131I-VIP在正常家兔体内的显像研究

应用放射性核素标记小分子多肽进行肿瘤受体显像为当今分子核医学研究的主要领域之一[1,2 ] 。血管活性肠肽(ＶＩＰ)是由 2 8个氨基酸残基组成的直链多肽。基础研究证实结肠腺癌、胰腺腺癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞表达高密度及高亲和力的ＶＩＰ受体 ,其Ｂｍａｘ为正常组织的 2 2 5～ 5 7 9倍[3,4] 。本研究应用显像方法探讨了自制的高比活度131Ｉ ＶＩＰ在正常家兔体内的动态过程 ,旨在为临床肿瘤ＶＩＰ受体显像奠定基础。材料与方法一、实验材料1 动物 :新西兰大白兔 2只 (一级 ) ,体重约 3ｋｇ ,华西医科大学实验动物中心提供。2 试剂 :…     

99Tcm-VIP-ASON对结肠腺癌HT29细胞的反义抑制研究

目的　评价99Tcm 标记血管活性肠肽 (VIP)受体介导的C mycmRNA反义寡核苷酸复合物 (99Tcm VIP ASON)对结肠腺癌HT2 9细胞的反义抑制作用。方法　用99Tcm 标记长度为 15个碱基互补于C mycmRNA的反义寡核苷酸 (ASON) ,在一定条件下与VIP形成99Tcm VIP ASON复合物 ,测定HT2 9细胞对99Tcm VIP ASON的摄取率以及99Tcm VIP ASON对HT2 9细胞生长和C myc癌蛋白质表达的影响。结果　摄取研究显示 ,各时间点HT2 9细胞对99Tcm VIP ASON的摄取均高于99Tcm ASON(P <0 .0 5 ) ,摄取率在 12 0min达最高 ,为 2 7.39%。噻唑蓝 (MTT)比色试验中 ,99Tcm VIP ASON组在各剂量下吸光度值均明显低于99Tcm ASON和99Tcm 正义寡核苷酸 (SON)、99Tcm 无义寡核苷酸 (MON)、VIP 多聚赖氨酸结合物 (VIP PL)及空白对照组 ,流式细胞仪测定99Tcm VIP ASON组C myc癌蛋白质的荧光强度为 0 6 33± 0 0 38,显著低于其他各组 (P <0 .0 1)。结论　VIP受体介导途径能显著增加99Tcm ASON的转染效率 ,明显抑制HT2 9细胞的生长和C myc癌蛋白质的表达 ,增强反义抑制作用效果。     

C-myc反义寡核苷酸对胃癌荷瘤裸鼠抑瘤作用的研究

目的:探讨C-myc反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法:将21只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机平均分为3组,分别由皮下瘤体内注射脂质体(lipofectin,Lip)、C-mycSODN/Lip、C-mycASODN/Lip,每周1次,共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况。免疫组化ABC法检测各组肿瘤的C-myc蛋白表达情况。结果:ASODN/Lip组肿瘤体积明显减少,肿瘤生长抑制,抑瘤率达41.5%;ASODN/Lip组裸鼠生存期较SODN/Lip组和Lip对照组延长明显(P<0.05);ASODN/Lip组肿瘤的C-myc蛋白表达明显降低。结论:C-myc反义寡核苷酸可以有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长,延长动物生存期,为胃癌的治疗提供新的思路。     

125I-VIP的制备及其与SGC7901人胃腺癌细胞受体体外结合特性研究

目的：探讨高比活度＾１２５Ｉ－血管活性肠钛（ＶＩＰ）的制备及其与人ＳＧＣ７９０１胃腺癌细胞受体外结合特性。方法 ＾１２５Ｉ－ＶＩＰ采用氯胺－Ｔ法标记，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０柱层析分离纯化，硅胶６０Ｆ２５４薄板层析检测。＾１２５Ｉ－ＶＩＰ与ＳＧＣ７９０１细胞进行体外时间－温度给合实验、可逆结合实验，饱和结合实验和竞争结合实验、通过＾１２５Ｉ－ＶＩＰ比活度为１８．２ＴＢｑ／ｍｍｏｌ，放射化学纯度（     

125I标记三链形成寡核苷酸对肝癌细胞生长的抑制作用

目的探讨^125I标记的三链形成寡核苷酸（TFO）对肝癌细胞的抑制作用，为HBV相关肝细胞癌（HCC）的基因治疗提供实验依据。方法合成能与HBV前S基因特异结合的TFO，并以^125 I标记（^125 I-TFO）；分^125I—TFO、等量TFO、相同活度^125 I和空白对照4组与HepG2．2．15细胞共同培养，通过ELISA法检测培养前后各组细胞上清中乙型肝炎e抗原（HBeAg）和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）含量的变化，以四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）比色法检测各组细胞存活率。结果^125 I-TFO标记率〉93％，稳定性较好，37℃放置12h放化纯90．8％，48h81．1％，72h73．2％；^125I-TFO组在转染48h对HepG2．2．15细胞合成HBeAg及HBsAg的抑制作用最强，对HBeAg和HBsAg表达的抑制率（74．5％和45．2％）及细胞杀伤率[72h细胞增殖抑制率为（31．64-2．5）％]高于其他实验组（P〈0．01）。结论^125 I-TFO可以抑制HBV抗原表达，杀伤肝癌细胞，为制备抗HBV、抗HCC的放射性基因治疗药物提供依据。     

125 I-NT类似物与人结肠癌细胞HT29体外结合特性研究

目的设计神经紧张肽(NT)C端六肽NT(8-13)类似物NT2Lys-Arg-Pro-Tyr-Tle-Leu,并研究高比活度125I-NT2与人结肠癌细胞HT29体外结合特性.方法采用氯胺T法对NT2进行125I标记,用Sep-Pak柱纯化,以高效液相色谱法(HPLC)检测标记产物.通过125I-NT2与HT29细胞体外结合实验条件的选择,确定细胞量、保温温度和时间,并在选定条件下进行体外受体饱和实验,研究其亲和特性.结果①125I-NT2标记率为76%,放化纯＞98%,比活度为9.71×1012Bq/mmol.②125I-NT2与HT29细胞结合具有饱和性,在细胞量、保温温度和时间分别为106个、25℃和1 h条件下,平衡解离常数(Kd)为(0.745±0.418)nmol/L,最大结合容量(Bmax)为(0.103±0.060)pmol/106 cell.结论NT2与HT29细胞具有较高的亲和力,在人结肠癌显像中具有潜在的应用前景.     

131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨^131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人乳腺癌细胞生长的影响及其相关机制。方法 采用过氧化氢标记法制备^131I-17-AAG。细胞杀伤实验分为5组：二甲基亚砜（DMSO）对照（A）组，Na^131I370kBq（B）组，17-AAG2．5mg／L（C）组，^131I-17-AAG370kBq（D）组，^131I-17-AAG370kBq＋17-AAG2．5mg／L（E）组。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各种药物对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用，流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化，RT—PCR检测药物处理前后MCF-7细胞中Akt2基因的mRNA表达情况。结果 ^131I-17-AAG的标记率为83％，放化纯为96．6％，比活度为1．48×10^5MBq／μmol。各组药物对细胞的杀伤呈时间效应，随着时间的延长，细胞的抑制率都呈明显上升趋势，尤以E组趋势明显。A～E组药物作用48h后，通过亚G1峰检测MCF-7细胞凋亡率分别为（1．54±0．13）％，（5．72±1．05）％，（12．97±1．44）％，（20．65±1．36）％，（35．39±4．15）％，各组细胞凋亡率差异有统计学意义（P均〈0．05）。C组，D组及E组Akt2基因的mRNA表达均比A组降低，其中E组降低尤为明显。结论 ^131I-17AAG能够抑制MCF-7细胞的生长并促进其凋亡，且能有效抑制Akt2基因的mRNA表达，和17-AAG联合应用能够增强肿瘤细胞对放疗的敏感性。     

hTERT启动子调控hNIS基因介导肺癌细胞碘摄取和131I治疗的实验研究

目的 构建含人端粒酶反转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠/碘同向转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并靶向转染至肺癌A549细胞中特异性表达.探讨hTERT启动子调控的hNIS基因介导放射性碘治疗肿瘤的可能性.方法 应用AdEasy系统构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS,同时构建巨细胞病毒(CMV)启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV.hNIS作为阳性对照,不含hNIS的重组腺病毒Ad-CMV作为阴性对照.应用反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性,摄碘实验检测表达的hNIS蛋白功能,细胞克隆形成实验评价131I对转染肿瘤细胞的毒性作用.结果 成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS及Ad-CMV,并经PCR验证正确.RT-PCR证实hNIS cDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来.Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞摄碘能力比阴性对照组Ad-CMV转染的细胞分别提高了23和31倍,且摄碘能力可以被NaClO4抑制.Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞均可被131I杀死,2组细胞成活率分别为(31.2±1.45)%和(23.6±4.08)%,而阴性对照组和未转染病毒组分别为(89.0 ±2.99)%和(91.2 ±4.63)%.结论 hTERT启动子调控的hNIS重组腺病毒转染肿瘤细胞后,应用131I治疗有望成为一种新的基因靶向治疗手段.     

重组质粒hTSHR转染低分化甲状腺癌细胞株后对摄碘能力及特异性基因表达的影响

目的 探讨重组真核表达质粒pcDNA3.1/人TSH受体（hTSHR）体外转染TSHR表达下降的低分化滤泡状甲状腺癌细胞株后,细胞摄取放射性碘功能以及甲状腺癌相关基因mRNA表达 的变化.方法 pcDNA3.1/hTSHR转化DH5a感受态菌,进行扩增、酶切,再以核苷酸测序方法鉴定.体外转染pcDNA3.1/hTSHR,通过免疫荧光检测TSHR表达产物,井型γ计数仪检测摄碘率,相对定量实时荧光PCR验证其表达的TSHR蛋白功能和特性.采用SPSS 13.0软件,对计量资料行t检验.结果pcDNA3.1/hTSHR经PCR扩增hTSHR-cDNA片段约113 kb,Kpn Ⅰ和Xha Ⅰ双酶切：hTSHR-cDNA的片段约2.3 kb,pcDNA3.1（＋）的片段约5.5 kb,均同预期片段大小相符;核苷酸测序方法鉴定测序结果与GenBank中收录的hTSHR全长序列一致,表明真核表达质粒构建正确.在hTSH刺激下,转染pcDNA3.1/hTSHR细胞与转染pcDNA3.1（＋）细胞比较：（1）在甲状腺肿瘤细胞胞质、胞膜有增强的绿色荧光,（2）前者125 I摄取率是后者的2.9倍（t=28.63,P＜0.01）,（3）甲状腺碘摄取相关基因TSHR、钠碘转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、Tg的mRNA的表达分别升高1.74倍（t=5.959,P＜0.01）、7.2倍（t=3.807,P＜0.05）、2.88倍（t=4.769,P＜0.01）和2.67倍（t=6.388,P＜0.01）.结论 pcDNA3.1/hTSHR体外转染甲状腺癌肿瘤细胞后,可有效提高碘的摄取;这可为放射性碘治疗失分化甲状腺癌提供新的实验依据.     

125 I-脱氧尿嘧啶核苷对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用

目的评价125I-脱氧尿嘧啶核苷(UdR)对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及影响因素.方法 HepG2细胞在含有125I-UdR培养基中培养后测量其放射性,观察HepG2细胞对125I-UdR的摄取;用细胞克隆形成法评价125I-UdR对HepG2细胞生长的抑制作用.结果 HepG2摄取125I-UdR量随培养基中125I-UdR浓度增加而增加,两者显著相关(r=0.99).HepG2对125I-UdR的摄取明显高于Na125I.HepG2细胞摄取125I-UdR后其生长受到抑制,两者呈明显负相关(r=-0.943),半数致死剂量(LD50)为(0.87±0.29) kBq/mL.125I-UdR组细胞存活分数明显低于Na125I组.结论 125I-UdR对HepG2细胞生长有明显抑制作用,HepG2细胞摄取125I-UdR量有浓度依赖性.     

125I标记雄激素受体TFO抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨反基因放射治疗对雄激素受体（AR）表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法用Iodogen法对AR三螺旋形成寡核苷酸（TFO）进行直接^125I标记，经脂质体介导转染LNCaP前列腺癌细胞株，于转染后24和48h分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法测定癌细胞增殖活性，RT-PCR方法检测ARmRNA表达，免疫组织化学方法检测AR蛋白表达。结果^125I-TFO的标记率为63．7％，放化纯为95．6％，比活度为80．1kBq／μg。相同TFO浓度下，^125I-TFO组LNCaP细胞的AR表达水平显著低于TFO组（P〈0．01），^125I-TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于TFO（P〈0．01）。结论反基因放射治疗对AR表达和前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于单纯的反基因治疗。     

99Tcm标记血管活性肠肽衍生物的制备及其生物分布研究

目的观察99Tcm标记血管活性肠肽(VIP)衍生物VIPSN3在生物体内的分布和肿瘤摄取情况。方法通过化学合成法合成含SN3类配体的VIPSN3。在VIP的羧基端连接4个氨基酸(其中1个含巯基),以形成含有SN3的四齿状结构作为99Tcm的强螯合基团,即VIPSN3。引入γ氨基丁酸(Aba)作为隔离物以消除空间阻碍。采用配体交换法进行99Tcm标记,测定99TcmVIPSN3的生物活性和功能、体外稳定性及其在荷结肠癌裸鼠的体内分布,并行γ显像。结果VIPSN3纯度经HPLC分析证实>99%。99TcmVIPSN3标记率为(90±8)%,体外活性分析证实其活性损失小,标记物体外稳定。动物实验示99TcmVIPSN3从血液清除快速,经肾、膀胱排除。荷结肠癌裸鼠肿瘤在注射99TcmVIPSN3后24h显像清晰,除肾外,肿瘤摄取最高,与99TcmVIPN4相比,肾脏摄取明显减少。体内分布结果示99TcmVIPSN3注射后24h,肿瘤每克组织百分注射剂量率(%IDg)为058±015,比99TcmVIPN4(026±001)高,瘤血比值>2,瘤肌肉比值>10。结论VIPSN3具有天然VIP的生物活性,99TcmVIPSN3肾脏摄取较低,肿瘤显像清晰,是一个较有希望的肿瘤显像剂。