厄贝沙坦减轻糖尿病肾病大鼠肾损伤

目的观察厄贝沙坦能否减轻糖尿病肾病(DN)大鼠的肾损伤。方法将大鼠随机分为对照组、DN模型组、厄贝沙坦治疗组。于22周测体质量、随机血糖、24 h尿微量白蛋白、血肌酐、尿素氮,观察肾脏形态改变。应用荧光定量PCR检测miR-192 mRNA在大鼠肾组织中的表达;蛋白免疫印迹法、免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、Zeb1、collagenⅠ蛋白的表达。结果与对照组比较,DN组大鼠体质量、随机血糖、血肌酐、尿素氮和24 h尿微量白蛋白显著增高(P<0.05);与DN组比较,厄贝沙坦治疗组大鼠体质量、随机血糖、血肌酐、尿素氮和24 h尿微量白蛋白显著降低(P<0.05)。厄贝沙坦治疗可以改善DN大鼠的一般情况和肾脏病理损害。与对照组相比,DN组miR-192 mRNA在DN大鼠肾脏的表达下调(P<0.05);与DN组相比,厄贝沙坦组miR-192 mRNA表达上调(P<0.05);与对照组大鼠相比,DN组肾组织的TGF-β1、ZEB1和collagenⅠ蛋白表达量明显增加(P<0.05);与DN组相比较,厄贝沙坦治疗可以减少TGF-β1、ZEB1和collagenⅠ蛋白的表达(P<0.05)。结论厄贝沙坦可减轻糖尿病肾病大鼠的肾损伤。     

伊贝沙坦对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏肥大的影响

目的:探讨新型血管紧张素II受体拮抗剂伊贝沙坦(Irb)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏肥大的影响。方法:SD大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=7),糖尿病肾病组(DN组,n=6)和伊贝沙坦治疗组(DNI组,n=7)。大鼠单侧肾切除后,腹腔注射STZ诱导糖尿病模型。于第4、8、12周分别测血糖(BG)、体重(BW)、尿白蛋白排泄(Ualb)、24h尿蛋白(24hUpro)定量,12周实验结束时测肌酐清除率(Ccr)、肾重(KW)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾组织总蛋白含量(RTP)、肾小球面积(A_G)和体积(V_G)、肾小球毛细血管基底膜(GBM)厚度等改变。结果:DN组和DNI组间BG差异无显著(P>0.05)。Irb可明显降低糖尿病大鼠Ualb、24hUpro排泄,抑制Ccr的增高(P＜0.01);Irb可显著抑制糖尿病大鼠KW、KW/BW、RTP、A_G、V_G的增加(P＜0.05或P＜0.01)和GBM的增厚(均为P＜0.01)。结论:糖尿病大鼠早期应用Irb可减轻尿蛋白排泄,并通过抑制肾脏肥大和GBM增厚而发挥肾保护作用。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的： 观察nephrin在糖尿病肾病（DN）大鼠肾小球足细胞中的表达，探讨厄贝沙坦对DN肾脏保护作用的机制。方法： 应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型，将DN模型大鼠随机分为2组：厄贝沙坦治疗组、模型对照组；另设正常对照组。各组分别干预8周后，观察大鼠体重、肾重、相对肾重、24 h尿蛋白定量、血糖、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯变化，利用光镜、电镜观察肾脏病理改变，应用免疫组化技术观察nephrin表达情况。结果： 应用厄贝沙坦干预后，DN大鼠24 h尿蛋白定量明显减少、肾功能改善、肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin表达量明显减少。结论： 厄贝沙坦对DN肾脏的保护作用可能与其抑制足细胞nephrin表达有关。     

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体对厄贝沙坦抑制糖尿病肾病大鼠CHOP-JNK-Caspase-12信号通路的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)对厄贝沙坦(Irb)抑制糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏内质网应激相关凋亡信号通路的影响。方法:将自建DN模型大鼠随机分为DN组和厄贝沙坦干预(Irb+DN)组,并设正常大鼠对照(NC)组。ELISA法测定DN组和Irb+DN组大鼠血清AT1-AA水平。4周后平行检测相关各组有关指标变化:TUNEL法检测肾脏细胞凋亡,Western Bloting测定肾脏内质网应激(ERS)标志蛋白GRP78及凋亡蛋白CHOP、p-JNK和Caspase-12表达水平。统计学比较各组间各指标差异。结果:(1)DN组大鼠肾脏细胞凋亡率及GRP78、CHOP、p-JNK及Caspase-12蛋白表达水平(16.65%±5.01%、0.751±0.030、0.757±0.056、0.603±0.048、0.709±0.047)均较NC组(0.38%±0.24%、0.334±0.001、0.249±0.026、0.209±0.003、0.348±0.004)显著增加(P0.01),Irb+DN组均明显降低(9.14%±5.98%、0.528±0.022、0.551±0.027、0.410±0.038、0.520±0.001,P0.01)。(2)DN组AT1-AA阳性大鼠肾脏细胞凋亡率及前述蛋白水平(20.05%±1.71%、0.774±0.026、0.809±0.014、0.643±0.026、0.748±0.025)均高于AT1-AA阴性大鼠(13.24%±4.93%、0.728±0.003、0.705±0.010、0.562±0.018、0.670±0.022,P0.01或P0.05)。(3)Irb+DN组中AT1-AA阳性大鼠肾脏细胞凋亡率及ERS相关蛋白表达(7.27%±3.97%、0.511±0.018、0.530±0.023、0.378±0.012、0.500±0.012)均较AT1-AA阴性大鼠(11.02%±7.21%、0.545±0.002、0.572±0.006、0.443±0.020、0.540±0.021)减少更明显(P0.01或P0.05)。结论:AT1-AA对DN大鼠肾脏ERS反应及ERS介导的肾脏细胞凋亡有影响,并在Irb抑制ERS相关的CHOP-JNK-Caspase-12凋亡途径、减少细胞凋亡、保护肾脏功能过程中起到一定作用。     

糖尿病大鼠肾脏nephrin表达的动态观察

目的从不同时间点动态观察足细胞相关分子nephrin在糖尿病大鼠肾组织中的表达,探讨nephrin在DN蛋白尿发生发展中的改变及意义。方法将SD大鼠分为健康对照组(C组)、糖尿病组(DM组)。SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型,正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液。分别于0、2、4、6、8、12周动态检测尿白蛋白(UA),血糖(BG)及肾功能,取肾组织行常规病理检查,免疫组化、Western blot分析技术检测肾脏nephrin的表达。结果 (1)与NC组相比,DM组随着病程的延长,尿白蛋白、BUN、Ccr均逐渐出现明显的变化,而白蛋白尿早于BUN、Ccr异常的出现;(2)与NC组相比,DM组足细胞相关分子nephrin蛋白于第2周出现表达下调,随着时间的进展,nephrin蛋白的表达进一步减少,直至第12周,各周间比较差异有显著性(P0.05);(3)相关分析显示:尿白蛋白排泄与足细胞相关分子nephrin呈负相关。结论糖尿病大鼠早期(2周)出现足细胞相关分子nephrin表达下调,是糖尿病肾病早期损伤指标,nephrin参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生及发展。     

巢蛋白在阿霉素肾病模型大鼠肾组织中表达及霉酚酸酯的干预作用

背景：研究证明,足细胞损伤是产生肾小球性蛋白尿的重要机制。而关于足细胞内众多骨架蛋白如何互相调节维持足细胞特有的形态目前尚未完全了解,足细胞骨架的构建和重塑也成为蛋白尿发生机制的研究热点。 目的：构建阿霉素微小病变肾病大鼠模型,以霉酚酸酯进行干预,检测大鼠肾组织中巢蛋白(nestin)的表达。 方法：纳入雄性Wistar大鼠36只,随机均分为肾病模型组、霉酚酸酯组、正常组(n=12)。肾病模型组、霉酚酸酯组大鼠一次性尾静脉注射阿霉素进行造模,正常组尾静脉注射等量生理盐水。霉酚酸酯组大鼠于造模次日给予霉酚酸酯灌胃,20 mg/(kg•d),1次/d;其他两组大鼠每日给予等量生理盐水。各组分别于造模后14,21,28 d各处死4只大鼠,取肾皮质进行苏木精-伊红染色和免疫组化染色,观察大鼠肾组织病理学改变以及nestin表达情况。 结果与结论：正常组大鼠肾小球滤过膜结构完整,上皮细胞足突清晰;肾病模型组大鼠肾小球上皮细胞足突广泛融合,基底膜正常;霉酚酸酯组大鼠肾小球上皮细胞足突部分融合,但病变较轻。免疫组化结果提示从造模第14天开始,肾病模型组和霉酚酸酯组大鼠nestin表达明显增加,与正常组比较差异有显著性意义(P < 0.05);霉酚酸酯组大鼠nestin表达低于肾病模型组,差异有显著性意义(P < 0.05)。提示肾小球足细胞损伤时,足细胞内nestin表达增多,随病情加重而表达增高。霉酚酸酯可以减轻足细胞损伤,下调nestin的表达,维持足细胞的正常结构,达到延缓肾脏损害的目的。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程      

灵芝提取物对神经元缺氧复氧损伤的保护作用及其机制的离体研究

目的: 研究灵芝提取物(GLE)对原代大鼠皮层神经元氧糖剥夺-再复氧(OGD/R)损伤模型的影响,在细胞水平探讨GLE神经保护作用的机制。方法: 新生SD大鼠的皮层神经元原代培养至第7 d,用GLE预处理神经元OGD/R模型。选取OGD/R后的0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h作为观察点,观察GLE干预后对各个时点的细胞形态学、细胞毒作用、细胞线粒体活性、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达量的影响。结果: GLE(0.1、1、10 mg/L)能明显减少神经元LDH的释放,提高线粒体活性。流式细胞术结果证实了GLE能抑制神经元OGD/R损伤导致的凋亡,这种作用甚至能持续至OGD/R后的72 h。GLE(0.1、1、10 mg/L)下调caspase-3、caspase-8蛋白的表达,GLE (10 mg/L)还能下调caspase-9蛋白表达。结论: GLE对OGD/R诱导的神经元损伤有一定的保护作用,可能是有效防治急性缺血性卒中的神经保护药物。     

CD2AP、F-actin在肾病大鼠中的表达及意义

目的：观察CD2-associated protein（CD2AP）、肌动蛋白微丝（F-actin）在氨基核苷肾病大鼠肾小球中的表达变化及其意义。 方法： 通过建立大鼠氨基核苷肾病模型，采用免疫组织化学、蛋白质印迹技术观察CD2AP在不同时点肾病大鼠肾小球中的表达和分布变化，采用荧光技术检测肾小球F-actin含量的变化。 结果： ①肾小球足细胞CD2AP的表达在肾病模型建立的早期即有下调；在肾病大鼠蛋白尿的高峰期，CD2AP的表达明显下降（P<0.01）；在肾病大鼠的疾病恢复期，CD2AP的表达逐步恢复正常。②肾小球足细胞CD2AP表达量的变化与肾病大鼠24 h尿蛋白的变化呈负相关（r=-0.865，P<0.01）。③在肾病大鼠蛋白尿的高峰期，肾小球F-actin含量明显下降（P<0.05）。④肾小球CD2AP蛋白表达量和肾小球F-actin荧光定量变化呈正相关（r=0.873，P<0.01）。 结论： ①CD2AP、F-actin的表达变化在蛋白尿的发生机制中有着重要作用。②CD2AP可能是判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。     

肾康丸对早期糖尿病肾病大鼠肾脏晚期糖基化终产物及其受体表达的影响

目的：观察肾康丸对糖尿病肾病（DN）大鼠晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGEs）表达的影响，探讨肾康丸对DN的肾保护作用机制。方法:应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型，将DN模型大鼠随机分为4组：DN模型对照组、肾康丸组、厄贝沙坦组、肾康丸和厄贝沙坦合用组；另设正常对照组。各组分别干预8周后，观察24 h尿蛋白量、血清和肾组织AGEs含量变化，免疫组化法检测肾组织RAGEs的表达，RT-PCR法检测肾组织RAGEs mRNA的表达，光镜观察肾脏病理改变。结果:应用肾康丸、厄贝沙坦干预后，DN大鼠24 h尿蛋白量、血清及肾组织AGEs含量明显减少，肾组织RAGEs含量及其mRNA表达水平明显降低，肾脏病理改变显著减轻，肾康丸和厄贝沙坦合用组效果更为显著。结论:肾康丸对DN的肾保护作用与厄贝沙坦作用相当，且二者具有协同作用，其机制可能与其降低DN大鼠血清、肾组织AGEs水平以及肾组织RAGEs含量，抑制肾组织RAGEs mRNA的表达有关。     

3-硝基丙酸预处理对脑缺血耐受模型GLUT1和GLUT3表达的影响

目的: 探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带区不同再灌注时点GLUT1和GLUT3 mRNA及蛋白水平表达的影响。方法: 雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组(sham组,n=4)、预处理对照组(3-NPA组,n=4)、大脑中动脉缺血组(M组,n=16)、3-NPA 预处理组(IPC组,n=16)。M组和IPC组按再灌注时间(4 h、12 h、24 h及48 h)不同又分为4个亚组,每组动物4只。将大鼠在相应时点断头取脑,取缺血侧(左侧)冠状面中间1/3皮质,分别采用RT-PCR和Western blotting方法检测GLUT1、GLUT3 mRNA和蛋白水平表达情况。结果: IPC组GLUT1 mRNA表达在缺血再灌注后4 h开始升高,48 h最大,显著高于sham组和M组相应时点。IPC组GLUT3 mRNA表达在24 h增高,48 h最高,与M组相应时点24 h、48 h及sham组比较显著增高。IPC组比M组的GLUT1蛋白、GLUT3蛋白表达增高,有显著差异(F=5.848,P<0.05;F=6.295,P<0.05),尤以缺血再灌注后48 h两者差异最明显。结论: 3-NPA预处理能诱导脑缺血耐受,其机制可能是上调GLUT1和GLUT3 mRNA及蛋白表达水平,维持脑组织的能量供给。     

Loss of PTEN promotes podocyte cytoskeletal rearrangement,aggravating diabetic nephropathy

In diabetic nephropathy (DN), podocyte cytoskeletal rearrangement occurs followed by podocyte effacement and the development of proteinuria. PTEN (phosphatase and tensin homologue) is a ubiquitously expressed phosphatase that plays a critical role in cell proliferation, cytoskeletal rearrangement, and motility. In mouse models of diabetes mellitus, PTEN expression is reportedly decreased in mesangial cells, contributing to expansion of the mesangial matrix, but how PTEN in the podocyte influences the development of DN is unknown. We observed that PTEN expression is down‐regulated in the podocytes of diabetic db/db mice and patients with DN. In cultured podocytes, PTEN inhibition caused actin cytoskeletal rearrangement and this response was associated with unbalanced activation of the small GTPases Rac1/Cdc42 and RhoA. In mice treated with PTEN inhibitor, actin cytoskeletal rearrangement occurred in podocytes and was accompanied by increased albumin excretion. We also created mice with an inducible deletion of PTEN selectively in podocytes. These mice exhibited increased albumin excretion and moderate foot process effacement. When the mice were challenged with a high fat diet, podocyte‐specific knockout of PTEN resulted in substantially increased proteinuria and glomeruloclerosis compared to control mice fed a high fat diet or mice with PTEN deletion fed a normal diet. These results indicate that PTEN is involved in the regulation of cytoskeletal rearrangement in podocytes and that loss of PTEN predisposes to the development of proteinuria and DN. Copyright © 2015 Pathological Society of Great Britain and Ireland. Published by John Wiley & Sons, Ltd.     

糖尿病家兔心室肌细胞L型钙电流对模拟缺血-再灌注呈

方法: 采用四氧嘧啶静脉注射建立6周的糖尿病家兔模型,胶原酶分离家兔左心室肌细胞,以膜片钳全细胞模式记录糖尿病家兔和正常对照家兔心室肌细胞在基线状态,模拟缺血灌流5 min和再灌注5 min三个时相的I_Ca,L。 结果: 糖尿病组和对照组心室肌细胞最大I_Ca,L密度在基线状态无显著差异;对照组细胞(n=11)最大I_Ca,L密度在基线、缺血灌流后和再灌注后分别为(-8.36±1.63)pA/pF、(-5.90±1.75)pA/pF 和 (-4.22±1.02)pA/pF,缺血时I_Ca,L小于基线(P<0.01),而再灌注后I_Ca,L较之基线(P<0.01)和缺血时(P<0.05)均显著减小;糖尿病组细胞(n=9)最大I_Ca,L密度在基线、缺血灌流后和再灌注后分别为(-7.55±1.62)pA/pF、(-6.05±1.58)pA/pF和(-5.12±1.13)pA/pF,仅再灌注后I_Ca,L明显小于基线(P<0.01),而缺血时I_Ca,L分别与基线(P>0.05)和再灌注后(P>0.05)相比均无显著差异。 结论: 糖尿病状态下的心室肌细胞I_Ca,L对急性缺血损伤呈现"钝化"反应,随缺血进程的衰减较正常细胞缓慢,而缺血后再灌注则对于有无糖尿病的心肌均强力抑制I_Ca,L。本研究结果可能有助于提示糖尿病条件下的缺血-再灌注心肌损伤机制以及对合并缺血性心脏病的糖尿病患者的治疗方案。     

同种异体脂肪干细胞门脉移植对大鼠纤维化肝脏的影响

目的: 研究同种异体脂肪干细胞肝内移植对大鼠纤维化肝脏的影响。方法: 从SD大鼠腹膜脂肪组织提取脂肪干细胞,纯化、培养并稳定传代。雄性SD大鼠48只,成功建立大鼠肝纤维化模型。实验分为对照组(n=14)、门静脉组(n=11)和尾静脉组(n=14)。后两组分别经门静脉、尾静脉注射同种异体移植脂肪干细胞,观察移植前后大鼠肝血流动力学变化,并比较门静脉组和尾静脉组的疗效差异。结果: 成功提取脂肪干细胞,纯化、培养并稳定传代。输注脂肪干细胞前后各组肝脏计算机断层扫描灌注指数显示,门静脉组肝脏血流灌注有明显改善,且以门静脉灌注量为主(P<0.05),尾静脉组仅有轻微改善。组织学肝硬化评分显示,门静脉组见肝纤维化、肝细胞脂肪变性、肝细胞变性坏死均明显改善(P<0.05);尾静脉组仅肝细胞脂肪变性有改善。免疫组化示门静脉组肝脏微血管密度较其它组明显减少(P<0.05)。结论: 同种异体脂肪干细胞移植能改善肝纤维化SD大鼠的肝脏血流灌注及病理学改变;门静脉移植途径较尾静脉途径疗效更显著。     

狼疮肾炎患者外周血单个核细胞IL-17信号转导途径的初步研究

目的:了解IL-17及其信号转导成分JNK活化状态在狼疮肾炎(LN)发病机制中作用。方法:活动期LN病人15例,分离、培养外周血单个核细胞(PBMC);ELISA法检测上清液IL-6蛋白水平;逆转录多聚酶链反应法检测IL-6mRNA水平;蛋白印迹法检测JNK活性。结果:IL-17刺激下,LN患者PBMC反应性明显增强,各浓度点IL-6蛋白水平明显高于正常对照(均P<0.05)。LN患者PBMCIL-6mRNA表达水平明显高于对照组(无刺激培养:1.80±0.11vs0.36±0.07,P<0.01;刺激培养:3.21±0.24vs1.30±0.14,P<0.05);正常对照或LN患者刺激培养组PBMCIL-6mRNA表达水平均明显高于其无刺激培养组(对照:1.30±0.14vs0.36±0.07,P<0.05;LN患者:3.21±0.24vs1.80±0.11,P<0.01)。LN患者PBMCJNK活性水平明显高于对照组(无刺激培养:3.21±0.32vs1.00,P<0.01;刺激培养:4.82±0.39vs1.21±0.35,P<0.01);LN患者的刺激培养组PBMCJNK活性水平明显高于LN对照培养组(4.82±0.39vs3.21±0.32,P<0.01)。活动性LN病人PBMCJNK活性高低与其SLEDAI和IL-6mRNA水平均呈显著正相关。结论:IL-17介导LN患者PBMC过度表达、分泌IL-6可能是其参与LN的发病机制之一,JNK的活化在IL-17信号转导中具有重要作用。     

心房钠尿肽对脂多糖所致大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨心房钠尿肽(ANP)对脂多糖(LPS)血症大鼠急性肺损伤的作用和机制。方法: 大鼠静脉给予LPS(2 mg·kg^－1)后立即静脉给予ANP(2 μg·kg^－1),记录动物平均动脉血压(MAP)、检测血浆一氧化氮(NO)和内皮素(ET)浓度、测定肺水含量并做肺组织病理学检查。结果: 给予LPS的大鼠,MAP持续下降,至4 h MAP(8.1±2.6)kPa;血浆NO和ET浓度均显著升高(P<0.01 vs control);4 h肺湿干比(5.15±0.43),显著高于对照组(P<0.05);大鼠肺组织病理学检查呈现肺间质水肿。LPS＋ANP组大鼠MAP在给药初期的短暂下降后逐步回升,至4h MAP(13.4±2.9)kPa(P<0.05 vs LPS);4 h血浆NO水平和ET浓度均显著下降(P<0.05 vs LPS),但仍明显高于对照组(P<0.01 vs control);肺湿干比(4.57±0.35)与对照组没有显著差异;肺组织病理学改变较LPS组明显减轻。结论: ANP对LPS引起的急性肺损伤有治疗作用,能调节LPS引起的动脉血压的持续下降,上述作用可能与ANP拮抗ET的产生、降低NO的分泌有关。     

FK506 ameliorates podocyte injury in type 2 diabetic nephropathy by down-regulating TRPC6 and NFAT expression

Diabetic nephropathy (DN) is the leading cause of end-stage renal failure, and podocyte injury plays a major role in the development of DN. In this study, we investigated whether tacrolimus (FK506), an immunosuppressor, can attenuate podocyte injury in a type 2 diabetic mellitus (T2DM) rat model with DN. Transmission electron microcopy was used to morphologically evaluate renal injury. The urinary albumin (UAL), creatinine clearance rate (Ccr) and major biochemical parameters, including glucose, insulin, serum creatinine (Scr), urea nitrogen, total cholesterol (CHO) and triglyceride (TG), were examined 12 weeks after the administration of FK506. The expressions of the canonical transient receptor potential 6 (TRPC6), nuclear factor of activated T-cells (NFAT) and nephrin were detected by Western blotting and qPCR. In the rat model of DN, the expressions of TRPC6 and NFAT were significantly elevated compared with the normal rat group; however, the treatment with FK506 normalized the increased expression of TRPC6 and NFAT and attenuated podocyte ultrastructure injury. UAL, Ccr and the biochemical parameters were also improved by the use of FK506. In cell experiments, FK506 improved the decreased expression of nephrin and suppressed the elevated expression of both TRPC6 and NFAT caused by high glucose in accordance with TRPC6 blocker {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"U73122","term_id":"4098075","term_text":"U73122"}}U73122. Our results demonstrated that FK506 could ameliorate podocyte injury in T2DM, which may be related to suppressed expressions of TRPC6 and NFAT.