HPLC法测定两性霉素B中乙二胺四乙酸二钠含量

摘 要 目的： 建立两性霉素B注射液中乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）的HPLC检测方法。方法: 采用Waters C18柱（50 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相A为醋酸溶液（取冰醋酸1.5 ml,加水1 000 ml,加四丁基氢氧化铵41 ml）,B为乙腈,梯度洗脱流速0.8 ml·min^-1,柱温30℃,检测波长为260 nm,进样体积25 μl。结果: EDTA 2Na峰与其他色谱峰分离度良好,在0.92~7.37 μg·ml^-1浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9）,最低检测限（LOD）为1.93 ng·ml^-1,最低定量限（LOQ）为6.45 ng·ml^-1,平均回收率分别为102.5%,RSD为2.8%（n=9）。结论:本方法操作简便,精密度好,结果准确可靠,可用于两性霉素B原料药中EDTA 2Na的质量控制。     

反相高效液相色谱法测定血浆中两性霉素B浓度

目的：采用反相高效液相色谱法测定两性霉素B（AMB）的血药浓度,用于该药的治疗药物监测。方法：在ODS－HypersilC18柱上,以0．005mol/L EDTA-2Na溶液－甲醇（2：8v/v)为流动相,流速为1．5ml/min,检测波长为380nm,测定血中AMB浓度。结果：AMB保留时间为3.85min,在0．125－4．0μg/ml之间有较好的线性范围。r=0.9998,最低检测浓度为0.06μg/ml,AMB样品日内精密度和日间精密度均小于3．5％,平均方法回收率99．4％。结论：本方法专一性强,回收率高,样品保留时间短,适用于临床AMB的治疗药物浓度监测。     

高效液相色谱法测定人血浆中两性霉素B浓度

目的　测定人血浆中两性霉素B浓度。方法　色谱柱为SupelcosilLC 18 DB( 4 .5mm× 2 5 0mm ,5 μm) ,流动相为0 .0 2 5mol/L乙二胺四乙酸二钠 (EDTA 2Na) 乙腈 ( 5 0∶5 0 ) ,柱温 :2 5℃ ,流速 1.0mL/min ,检测波长 4 0 5nm。结果　人血浆中两性霉素B浓度在 0 .0 5～ 4 .0 μg/mL范围内线性关系良好 ,回归方程为 :C =5 .0 4× 10 -6A + 0 .0 7(r =0 .9994 )。高、中、低 3个浓度平均回收率为 ( 98.4± 6 .9) % ;日内RSD≤ 3.5 % ,日间RSD≤ 7.6 %。结论　本法灵敏、快速、重现性好 ,分析时间短 ,可用于临床药代动力学研究及血药浓度监测     

HPLC法测定复方两性霉素B眼用凝胶的含量

目的建立同时测定复方两性霉素B眼用凝胶中两性霉素B和利福平含量的高效液相色谱法。方法采用Diamonsil C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,以0．005mol／L乙二胺四乙酸二钠-乙腈（65：35）为流动相,流速为1．0ml／min,检测波长为334nm,柱温为20℃。结果曲性霉素B的线性范围为4．816～48．16μg／ml,r=0．9999,平均回收率为99．3％,RSD=1．0％（n=9）;利福平的线性范围为1．739～17．39μg／ml,r=0．9999,平均回收率为99．4％,RSD=1．1％（n=9）。结论该方法操作简便,快速,结果准确,可适用于产品的质量控制。     

HPLC法测定复方两性霉素B眼用凝胶的含量

目的建立同时测定复方两性霉素B眼用凝胶中两性霉素B和利福平含量的高效液相色谱法。方法采用DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.005mol/L乙二胺四乙酸二钠-乙腈(65∶35)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为334nm,柱温为20℃。结果两性霉素B的线性范围为4.816～48.16μg/ml,r=0.9999,平均回收率为99.3%,RSD=1.0%(n=9);利福平的线性范围为1.739～17.39μg/ml,r=0.9999,平均回收率为99.4%,RSD=1.1%(n=9)。结论该方法操作简便,快速,结果准确,可适用于产品的质量控制。     

反相高效液相色谱法测定两性霉素B中的相关杂质

目的：建立高效液相色谱法分离测定两性霉素B中有关物质。方法：采用KromasilC18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相（乙腈：甲醇：2．5nmaol／LEDTA=25：50：30）;检测波长λ=405nm;流速：1．0mL／min。结果：两性霉素B与14种相关杂质能完全分离,样品的浓度（C在14．07～26．0μg/mL范围内与各杂质峰面积响应值似）均呈良好的线性关系。结论：实验建立的方法简便、准确、可靠,适用于生产过程中间体、产成品杂质控制。     

用RP-HPLC法测定注射用两性霉素B脂质体中两性霉素B的含量

两性霉素B（amphotericin B）是一种多烯类广谱抗真菌抗生素，是目前临床上治疗全身隐球菌、曲霉菌等真菌感染的一种有效药物，但该药在治疗剂量下比较严重的毒副作用限制了它在临床上的使用。研究表明，脂质体作为药物载体可以有效地降低药物的毒副作用，提高药物的治疗指数。     

反相高效液相色谱法测定人血浆中两性霉素B浓度

目的:建立以反相高效液相色谱法测定两性霉素B血药浓度的方法。方法:色谱柱为C18,流动相为0.005mol/L乙二胺四乙酸二钠-甲醇(3∶7),流速为1.0ml/min,检测波长为380nm。结果:两性霉素B检测浓度线性范围为0.125～4.0μg/ml(r=0.9998),高、中、低3种浓度的平均回收率为93.5%,日内和日间RSD均小于3.6%。结论:本方法简便、快速、专属性强、重现性好,适用于临床两性霉素B血药浓度的监测。     

HPLC法测定两性霉素B含量

目的：用高效液相色谱法测定两性霉素 Ｂ含量。方法：外标法定量，色谱柱为μ－ Ｂｏｎｄａｐａｋ Ｃ柱（１０μｍ， ３．９ｍｍ × ３００ｍｍ）；流动相为乙腈－磷酸盐缓冲液（ｐＨ６． ２０）（５５： ４５， ｖ／ｖ），其中含 ０．０２ｍｏｌ／Ｌ四丁基溴化铵；流速１．２ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长４０５ｎｍ。结果：两性霉素Ｂ浓度在３．０～２１．０μｇ／ｍｌ范围内线性关系良好，其相关系数 ｒ＝ ０．９９９７，本方法的平均回收率为 １０２．９４ ± ２．１７％，日内和日间相对标准偏差分别平均为 ２．８０％和５．２５％。结论：该方法简便、快速、准确、重现性好。     

注射用两性霉素B脂质体致呼吸困难

1例7岁女性儿童,确诊急性淋巴细胞白血病3年,既往无药物和食物过敏史。治疗期间在第一次使用注射用两性霉索B脂质体30min,出现呼吸困难、寒战、体温39℃,无头痛、低血压。立即停止输注注射用两性霉素B脂质体,给予盐酸异丙嗪注射液10mg肌肉注射、注射用赖氨匹林0．45g入莫菲氏管,30min后症状缓解,4h后体温降至正常,5h后继续使用该药物,未再发生类似反应。     

兔眼玻璃体腔两性霉素B的高效液相色谱法测定

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定新西兰大白兔眼玻璃体腔两性霉素B.方法:兔眼玻璃体溶液两性霉素B标本100μL经过冷冻干燥后,加入乙腈-水(70:30)20 μL去蛋白,并溶解浓缩回收目标药物,13 000r·min-1离心5 min,取10 μL进样分析.色谱条件为流动相:乙腈-10 mmol·L-1磷酸二氢钠溶液(35:65),流速:0.20 mL·min-1,C18色谱柱,柱温:25℃,检测波长:410nm.结果:两性霉素B在3～500μg·L-1内线性关系良好(r=0.998 8),高、中、低3种浓度的方法回收率为99%～108%,绝对回收率为83%～93%;日内、日间RSD分别为3.1%～12.6%,3.8%～12.9%;检测灵敏度为1μg·L-1.结论:本方法适用于兔眼玻璃体腔两性霉素B的定量分析,过程简单,方法稳定,结果可靠.     

高效液相色谱法测定两性霉素B在家兔体内的血药浓度及药动学

目的：建立血浆中两性霉素B浓度的HPLC测定方法,并用此方法研究两性霉素B在家兔体内的药动力学,方法：血浆经处理后,采用PlatinumC18柱以乙腈-0.005mol.L^-1EDTA-2Na(60:40)为流动相,在紫外405nm处检测。结果：两性霉素B浓度在0．05－12．8ug.ml^-1范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,血浆中药物最低检测浓度为0．005ug.ml^-1,高中低三种浓度的日内及日间RSD％（n=5)分别为（0．34－1．71％）和（0．25－6．78）％,方法回收率和绝对回收率分别为（100．03－105．19）％和（92．18－95．21）,药动研究表明,家兔静脉注射单剂量的两性霉素B后其体内血药浓度时间数据符合权重为1／C的三室模型。结论：本方法操作简便,结果准确可靠,很好的满足两性霉素B血药浓度测定及药动学的研究。     

两性霉素B阴道泡腾片有关物质液相色谱方法的建立

目的:建立以液相色谱方法测定两性霉素B阴道泡腾片有关物质的方法.方法:色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18(4.6mm×250mm,5μm)C18,流动相为0.005mol/L EDTA-Na2溶液-甲醇(3:7),流速为1.0ml/min,柱温:35℃,检测波长为380mm.结果:在上述色谱条件下,各成分得到有效分离,空白辅料无干扰.结论:该方法专属性强、灵敏度高、系统耐用性好,可以作为两性霉素B阴道泡腾片的有关物质检测方法.     

浊度法测定两性霉素B及其脂质体的效价

目的建立浊度法测定两性霉素B及其脂质体效价的方法。方法啤酒酵母为实验菌,加菌量2%～3.3%(V/V),(37±1)℃培养6～8h测定。结果抗生素线性浓度为0.04～0.10μg/ml,一剂量法、二剂量法的平均回收率分别为103.5%(n=5)、106.6%(n=2),日内RSD分别为1.64%、0.38%,日间RSD分别为2.79%(n=8)、0.87%(n=3)。结论本方法灵敏,快速,可作为测定两性霉素B及其脂质体的效价的方法。     

HPLC测定易善复注射液中维生素B2的含量

目的 建立HPLC法测定易善复注射液中维生素B2的含量.方法 采用Lichrospher C18色谱柱,甲醇-2.5 mmol·L-1庚烷磺酸钠(含三乙胺0.1%,磷酸调pH2.5)(29:71)为流动相;流速1 ml·min-1,柱温30℃,检测波长267 nm.结果 维生素B2在1～100 ng·ml-1范围内与峰面积有良好的线性关系(r=0.9999).检测限和定量限分别为0.15 ng和0.50 ng,平均回收率为100.1%,RSD=0.76%.结论 所建方法简便、准确,专属性好,可用于易善复注射液中维生素B2的测定.     

注射用两性霉素B脂质体效价测定法的改进

目的 建立准确测定注射用两性霉素B脂质体效价含量的生物测定方法,解决现有质控标准中培养体系下无法形成抑菌圈的难点问题。方法 效价测定方法：管碟法,沙氏培养基(含1%氯化钠)pH6.0~6.2,磷酸盐缓冲液(pH7.0,含1%聚山梨醇),检定菌为啤酒酵母(ATCC9763)。桥接液相方法：色谱柱：CAPCELLPAK MG ⅡC18(250mm×4.6mm, 5μm);流动相：乙腈：磷酸溶液(pH1.00±0.05)(370:630, V/V);流速：0.8mL/min;柱温：25℃;检测波长：383nm;进样量：10μL。结果 改进后的方法：抑菌圈边缘清晰,且其抑菌圈直径大小符合生物测定法的方法学要求;在1.0~11.9u/mL浓度范围内线性良好(r=0.9995);可信限率符合中国药典要求(不大于5%);通过HPLC间接桥接方式验证,效价含量测定结果准确,可满足预期用途。结论