肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的调查肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因（PMQR基因）的现状、基因型以及PMQR基因阳性菌株携带Ⅰ类整合子的情况及其相关性。方法PCR法对125株肠杆菌科细菌（80株大肠埃希菌、18株肺炎克雷伯菌和27株阴沟肠杆菌）进行PMQR基因和Ⅰ类整合子检测。对阳性扩增产物进行测序分析并对阳性菌株做接合试验,采用琼脂倍比稀释法测定供体菌、受体菌和接合子对喹诺酮类和其他抗菌药物的MIC。结果125株肠杆菌科细菌检出16株（12．8％）qnr基因阳性,其中8株携带qnrS1基因,8株携带qnrB6基因;另检出15株（12．0％）携带aac（6’）-Ib-cr基因。20株PMQR基因阳性菌株携带I类整合子。26株PMQR基因阳性的菌株中有12株接合成功,典型Ⅰ类整合子阳性的菌株中有7株接合成功。与受体菌相比,喹诺酮类等抗菌药物对接合子的MIC值均有不同程度的提高。结论肠杆菌科细菌中存在PMQR基因的流行,PMQR阳性菌株可同时携带整合子基因,这些耐药基因均具有水平转移的特性,故应引起高度重视。     

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的 分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法 收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance genes, PMQR) 如qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr和qepA 基因的流行特点。结果 胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PMQR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株 (89.63%) qnrA1 基因阳性,45株(33.33%) qnrB4 基因阳性,32株 (23.70%) qnrB6 基因阳性,43株(31.85%) qnrS1 基因阳性,34株(25.19%) aac(6')-Ib-cr 基因阳性菌株,未检出qepA基因;其中45株(33.33%)同时携带 qnrA1、qnrB4 基因,32株(23.70%)同时携带 qnrA1、qnrB6, 25株(18.52%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1, 21株(15.56%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 12株(100%)同时携带 qnrA1、qnrB6、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PMQR基因组合种类的增多而增多。结论 消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以 qnrA1为主,qnrB4和qnrB6 次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。     

大肠埃希菌的qepA基因检测及菌株同源性分析

摘要：目的：检测质粒介导的喹诺酮类外排基因qepA在临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌中的分布情况,并对阳性菌株进行同源性分析。 方法：用Vitek2 Compact系统对57株大肠埃希菌进行鉴定和药敏实验,用PCR法检测qepA基因并进行基因测序及序列比对。用细菌基因组重复序列PCR技术（rep-PCR）和芯片分析技术对qepA阳性菌株进行基因分型及同源性分析。 结果：57株大肠埃希菌对环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的耐药率分别为86.0%（49/57）、82.5%（47/57）、70.2%（40/57）、26.3%（15/57）和8.8%（5/57）。6株大肠埃希菌检测到qepA基因,检出率为10.5%。Diversilab分析结果表明,含qepA的大肠埃希菌相似性为70.4%~97.2%,未发现高度同源的菌株。 结论：临床分离大肠埃希菌菌株可检出质粒介导的喹诺酮类外排基因qepA。     

临床分离大肠埃希菌质粒介导喹诺酮耐药基因和β内酰胺酶基因检测

目的探讨大肠埃希菌临床分离株质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的流行情况,及其与β内酰胺酶基因相关性。方法收集2013年7-12月福建医科大学附属协和医院临床分离的对左氧氟沙星和/或环丙沙星耐药的大肠埃希菌200株,采用PCR检测qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib-cr、qepA和oqxAB基因,对PMQR基因阳性菌株扩增常见β内酰胺酶基因;采用琼脂稀释法对PMQR基因阳性菌株进行药敏试验,以及PCR法对菌株进行系统发育分型;利用肠杆菌基因重复一致序列分析(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析。结果 PCR扩增结果显示实验菌株PMQR阳性率为29.0%(58/200)。其中qnr阳性率为5.5%(11/200),aac(6')-Ib-cr阳性率为20.5%(41/200),oqx AB阳性率为8.0%(16/200),qepA阳性率为0.5%(1/200)。58株PMQR基因阳性菌株中CTX-M-1组32株(55.2%)、CTX-M-9组17株(29.3%)和TEM型1株(1.7%),未检出SHV型β内酰胺酶基因。PMQR阳性菌呈现多重耐药现象;系统发育分型结果显示A型有21株(36.2%),D型17株(29.3%),B2型11株(19.0%),B1型9株(15.5%)。ERIC-PCR显示PMQR大肠埃希菌可分为50个不同的型别,其中1株未能分型。结论该院大肠埃希菌中PMQR基因以aac(6')-Ib-cr、qnr和oqxAB为主,且与β内酰胺酶耐药基因高度相关;此外PMQR菌株以非克隆播散方式在该院中流行。     

儿科临床分离株中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行

目的了解质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行情况与分布特点。方法琼脂稀释法测定抗生素MIC;PCR检测喹诺酮类药物耐药基因qnrA、qnrB和qnrS及相应ESBLs和AmpC酶基因;接合试验检测qnr基因是否可通过质粒转移;肠杆菌基因间重复一致序列-聚合酶链反应（ERIC—PCR）检测qnr阳性菌株的同源性。结果702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共检出含qnr基因菌株99株（14．1％）,其中qnrA、qnrB和qnrS的检出率分别为1．1％（8株）、4．0％（28株）和9．5％（67株）,其中3株菌同时含有qnrA和qnrB,1株含qnrB和qnrS。在99株qnr阳性菌株中,有88株（88．9％）检测到至少1种bla基因。20株qnr阳性菌株通过接合试验传递成功。相对于受体菌,接合子对环丙沙星的MIC提高了2～125倍。ERIC—PCR显示99株qnr阳性菌株有不同的DNA条带,提示其可能属于不同的克隆株。结论在702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr携带率为（14．1％）,qnrS为最流行的亚型。88．9％的qnr阳性株携带1种或1种以上bla基因。     

临床分离肠杆菌科细菌中mcr-1的筛查及其阳性菌株的药敏结果

目的了解mcr-1基因在临床分离肠杆菌科细菌中的分布及其阳性菌株对临床常用抗菌药物的敏感性。方法 PCR法对1 617株临床分离肠杆菌科细菌进行mcr-1基因的筛查,并对阳性扩增产物进行测序分析。微量肉汤稀释法测定mcr-1基因阳性菌株对于临床常见抗菌药物的MIC。脉冲场凝胶电泳(PFGE)对mcr-1基因阳性菌株进行同源性分析。结果 1 617株临床分离肠杆菌科细菌中,仅9株(0.6%)细菌mcr-1基因检测阳性,其中包括8株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌。PFGE分析显示8株mcr-1阳性大肠埃希菌分属8个不同型别;9株mcr-1阳性菌株对多黏菌素E均耐药,MIC为4~8 mg/L;9株细菌对头孢美唑、碳青霉烯类药物及替加环素均敏感,对庆大霉素、环丙沙星和左氧氟沙星均耐药,仅1株大肠埃希菌对头孢他啶、头孢噻肟敏感;1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌对哌拉西林-他唑巴坦耐药;1株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希菌对阿米卡星耐药。结论 mcr-1基因在受试临床分离肠杆菌科细菌中检出率很低,mcr-1基因阳性菌中以大肠埃希菌多见,未发现克隆传播,其介导的多黏菌素耐药水平也较低。mcr-1阳性菌株对第三代头孢菌素、氨曲南及喹诺酮类等药物耐率高,但对头霉素、碳青霉烯类、替加环素敏感,提示mcr-1阳性菌株感染仍有多种抗菌药物可供选择。     

大肠埃希菌和克雷伯菌临床分离株中整合子介导的多重耐药性的相关性分析Ⅰ

目的研究整合子介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的多重耐药性。方法采用聚合酶链反应（PCR）对临床分离的135株大肠埃希菌和59株克雷伯菌进行Ⅰ型和Ⅱ型整合酶基因的检测。结果在135株大肠埃希菌和59株克雷伯菌中，大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）率为50．4％，克雷伯菌产ESBLs率为37.3％，共检出105株细菌携带Ⅰ类整合酶基因，72株为大肠埃希菌，占53.33％（72／135），33株肺炎克雷伯菌，占55.93％（33／59）；其中携带Ⅱ类整合酶基因3株，全部为大肠埃希菌，此3株同时携带Ⅰ类整合酶基因并产ESBLs。结论Ⅰ类整合子在大肠埃希菌和克雷伯菌中分布广泛。整合子与大肠埃希菌和克雷伯菌的耐药有关，即整合子阳性菌比整合子阴性菌更容易产生耐药。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌qnrB基因的检测

目的:了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌株qnrB基因的存在情况及与细菌耐药的关系。方法:收集福建省福州市三家"三甲"医院临床分离的菌株,菌株药敏试验检测采用K-B法,聚合酶链反应对42株产ESBLs肺炎克雷伯菌和44株产ESBLs大肠埃希菌进行qnrB基因筛查。结果:42株产ESBLs肺炎克雷伯菌有5株检出qnrB基因,检出率为11.90%,44株产ESBLs大肠埃希菌中有7株检出qnrB基因,检出率为15.91%。检出qnrB基因的5株肺炎克雷伯菌和7株大肠埃希菌对两种喹诺酮药物均耐药。结论:在福州地区产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中存在qnrB基因,携带qnrB基因的12株细菌对左氟沙星和环丙沙星均耐药。     

大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的　了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法　用聚合酶链反 应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K B法、break point法。结果　227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产 酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号:AY675584。6株qnr 基因阳性菌株均为产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论　qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药 性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。     

80株大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮类药物耐药的影响

目的：探讨大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮类药物耐药的影响。方法：本研究分别用琼脂稀释法和K-B纸片扩散法药敏试验检测了80株致泌尿系感染的大肠埃希菌环丙沙星MIC的分布和对四种喹诺酮类药物的敏感性；PCR扩增大肠埃希菌的gyrA基因的QRDR区，并进行限制性内切酶酶切分析以检测药物靶位基因可能存在的突变。结果：80株致泌尿系感染的大肠埃希菌中有47株对环丙沙星耐药，耐药率达58．75％，20株对环丙沙星敏感的菌株gyrA基因QRDR区未发生改变，而13株敏感株和47株耐药株gyrA247bp处均存在突变，且这13株对环丙沙星敏感的菌株均对萘啶酸耐药。结论：①80株致泌尿感染的大肠埃希菌对环丙沙星的敏感性和对萘啶酸的敏感性存在明显差异。②gyrA基因是大肠埃希菌喹诺酮类药物的主要作用靶位，在某些菌株中，其247位核苷酸位点的改变仅使细菌对环丙沙星的敏感性下降，其它靶位基因的突变促进细菌的耐药程度增加。     

产超广谱β-内酰胺酶表型及基因型特征的研究

目的分析大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBL）的基因型分布情况。方法用表型确证试验确定临床标本中产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别用TEM、SHV和CTX-M通用引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增,鉴定其基因型。结果 66%的菌株为TEM基因型,14%的菌株为SHV基因型,10%的菌株为CTX-M型。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBL）的基因型分布以TEM基因型为主,部分菌株为SHV、CTX-M型。同一菌株内可以产生2种不同基因型的超广谱β-内酰胺酶。     

邵阳地区耐氨基糖苷类抗生素KPN菌AAC基因分布

目的 调查分析湖南邵阳地区医院2012～2013年临床分离肺克雷伯菌（KPN）的药物敏感性,探讨氨基糖苷乙酰转移酶基因（AAC）在耐氨基糖苷类药KPN菌株中的携带情况.方法 收集邵阳地区新邵县人民医院,洞口县人民医院,邵阳医专附属医院三家医院2012年8月～2013年12月临床连续分离非重复KPN 259株,梅里埃药敏条和KB纸片法检测其药物敏感性.采用PCR法对氨基糖苷类修饰酶（AMEs） AAC（3）-Ⅰ,AAC（6＇）-Ⅰb,AAC（3＂）-Ⅰ,AAC（3＇）Ⅵa基因进行检测.基因测序确定其基因型,探讨耐药基因与耐药表型的关系.结果 259株KPN中213株对氨基糖苷类抗生素耐药,其中对庆大霉素、妥布霉素、奈替米星和阿米卡星的耐药率分别为83.1％,68.5％,56.3％和44.1％.213耐药菌株中12株携带AAC（3）-Ⅰ基因,阳性率为5.6％;28株携带AAC（3＇）Ⅵa基因,阳性率为13.1％;103株携带AAC（6＇）-Ⅰb基因,阳性率48.4％;30株携带AAC（3＂）-Ⅰ基因,阳性率为14.1％;5株同时携带AAC（3）-Ⅰ和AAC（6＇）-Ⅰb基因.结论 湖南邵阳地区临床分离肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗生素耐药率高,其耐药基因以AAC（6＇）-Ⅰb基因为主.     

与ISEcp1—like插入序列相关的CTX—M型ESBLs基因传播机制研究

目的研究CTX—M—ESBLs在天津地区肺炎克雷伯菌中的传播与ISEcp1—like插入序列及1类整合子的关系。方法采用PCR-mapping、Southern印迹杂交及DNA序列分析等方法检测CTX-M-ESBLs基因，及其与ISEcp1—like插入序列和1类整合子的关系。结果46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中44株（95．7％）携带CTX—M-1组和（或）CTX—M-9组基因，未发现CTX—M-2组基因。60％的CTX—M-1组β内酰胺酶基因和73．7％的CTX-M-9组β内酰胺酶基因上游存在ISEcp1—like插入序列。ISEcp1—like插入序列与CTX—M-3及CTX-M-14基因间隔区序列不同。46株中25株（54．3％）携带1类整合子基因，PCR—mapping及Southern印迹杂交未发现CTX—MB内酰胺酶基因在整合子上的证据。结论天津地区肺炎克雷伯菌临床株中存在CTX—M-ESBLs的流行，许多CTX—M—ESBLs基因上游存在ISEcp1—like插入序列。ISEcp1—like插入序列可能与CTX—M型超广谱酶基因在天津市肺炎克雷伯菌临床株中的播散有关。     

Prevalence of Plasmid-Mediated Quinolone Resistance Determinants over a 9-Year Period

Recently, several plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) genes conferring low levels of quinolone resistance have been discovered. To evaluate the temporal change in the prevalence of PMQR genes over a decade in a tertiary hospital in the Republic of Korea, we selected every fifth isolate of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae and every third isolate of Enterobacter cloacae between 1998 and 2001 and between 2005 and 2006 from a collection of blood isolates. Six PMQR genes [qnrA, qnrB, qnrC, qnrS, aac(6′)-Ib-cr, and qepA] were screened by multiplex PCR and then confirmed by direct sequencing, and the aac(6′)-Ib-positive PCR products were digested with BtsCI to identify the aac(6′)-Ib-cr variant. Of 461 isolates, 37 (8%) had one of the six PMQR genes; 13 (5%) of 261 E. coli strains, 13 (10%) of 135 K. pneumoniae strains, and 11 (17%) of 65 E. cloacae strains. qnrB was the most common PMQR gene and was found as early as 1998, whereas qnrS, aac(6′)-Ib-cr, and qepA emerged after 2000. None of the isolates carried qnrA or qnrC. Ciprofloxacin resistance increased over time (P < 0.001), and the overall prevalence of PMQR genes tended to increase (P = 0.20). PMQR-positive isolates had significantly higher ciprofloxacin resistance and multidrug resistance rates (P = 0.005 and P < 0.001, respectively). The increasing frequency of ciprofloxacin resistance in Enterobacteriaceae was associated with an increasing prevalence of PMQR genes, and this change involved an increase in the diversity of the PMQR genes and also an increase in the prevalence of the mutations in gyrA, parC, or both in PMQR-positive strains but not PMQR-negative strains.     

腹腔感染患者大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶及整合子研究

目的了解腹腔感染患者大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及Ⅰ、Ⅱ类整合子的分布情况。方法共收集分离自腹腔感染患者的大肠埃希菌62株,纸片扩散法测定16种抗菌药物敏感性,采用纸片协同扩散法检测ESBLs表型,PCR检测blaCTX-M、blaSHV、blaTEM及Ⅰ、Ⅱ类整合子基因,整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区基因盒。结果大肠埃希菌对碳青霉烯类、哌拉西林/他唑巴坦100%敏感,对复方磺胺甲噁唑耐药率最高(62.9%)。30株大肠埃希菌产ESBLs,其中基因型blaCTX-M-14、blaCTX-M-3、blaTEM-1、blaCTX-M-14+TEM-1分别检出16株、4株、3株、7株。未发现携带SHV型ESBLs菌株。有40株(64.5%)大肠埃希菌携带Ⅰ类整合子,其中1株同时携带Ⅰ、Ⅱ类整合子,共扩增出7种耐药基因盒组合形式。最常见的基因盒组合为dfrA17-aadA5,其次为dfrA12-orfF-aadA2,Ⅱ类整合子携带dfrA1-sat1-aadA1。结论腹腔感染大肠埃希菌主要携带blaCTX-M-14和blaTEM-1,Ⅰ类整合子的存在非常普遍,主要介导对氨基糖苷类及磺胺类耐药。     

血培养大肠埃希菌的药物敏感性分析及ESBLs编码基因的流行性分析

目的 对2012年血培养分离121株大肠埃希菌的药物敏感性、产ESBLs情况及ESBLs编码基因blaCTX-M,blaTEM和blaSHV的分布进行分析。方法 收集2012年血培养非重复分离大肠埃希菌121株,使用WHONET 5.6分析耐药性; 采用双纸片协同法确认试验筛选产ESBLs菌; 聚合酶链反应(PCR)法和DNA测序法分析产ESBLs菌中blaCTX-M,blaTEMt blaSHV基因的流行性。结果 121株大肠埃希菌对广谱青霉素和二,三代头孢菌素、左旋氧氟沙星及复方新诺明都有较高的耐药性,耐药率大于40%; 对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星有较高的敏感性,耐药率小于12%; 121株大肠埃希菌中,86(88.7%)株产ESBLs,blaCTX-M,blaTEM和blaSHV基因的检出率分别为59.5%(72),38.8%(47)及4.1%(5)株; 其中,2(1.7%)株细菌同时携带blaCTX,blaTEM和blaSHV基因,30(24.8%)株细菌同时携带blaCTX和blaTEM基因,1(0.8%)株细菌同时携带blaSHV和blaTEM基因。结论 南京鼓楼医院血培养大肠埃希菌大多产ESBLs,以bla(CTX-M-14)的流行为主,对大多数的青霉素类、头孢菌素和单环类等常用抗菌药物耐药治疗时应根据药敏结果选择抗菌药物。     

非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的了解3类质粒介导的喹诺酮类耐药基因在浙江省温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中的分布情况。方法收集2008年1月至2013年6月温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌,共600株,其中非发酵菌419株,环丙沙星敏感肠杆菌科细菌181株。采用聚合酶链反应(PCR)检测qnrA、qnrB、qnrS、aac(6)-Ib以及qepA基因,并通过DNA测序确定qnr基因型和aac(6')-Ib-cr基因变异体;通过接合转移实验研究细菌质粒介导的耐药性传递情况。结果 419株非发酵菌临床株中未检测到qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib和qepA等耐药基因。181株环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌临床株中未检到qepA,检到2株qnrA1阳性株,分别为1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌;2株qnrB4阳性株,均为阴沟肠杆菌复合菌;12株检测到aac(6')-Ib,分别为6株大肠埃希菌、3株阴沟肠杆菌复合菌和3株克雷伯菌属细菌。接合转移试验中,2株qnrA1阳性株和1株qnrB4阳性株接合转移成功,12株携带aac(6')-Ib-cr基因的阳性株中4株接合转移成功。结论温州地区,质粒介导的喹诺酮类耐药基因不仅存在于环丙沙星耐药株中,而且还存在于环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌中,可能不存在于非发酵菌中。     

铜绿假单胞菌的临床分布及对环丙沙星耐药机制的研究

目的 分析医院铜绿假单胞菌（PAE）的临床分布和耐药性,并了解其对环丙沙星的耐药机制.方法 我院2011年9月-2013年9月收集的287株铜绿假单胞菌.采用琼脂纸片扩散法（K-B法）进行药敏试验,微量肉汤稀释法测定环丙沙星对PAE的最低抑菌浓度（MIC）.应用PCR方法扩增PAE的gyrA、gyrB、parC及parE基因,并测序来确定基因的突变.结果 287株铜绿假单胞菌以痰液标本中分离最多（76.3％）;主要感染分布在重症监护室（29.3％）和呼吸内科（22.6％）;且对哌拉西林/他唑巴坦及亚胺培南敏感,敏感率均在70％以上;而对氨苄西林及环丙沙星耐药率高,分别达97.9％和44.9％.在45株（环丙沙星MICs≥32 μg/ml）铜绿假单胞菌中,有42株均存在gyrA基因突变,且28株存在着gyrA基因和parC基因双突变.结论 铜绿假单胞菌多重耐药现象严重,gyrA基因突变是PAE对环丙沙星耐药的主要机制之一.应加强对铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性监测,更好地指导临床合理用药,控制医院感染.