三维培养条件下电离辐射诱导适应性反应研究

目的研究在三维细胞培养条件下,电离辐射诱导人成纤维细胞发生适应性反应。方法采用人成纤维细胞进行三维条件培养,以60Co进行照射（诱导剂量D1为0.1Gy,攻击剂量D2为2Gy）,以Western blot检测生长相关基因p53和p21的表达,免疫荧光染色及共聚焦法观察形态学变化。结果三维培养条件下,细胞生长与二维（单层）培养形态学表现明显不同,细胞形态伸展,呈现伪足和多微丝状,细胞正常∶异常∶中间态比例为87.05%∶6.1%∶6.85%。经过2Gy（D2）照射后细胞明显收缩,伪足和微丝消失,与对照组比较,细胞变为正常∶异常∶中间态比例30.4%∶67.45%∶2.15%;预先给以0.1Gy即D1＋D2照射后则出现异常细胞数量减少,正常细胞有所增加,同时不典型的中间态细胞比例增加,细胞比例为正常∶异常∶中间态35.5%∶34.7%∶30.4%。结论人成纤维细胞在三维培养条件下,预先低剂量60Co照射可以降低随后高剂量照射引起的形态学改变,诱导产生适应性反应。     

2 Gy X射线对EL-4细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录和蛋白表达影响

目的研究电离辐射对EL-4细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录及蛋白表达的影响.探讨p16/CyclinD/CDK4负向调控通路在辐射诱导G1期阻滞中的作用.方法采用半定量RT-PCR方法检测2 GyX射线照射后EL-4细胞p16 mRNA水平变化,采用Northern blot方法检测CyclinD、CDK4基因转录变化,应用免疫细胞化学方法(ICC)检测3种蛋白表达的变化.结果2 Gy X射线照射后2～48 h EL-4细胞p16 mRNA水平增高,48 h恢复至正常水平.p16蛋白表达照射后2h开始增高,12h达到峰值(P＜0.01),72 h恢复至正常水平.EL-4细胞周期蛋白CyclinD mRNA水平于照射后1 h开始明显降低,照射后8 h降至最低值.CyclinD蛋白表达于照射后8 h开始明显减少,持续至照射后48 h(P＜0.05～P＜0.01).EL-4细胞CDK4 mRNA水平于照射后1h明显降低,照射后4 h～12 h保持较低水平,72 h恢复至正常水平.CDK4蛋白表达于照射后4 h明显下降,12 h降至最低,72 h仍低于正常水平(P＜0.01).结论2 Gy X射线照射可诱导EL-4细胞p16表达增高,CyclinD和CDK4表达降低.提示p16/CyclinD/CDK4负向调控通路可能在电离辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中发挥重要作用.     

电离辐射对p16基因转录及蛋白表达的影响

目的　研究电离辐射对p16基因转录及蛋白表达的影响。方法　采用Northernblot检测p16mRNA水平的变化 ;采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测p16蛋白表达的变化。结果　研究证实 ,2 0Gy照射后 2～ 2 4h ,胸腺细胞p16mRNA水平明显增高 ,8～ 4 8hp16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;照射后 2～ 8h脾细胞p16mRNA水平明显增高 ,2 4hp16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5 )。研究还证实 ,0 5～ 6 0Gy照射后 ,胸腺细胞p16mRNA水平呈剂量依赖性增高 ,p16蛋白表达在 1 0～ 4 0Gy组显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;脾细胞p16mRNA水平亦增高 ,但增幅远低于胸腺细胞 ,p16蛋白表达在 1 0～ 4 0Gy组显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。结论　电离辐射可诱导p16基因转录及蛋白表达增高 ,其增高幅度表现出一定的细胞异质性。     

辐射对Jurkat细胞P21蛋白及ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响

目的 探讨电离辐射对Jurkat细胞P21蛋白和ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响.方法 采用流式细胞术(FCM),检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后Jurkat细胞中P21蛋白表达的变化.采用实时定量PCR技术,分别检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后4和24 hd'鼠胸腺及脾细胞中p21基因表达的变化.结果 不同剂量X射线照射后12和24 h,Jurkat细胞中P21蛋白表达在0.5～4.0 Gy范围内均随剂量的增大而升高(t=-24.23～-3.96,P<0.05),6 Gy时均出现表达下降(t=-11.19、-14.50,P<0.05);与假照射组相比,在0～6.0 Gy照射后4和24 h,小鼠胸腺及脾细胞中p21基因的相对表达量均随剂量增大逐渐增加(t=-29.96～8.80,P<0.05);并于6.0 Gy时达最高(t=-11.84～-3.42,P<0.05),仅胸腺细胞1 Gy照射后4 h除外(t=-3.42,P>0.05).结论 x射线能诱导P21蛋白及基因表达增加,并在一定剂量范围内存在良好的剂量-效应关系.     

低剂量电离辐射对7721细胞细胞周期及p53、Ku70和Ku80表达的影响

目的　观察电离辐射对 772 1细胞 (人肝癌细胞 )细胞周期和p53、Ku70和Ku80基因表达的影响。方法　以人肝癌细胞株 772 1为研究对象 ,通过克隆形成实验拟合出 772 1细胞的剂量存活曲线 ;用流式细胞技术检测 75mGyX射线照射后 772 1细胞周期变化 ;用原位杂交方法检测 772 1细胞p53、Ku70和Ku80基因在 75mGyX射线照射前、后的表达情况。结果　与对照组相比 ,75mGyX射线照射后 0 5～ 6h ,772 1细胞S期延长 (P <0 0 5)。p53、Ku70和Ku80基因的表达照射前与照射后比较差异无显著性。结论　 772 1细胞在 75mGyX射线照射后 ,未出现G1期阻滞 ,p53、Ku70和Ku80基因在照射前、后表达无明显变化 ,是由于这些基因自身存在缺陷或激活机制存在缺陷所致     

电离辐射对小鼠骨髓细胞p53、Wafl、gadd45基因转录水平的影响

目的研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p53、wafl、gadd45基因转录水平的影响,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理.方法采用Northern blot和半定量RT-PCR方法分别检测p53、wafl、gadd45基因转录水平变化.结果2GyX射线全身照射后2～72 hp53基因转录水平均有不同程度的升高,wafl基因在照射后2 h开始升高,4 h达峰值,一直持续到照后48 h开始恢复,gadd45转录水平除在照射后2 h一过性升高外,从8 h即开始不同程度下降,照射后72 h开始恢复.分别以0.5～6.0 Gy X射线全身照射后12 h取小鼠骨髓细胞作量效研究表明,p53的改变在照射后各组虽有不同程度的升高,但未见明显的剂量依赖,wafl基因转录呈明显的剂量依赖性升高,6.0 Gy X射线照射后达对照组的3.41倍,gadd45未见升高趋势.结论在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期G1阻滞中p53-wafl通路起重要作用,而gadd45可能不参与该过程调控.     

X射线诱导转录因子活化与凋亡的关系

目的 通过观察较高剂量照射的鼠胸腺细胞内几种转录因子活性的变化和胸腺细胞凋亡发展时程，探讨转录因子活性的变化在辐射诱导的免疫细胞凋亡中的作用。方法 通过电泳移动变化分析及流式细胞术的方法分别检测了2Gy X射线全身照射后胸腺细胞内转录因子NF－κB、CREB和OCT－1活性以及胸腺细胞凋亡的动态变化。结果 2Gy X射线全身照射后胸腺细胞内NF－κB两种二聚体p50/p50和p50/p65的DNA结合活性的变化存在着明显的区别，主要以p50/p50活性显著升高为特征，CREB OCT－1的活性也明显增强，活性高峰均出现了照射后4－12h，而它们的活性高峰又恰与2Gy照射诱导的胸腺细胞凋亡的高峰相吻合。结论 较高剂量电离辐射主要诱导NF－κB同源二聚体的DNA结合活性增强；3种转录因子NF－κB p50/50、CREB以及OCT－1可能在2Gy照射诱导的胸腺细胞内具有协同促进细胞凋亡的作用。     

电离辐射联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对乳腺癌MCF-7细胞株作用的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对人乳腺癌MCF．7细胞株的作用以及与放射治疗联合的可行性。方法1×10^4／ml MCF-7细胞接种至96孔板培养后加入不同浓度的TRAIL、给予不同剂量照射及TRAIL与电离辐射联合，Mrrr法检测细胞抑制率。MCF-7细胞接种至6孔板培养后，分别加入TRAIL（1μg／ml）、给予8Gy照射及TRAIL与8Gy照射联合，流式细胞术检测不同处理组细胞的凋亡率。应用RT-PCR法检测经不同处理后的细胞凋亡相关基因的表达情况。结果TRAIL（1μg／ml）与4、8和12Gy照射联合后对细胞的抑制率明显增加，与单独应用TRAIL及单独照射相比，差异有统计学意义。RT-PCR结果显示Bcl-2、Bcl-Xl基因在TRAIL与8Gy照射联合时表达减弱。结论在体外实验中，乳腺癌MCF-7细胞株对TRAIL不敏感，但TRAIL与电离辐射照射联合后抗肿瘤作用增强，TRAIL可能是一种有临床应用潜能的新型抗肿瘤生物制剂。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞p53、waf1、gadd45基因转录水平的影响

目的：研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p53、wafl、gadd45基因转录水平的影响，以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理。方法：采用Northern blot和半定量RT-PCR方法分别检测p53、wafl、gadd45基因转录水平变化。结果：2Gy射线全身照射后2-72hp53基因转录水平均有不同程度的升高，wafl基因在照射后2h开始升高，4h达峰值，一直持续到照后48h开始恢复，gadd45转录水平除在照射后2h一过性升高外，从8h即开始不同程度下降，照射后72h开始恢复。分别以0.5-6.0Gy X射线全身照射后12h取小鼠骨髓细胞作量效研究表明，p53的改变在照射后各组虽有不同程度的升高，但未见明显的剂量依赖，wafl基因转录呈明显的剂量依赖性升高，6.0Gy X射线照射后达对照组的3.41倍，gadd45未见升高趋势。结论：在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期G1阻滞后p53-wafl通路起重要作用，而gadd45可能不参与该过程调控。     

RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响

目的 研究RNA干扰p21基因对X射线诱导细胞周期解耦联的影响。方法构建RNA 干扰质粒pSilencer3.1-H1 neo-p21,并采用脂质体转染将质粒转入EL-4细胞。 采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术 (FCM) 检测蛋白表达的变化。采用碘化丙啶(PI)荧光标记及FCM检测多倍体细胞数的变化。结果量效实验证实, 1.0~4.0 Gy X射线照射后24 h,EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高。 时效实验证实, 4.0 Gy X射线照射后8~72 h, EL-4细胞中P21蛋白表达与对照组相比较显著增高。 实验证实, 0.5~6.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞的八倍体细胞数未见明显变化,X射线照射不诱导EL-4细胞周期解耦联。RNA干扰实验证实, p21基因沉默后, P21蛋白表达于 4.0 Gy照射后24 及48 h, 干扰质粒组与空质粒对照组相比较显著降低;与此同时,干扰质粒组的八倍体细胞数与空质粒组相比较显著增高。结论RNA干扰p21基因使P21蛋白表达抑制后,X射线照射可诱导EL-4细胞周期解耦联。提示,P21蛋白可能在电离辐射诱导细胞周期解耦联中起重要作用。     

核因子E2相关因子2基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响

 目的 探讨核因子E2相关因子2(NRF2)基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响及其机制。方法 采用RT- PCR检测人前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达。采用脂质体转染法将NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列转染至PC-3细胞后,Western blot和RT-PCR检测转染效果,并筛选出干扰效果最好的NRF2 siRNA序列。将体外培养的PC-3细胞分为Con组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和NRF2 siRNA组(转染NRF2 siRNA-3),采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,Western blot检测各组细胞中细胞核增殖相关抗原(Ki67)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、N-钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达。结果 与前列腺上皮细胞株RWPE-1相比,前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达水平明显升高(0.84±0.05 vs 0.22±0.03,P<0.05)。NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列均能够明显下调PC-3细胞中NRF2蛋白(0.56±0.04,0.39±0.03,0.11±0.02 vs 0.76±0.07)和mRNA(0.80±0.05,0.52±0.03,0.26±0.03 vs 1.00±0.05)的表达,且NRF2 siRNA-3的干扰效果明显大于NRF2 siRNA-1和NRF2 siRNA-2。与Con组相比,NRF2 siRNA组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力[存活率:24 h (82.05±5.24)% vs (99.86±5.05)%,48 h (64.57±4.85)% vs (97.28±6.36)%,72 h (45.62±3.76)% vs (94.57±5.49)%;克隆形成率:(39.35±3.26)% vs (66.52±4.85)%;侵袭细胞数:42.00±5.50 vs 85.00±7.50;迁移细胞数:58.00±3.00 vs 118.50±8.00]均明显减弱,同时Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达(Ki67:0.25±0.03 vs 0.78±0.05;CyclinD1 0.41±0.03 vs 0.85±0.06;MMP-9:0.10±0.02 vs 0.89±0.07;N-cadherin:0.22±0.02 vs 0.49±0.04)均明显降低(P<0.05);而NC组与Con组间无统计学差异(P>0.05)。结论 NRF2基因沉默可抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移,其分子机制可能与下调Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达有关。     

CP节律性化疗对人脐静脉内皮细胞及其中自噬相关蛋白Beclin1、LC3的影响

 目的 研究持续低剂量磷酰胺氮芥(phosphoamide, PM)联合泼尼松龙(CP节律性化疗方案)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平的影响,探讨节律性化疗增加HUVEC对化疗药物敏感性的机制。方法 实验分DMSO对照组、磷酰胺氮芥(PM)组、泼尼松龙组、磷酰胺氮芥+泼尼松龙组(CP组),每组重复3次。采用不同的药物处理HUVEC,用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法和反转录PCR检测自噬相关蛋白的表达水平。结果 (1)与DMSO对照组相比,随着时间的延长,PM、泼尼松龙及CP组均使HUVEC的增殖抑制率明显升高(P均<0.001),并且在相同作用时间,不同组的药物对细胞的增殖抑制率也明显不同,泼尼松龙组对细胞的抑制率最低,而CP组对细胞的增殖抑制率(72 h,25.1%±0. 7%)最高,PM组(72 h,20.4%±0.7%)次之(P均<0.01);(2)用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组使HUVEC细胞的凋亡率依次增高(P均<0.001);(3)用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组的Beclin1、LC3的蛋白表达和mRNA表达水平均依次下降(P均<0.001)。结论 人脐静脉内皮细胞HUVEC经CP节律性化疗方案处理后,可以显著降低HUVEC细胞的增殖水平,促进HUVEC细胞的凋亡,并显著降低自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达水平。     

The role of Beclin 1 in SDT-induced apoptosis and autophagy in human leukemia cells

Abstract

Purpose: To prove the occurrence of autophagy after treatment by protoporphyrin IX (PpIX)-mediated sonodynamic therapy (SDT) of human chronic myelogenous leukemia K562 cells as well as its relationship with apoptosis.

Materials and methods: The 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenylter-trazolium bromide tetrazolium (MTT) assay was adopted to examine cytotoxicity of different treatments. Nuclear morphology changes were observed under a fluorescence microscopy with 4?-6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI) staining. Western blotting was used to analyze the expression of caspase-3, Beclin 1 (BECN 1) and the conversion of LC3- phosphatidylethanolamine conjugate/a cytosolic form of LC3 (LC3 II/I). Fluorescence microscope was used to identify the formation of autophagic vacuoles (AVO) during autophagy.

Results: Under optimal conditions, SDT was shown to induce autophagy in K562 cells, which caused the up-regulation of Beclin-1 and the formation of AVO. In addition, pre-treatment of cancer cells with Beclin 1-targeted short hairpin RNA (Beclin 1 shRNA) was shown to reduce the level of LC3-II accumulation and staining with punctate spots of monodansylcadaverine (MDC) staining. Besides, the cytotoxic effect of SDT was significantly increased by Beclin 1 shRNA. Furthermore, studies showed a marked effect on the apoptosis of cells by Beclin 1 shRNA to sonodamage with increased DAPI staining and caspase-3 cleavage.

Conclusions: These results demonstrated that SDT significantly induced autophagy of K562 cells, probably to protect the K562 cells from sonodamage.     

缺氧肠上皮细胞自噬的变化及意义

目的：研究缺氧条件下肠上皮细胞自噬的变化。方法将培养的人肠上皮细胞株Caco-2分为常氧处理组（正常对照组）及缺氧组,缺氧组细胞分别缺氧培养0.5、1、2、6、12及24h。采用蛋白质免疫印迹法检测自噬相关（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）及P62蛋白表达,透射电子显微镜镜观察细胞自噬溶酶体变化,绿色荧光蛋白（GFP）-LC3B融合蛋白示踪肠上皮细胞自噬体形成的变化。结果与正常对照相比较,肠上皮细胞Beclin1和LC3的蛋白表达水平在缺氧0.5h即开始逐渐增加,12h达高峰,24h仍显著高于正常; P62蛋白表达则逐渐降低,24h降至最低;透射电镜下观察到缺氧后肠上皮细胞自噬溶酶体显著增多; GFP-LC3B融合蛋白示踪也显示缺氧后肠上皮细胞自噬体形成非常明显。结论缺氧后肠上皮细胞自噬作用显著增强,可能参与缺氧引起肠上皮细胞损害的调控。     

自噬在X射线照射所致心肌线粒体损伤中的作用

目的观察X射线照射对大鼠心肌线粒体功能的影响以及自噬在线粒体功能损伤中的作用。方法将135只实验大鼠分成假照射组（10只）、照射组（80只）和照射＋3．甲基腺嘌呤（3-MA）组（45只）,假照射组接受0GyX射线照射,照射组给予20Gyx射线照射,照射＋3-MA组接受20Gvx射线照射前30min腹腔注射2μl 3-MA。采用蛋白免疫印迹法和实时定量PCR法检测心肌细胞的LC3II及Beclin1蛋白表达及其mRNA水平变化,检测左心室舒张压及＋-dP／dtmax（左心室压力上升及下降的最大速率）等离体心功能指标。结果与假照射组相比,照射组大鼠经20GyX射线照射后离体心功能在21d时出现降低;而在1d时心肌组织线粒体功能便出现了损伤;同时,心肌细胞自噬水平在3h、6h、12h、1d、2d、4d及7d时出现明显上升,与假照射组之间的差异显著,且在6h达到最高值。与照射组相比,照射＋3一MA组大鼠心肌LC3II及Beclin1表达水平明显下降,且心功能出现异常的时间提前至14d。结论x射线照射损伤大鼠心肌线粒体功能并诱导自噬发生,可能是心肌保护的重要因素。     

白藜芦醇对IEC-6细胞辐射损伤的防护作用及机制研究

目的 探讨白藜芦醇对大鼠小肠隐窝细胞（IEC-6）辐射损伤的防护作用及机制。方法 采用不同剂量（2、4、6、8、10 Gy）的6 MeV高能X射线对大鼠IEC-6细胞进行照射,应用克隆形成实验检测细胞增殖,建立IEC-6细胞辐射损伤模型。应用CCK-8检测不同浓度白藜芦醇（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol/L）对IEC-6细胞活力的影响,以及不同浓度白藜芦醇（0.1、1、2、4、6、8 μmol/L）对照射后细胞活力的影响。将细胞分为对照组、模型组（10 Gy）和白藜芦醇组（10 Gy,1 μmol/L）,对照组接受伪照射并予等量载体孵育;模型组接受6 MeV高能X射线照射,予等量载体孵育;白藜芦醇组在照射前2 h予相应浓度的白藜芦醇预处理,接受与模型组等剂量的高能X射线照射。采用 Annexin V-PI染色检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针检测活性氧;β-Gal染色检测细胞衰老;Real-time qPCR、Western Blot检测p16、p21、CAT和SOD2的mRNA水平及相应蛋白质表达情况。多组间数据比较采用单因素方差分析,应用Tukey’s HSD法进行事后两两比较。结果 4~10 Gy电离辐射明显抑制IEC-6细胞增殖,呈剂量依赖性（均P<0.05）;浓度为0.1、0.5、1、5 μmol/L的白藜芦醇对细胞活力无明显影响（均P>0.05）;浓度为0.1 μmol/L、1 μmol/L的白藜芦醇可增加电离辐射后细胞活力（均P<0.05）。白藜芦醇组细胞凋亡率、DCFH-DA荧光强度、β-Gal 阳性率均低于模型组（均P<0.05）;白藜芦醇组细胞中CAT、SOD2的mRNA水平及相应蛋白质表达较模型组升高（均P<0.05）,但p16、 p21的mRNA水平及相应蛋白质表达较模型组降低（均P<0.05）。结论 白藜芦醇可以降低活性氧水平,抑制细胞衰老和凋亡,从而减轻IEC-6细胞辐射损伤。     

p53 -Dependent thermal enhancement of cellular sensitivity in human squamous cell carcinomas in relation to LET

Purpose : To investigate the dependence on p53 gene status of the thermal enhancement of cellular sensitivity against different levels of linear energy transfer (LET) from X-rays or carbon-ion (C-) beams. Materials and methods : Two kinds of human squamous cell carcinoma cell lines were used with an identical genotype except for the p53 gene. SAS/m p53 cells were established by transfection with mutated p53 (m p53) gene to SAS cells having functional wild-type p53 (wtp53). As the control, a neo vector was transfected to the SAS cells (SAS/ neo cells). Both cells were exposed to X-rays or accelerated C-beams (30-150 KeV w m -1) followed by heating at 44°;C. Cellular sensitivity was determined by colony-forming activity. Induction of apoptosis was analysed by Hoechst 33342 staining of apoptotic bodies and agarose-gel electrophoresis for the formation of DNA ladders. Results : It was found that (1) there was no significant difference in cellular sensitivity between SAS/ neo and SAS/m p53 cells to LET radiation of >30 KeV w m -1, although the radiosensitivity of SAS/ neo cells to X-rays was higher (1.2-fold) than that of SAS/m p53 cells; (2) there was an interactive thermal enhancement of radiosensitivity below an LET of 70 KeV w m -1 in SAS/ neo cells, although only additive thermal enhancement was observed in SAS/m p53 cells through all LET levels examined; (3) low-LET radiation induced apoptosis only in SAS/ neo cells; (4) high-LET radiation at an isosurvival dose-induced apoptosis of SAS/ neo cells at a higher frequency compared with that with low-LET radiation; (5) high-LET radiation-induced p53-independent apoptosis in SAS/m p53 cells; and (6) thermal enhancement of cellular sensitivity to X-rays was due to induction of p53-dependent apoptosis. Conclusions : The findings suggest that thermal enhancement of radiosensitivity may result from p53-dependent apoptosis induced by inhibition of p53-dependent cell survival system(s) through either regulation of the cell cycle or induction of DNA repair. It is also suggested that the analysis of p53 gene status of cancer cells may predict response to combined therapies with low-LET radiation and hyperthermia.     

异紫堇碱对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响

目的 探讨异紫堇碱（ICD）对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。 方法 采用不同浓度（25、50、100、200 μmol/L）ICD处理宫颈癌SiHa细胞（简称ICD处理组）,同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照（NC）组。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测细胞的增殖抑制率,细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响,Western blot检测磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的相对表达量,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的表达。在SiHa细胞中分别转染miR-NC和miR-129-5p,观察转染miR-129-5p对细胞增殖、辐射敏感性、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、γ-H2AX蛋白表达的影响。在SiHa细胞中分别转染anti-miR-NC和anti-miR-129-5p并使用ICD处理,分析其对ICD诱导的细胞增殖、辐射敏感性、PI3K/Akt信号通路的影响。2组间数据的比较采用独立样本t检验。 结果 MTT实验结果显示,与NC组SiHa细胞的增殖抑制率[（0.05±0.01）%]相比,25、50、100、200 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（10.26±1.03）%、（22.16±2.21）%、（44.09±4.41）%、（70.88±7.09）%],且差异均有统计学意义（t=29.736~30.013,均P<0.05）。细胞克隆形成实验、Western blot和qRT-PCR结果显示,与NC组相比,100 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=19.135~44.478,均P<0.05）,提高γ-H2AX蛋白和miR-129-5p的相对表达量（t=15.041、19.682,均P<0.05）,降低p-PI3K和p-Akt蛋白的相对表达量（t=14.897、15.429,均P<0.05）。与转染miR-NC组相比,转染（高表达）miR-129-5p组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（75.06±7.51）%对（1.04±0.10）%,t=29.566,P<0.05]、对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=13.239~37.015,均P<0.05）和γ-H2AX蛋白的相对表达量（t=17.076,P<0.05）,能够降低cyclinD1蛋白的相对表达量（t=17.393,P<0.05）。与转染anti-miR-NC+ICD处理组相比,转染anti-miR-129-5p（低表达miR-129-5p）+ICD处理组可以反转ICD抑制SiHa细胞增殖、抑制PI3K/Akt信号通路的活性和增强细胞辐射敏感性的作用,且差异均有统计学意义（t=13.370~28.252,均P<0.05）。 结论 ICD能够通过上调miR-129-5p表达及抑制PI3K/Akt信号通路的活性来抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖以及增强其辐射敏感性。     

ANTP-SmacN7对肿瘤细胞的辐射增敏作用及其机制

目的 探讨ANTP-SmacN7融合蛋白对肿瘤细胞的辐射增敏作用及其机制。方法 合成ANTP-SmacN7融合蛋白并观察其细胞渗透能力,Western blot法检测辐射对XIAP表达量的影响,克隆形成实验观察ANTP-SmacN7融合蛋白的辐射增敏作用。Annexin V-FITC/PI双染法测定药物及射线对肿瘤细胞凋亡的影响,Western blot法检测ANTP-SmacN7阻断XIAP前后Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的变化。结果 ANTP-SmacN7融合蛋白可以进入细胞内,并在细胞内蓄积;辐射诱导肿瘤细胞体外XIAP表达量与肿瘤辐射敏感性呈负相关（r=0.82）;ANTP-SmacN7对肿瘤细胞有辐射增敏作用,增敏比为1.41;ANTP-SmacN7融合蛋白可促进4、8和10 Gy γ射线诱导的XIAP高表达肿瘤细胞的凋亡（t=-14.924、-7.294和-15.866,P<0.05）。辐射可诱导Caspase-3表达水平的升高,ANTP-SmacN7对Caspase-3蛋白表达水平不产生影响,但可增加活化Caspase-3的裂解片段的数量。结论 ANTP-SmacN7融合蛋白可通过诱导Caspase-3的活化降低肿瘤细胞的辐射抗性。