抗人胎盘层粘连蛋白P1单克隆抗体的制备与初步应用

在纯化人胎盘层粘连蛋白Ｐ１段（简称Ｐ１）的基础上，应用杂交瘤技术获得两株抗Ｐ１的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ１５和１Ｂ５。两株ＭｃＡｂ均属ＩｇＧ１，同人纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原无交叉反应。纯化的腹水ＭｃＡｂ效价分别为６．４×１０－７（３Ａ１５）和２×１０－８（１Ｂ５），分别识别Ｐ１分子上的不同表位。利用ＭｃＡｈ３Ａ１５和１Ｂ５建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ，用于检测Ｐ１的下限为１０ｎｇ／ｍｌ，标准曲线在１０～５００ｎｇ／ｍｌ之间呈直线关系。对１００例健康献血员、１８例慢性肝炎患者和１２例肝硬化患者血清Ｐ１的检查结果分别为３３．８±１１．６、６７．３±３１．７和１０７．５±５８．４ｎｇ／ｍｌ。     

人乳头瘤病毒与P 53协同致膀胱移行细胞癌关系的研究

目的 研究人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６和１８型及Ｐ５３与膀胱移行细胞癌的关系。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了７５例膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ的感染,免疫组化ＳＰ法检测Ｐ５３蛋白表达情况。结果 膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ６、１１、１６和１８的阳性率分别为６．７％（５／７５）,５．３％（４／７５）,３３．３％（２５／７５）和６．７％（５／７５）。低危型ＨＰＶ（６或１１）阳性率为９．３％（７／７５）,高危型ＨＰＶ（１６或１８）阳性率为３４．７％（２６／７５）。同一膀胱癌组织中两种以上（包括两种）ＨＰＶ亚型感染８例,占１０．６％。ＨＰＶ６、１６和１８型之间感染阳性率在肿瘤有无转移组中差异显著（Ｐ〈０．０５）,ＨＰＶ１６、１８的阳性率在肿瘤病理分级中差异有极显著性（Ｐ〈０．０１）。ＨＰＶ ＤＮＡ型别     

肝细胞肝癌中卵圆细胞的组织学与超微结构研究

目的：探讨人肝癌肝组织存在卵圆细胞的可能性。方法：对２０例人肝细胞肝癌的手术标本行常规组织学和超微结构观察，并用胆管上皮分化标记ＣＫ７和肝细胞分化标记白蛋白对以上组织作免疫组化染色，同时对其中５例作免疫电镜标记。结果：光镜下，１４／２０例癌肿边缘常可见到增生的小胆管样结构。电镜下，１４／２０例可找到三型卵圆细胞。其中Ⅰ型细胞体积较小、核大、胞质少，此为较为原始的卵圆细胞。Ⅱ型细胞体积稍大，胞质稍多     

层粘连蛋白受体研究进展

层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）是细胞与基质、细胞与细胞间相互作用与调节的重要组成部分。目前已分离纯化的ＬＮＲ多达２０余种。不同组织细胞上表达的ＬＮＲ各不相同，而同一种细胞上可表达多种不同的ＬＮＲ。     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白与子宫内膜异位症发病关系的研究

目的探讨纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN）和层粘连蛋白（Laminin,LN）与子宫内膜异位症的关系。方法采用免疫组化方法分析了子宫内膜异位症患者异位内膜35例、在位内膜20例及对照组子宫内膜24例的FN和LN的表达变化。结果1.与对照组相比子宫内膜异位症异位内膜组FN、LN的表达均明显下降,差异有显著性（均为P〈0.05）;2.在位内膜组FN、LN的表达同样也呈明显下降,有显著性差异（FN,P〈0.01;LN,P〈0.05）。提示细胞外基质中FN、LN的表达减少与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

层粘连蛋白研究进展

层粘连蛋白是重要的细胞外基质成分之一，近年来研究发现至少有７种不同的蛋白分子，它们分别由三种不同源的８条多肽链所构成。其在体内通过与受体（如整合素类受体）结合发挥生物学功能。层粘连蛋白不仅在维持细胞、器官的形态和调节体内细胞的分化、迁移、增殖中发挥重要的作用，而且在胚胎发育中起着关键作用。其分子或结构链的异常增加或减少可能是某些疾病的发病基础。     

良、恶性鼻咽活检组织中EB病毒DNA检测、EBNA的分型及表达

应用ＥＢ病毒ＤＮＡＢａｍＨＩＷ片段、ＥＢＮＡ一２Ａ、Ｂ型分了探针，检测我区鼻咽癌（包括鼻咽原位癌）、临床高度怀疑鼻咽癌（包括鼻咽上皮细胞非典型增生、颈淋巴结肿大及鼻咽结节）和慢性鼻咽炎等活检组织共９６例。各组均以Ａ型病毒感染为主：鼻咽癌组阳性为２７／３５（７７．１％）；临床疑癌组７／１０（７０．０％）；慢性鼻咽炎织１８／２７（６６．７％）。Ｗ和Ａ型均阳性的鼻咽癌组为２０／２９（６９．０％）；非癌组为８／２５（３２．０％）。同时用抗补体免疫荧光法检测ＥＢＮＡ的表达，鼻咽癌组阳性为１９／２０（９５．０％），而慢性炎组为１／１５（６．７％）。以ＥＢ病毒ＤＮＡＢａｍＨＩＷ片段、ＥＢＮＡ一２Ａ型片段和ＥＢＮＡ表达检测中任一项阳性作为ＥＢ病毒感染、整合或表达的依据，则鼻咽癌组与非癌组之间有明显的差别（Ｐ＜０．００１）。这从另一角度提示ＥＢ病毒（特别是ＥＢＮＡ一２Ａ型）感染与我区鼻咽癌病因、发病有密切关系。     

肝纤维化大鼠肝脏中内质网应激相关分子CHOP和TRB3的表达变化

 目的： 观察内质网应激相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP）和Tribbles同源蛋白3（TRB3）在四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化过程中的表达变化,探讨其在肝纤维化过程中的可能作用。方法： 体重180～200　g的雄性Wistar大鼠随机分为正常4周组、正常8周组、肝纤维化4周组和肝纤维化8周组,肝纤维化组大鼠皮下注射40%CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周和8周处死大鼠,观察肝组织病理改变,Western blotting检测肝脏活化转录因子6（ATF6）蛋白,免疫组化、Western blotting和real-time PCR分别检测肝脏CHOP和TRB3蛋白和mRNA表达变化,TUNEL法检测肝脏细胞凋亡。结果： 肝纤维化组大鼠肝脏可见假小叶形成,p90ATF6蛋白表达量较正常组明显减少（P<0.01）,p50ATF6蛋白表达量较正常组明显增加（P<0.01）,肝细胞胞浆CHOP和TRB3蛋白及mRNA表达量较正常组显著增加（P<0.01）,细胞凋亡率较正常组显著增加（P<0.01）。结论： 内质网应激相关分子CHOP和TRB3在CCl4致大鼠肝纤维化过程中蛋白及mRNA表达水平明显增加,其变化趋势与大鼠肝细胞凋亡率一致,提示内质网应激可能通过CHOP和TRB3促进肝细胞凋亡,参与肝纤维化发生发展。     

大鼠肝脏热缺血-再灌注损伤中HSP 72对肝细胞的保护作用

目的探讨应用亚砷酸钠（Sodium Arsenite，SA）诱导热休克蛋白72（HSP72）在大鼠肝脏热缺血-再灌注损伤中对肝细胞的保护作用。方法采用大鼠肝脏部分热缺血．再灌注模型，预先给予SA（6mg／ml），24h后阻断肝脏中、左叶血供90min，再灌注3、6h，分别用Western blot检测肝脏中的热休克蛋白72（HSP72）、核转录因子-κB（NF-κB）;外周血测定ALT、AST、LDH、TNF-α、CINC、MIP-2；组织学作HE染色、HSP72、NF-κB免疫组化。观察7d存活率。结果Western blot结果显示SA组均有HSP72表达，对照组则无表达。对照组有NF-κB表达，SA组则无表达。SA组血清ALT、AST、LDH、TNF-α、CINC、MIP-2均显著低于对照组（P〈0．05）。病理观察结果显示，对照组可见肝实质细胞浊肿、空泡样变性、肝窦内中性粒细胞浸润。SA组肝实质细胞无明显损伤。免疫组化结果显示，SA组肝细胞胞浆、核均有较显著的HSP72表达，对照组基本无表达。对照组肝实质细胞核内有较显著的NF-κB的表达，SA组则基本无表达。SA组7d生存率为87．5％（7／8），显著高于对照组的37．5％（3／8）（P〈0．05）。结论SA可诱导大鼠肝脏产生HSP 72，在肝脏热缺血-再灌注中抑制NF-κB的活性，减轻肝脏炎症反应，对肝实质细胞具有保护作用。     

胰腺癌组织中内分泌细胞及其意义研究

４２例胰腺癌嗜银和亲银染色发现１９例４５．２％含内分泌细胞（ＥＣ），其中ＥＣ阳性率≥５０％４例；高分化腺癌ＥＣ阳性率（５／２０例，２５％）低于中、低分化腺癌（１２／１９例，６３．２％）和粘液癌（２／２例，１００％），组织学分级Ｉ级病例ＥＣ阳性率（５／１８例，２７．８％）低于Ⅲ级病例（７／８例，８７．５％）；ＥＣ阳性病例间质肥大细胞数明显高于ＥＣ阴性病例；发生转移病例ＥＣ阳性率（８／１４例，５７．１     

EB病毒感染对鼻咽上皮HLA表型改变的影响

用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）检测ＨＬＡ－Ⅰ和ＨＬＡ－Ⅱ的表达。结果显示，体外培养的１０例人胚鼻咽上皮细胞被ＥＢ病毒感染后，ＨＬＡ－Ⅰ型抗原的表达无明显改变（阳性细胞为８５．８％±１７．１６％）；但ＨＬＡ－Ⅱ抗原的表达比对照组明显增高，两组阳性细胞各为５２．４％±１７．１６％和９．６７％±７．２３％，其差别有显著的统计学意义（Ｐ＜０．０５）。鼻咽活检组织中，１８例鼻咽癌细胞同时表达ＨＬＡ－Ⅰ和－Ⅱ两种抗原，并以后者为主（各为７２．２％和１００％），聚合酶链反应（ＰＣＲ）查到ＥＢ病毒ＤＮＡ的占９０％，与慢性鼻咽炎的差别有显著的统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＨＬＡ－Ⅱ表达增高可能在鼻咽癌的发生和发展中起着一定的作用。     

大肠癌细胞株浸润人羊膜时Ⅳ型胶原酶表达的影响因素

目的：探讨有关层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）、上皮性钙调蛋白（Ｅ－ｃａｄ）及Ⅳ型胶原酶（Ⅳｃｏｌ）在大肠癌浸润中的相互关系。方法：利用人羊膜浸润模型，观察ＬＮＲ、Ｅ－ｃａｄ对大肠癌细胞株与羊膜粘附及细胞内Ⅳｃｏｌ表达的影响。结果：高转移细胞株ＬｏＶｏ与羊膜的粘附率高于转移力较低细胞株ＨＴ２９。瘤细胞用Ｅ－ｃａｄ单抗封闭后培养于羊膜上，两细胞株内Ⅳ型胶原酶表达明显增高；但用ＬＮＲ单抗封闭细胞后，细胞内Ⅳ型胶原酶表达降低，并且均以高转移株变化更为明显。结论：Ｅ－ｃａｄ与ＬＮＲ通过细胞内信使传递作用影响细胞内Ⅳ型胶原酶的表达，从而对肿瘤浸润和转移产生影响。     

GPC3C末端融合蛋白在肝细胞癌中的分布及其临床意义

目的：检测Glypican-3(GPC3)在肝细胞癌中的表达。探讨GPC3在肝细胞癌中的作用。方法：（1）定向克隆GPC3基因C末端180bp的片段,IPTG诱导原核表达载体pGEX-5X-1、鉴定并利用谷胱苷肽转移酶纯化GPC3末端融合蛋白;（2）免疫家兔,制备抗体;（3）应用免疫组化（SP法）检测了肝细胞癌及其癌旁组织中GPC3的表达。结果：（1）纯化了GPC3末端融合蛋白;（2）制备了抗人GPC3多克隆抗体;（3）免疫组化结果表明25例低分化肝细胞癌中18例为阳性,表达率为72%;阳性结果为棕色颗粒均匀分布于肝细胞癌的细胞膜上和胞浆内;正常肝细胞,胆管细胞,血管内皮细胞、Ito细胞及成纤维细胞均呈阴性;癌旁组织不表达,GPC3的表达和肿瘤大小及门脉癌栓形成有密切关系。结论：GPC3在肝细胞癌中高表达,且具有细胞特异性;GPC3在低分化的肝细胞癌中有重要作用。     

血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对心肌细胞周期素和p27蛋白表达量的调节

目的：细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）和ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）是对细胞周期起正性和负性调节作用的两类物质。ｐ２７蛋白是ＣＫＩ的一种，主要对细胞外部促进或抑制增殖的信号起反应。本文观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对心肌细胞细胞周期素和ｐ２７蛋白表达量的影响。方法：培养的心肌细胞除血清２４ｈ使其处于静止状态，加入ＡｎｇⅡ１０－６ｍｏｌ／Ｌ、ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍＬ后不同时间收集细胞，用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ，以确定细胞所处的周期。用细胞周期素或ｐ２７蛋白的单抗和标记ＦＩＴＣ的二抗标记细胞，用流式细胞仪测定被激发出的荧光量来测定细胞周期素和ｐ２７蛋白表达的相对量。结果：ＡｎｇⅡ可促进细胞周期素的表达，但对ｐ２７蛋白的表达没有影响，不能促进心肌细胞增殖；ＰＤＧＦ明显促进心肌细胞细胞周期素的表达，也不能明显抑制ｐ２７的表达，也不能促进心肌细胞增殖。结论：细胞周期素的表达增加与心肌细胞能否进入细胞周期并不一致，ｐ２７蛋白是心肌细胞能否进入细胞周期并进行有丝分裂的重要调节因子。     

层粘蛋白及其受体、增殖细胞核抗原与肝细胞癌肿瘤生物学特性的关系

目的:探讨层粘蛋白(LN)、层粘蛋白受体(LN-R)及增殖细胞核抗原(PCNA)与原发性肝细胞癌(HCC)恶性程度的关系。方法: 采用SABC法分别检测42例肝细胞癌及癌旁组织中LN、LN-R及PCNA的表达情况。 结果:LN、LN-R及PCNA在肝细胞癌中的表达均显著高于癌旁组织(P＜0.05),且与肝细胞癌Edmondson分级呈正相关;浸润型(IHCC)生长、有转移、肿瘤直径＞3 cm者LN、LN-R及PCNA的表达高,而膨胀型(EHCC)生长、无转移、肿瘤直径≤3 cm者多表达较低;在高增殖指数组LN、LN-R表达高于低增殖指数组(P＜0.05)。结论: 细胞内LN、LN-R及PCNA可作为评判肝细胞癌恶性程度及临床预后的良好指标。     

层粘连蛋白受体和nm23蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与间 …

探讨乳腺癌组织层粘连蛋白（ＬＮ）及其受体（ＬＮ－Ｒ）和ｎｍ２３蛋白的表达与间质微血管密度及肿瘤转移的关系。方法应用免疫组织化学ＬＳＡＢ方法检测７３例乳腺癌力ｎｍ２３蛋白的表达,在第Ⅷ因子相关抗原染色切片上检测其微血管密度（ＭＶＤ）。结果病理分级越高,乳腺癌ＬＮ表达程度越强,即病理Ⅰ级而ＬＮ分布Ⅲ级者为８．３％,病理和ＬＮ分布均Ⅲ级者为５８．８％,两者间差异有极显著意义。ＬＮ－Ｒ表达程度则与转移有关     

层粘连蛋白受体、Ⅳ型胶原的表达及微血管密度与乳腺癌转移的关系

目的：探讨乳腺癌组织层粘连蛋白受体（LN－R）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ)、间质微血管密度与乳腺癌淋巴结转移的关系。方法：应用免疫组织化学S－P方法标记82例乳腺癌组织中LN－R、Col Ⅳ、FⅧRAg，并在第Ⅷ因子相关抗原（FⅧRAg)标记切片上计算微血管密度（MVD）。结果：LN－R表达强度及MVD的高低在乳腺癌有淋巴结转移组和无淋巴结转移组间有差异；ColⅣ在两组间无差异。结论：乳腺癌间质微血管密度增加及LN－R表达增强可作为预测肿瘤转移及判断预后的指标。     

层粘连蛋白及其受体在乳腺癌的表达与转移和预后的关系

目的观察层粘连蛋白（ｌａｍｉｎｉｎ,ＬＮ）和层粘连蛋白受体（ｌａｍｉｎｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＬＮ－Ｒ）与乳腺癌转移和预后的关系。方法用ＬＳＡＢ免疫组化法,检测了１０９例乳腺癌原发灶和３７例淋巴结转移灶组织中ＬＮ和ＬＮ－Ｒ在癌细胞内表达的情况。结果有３２例（２９．４％）原发灶浸润性癌细胞内可见ＬＮ表达,５例（１３．７％）腋窝淋巴结转移灶中癌细胞内有ＬＮ表达。乳腺癌原发灶中有ＬＮ－Ｒ表达者占５５．０４％,淋巴结转移灶中ＬＮ－Ｒ表达占８３．７８％,后者明显高于前者（Ｐ＜０．０５）。６４例随访材料中单独ＬＮ表达者无１例死亡,而有ＬＮ－Ｒ表达者生存期明显短于无ＬＮ－Ｒ表达者（Ｐ＜０．００１）。经临床和病理多因素比例风险回归分析,显示淋巴结转移和ＬＮ－Ｒ是影响患者生存的独立因素,ＬＮ－Ｒ的风险度（４．３７５倍）大于淋巴结转移（２．８１０倍）。结论结果提示ＬＮ－Ｒ表达是导致乳腺癌患者死亡的重要生物学因素之一。     

不同引物介导的聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒DNA

应用３对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）引物对１０７例各种宫颈标本进行了聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果显示，共同引物（ＧＰ）扩增，有５８．８％（３０／５１）宫颈鳞癌，１００％（１４／１４）尖锐湿疣、１３．６％（３／２２）宫颈炎和１０％（２／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ阳性。型特异性引物ＳＰ１６／ＳＰ１８扩增，有３７．２％（１９／５１）宫颈鳞癌２５．７％（５／１４）尖锐湿疣和５％（１／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ１６型阳性，５．８％（３／５１）宫颈鳞癌为ＨＰＶ１８型阳性。进一步用ＳＰ１６ｂ引物扩增，没有１例ＨＰＶ１６ｂ亚型被发现。说明宜颈磷癌和尖锐湿疣与ＨＰＶ感染有关，结合应用共同引物和型特异性引物可作为ＨＰＶ检测与分型方法。     

EB病毒感染与中线恶性网织细胞增多症

使用一个针对ＥＢ病毒编码的小分子ＲＮＡ（ＥＢＥＲ）的寡核苷酸探针对１９例中线恶性网织细胞增多症病变组织进行了原位杂交检测，并配合免疫表型分析。结果为：（１）本组病例中１８／１９例（９４．７％）的病变组织中的异形淋巴样细胞表达Ｔ细胞分化抗原。ＣＤ３阳性１５例，ＵＣＨＬ１阳性９例，其中二者均阳性６例，但各例中的异形淋巴样细胞均未表达Ｂ细胞及组织细胞分化抗原；（２）ＥＢＥＲ原位杂交检测的阳性数高（１５／