人参皂苷Rg1对大鼠海水淹溺性肺损伤的保护作用及其机制

 目的 探讨人参皂苷Rg1对海水淹溺性肺损伤的保护作用及其机制。方法 128只雄性SD大鼠随机均分为4组:空白对照组(C组)、生理盐水组(S 组)、20 mg/kg低剂量人参皂甙Rg1组(L组)、100 mg/kg高剂量人参皂苷Rg1组(H组)。L组和H组分别经尾静脉注射人参皂苷20或100 mg/kg, S组尾静脉注射等容的生理盐水,给药2 h后建立海水淹溺性肺损伤模型。分别于吸入海水前(基础值T0)、吸入海水后30 min(T₁)、1 h(T₂)、2 h(T₃)和4 h(T₄)各时间点检测动脉血PaO₂和PaCO₂的动态变化;于建模后2 h和4 h取出肺组织和外周血标本,检测肺湿干重比(W/D)、肺泡灌洗液蛋白定量(BALF)、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)和细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度,取建模后4 h的右肺下叶组织行HE病理检查。结果 T₀时4组的动脉血 PaO₂、PaCO₂差异均无统计学意义。T₁~T₄时S和L组PaO₂明显低于 H组(P<0.05),S和L组PaCO₂明显高于H组(P<0.05)。T₃和T₄时,S、L和H组肺组织 W/D比值均明显高于C组(P<0.05),H 组肺组织 W/D明显低于S组和L组(P<0.05)。H 组 MDA浓度和MPO活性明显低于S组和 L组(P<0.05), H 组SOD活性明显高于S组和 L组(P<0.05)。H 组血清中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显低于S组和L组。HE病理染色显示H 组肺泡塌陷、水肿及炎性细胞浸润较S组明显减轻。结论 预防性使用人参皂苷Rg1(100 mg/kg)能显著减轻海水淹溺导致的早期(4 h内)肺损伤,其保护机制与减轻肺内的炎性反应和氧化应激相关。     

人参皂甙Rg3促进同系小鼠外周血干细胞移植后免疫恢复研究

目的研究人参皂甙Rg3对小鼠外周血干细胞移植（PBSCT）后免疫恢复的促进作用。方法首先建立PBSCT小鼠模型，然后将90只接受移植的小鼠随机分成6组，分别从移植后第15天起腹腔注射不同剂量Rg3、IL-2及生理盐水。淋巴细胞转化实验观察T淋巴细胞功能的恢复；抗体形成实验（溶血素分光光度法）观察B淋巴细胞功能的恢复；杀伤实验观察NK细胞的功能恢复；流式细胞计数观察T亚群、B和NK细胞的恢复。结果9mg／kg＋IL-2联合治疗组显现出了良好的协同免疫增强作用，对细胞及体液免疫恢复的促进作用明显好于其他实验组及盐水组。NK细胞的恢复，各实验组之间无明显差异，但都要好于盐水组。结论人参皂甙Rg3与IL-2联合应用可明显加快移植后小鼠的免疫恢复过程，具有显著的免疫增强作用。两者的联合治疗要明显好于IL-2或Rg3单药治疗效果。     

三七消痔栓的鉴别及人参皂甙Rg1的含量测定

目的：对三七消痔栓进行质量控制,对其主要药物进行定性鉴别,并建立人参皂苷Rg1的定量测定方法。方法：采用TLC法对三七,川芎,冰片进行定性鉴别,用薄层双波长锯齿扫描法测定人参皂苷Rgl的含量。结果：三七消痔栓中人参皂苷Rgl1在0．798－3．990ug(r-0.9989)范围内呈良好的线性关系,含量为0．194mg.g^-1,回收率为98．28％,RSD为0．66％,结论：TCL法作为该制剂的质量控制方法,简单快速,稳定可靠。     

人参皂甙Rg1对小鼠力竭游泳后恢复期骨骼肌自由基代谢的影响

目的 :研究人参皂甙Rg1对急性力竭游泳后恢复期小鼠骨骼肌自由基代谢的影响。方法 :以小鼠为实验动物 ,测定 2 4h后第二次力竭游泳时间和不同恢复时间小鼠骨骼肌MDA含量、SOD、GPX及CAT的活性。结果 :(1 )人参皂甙Rg1给药组小鼠第二次力竭游泳时间较对照组明显延长 ;(2 )急性力竭游泳后恢复期人参皂甙Rg1给药组小鼠骨骼肌MDA含量的降低及SOD活性的升高与对照组比较均有显著性差异。结论 :人参皂甙Rg1能促进力竭游泳后小鼠体能的恢复 ,其机制可能与其能增强抗氧化酶的活性 ,加速自由基的清除 ,减轻自由基对骨骼肌的损伤作用有关     

三七皂甙单体Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体功能影响的研究

目的观察三七皂甙单体Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体细胞色素氧化酶(COX)活性及膜电位的影响。方法健康Wistar大鼠24只,随机等分为4组:正常对照组(N)、失血性休克5小时组(HS)、单纯复苏对照组(RE)、复苏加Rg1治疗组(Rg),每组6只。采用荧光分光光度法检测线粒体膜电位;采用紫外分光光度法检测COX活性。结果失血性休克5小时大鼠肠上皮细胞线粒体摄取Rhoda-mine123减少,即膜电位水平显著降低(P0.01),单纯复苏组膜电位有轻微提高,复苏加Rg1治疗组线粒体膜电位明显提高,恢复到正常组水平。失血性休克5小时大鼠肠上皮细胞线粒体COX活性显著降低,单纯复苏后其活性仍然较低。复苏加Rg1治疗组COX活性较休克组比较有明显升高,并显著高于单纯复苏组。结论复苏加Rg1可显著提高失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体COX活性及线粒体膜电位。Rg1提高COX活性可能和提高该酶的产量和质量有关。     

HPLC法测定田七痛经胶囊中人参皂苷Rg1的含量

目的:建立RP-HPLC法测田七痛经胶囊中有效成份人参皂苷Rg1的含量。方法:hypersil NH2色谱柱(5μm 4.6 mm×150 mm);乙腈-水(86∶14)为流动相;检测器为蒸发光散射检测器;流速为1.0 mL/min;线性范围1.34μg～6.71μg(r=0.9999),加样回收率为99.1%。结论:此方法简便、快捷、准确。     

人参皂甙20(R)-Rg3对人胶质瘤U87侵袭的影响

目的探讨人参皂甙20(R)-Rg3体外对人胶质瘤系U87细胞侵袭的影响及可能机制。方法采用MTT法检测Rg3对U87细胞黏附纤维连接蛋白能力的影响。采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测Rg3对U87细胞侵袭能力的影响。采用明胶酶活性方法检测Rg3对U87细胞MMP-9和MMP-2蛋白表达的影响。结果 Rg3(12.5、25、50 ng/L)作用24 h后,U87细胞黏附纤维连接蛋白能力逐渐降低,呈显著的浓度依赖性(P<0.05)。体外侵袭实验显示不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞侵袭能力逐渐降低。明胶酶活性检测表明增殖,不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞中基质金属蛋白酶MMP-2蛋白酶原及其活性片段的表达逐渐减少,呈显著的浓度依赖性。结论 Rg3能显著抑制U87细胞的黏附和侵袭能力,可能与Rg3降低MMP-2蛋白酶原及其活性片段表达减少有关。     

人参皂甙Rb1对急性运动小鼠肝损伤保护作用的研究

目的探讨人参皂甙Rb1对急性运动小鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法实验小鼠随机分为4组:安静+生理盐水组(A组,n=7),安静+人参皂甙Rb1组(B组,n=7),力竭运动+生理盐水组(C组,n=7),力竭运动+人参皂甙Rb1组(D组,n=7)。测定血中AST、ALT的含量;检测肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的活性。结果 C组小鼠血中转氨酶水平及肝脏中MDA活性比D组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而肝脏组织中SOD及GSH的活性显著低于D组,差异有统计学意义(P<0.05);A、B、D三组之间的血中转氨酶及肝脏SOD、GSH及MDA活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂甙Rb1能够通过增强肝脏清除自由基能力的机制从而起到保护急性运动肝损伤的作用。     

人参皂苷Rg1对急性心肌梗死后VEGF和HIF-1α的作用

目的研究人参皂苷Rg1，对急性心肌梗死（AMI）后血管新生的影响及其作用机制。方法建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型，104只大鼠分为假手术组、急性心肌梗死对照组、人参皂苷Rg1低剂量治疗组（1mg／kg）和高剂量治疗组（5mg／kg），于术后3、7、10、14天测定梗死区微血管密度，RT-PCR法检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子（VEGF）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA，免疫组化法检测VFGF在梗死区内的表达。结果梗死区的血管生成数量稳定持续的增加，治疗组显著高于对照组（P〈0．01）；心肌梗死后VEGF、HIF-1α mRNA表达随缺血时间的延长（3、7、10天组）有增高趋势，治疗组明显升高（P〈0．01），14天时VEGF的增长出现停止或下降，而HIF-1α继续升高；假手术组VEGF表达明显低于各手术组。结论严重缺血可刺激心肌组织产生大量的VEGF、HIF-1α，其对缺血心肌起保护作用，人参皂苷Rg1可通过增加其表达而刺激心肌梗死区的血管生成和侧支循环建立。     

红细胞生成素(EPO)对脑源性神经干细胞增殖与分化的调控作用

目的探讨红细胞生成素(EPO)对大鼠海马神经干细胞(NSCs)体外增殖和分化的影响。方法利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSCs,在NSCs增殖和分化过程中添加不同剂量EPO,以免疫细胞化学方法对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果与对照组相比,不同接种密度条件下的NSCs加入EPO后,增殖期表达Nestin的细胞增加2～4倍,分化期表达Nestin的细胞数明显减少;表达Tuj1和GFAP的细胞出现早,且Tuj1阳性细胞较对照组明显增加(P<0.05),加入antiEPO后Tuj1阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01);相同细胞接种密度下,添加不同剂量EPO后Tuj1阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论EPO可促进大鼠海马源NSCs的增殖,并使其呈剂量依赖性的向神经元分化。     

EPO促进血管痴呆大鼠神经干细胞增殖的机制研究

目的研究促红细胞生成素（EPO）促进血管性痴呆（VD）大鼠神经干细胞（NSC）增殖的分子调控机制。方法选取SD大鼠60只,采用改良血管阻断加硝普钠降压法建立VD大鼠模型,随机分为VD组和治疗组;治疗组腹腔注射EPO,分别于建模后7、14 d提取分离各组大鼠脑组织RNA,采用RT-PCR检测NSC增殖相关调控基因FGF2、EGF、TGFа表达。结果治疗组7 d、14 d时的FGF2、EGF表达均高于VD组（P〈0.05）,TGFа表达两组无统计学差异;7 d时两组FGF2表达明显高于EGF（P〈0.05）,14 d时则无统计学差异。结论 EPO通过上调胞外FGF2及EGF表达促进VD大鼠NSC增殖;在VD大鼠NSC增殖早期,FGF2起主要作用。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑瘫2年随访

 目的 观察自体骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)转化神经干细胞治疗脑瘫的临床效果。方法 选择2010-06至2011-06期间, GMFCS级别III～Ⅴ级,自愿接受干细胞移植的脑瘫患儿11例为移植组,同时选择年龄、性别及疾病严重程度相仿的11例脑瘫患儿为对照组。移植组采用hMSCs转化神经干细胞移植治疗和运动功能锻炼为主的康复治疗,对照组仅仅给予运动锻炼为主的康复治疗。采用脑瘫患儿粗大运动功能评定(GMFM)量表评价移植组和对照组在治疗前和治疗后1、3、6、12、18、24个月的GMFM得分。结果 (1)移植组治疗后1个月、3个月、6个月的GMFM较GMFM0上升率均明显高于对照组(P=0.025);移植组治疗后3个月GMFM3较1个月GMFM1的上升率比较有明显差异,而治疗后6个月GMFM6较3个月GMFM3的上升率比较无统计学差异,提示移植组运动能力在移植后2~3个月时快速显示明显的康复效果。对照组GMFM上升率无此特征;(2)随访12个月、18个月及24个月发现移植组和对照组的GMFM12、GMFM18、GMFM24较之前6个月的GMFM的上升率无差异,而较治疗之前的GMFM0的上升率有显著差异(P<0.01)。(3)两组治疗后1个月、3个月的语言商与治疗前语言商比较,上升率差异均无统计学意义,两组治疗后6个月、12个月移植组语言商较治疗前上升率明显高于对照组(P<0.01)而18个月及24个月随访提示语言商上升率较对照组无增快显现,但较治疗前语言商上升率有明显差异(P<0.05)。结论 hMSCs转化神经干细胞移植治疗脑瘫安全,有效,对脑瘫患儿的运动功能改善明显,在移植后3个月明显显效。6个月以后运动康复效果逐渐消失,但患儿运动能力无倒退现象。语言功能的改善显效较晚,在移植治疗后6个月后显效,12个月后语言快速改善效果消失,但没有语言能力的倒退。
     

心理因素对脊髓损伤患者神经干细胞移植疗效的影响

 目的 探讨脊髓损伤患者心理因素对神经干细胞(neural stem cells, NSCs)移植疗效的影响.方法 随机选择60例脊髓损伤患者,根据自评焦虑量表(SAS)评分系统分为高评分组和低评分组,采用相同的NSCs移植方案,术后给予相同的治疗及护理措施,术后3个月评价患者各方面改善情况,并比较两组之间的差别.结果 SAS低评分组改善情况明显好于高评分组,两者间差异具有统计学意义.结论 心理因素对脊髓损伤患者NSCs移植疗效有一定影响.     

胚胎脊髓提取液对神经干细胞分化发育的影响

目的 观察胚胎脊髓提取液(fetal spinal cord extracts,FE)对神经干细胞(neural stem cells,NSC)分化的影响并探讨其机制.方法 制备FE加入NSC培养体系中诱导分化,分别于分化后第3、7天进行免疫荧光细胞化学鉴定,观察分化细胞表型并计算神经元样细胞所占的比例.结果 两组均可观察到神经元,实验组所占比例较高,可达23.39%,明显多于对照组(P＜0.01).两组GFAP阳性星形胶质细胞分化已经比较成熟,也可检测出MBP阳性少突胶质细胞.结论 FE通过提供胚胎脊髓源性神经营养因子、各种细胞因子和细胞外基质,支持NSC成活并诱导其分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,且神经元的分化比例达到23.39%.     

Magnetic resonance imaging detects differences in migration between primary and immortalized neural stem cells

RATIONALE AND OBJECTIVES: The study was performed to evaluate the effect of magnetic resonance imaging (MRI) contrast agent (super paramagnetic iron oxide [SPIO]) on differentiation and migration of primary murine neural stem cells (NSCs) in comparison to a neural stem cell line (C17.2). Because detection of labeled cells depends on the concentration of SPIO particles per imaging voxel, the study was performed at various concentrations of SPIO particles to determine the concentration that could be used for in vivo detection of small clusters of grafted cells. MATERIALS AND METHODS: Murine primary NSCs or C17.2 cells were labeled with different concentrations of SPIO particles (0, 25, 100, and 250 mug Fe/mL) and in vitro assays were performed to assess cell differentiation. In vivo MRI was performed 7 weeks after neonatal transplantation of labeled cells to evaluate the difference in migration capability of the two cell populations. RESULTS: Both the primary NSCs and the C17.2 cells differentiated to similar number of neurons (Map2ab-positive cells). Similar patterns of engraftment of C17.2 cells were seen in transplanted mice regardless of the SPIO concentration used. In vivo MRI detection of grafted primary and C17.2 cells was only possible when cells were incubated with 100 mug/mL or higher concentration of SPIO. Extensive migration of C17.2 cells throughout the brain was observed, whereas the migration of the primary NSCs was more restricted. CONCLUSIONS: Engraftment of primary NSCs can be detected noninvasively by in vivo MRI, and the presence of SPIO particles do not affect the viability, differentiation, or engraftment pattern of the donor cells.     

间充质干细胞移植治疗小儿脑瘫疗效分析

目的观察及对比分析自体骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）和脐血间充质干细胞（umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCBMSCs）移植治疗小儿脑瘫（cerebral palsy,CP）的临床疗效。方法 CP患儿60例,随机分入BMSCs移植组和UCBMSCs移植组,并接受术后6个月的随访,观察对比两组患儿术前与术后高级智能和肢体运动功能的变化。结果两组高级智能均有改善（包括：智力、语言、性情）,高级智能功能改善率差异无统计学意义（7.5%vs 6.7%,P〉0.05）。术后6个月运动功能两组较术前均有改善,BMSCs移植组在竖头（14.3%vs 2.7%）、身体居中性（7.7%vs 2.7%）、翻身（6.7%vs 0）、双上肢抓握等改善率均显著高于UCBMSCs移植组（P〈0.01）。结论 UCBMSCs和BM-SCs移植对高级智能功能均有改善;而BMSCs移植对CP患者活动功能改善显著优于UCBMSCs移植。     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞诱导凋亡作用

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法用浓度梯度Rg3处理Hela细胞,用流式细胞仪方法检测细胞凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、bax表达。结果 10、20、40 mg/L Rg3作用Hela细胞24 h后的凋亡率分别为(5.6±1.4)%、(10.3±2.7)%、(21.2±4.9)%,均高于对照组(P<0.01);同时随着Rg3浓度的增加,G2/M期细胞比例升高,Bcl-2表达明显降低,bax基因表达明显升高(P<0.01)。结论 Rg3能将Hela细胞阻滞在G2/M期,通过上调bax和下调Bcl-2表达诱导肿瘤细胞凋亡。其作用呈浓度依赖性。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤

目的探索移植转染胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的大鼠神经干细胞（NSCs）能否促进脑损伤大鼠的神经功能修复。方法利用阳离子脂质体转染GDNF基因到大鼠NSCs，在脑立体定向仪引导下分别将PBS、NSCs、转基因NSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘，通过观察记录大鼠行为能力的变化，评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况。结果转染后72h，荧光蛋白大量表达。转基因细胞移植后可以在14d时仍表达GDNF基因，各实验组于移植后3d时行为学指标差异无统计学意义（P〉0．05），而在移植后7d，移植转基因NSCs组和NSCs组即与对照组在行为学指标上差异有统计学意义（P〈0．05）；在移植后14d，移植转基因NSCs组与其余两组在行为学指标上差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论转基因NSCs移植后可以分泌GDNF并促进脑外伤大鼠神经功能的恢复。