蜂毒肽MP-1体外拮抗内毒素作用及其机制

目的 观察蜂毒肽MP-1的体外抗内毒素(LPS)活性并探讨其作用机制. 方法 应用生物传感器检测MP-1对类脂A(lipid A)的亲合力,采用动态比浊法鲎试验检测MP-1对LPS(2μg/L)的中和作用,激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度MP-1(5,10,20,40 μmol/L)干预后异硫氰酸荧光素标记LPS(FITC-LPS,100 μg/L)与小鼠RAW264.7细胞的结合,免疫细胞化学法观察MP-1对LPS(100μg/L)诱导的RAW264.7细胞TLR4表达的影响;实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测不同浓度MP-1作用下LPS(100μg/L)刺激的RAW264.7细胞TLR4、TNF-α和IL-6基因及蛋白的表达;MTT法检测MP-1对RAW264.7细胞活力的影响. 结果 MP-1具有一定的结合lipid A及中和LPS的作用,在10 μmol/L浓度可显著抑制FITC-LPS与RAW264.7细胞结合(P<0.05),并对LPS刺激的小鼠RAW264.7细胞TLR4、TNF-α和IL-6的基因及蛋白表达有抑制作用(P<0.05或<0.01),该作用具有一定的剂量效应关系.MP-1体外实验浓度对细胞活力无影响(P>0.05). 结论 MP-1可能通过中和LPS作用,阻断LPS与RAW264.7细胞膜受体的结合,从而抑制LPS介导的细胞活化.     

激活HaCat细胞表面TLR促进细胞迁移的初步研究

目的观察长链游离脂肪酸对体外培养的角质形成细胞的作用,探讨其促进细胞迁移的机制。方法 (1)体外培养HaCat细胞。(2)免疫印迹法(Weston bloten)检测HaCat细胞表面TLR2、TLR4表达。(3)划痕实验法检测激活TLR对HaCat细胞迁移率的影响。(4)Real Time-PCR法分析N、PA、SA、LPS组MMP-3、MMP-9、TIMP-1的表达。结果 (1)HaCat细胞表面有丰富的TLR2、TLR4受体表达。(2)SA、LPS激活细胞表面TLR后可以明显促进细胞迁移,从而发挥促进创面愈合的作用。结论 SA、LPS可促进角质形成细胞迁移从而促进创面愈合;其机制可能为:SA作用于TLR促进细胞释放MMP-1、MMP-9、抑制TIMP-1表达等因素有关。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞iNOS表达及NO生成的影响

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达和一氧化氮(NO)生成的影响。方法体外培养大鼠巨噬细胞NR8383,分别加入LPS(终浓度1μg/ml)和不同浓度(10-10、10-8和10-6mol/L)的CCK-8进行干预,并设空白对照组(加入PBS)和丙谷胺干预组(丙谷胺终浓度2μg/ml,CCK-8浓度10-8mol/L,LPS浓度1μg/ml)。各组细胞培养24h后收集上清液,Griess法检测NO含量;取培养24h后的细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR法检测iNOS基因表达情况;裂解培养24h后的细胞,离心取上清,生化法检测细胞内iNOS活性。结果 LPS可明显促进大鼠肺泡巨噬细胞iNOS的表达和NO的生成;预先加入不同浓度的CCK-8均可抑制LPS诱导的iNOS mRNA水平上升和活力增强,减少NO生成,且呈现剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。CCK受体拮抗剂丙谷胺可逆转CCK-8的抑制作用。结论 CCK-8可能通过降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞iNOS表达和NO产生来实现其对内毒素休克动物的保护效应。     

骨髓间充质干细胞对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA和蛋白表达的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对肺泡巨噬细胞Toll 样受体(toll-like receptor,TLR2/4)基因和蛋白的影响,为探讨骨髓MSCs移植对早期炎症介质的影响及炎症级联反应的调控机制做铺垫。 方法 巨噬细胞分为PBS对照组、骨髓MSCs对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对照组和LPS+骨髓MSCs处理组,各组均取1,3,6,12 h时相点。流式细胞仪检测骨髓MSCs表面标记阳性细胞率和巨噬细胞TLR2/4蛋白的表达;RT-PCR方法检测各组不同时相点巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达变化;ELISA法检测各组不同时相点上清液中TNF-α浓度变化。 结果 与PBS对照组、骨髓MSCs对照组比较,LPS对照组巨噬细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.01),1h时开始增高,12h时达到峰值;同时TNF-α浓度也明显增高(P＜0.01),6h时TNF-α浓度达到峰值。与LPS对照组比较,LPS+ MSCs组巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01),TNF-α浓度也降低(P＜0.01)。 结论 LPS刺激后巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达升高,TNF-α浓度也升高,后者峰值时间出现略早,说明TLR2/4表达与TNF-α之间存在一个正反馈环;骨髓MSCs可以明显降低LPS刺激后巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达及TNF-α浓度,说明骨髓MSCs打破了上述正反馈环。     

EGCG对A549细胞炎性反应模型UBC9表达的影响

 目的 观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导A549细胞中的表达,探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。方法 根据筛选结果随机分为对照组、EGCG组、LPS组、EGCG＋LPS组4个组,MTT检测不同浓度的EGCG(50～400 μg/ml)和LPS(10～50 μg/ml)对A549细胞增殖活性的影响,筛选最佳作用浓度,进一步通过免疫组化染色法、蛋白质印迹法和Realtime-PCR检测分析各处理组UBC9蛋白及其mRNA的相对表达量。结果 MTT显示,200 μg/ml的EGCG细胞增殖抑制作用最强(F=1618.18,P＜0.001),LPS 25μg/ml细胞增殖活性最明显(F=237.38,P＜0.001)。免疫组化与蛋白质印迹检测均显示,与对照组比较,EGCG下调A549细胞UBC9蛋白表达(P＜0.001),LPS则上调UBC9表达量(P＜0.001),与LPS组比较,EGCG＋LPS组UBC9蛋白表达明显降低(P＜0.001)。同样,Realtime-PCR显示,与对照组比较,EGCG组UBC9 mRNA表达下调(F=89.34,P＜0.001),LPS组UBC9 mRNA表达上调(F=225.00,P＜0.001),与LPS组比较,EGCG＋LPS组UBC9 mRNA的表达受到抑制,显著降低(F=625.00,P＜0.001)。结论 EGCG下调LPS刺激的炎性反应模型的UBC9的表达,其抗炎机制可能与抑制UBC9蛋白与mRNA表达有关。     

低能量激光照射对脂多糖介导人牙周膜成纤维细胞炎性损伤的保护作用

目的:研究低能量激光照射(low level laser irradiation,LLLI)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)炎性损伤的影响及机制。方法:将hPDLFs接种于孔板中,随机分为正常组和LPS组以及LPS+LLLI组。正常组细胞行常规培养基培养,LPS组及LPS+LLLI组在加入1 mg/1 LPS培养基中培养24 h,LPS+LLLI组3个亚组分别接受不同强度照射。4 d后检测各组细胞凋亡、活力及细胞内游离Ca~(2+)浓度,酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-8、IL-1β及IL-6的含量,RT-PCR及Western-blot检测各个实验组hPDLFs的MMP-2、MMP-3、MMP-9基因和蛋白的表达。结果:与正常组比较,LPS组hPDLFs细胞凋亡率及细胞内游离Ca~(2+)浓度增加,细胞活力降低(P0.05),细胞的上清液中TNF-α、IL-8、IL-1β及IL-6的含量显著升高(P0.05),Ca~(2+)hPDLFs的MMP-2、MMP-3、MMP-9基因和蛋白的表达显著升高(P0.05)。与LPS组比较,LPS+LLLI组细胞凋亡率及细胞内游离Ca~(2+)浓度降低,细胞活力升高(P0.05)。细胞的上清液中TNF-α、IL-8、IL-1β及IL-6的含量显著降低(P 0.05),Ca~(2+)hPDLFs的MMP-2、MMP-3、MMP-9基因和蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论:LLLI对LPS诱导hPDLFs炎性损伤有保护作用,照射强度为4 J/cm~2时效果最明显。     

大鼠严重创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4基因表达及受体反应性

目的 观察大鼠创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体(TLR)2/4基因表达及受体反应性变化.方法 建立大鼠严重创伤(右侧胸部撞击伤复合双侧股骨闭合性骨折)模型,分别于创伤后2、6、12、24小时取腹腔巨噬细胞,以逆转录-聚合酶联反应(RT-PcR)测定TLR2/4的mRNA表达,以脂多糖(LPS)、Pam3CSK4刺激后取细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 创伤后2小时腹腔巨噬细胞TLR2、TLR4的mRNA表达较正常对照组降低(P<0.05),直至创伤后24小时.行不同浓度LPS、PandCSK4刺激后细胞上清液TNF-α水平较对照组降低(P<0.01).结论 严重创伤后腹腔巨噬细胞TLR2/4基因表达降低,受体反应性下降.     

脂多糖对成纤维细胞基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制因子表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）对成纤维细胞基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制物金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）表达的变化，探讨伤口感染时LPS对伤口愈合的可能影响。方法将体外培养的人成纤维细胞加入不同浓度的LPS（10、100、1000μg／ml后，用荧光标记的明胶酶谱法和反向酶谱法测定培养液中MMPs及TIMPs表达的变化，并用电泳分析软件对黑色条带（MMPs）或亮色条带（TIMPs）的面积及密度进行半定量分析。结果LPS可以上调成纤维细胞的MMP-2、TIMP-1和TIMP-2的表达，且TIMPs增加的程度大于MMPs。10、100、1000μg／ml的LPS使MMP-2分别增加为基值的1．3、1．7、1．6倍，TIMP-1分别为3、4．5、3．5倍，TIMP-2分别为3、6、5．6倍。结论LPS在伤口愈合过程中成纤维细胞表达MMPs和TIMPs的环节上，对伤口愈合没有明显的不利影响。     

丙泊酚对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞促炎细胞因子mRNA的影响

目的：研究不同浓度丙泊酚(异丙酚)对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α，IL-6，IL-8 mRNA表达的影响。方法：分离巯基乙酸盐诱导的小鼠腹腔巨噬细胞，随机分为7组。A组：阴性对照组；B组：阳性对照组．脂多糖(LPS)10n/ml孵育细胞；C组：单用丙泊酚组，500μg／ml孵育细胞；D，E，F，G组：丙泊酚 LPS组，不同浓度丙泊酚(0．5，5，50，500μg/ml)孵育2h后加入LPS 10ng/nl继续孵育1～4h。用RT-PCR法检测巨噬细胞TNF-α，IL-6，IL-8 mRNA的水平。结果：在内毒素诱导下，腹腔巨噬细胞TNF-α，IL-6，IL-8 mRNA的水平均显著增高；丙泊酚对LPS刺激后TNF-α，IL-6 mRNA表达水平的增高有抑制作用，并呈浓度依赖性；但对LPS刺激下IL-8 mRNA表达水平增高的影响无统计学意义。结论：丙泊酚能在转录水平抑制内毒素刺激下小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子的产生。     

创伤患者外周血单核细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化

目的 研究创伤患者外周血单核细胞内内毒素复合受体-Toll样受体4（TLR4）/髓样分化蛋白-2（MD-2）mRNA的表达变化，观察其与临床预后的关系。方法 35例创伤患者[损伤严重度评分（ISS）≥9分]与14例正常对照，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增TLR4，MD-2，以β肌动蛋白（β-actin)的表达作为内参照，比较TLR4，MD-2的表达水平；采用鲎试剂法测血浆脂多糖（LPS）浓度；同时观察患者的预后情况。结果 所观察的创伤患者中，血浆LPS浓度均发生不同程度的升高；TLR4，MD-2基因的表达均降低，但预后良好的可在伤后第5天恢复正常水平，预后差的在伤后第5天的表达仍处于低水平。结论 创伤可引起内毒素血症创伤后人外周血单核细胞内TLR4，MD-2mRNA的表达与患者的免疫机能，预后情况密切相关。     

Optimization of the system of medical service of students of Cadet Schools of the Ministry of Defense of the Russian Federation

One of the factors of the successful military career guidance Cadet schools students is preserving and promoting their health. Medical support of children and adolescents aged 10-17 years should include the full range of medical and preventive measures defined for this group. The state of providing outpatient care for pupils at the Cadet School in St. Petersburg was studied. These results show that full medical care in accordance with the standards can be based only on children's health clinics. It is important that the organization of medical support pupils cadet schools should be cooperate with civilian health care.     

带状疱疹83例误诊原因分析

带状疱疹是由水痘—带状疱疾病毒引起的皮肤科常见疾病。其主要的病理损害,一是受累神经的严重炎症性浸润,继而导致受侵犯神经节内神经细胞变性、坏死;二是皮肤的水泡。迅速抑制神经节和相应的感觉神经纤维的充血、水肿和坏死,防止粘连形成,达到迅速镇痛、改善皮损,缩短病程及防止后遗症的发生是治疗的关键。因而,尽早明确诊断,     

Estimation of accumulated dose of radiation by method of ESR-spectrometry of dental enamel of mammals

ESR-spectrometry was used to investigate radiation-induced paramagnetic centers in enamel of mammals: carnivores (polar bear and fox), ungulates (reindeer, European bison, moose), and man. Values at half the microwave power saturation of the radiation signal, P_1/2, evaluated at room temperature, was found to range from 16 to 26 mW for animals and man. A new approach to discrimination of the radiation induced signal from the total ESR spectrum of reindeer enamel is proposed. ‘Dose-response’ dependencies of enamel of different species mammals were measured within the dose range from 0.48 up to 10.08 Gy. Estimations of ‘radiosensitivity’ enamel of carnivores and ungulates showed good agreement with radiosensitivity enamel of man by ESR method.     

Analysis of the results of the international comparison of activity measurements of a solution of Fe

The results of an international comparison of activity measurements of a solution of ⁵⁵Fe organized by the BIPM in 2005 are reported and analysed. This exercise, which follows the procedures of the CIPM mutual recognition arrangement to update older comparisons, is a renewal of the comparison organized by the BIPM that took place in 1978. A EUROMET comparison was organized in 1996 specifically to compare activity measurements of a ⁵⁵Fe solution by means of liquid-scintillation techniques. Results of these three comparisons are presented and discussed in this paper.

The radionuclide solution was provided by the NPL, which also distributed the samples to the participants. The activity of the ampoules was measured by 16 laboratories using 12 methods producing 25 results. Some general considerations on uncertainty assessments pertaining to the different techniques used are drawn. The outcome of four different estimators is compared from which the presence of at least one outlier can be confirmed. Further measurements should be made to try to reduce the discrepancy between the results. To date the outcome of the present comparison does not show an improvement to that of the 1996 comparison.     

Evaluation of the results of various technics of non-surgical therapy of varicocele

A new method of non-surgical treatment of varicocele syndrome is described: it consists in sclerotherapy of spermatic vein by trans-femoral percutaneous catheterization with balloon-catheters. In 8 cases venous thrombosis has been induced by direct electric clotting. The techniques and a 6 months follow-up are discussed. It is pointed out that this procedure should be considered as the method of choice for tubular lesions and sub-fertility prophylaxis in young people and in childhood.     

延迟性脾破裂误漏诊原因分析

目的探讨延迟性脾破裂误漏诊原因和预防措施.方法回顾性分析总结12例延迟性脾破裂中的诊断和误漏诊的经验与教训.结果本组延迟性脾破裂的误漏诊5例(41.66%).对多发伤与脾破裂并存可能认识不足,外伤史轻微或伤员隐瞒外伤史,缺乏腹痛-缓解-突然再腹痛的典型病史,缺乏“对冲性脾破裂”力学分析和整体化诊断思路等为其误漏诊的主要原因.结论详细的外伤史和全面系统检查,重视腹以外多发伤掩盖腹内脏器伤及延迟性脾破裂可能.确立外伤-腹内脏器伤-脾破裂整体化诊断思路.不间断地辅以B超检查脾形态学变化和腹内有无积液,腹腔穿刺确定有无血腹、X线胸腹部检查观察左侧胸肋角和膈肌运动情况、必要时CT检查以尽早发现脾包膜下血肿,降低延迟性脾破裂误漏诊率.