只）,2 d、4 d、6 d、10 d、14 d 组大鼠均行右眼抗青光眼滤过术处理,术后采用裂隙灯观察各组大鼠滤过泡及眼前节情况,分别于术后第2、4、6、10、14 d 处死相应组大鼠,检测滤过泡中 HSP47及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、mRNA 的表达情况。结果2 d 组大鼠 HSP47及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、mRNA 在滤过泡中的表达略微上升,但与正常组比较差异无统计学意义（P ﹥0.05）,4、6、10、14 d 组大鼠滤过泡中的 HSP47及Ⅲ型胶原蛋白、mRNA表达水平较正常组显著升高（P ﹤0.05）;6、10、14 d 组大鼠滤过泡中的Ⅰ型胶原蛋白、mRNA 表达水平较正常组显著升高（P ﹤0.05）。结论 SD 大鼠抗青光眼术后 HSP47及 mRNA 的表达水平变化基本与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、mRNA 表达变化一致,表明 HSP47在大鼠眼滤过泡瘢痕形成过程中可能起重要作用。     

黄芪对尾加压素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及分泌转化生长因子-β_1的影响

目的观察黄芪注射液对尾加压素Ⅱ（UⅡ）诱导的心脏成纤维细胞合成胶原及分泌转化生长因子（TGF-β1）的影响。方法体外培养乳鼠心脏成纤维细胞,分成3组：对照组、UⅡ组、UⅡ＋黄芪组。作用一定时间后,Real-time RT-PCR法测定各组细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1基因表达情况,3H-脯氨酸掺入测定胶原合成情况,双抗体夹心ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况。结果UⅡ可以促进乳鼠心脏成纤维细胞胶原合成,刺激TGF-β1的分泌,黄芪注射液可明显抑制UⅡ的上述作用。结论黄芪可以通过抑制UⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及TGF-β1分泌,延缓心肌纤维化及心脏重构的进展。