PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

6种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的应用评价

目的 对6种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法进行应用评价.方法 分别采用6种方法检测134株临床分离的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的情况:聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、琼脂稀释法检测苯唑西林最小抑菌浓度、琼脂稀释法检测头孢西丁最小抑菌浓度、显色培养基法.结果 以PCR检测mecA基因为“金标准”,65.7％的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林 ;苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的敏感性和特异性分别为95.5％和97.8％ ;头孢西丁纸片扩散法敏感性和特异性分别为97.7％和97.8％;苯唑西林和头孢西丁琼脂稀释法敏感性均为100％,特异性分别为97.8％和91.3％ ;显色培养基法敏感性和特异性分别为98.9％和97.8％.结论 6种检测方法具有较好的一致性.头孢西丁纸片扩散法简便、可靠,可作为临床实验室常规检测MRSA的方法.     

几种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的对三种检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法以PCR检测金黄色葡萄球茵甲氧西林决定因子A（mecA）为金标准,按临床实验室标准化委员会（CLSI）操作规程用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法对临床分离的155株金黄色葡萄球菌进行检测。结果155株金黄色葡萄球菌经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为61．9％（96／155）;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100％;苯唑西林纸片扩散法的敏感性为95．8％,特异性为91．5％;苯唑西林琼脂稀释法的敏感性为100％,特异性为98．3％;头孢西丁纸片扩散法优于苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林琼脂稀释法。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便、敏感性高、特异性好、结果可靠,可作为医院微生物实验室日常工作中检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。     

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性.方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性.结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112).头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%.结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法.     

压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

聚合酶链反应对耐甲氧西林葡萄球菌的监测

为了解同济医院临床各科室分离的金黄色葡萄球菌对甲氧西林类抗生素耐药性的状况，收集同济医院临床各科室1999年分离的金黄色葡萄球菌84株，通过设计的引物，利用扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因，用地高辛标记的特异性探针与PCR扩增产物杂交。84株金黄色葡萄球菌中获得8株扩增产物为阳性的菌株，用这些阳性产物与地高辛标记的探针进行Southern blot分析，杂交结果与PCR结果一致，故同济医院1999年金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药率为8．8％。将聚合酶链反应技术用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）其敏感性、特异性较高且重复性好，准确率比实验室常用纸片法更高，为指导临床应用抗生素提供了一个切实可行的方法。     

应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：探讨双重聚合酶链反应(PCR)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重PCR反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经PCR法鉴定为MRSA。结论：应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌femA调控基因的研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA是否存在调控基因,以进一步揭示其耐药机制。方法用最低抑菌浓度法（MIC）筛选对苯唑西林高耐株、低耐株、敏感株;用头孢色芬纸片法（Nitrocephin）筛选出不产β-内酰胺酶菌株;用PCR筛选出含mecA的菌株。将含mecA不产酶的高耐株、低耐株、敏感株纳入进一步研究中;PCR扩增femA及femA5？上游基因;提取细菌总蛋白;生物素标记DNA探针;滞留电泳检测调控基因。结果滞留电泳检测对苯唑西林高度耐药不产β-内酰胺酶含mecA基因菌株均出现滞留条带。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA有调控基因存在。     

耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的比较

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为金标准，比较头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的优缺点。方法对临床分离的70株葡萄球菌（其中金黄色葡萄球菌40株，凝固酶阴性的葡萄球菌30株）分别用PCR法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准KB（Kirby Bauer）法进行。结果经PCR法检测mecA基因，耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的发生率分别为75．0％（30／40）和80．0％（24／30）；头孢西丁纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为93．3％、95．9％；90．0％和100％；苯唑西林纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为90．00%、87．5％；90．0％和83．3％；乳胶凝集法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为100．0%、100．0％；100．0％和100．0％。与PCR结果比较，3种方法所获得的结果经统计学分析，差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法是成批检测的理想方法；乳胶凝集法检测快速，结果可靠，但检测成本高；实验室应选择合适的方法，以提高MRS的检出率。     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测

目的 采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法 对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增,并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果 以mecA基因阳性判断MRS,灵敏度为100％,特异度为96．6％,阴性预测值为1.0％,阳性预测值为99．0％;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,灵敏度为100％,特异度为99．5％,阴性预测值为100％,阳性预测值为98．5％。我院葡萄球菌耐药率为78．6％,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79．0％,金黄色葡萄球菌耐药率为78．0％。结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS,与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的评估

目的 评价 4 种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)方法的临床应用价值.方法 对94株临床分离的金黄色葡萄球菌采用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量稀释法筛选MRSA,并采用聚合酶链反应(PCR)检测mecA 基因作为检测MRSA的金标准.结果 94株中有63株为MRSA,检出率为67%;其中头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA敏感性为100.0%,特异性100.0%;苯唑西林K-B 法筛选MRSA敏感性为96.8%,特异性为87.1%;苯唑西林微量稀释法筛选MRSA敏感性为98.4%,特异性为96.8%.结论 综合分析头孢西丁纸片扩散法可作为医院微生物实验室日常工作中检测MRSA的简便又准确的实验方法.     

头孢西丁替代苯唑西林检测"耐甲氧西林"的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌

目的探讨头孢西丁纸片扩散法替代苯唑西林检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的准确率。方法临床标本培养鉴定出的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌同时用苯唑西林和头孢西丁筛选(K-B法)耐药菌株,再用PBP2a胶乳法进一步检测耐药菌株的mecA基因。结果121株的葡萄球菌,对苯唑西林的耐药率为97.5%,其中金黄色葡萄球菌31株,表皮葡萄球菌67株,腐生葡萄球菌18株,溶血葡萄球菌5株,用PBP2a胶乳试剂和头孢西丁纸片检测金葡菌中MRSA发生率均为77.4%(24/31),凝固酶阴性葡萄球菌中MRCNS发生率96.6%(87/90)和94.4%(85/90)。头孢西丁纸片扩散法的符合率为99%(109/111)。结论苯唑西林纸片扩散法检测MRSA假阳性率较高,而头孢西丁纸片法(K-B法)与PBP2a胶乳凝集法检测MRSA和MRCNS的结果相近,适合实验室推广使用。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

院内外环境分离金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）耐药基因及毒素基因,了解其分布情况。方法采用多重聚合酶链反应（multiplex polymeras chain reaction,PCR）技术分别检测耐药基因mecA、femA与毒素基因TSST、PVL。结果 83株金黄色葡萄球菌,仅3株（3.61%）菌检出mecA基因,22株菌（26.50%）检出femA基因,15株菌（18.07%）同时检出mecA与femA基因。医院样本检出12株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA）,3株甲氧西林耐药凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant and coagulasenegative Staphylococcus aureus,MRCNS）。83株分离自医院及环境样本SA,2株分离自咽拭子的样本检出TSST基因,检出率4.54%（2/44）;1株分离自血液的样本检出PVL基因,检出率2.27%（1/44）,其余菌株未检出毒素基因。结论院内样本中,部分菌株携带mecA基因,环境样本未发现携带mecA菌株,两者存在差异。83株SA菌,毒素基因携带率较低。检测耐药、毒素基因携带率,为临床治疗及院内感染控制,食物中毒溯源提供依据。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

目的 分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）检测方法及其耐药性。方法 采用头孢西丁、苯唑西林纸片法和PCR3种方法检测2005年安徽地区12家医院临床分离133株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株;琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果头孢西丁、苯唑西林纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为52．63％、54、13％、51．87％,3种方法对MRSA检出率差异无显著性。以PCR法检出mec—A基因为判断MRSA的金标准,头孢西丁纸片法灵敏度为100％、特异度为98．44％、符合率为99、24％,r（正确诊断指数）=0．9844。苯唑西林纸片法的灵敏度为98．55％、特异度为93、75％、符合率为96．24％,r=0．923。除了青霉素-G、氨苄西林、替考拉宁、万古霉素以外,其余抗生素的耐药率,MRSA组均明显高于MSSA组（P〈0．01）。结论 头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法;MRSA为多重耐药菌株,临床应加强检测。     

耐甲氧西林葡萄球菌HVR基因分型及其与耐药性的关系

目的　为获得成都地区耐甲氧西林葡萄球菌的 HVR- PCR基因型 ,比较 HVR基因型与耐药谱的关系 ,从而指导临床合理选用抗生素 ,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用。方法　从成都地区四家三甲医院收集到临床分离的葡萄球菌 114株。其中 86株 MRSA、10株 MRSE(Mcr S.epidemidis)、5株 MSSE(Mcs S.epidemidis)、8株 MRSH(Mcr S.haemolyticus)和 5株 MSSH(Mcs S.haemolyticus) ,用琼脂平皿二倍稀释法测定其MIC值 ,改良的碱裂解法提取 DNA,应用 PCR技术 ,扩增 mec基因高变区 (HVR区 ) ,聚丙烯酰胺凝胶垂直板和琼脂糖凝胶电泳分型。结果　根据 PCR产物片段大小 ,MRSA、MRSE和 MRSH分别被分为 4种、3种和 2种基因型 ,其中有 9株 MRSE的 PCR扩增产物片段大小与 MRSA相同。 MRSA主要为 A、D型 ,分别占 5 2 .32 %和39.5 3% ;B、C型最为耐药 ,而 D型对多种药物敏感。 MRSE的 型为高度多重耐药株 ,而 型对多种抗生素敏感。MRSH的 a型比 b型耐药。结论　 HVR- PCR法对于由 MRSA引起的院内感染的流行病学调查是一种快速、简单、可靠的分型法 ,且有利于抗菌药物的选用。这种方法能够部分比较 MRSA菌株和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌 (Mcr CNSt)的 mec决定因子 ,从而探讨其起源。     

外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌耐药及femA表达水平的影响

目的探讨外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌苯唑西林耐药水平及femA表达的影响。方法用琼脂平皿对倍稀释法检测不同浓度甘氨酸下苯唑西林对30株金黄色葡萄球菌的MIC值,用实时荧光定量PCR方法检测不同浓度甘氨酸下金黄色葡萄球菌femA表达水平。结果30株金黄色葡萄球茵中MSSA4株,低耐MRSA2株,高耐MR-SA24株,在0．2M外源性甘氨酸存在时MIC下降4-256倍,在0．3M外源性甘氨酸存在时MIC均〈0．25μg／ml。在所有金黄色葡萄球菌中均检测到femA表达,在0．2M甘氨酸存在时femA表达下降50％-80％,0．3M甘氨酸存在时femA表达下降75％-90％。结论外源性甘氨酸能降低金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药水平及femA表达水平。