以IgH bcl-2/IgH为分子标志检测B细胞淋巴瘤微小残留病研究进展

肿瘤的复发与停止治疗时患者体内仍存在用常规方法无法检测出的微小残留病(minimal residual disease，MRD)有关，关于MRD的研究已成为肿瘤研究领域的热点。B细胞所特有的基因重排等遗传学特征为我们提供了可用于检测B细胞淋巴瘤(B-NHL)MRD的分子标志，本文就这一方面的研究进展进行综述。     

非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其义

目的探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的诊断价值.方法用半巢式和混合聚合酶链式反应方法,联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mjxtures(VH1、VH2、VH3)检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况.结果1)采用FR3A引物,44例B-NHL有37例出现IgH基因重排,检测率为84%;采用FR2A引物,有27例出现IgH基因重排,检测率为61%;采用FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3)与J区(JHb、JHc)引物,有34、33例出现IgH基因重排,检测率为77%、75%;结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3),总检测率为95%.2)15例T-NHL有4例出现IgH基因重排,而5例LRH未出现IgH基因重排.3)1例免疫组化未分型的NHL经PCR检测后,明确分型为B细胞性淋巴瘤.结论联合采用多对引物可提高检测阳性率;IgH基因重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义.     

荧光定量聚合酶链反应检测B细胞淋巴瘤IgH基因重排的进展

实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)是近年出现的一种新的核酸定量技术,为检测血液系统肿瘤微小残留病(MRD)提供了快速、简便、精确、敏感、可靠的定量检测方法.对判断疗效、预防复发,指导治疗有一定的临床意义.就目前国内外用RQ-PCR在B细胞淋巴瘤患者中检测IgH基因重排的应用研究进展进行综述.     

非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其意义

目的：探讨免疫球蛋白重链（IgH）基因重排的检测在非霍奇坌淋巴瘤（NHL）中的诊断价值。方法：用半巢式和混合聚合酶链式反应方法，联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3）检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况。结果：1）采用FR3A引物，44例B-NHL有37例出现IgH基因重排，检测率为84％：采用FR2A引物，有27例出现IgH基因重排．检测率为61％：采用FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3）与J区（JHb、JHc）引物，有34、33例出现IgH基因重排．检测率为77％、75％：结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3），总检测率为95％.2）15例T-NHL有4例出现IgH基因重排．而5例LRH未出现IgH基因重排。3）1例免疫纽化未分型的NHL经PCR检测后，明确分型为B细胞性淋巴瘤。结论：联合采用多对引物可提高检测阳性率；IgH基因重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义。     

检测IgH和TCR γ基因重排对NHL分期参考价值的探讨

目的：探讨以IgH和TCR γ基因重排为标志对NHL患者临床分期的参考价值。方法：多聚酶链反应(PCR)技术结合限制性酶谱分析患者骨髓和淋巴结细胞DNA IgH和TCR γ基因重排的克隆性。结果：形态学无骨髓浸润的23例NHL患者发现6例(26．1％)具单克隆基因重排。结论：IgH和TCR γ基因重排作为分子标志对形态学检查不能确认骨髓浸润的NHL患者的分期诊断有一定参考价值。     

化疗对B-NHL患者外周血IgH基因重排的影响

目的：通过观察B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者化疗过程中IgH基因重排的阴转情况,了解IgH基因重排能否作为适时的肿瘤分子水平缓解指标。方法：对20例B-NHL的初治患者于化疗前及化疗达到部分缓解及完全缓解后应用多聚酶链反应（PCR）进行IgH基因重排检测;对10例非淋巴瘤的肿瘤患者在化疗前后行IgH基因重排检测;同期检测10例正常人。结果：20例初治B-NHL患者,化疗前18例检测到IgH基因单克隆型重排;化疗后7例达到完全缓解,6例达到部分缓解。18例阳性患者中,除1例化疗后达到完全缓解的患者IgH基因重排转阴外,余未变化。2例IgH基因单克隆型重排阴性的病例化疗后检测结果仍为阴性。对照组的肿瘤患者化疗前后外周血以及正常人外周血IgH基因单克隆重排均为阴性。结论：IgH基因单克隆型重排虽可以作为诊断B-NHL及检测微小残留病变的重要指标,但是肿瘤缓解后的短期内还不能作为适时的肿瘤分子水平缓解指标。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在淋巴细胞来源肿瘤中检测的临床意义

目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链（IgH)和T细胞受体γ（TCRγ) 排在淋巴细胞来源的肿瘤的检测意义。方法 用多聚酶链反应（PCR）方法检测15例急性淋巴细胞性白血病（ALL）、25例非霍奇金淋巴瘤（NHL）、10例多发性骨髓瘤（MM）、4例慢性B细胞性淋巴细胞性白血病（B－CLL）和20例正常人骨髓、周围血和（或）淋巴结中单个核细胞（MNCs)IgH、TCRγ基因重排。结果 IgH和（或）TCRγ基因重排在淋巴细胞来源的恶性肿瘤检出阳性率为92．6％（50／54）,在NHL为84．0％（21／25）,在ALL为100％（15／15）。IgH重排在T－NHL和B－NHL中阳性率分别为20．2％（2／10）和86．7％（13／15）,TCRγ是排在T－NHL和B－NHL中分别为80．0％（8／10）和53．3％（8／15）。22例NHL患者骨髓形态学检查阳性率50．0％（11／22）,基因检测阳性率81．8％（18／22）,两者差异有显著性（P＜0．05）。10例MM和4例B－CLL均检出IgH重排。20例正常人未检测出克隆性IgH、TCRγ基因重排。结论 IhG、TCRγ基因重排检测可用于NHL、ALL、MM和CLL等淋巴细胞来源的肿瘤的诊断和鉴别诊断,并判断NHL的早期骨髓浸润和临床预后。TCRγ、IgH基因重排在T、B淋巴细胞来源的肿瘤之间有交叉性。     

B细胞淋巴瘤患者骨髓IgH基因克隆性重排检测的临床意义

目的 探讨半巢式聚合酶链反应(PCR)检测B细胞淋巴瘤患者骨髓中IgH基因克隆性重排的可行性,并初步评价其临床价值.方法 选用FR2、FR3A引物,采用半巢式PCR方法检测105例B细胞淋巴瘤患者骨髓中IgH基因的单克隆性重排,与骨髓穿刺细胞形态学检测结果进行比较,并评价PCR检测结果与临床病理特征的关系.结果 105例B细胞淋巴瘤患者中,IgH基因克隆性重排PCR检测48例(45.7%)阳性,而骨髓细胞形态学只检测出22例(21.0%),两者差异有统计学意义(P<0.05),符合率为71.4%(75/105).弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)及小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)初治患者PCR检测阳性率分别为30.8%、25.0%和100.0%.PCR检测结果与Ann Arbor分期有关,早期B细胞淋巴瘤患者lgH基因克隆性重排PCR检出阳性率低于晚期患者(P=0.02).PCR检测阳性和阴性患者的近期疗效差异无统计学意义(P>0.05),但CR率(23.3%和46.3%)差异有统计学意义(P=0.019).结论 IgH基因克隆性重排PCR检测可能是判断B细胞淋巴瘤患者骨髓异常的有效方法,较骨髓细胞形态学敏感;Ann Arbor分期晚的患者PCR检测阳性率高于分期早的患者;PCR检测阳性者治疗后获得CR的机会低于阴性者.     

70例急性非淋巴细胞白血病IgH、TCRγ基因重排的结果分析

目的：分析急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体γ链(TCRγ)基因重排结果。方法：用聚合酶链反应方法检测70例ANLL患者IgH及TCRγ基因重排。结果：有41例(58．6％)发生IgH基因重排,7例(10％)发生TCRγ基因重排。结论：ANLL中确实存在系列不保真现象,不仅具有较高IgH重排发生率,还具有TCRγ重排发生。     

克隆性基因重排检测技术在淋巴瘤穿刺标本中的诊断价值

目的探讨克隆性基因重排检测技术在淋巴瘤穿刺标本中的诊断价值。方法以IgH、T细胞受体γ链(Tcellreceptorγchain,TCRγ)和bcl-2/IgH融合基因(bcl-2/IgH)重排基因为分子标志,分别应用一步法、巢式及半巢式多种聚合酶链反应技术,检测40例细针穿刺活检标本(fine-needle aspiration biopsy,FNAB)克隆性基因重排。其中实验组为非霍奇金淋巴瘤(NHL)25例,对照组15例,其中霍奇金病(HD)4例,转移癌5例,反应性增生6例。结果实验组中3例滤泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma,FL)中2例bcl-2/IgH主要断裂点(bcl-2/IgHMBR)阳性,1例bcl-2/IgHMBR阴性,但IgH阳性,TCRγ检测均为阴性;19例弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中14例IgH阳性,5例阴性,无1例bcl-2/IgH及TCRγ阳性;3例T-NHL TCRγ均阳性,IgH及bcl-2/IgH均阴性;对照组3个指标检测均阴性。通过3个指标检测NHL总阳性率80%(20/25),假阴性率20%(5/25),无假阳性。结论克隆性基因重排分子检测用于FNAB标本有助于NHL的诊断,但由于存在假阴性可能,应结合细胞形态学,如能结合其他检测手段,如流式细胞术等可提高诊断率。     

骨髓凋亡蛋白抑制因子survivin检测在非霍奇金淋巴瘤中的临床意义

目的探讨survivin mRNA在非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者骨髓中的表达及临床意义。方法多聚酶链反应（PCR）方法检测21例NHL患者骨髓单个核细胞（MNCs）中克隆性免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排。逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测21例NHL患者骨髓及7例术后实体癌患者的外周血单个核细胞的survivin mRNA的表达,12例正常骨髓作为正常对照。骨髓常规检查21例NHL患者淋巴瘤细胞骨髓浸润情况。结果克隆性IgH和（或）TCRγ基因重排在21例NHL患者中检出率为71.4%（15/21）,其中IgH为52.4%（11/21）,TCRγ为47.6%（10/21）。21例NHL患者survivin mRNA的阳性率为81.0%（17/21）,7例术后实体癌患者的外周血单个核细胞仅有1例为弱阳性,12例正常骨髓单个核细胞不表达survivin mRNA。21例NHL患者骨髓常规检查的阳性率为19.0%（4/21）。其中,1例survivin mRNA检测阴性患者,克隆性IgH和（或）TCRγ基因重排阳性,而3例克隆性IgH和（或）TCRγ基因重排阴性患者,survivin mRNA检测阳性,其余病例均同时阴性或阳性。IgH和（或）TCRγ基因重排阳性与survivin mRNA表达存在正相关性。结论survivin mRNA在恶性淋巴瘤患者骨髓中的表达检测也可作为诊断微小残留病变及骨髓侵犯的辅助指标。而survivin mRNA表达与淋巴瘤患者疗效及生存预后关系尚待进一步累积病例及随访。     

荧光定量PCR法检测弥漫大B细胞淋巴瘤IgH基因重排的意义

 目的 探讨荧光染料标记的实时定量PCR方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）IgH基因重排的可行性和临床意义。方法 44例DLBCL患者的57份骨髓标本用于检测IgH基因重排。Namalwa细胞系作阳性对照,U-937细胞系作阴性对照。SYBR Green荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法检测IgH基因重排CDRⅢ。β-actin 作内参照,对IgH基因重排相对定量。结果 分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性。荧光定量PCR检测IgH基因重排的阳性率分别为63.2 ％。Ⅰ、Ⅱ期患者IgH基因重排表达量中位数为0,Ⅲ、Ⅳ期患者IgH基因重排表达量中位数为0.35,两组患者之间差异有统计学意义（P＝0.018）。LDH值高于正常组,IgH基因重排表达量为0.39,LDH值低于正常组,IgH基因重排表达量为0.01,两组之间差异有统计学意义（P＝0.046）。结论 荧光染料标记的定量PCR方法可用于DLBCL的骨髓微小残留病变的检测。检测骨髓IgH基因重排,可以协助分期。     

伴两种bcl-2/IgH融合基因的脾边缘区淋巴瘤一例并文献复习

目的 探讨伴有bcl-2/IgH融合基因的脾边缘区淋巴瘤(SMZL)患者的临床特征.方法 分析1例同时伴两种bcl-2/IgH融合基因SMZL患者的临床及实验室资料,并复习相关文献.结果 与经典bcl-2/IgH融合基因阴性SMZL病例相比较,该例bcl-2/IgH融合基因阳性SMZL患者实验室资料显示外周血淋巴细胞数量显著升高,临床资料显示侵袭性高,疾病进展快,接受R-CHOP方案化疗不能够获得完全缓解.结论 bcl-2/IgH融合基因鲜见于SMZL患者,bcl-2/IgH融合基因阳性SMZL患者具有恶性度高、化疗效果差的不良临床特征.     

常规细胞遗传学和荧光原位杂交方法检测14q32/IgH基因重排

  目的 比较常规细胞遗传学（CC）,间期荧光原位杂交（FISH）技术及连续R显带后FISH检测免疫球蛋白重链（IgH）基因重排的应用价值。方法 应用常规细胞遗传学及间期FISH分析血液系统肿瘤患者43例。结果 43例患者中14q32+／IgH+患者19例,14q32-／IgH+患者2例（4.7 %）,14q32+／IgH-患者3例（7.0 %）,14q32-／IgH-患者19例。部分病例CC与间期FISH方法检测14q32／IgH基因重排得到了不一致的结果。对5例患者进行连续R显带后FISH分析,对照核型和FISH图,能清楚地看到IgH基因易位涉及的染色体。结论 间期FISH可以提高14q32／IgH重排检出率,R显带后FISH可以帮助识别与14q32易位的伙伴染色体。     

甲状腺原发MALT淋巴瘤12例临床病理、免疫表型及IgH基因重排研究

目的：观察甲状腺原发MALT淋巴瘤的临床病理表现、免疫组织表型和免疫球蛋白重链(IgH)基因重排情况。方法：对12例甲状腺原发MALT淋巴瘤进行回顾性研究，包括临床病理表现、免疫表型(CD20、CD45RO、CD5、CDl0、CyclinD1、bcl-2、κ、λ)分析及多聚酶链反应(PCR)检测IgH基因重排。结果：按2001新版WH0关于淋巴造血组织肿瘤分类．12例均被确诊为MALT淋巴瘤。其中男2例，女10例，男女之比为1：5，中位年龄为63岁。免疫表型检测：所有病例之瘤细胞均表达B细胞分化抗原CD20；4例(33．3％)检测出免疫球蛋白轻链限制性表达；bcl-2阳性1例；CD45RO、CD5、CD0和Cyclin D1均为阴性。8／12例(66．7％)检测出IgH基因克隆性重排。随访11例，失访1例，死亡3例(25％)，存活8例(66.7％)。结论：甲状腺原发MALT淋巴瘤属惰性淋巴瘤，需要结合其病理组织形态、免疫组织化学染色及必要的分子生物学技术才能作出正确的诊断。     

IgH和IgL引物联合检测对提高石蜡组织淋巴瘤基因重排检出率的价值

背景与目的：通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增免疫球蛋白重链（immunoglobulin heavy chain,IgH）基因对其克隆性的检测,可以辅助诊断淋巴瘤。缺点是假阴性率较高,在石蜡包埋组织中尤为明显。本研究拟采用手工显微切割、免疫球蛋白重链和轻链（immunoglohulin light chain,IgL）联合测定等方式,探讨该方法在石蜡包埋组织中非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）诊断中的价值。方法：选用1对IgH引物、1对T细胞受体γ（Tcell receptor γ,TCRγ）、TCRγ引物、2对新设计的轻链引物,通过PCR、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及银染技术,检测经形态学及免疫组织化学确诊的58例石蜡包埋组织标本,包括39例B细胞淋巴瘤、16例T细胞淋巴瘤和3例淋巴结反应性增生组织。以DG75和Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为对照。结果：IgH引物P1在39例B细胞淋巴瘤检出阳性率79．5％（31／39）。假阳性率6．25％（1／16）,IgL引物在B细胞淋巴瘤检出阳性率71．8％（28／39）。假阳性率12．5％（2／16）,经统计学分析二者检出率无显著性差异（P〉0．05）。二者联合检测,B细胞淋巴瘤阳性检出率可以达到92．3％,假阳性率并无明显提高（12．5％）。以上重排引物在反应性增生淋巴结组织中均未检出。结论：IgH与IgL引物联合检测可明显提高石蜡包埋组织中B细胞淋巴瘤的检出率,并为B-NHL的诊断及鉴别诊断提供了有效的辅助手段。     

实时定量PCR检测IgH重排在B淋巴细胞恶性肿瘤中的应用

用精确、敏感和可靠的RQ-PCR方法,以克隆性IgH重排为靶分子,可对B淋巴细胞恶性肿瘤的MILD定量检测,对于其疗效评价、预后判断和预防复发等具有重要意义。就RQ-PCR在B淋巴细胞肿瘤中检测IgH重排的技术原理及其应用研究进行综述。     

荧光定量PCR分析弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排表达

背景与目的：大多数B细胞淋巴瘤患者综合治疗后可以达到完全缓解,但是一半以上的患者终究要复发.复发来源于体内残留的耐药淋巴瘤细胞,即微小残留病变.但临床上发现IgH基因重排阳性患者并非都出现复发或远处浸润.因此,推测阳性患者是否复发,可能与IgH基因重排的表达量有关.本研究探讨荧光染料标记的即时定量PCR方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因（IgH）重排的可行性及临床意义.方法：44例DLBCL患者的57份新鲜骨髓标本用于检测IgH基因重排, Namalwa细胞系作阳性对照,U-937细胞系作阴性对照.β-actin 作内参照,SYBR Green荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法分别检测IgH基因重排CDR III.结果：分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性.荧光定量PCR检测IgH基因重排的阳性率63.2%.IgH/β-actin阳性表达量在0.01～4131.69,中位数0.42.Ⅰ/Ⅱ期患者IgH基因重排表达量中位数为0,Ⅲ、Ⅳ期患者IgH基因重排表达量中位数为0.35,经统计学检验,两组患者之间差异有显著性（P＝0.018）.LDH值高于正常组,IgH基因重排表达量为0.39,LDH值低于正常组,IgH基因重排表达量为0.01,经非参数检验,两组患者之间差异有显著性（P＝0.046）.结论：荧光染料标记的定量PCR方法可用于弥漫大B细胞淋巴瘤的骨髓微小残留病变的检测.检测骨髓IgH基因重排,可以协助分期.     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中Bcl-2/IgH易位的初步研究

目的研究弥漫性大B细胞淋巴瘤中染色体Bcl-2/IgH易位及其与Bcl-2蛋白表达的关系。方法用PCR方法检测42例原发性DLBCL患者的Bcl-2/IgH易位,免疫组化方法检测Bcl-6和CD10的共表达（确认生发中心表型的标志）以及Bcl-2蛋白的表达。结果在42例DLBCL患者中13例为GC亚型病例;Bcl-2/IgH易位检出率为11.9%（5/42）,其中4例属于GC亚型,1例属于非GC亚型;5例易位阳性中3例有Bcl-2蛋白的表达。结论原发性DLBCL的Bcl-2/IgH易位率为11.9%,代表了一类由滤泡中心细胞起源的亚类,Bcl-2/IgH易位与Bcl-2蛋白表达无关。     

淋巴细胞白血病免疫表型与基因重排研究

采用系列单克隆抗体(McAbs)和聚合酶链反应(PCR)技术研究35例淋巴细胞白血病免疫表型与免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ、δ基因重排。结果表明,20例表达不同分化阶段B细胞表面标记,其中18例发生IgH基因重排,8例TCRγ基因重排.2例TCR_δ基因缺失。8例表达不同分化阶段T细胞表面标记,均检测到TCRγ和、或TCR_δ基因重排,无IgH基因重排。3例同时表达T、B细胞表面抗原者均发生IgH和TCRγ基因双重重排。4例缺乏表面抗原表达者中3例发生TCRδ或TCRγ基因重排。2例完全缓解病例经PCR扩增证明存在残留白血病细胞。