PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌femA调控基因的研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA是否存在调控基因,以进一步揭示其耐药机制。方法用最低抑菌浓度法（MIC）筛选对苯唑西林高耐株、低耐株、敏感株;用头孢色芬纸片法（Nitrocephin）筛选出不产β-内酰胺酶菌株;用PCR筛选出含mecA的菌株。将含mecA不产酶的高耐株、低耐株、敏感株纳入进一步研究中;PCR扩增femA及femA5？上游基因;提取细菌总蛋白;生物素标记DNA探针;滞留电泳检测调控基因。结果滞留电泳检测对苯唑西林高度耐药不产β-内酰胺酶含mecA基因菌株均出现滞留条带。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA有调控基因存在。     

MecA、femB基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的了解mecA、femB多重聚合酶链反应（PCR）法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出效率。方法对临床分离的71株非重复的金黄色葡萄球菌,采用多重PCR进行检测。结果 mecA、femB多重聚合酶链反应对MRSA的检测的特异性为100%,敏感性为97.87%。结论 mecA、femB多重PCR法可以对临床分离的金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药作出判断,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

斑点杂交法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的临床研究

目的 探讨斑点杂交技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的应用价值.方法 设计mecA基因特异性引物,用地高辛标记;制备mecA基因探针,运用斑点杂交方法、聚合酶链反应（PCR）法检测mecA基因.结果 100例临床分离的金黄色葡萄球菌中共检出mecA基因阳性32例,阳性率为32％; PCR方法检出阳性36例,阳性率为36％.结论 通过斑点杂交技术可以方便、特异地检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因.     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

耐甲氧西林葡萄球菌检测及耐药性研究

目的 调查金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球的耐药性现状.方法 对195株金黄色葡萄球菌和286株凝固酶阴性葡萄球,用VITEK-32和GPS-107药敏卡,GPI鉴定卡,API-Spath手工条鉴定细菌并测定其对药物的敏感性.应用胶乳凝集试验检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时用NCCLS推荐的纸片扩散法检测耐甲氧西林的葡萄球菌.耐万古霉素的葡萄球菌(VRSA)和异质性耐万古霉素的葡萄球菌(hetro-VRSA).结果 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌仪器法、PBP2a、纸片扩散法阳性率分别为72%、76%、68%,凝固酶阴性的葡萄球菌耐甲氧西林仪器法、纸片扩散法(CNS)分别是78%、72%,PBP2a全部阴性.未检出VRSA和hetro-VRSA.结论 万古霉素、复方新诺明和四环素对耐甲氧西林的葡萄球菌有较好的抗菌活性,胶乳凝集试验检测PBP2a简便、快速、准确.     

耐甲氧西林葡萄球菌耐药性分析

耐甲氧西林葡萄球菌是引起医院内感染的重要致病菌。为了解该菌的耐药情况，进而为临床预防与治疗提供依据，我们对８８株葡萄球菌进行了耐甲氧西林及耐其它１４种常用抗生素和产β－内酰胺酶的测定。结果：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率为５６％，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌检出率为４７．６％；耐甲氧西林敏感葡萄球菌对１４种常用抗生素的耐药性及多重耐药性均高于甲氧西林敏感葡萄球菌；产β－内酰胺酶最高的是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，产酶率为９２．９％，最低的是甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌，为３９．４％，说明产酶与耐药之间有一定关系。耐甲氧西林葡萄球菌对万古霉素、呋喃妥因敏感，提示这２种药可作为临床治疗该类菌的首选药物。     

62株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药分析

目的分析62株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA）多重耐药性及检测MRSA所带的mecA基因,以指导临床合理用药。方法药物敏感试验采用K—B法;MRSA的mecA基因检测采用PCR扩增法。结果62株MRSA呈现多重耐药性,仅万古霉素、替考拉宁、利奈唑烷没有出现耐药,其它耐药率由高到低依次为：青霉素100％、红霉素90．33％、环丙沙星90．16％、庆大霉素83．6I％、左氧氟沙星78．58％、克林霉素75．41％、复方磺胺58．07％、四环素38．71％、氯霉素22．95％。8株MRSA都检测到mecA基因,大约在533bp位置产生了相同的条带。结论mecA基因系MRSA所特有,它的存在使MRSA呈现多重耐药性,应引起广大医务人员的高度重视。     

异源双链PCR法快速检测ST239型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的用异源双链PCR法快速检测ST239型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。方法根据ST239型MRSA的分子结构特点设计两对引物序列，用PCR方法进行扩增反应。结果在102株MRSA中检测出99株ST239型MRSA，其余3株为非ST239型。结论用异源双链PCR法快速检测ST239型MRSA具有准确、快速、高通量、省时和省力特点，可作为研究MRSA分子流行病学特征的一个重要工具。     

实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达水平

目的探讨实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌乒,以表达的方法。方法以BB270femA基因表达为标准,建立实时荧光定量PCR方法,对实验菌株femA表达进行相对定量。结果建立的实时荧光定量PCR方法所得结果标准曲线线性关系好,熔解峰单一。随MIC变化,金黄色葡萄球菌femA表达水平也随之变化。结论用实时荧光定量PCR方法研究金黄色葡萄球菌femA表达量结果可靠、敏感、重复性好。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

胶体金法检测在判定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的价值探讨

目的探讨胶体金法检测在判定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株中的价值。方法收集我院2008年3月-2009年2月临床分离的75株金黄色葡萄球菌,分别采用苯唑西林药敏纸片扩散法、乳胶凝集法及胶体金法检测,比较分析检测结果。结果胶体金法的敏感度与苯唑西林药敏纸片扩散法及乳胶凝集法相比,差异无统计学意义（χ^2=0.260,P〉0.05）;胶体金法与苯唑西林药敏纸片扩散法的符合率为100.0%;胶体金法、乳胶凝集法和苯唑西林药敏纸片扩散法的检测时间分别为（9.2±0.4）min、（38.2±1.7）min和（1080.6±36.3）min,胶体金法的检测时间最短,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论胶体金法是一种快速、准确的判定MRSA菌株的方法,值得进一步研究。     

头孢西丁替代苯唑西林检测"耐甲氧西林"的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌

目的探讨头孢西丁纸片扩散法替代苯唑西林检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的准确率。方法临床标本培养鉴定出的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌同时用苯唑西林和头孢西丁筛选(K-B法)耐药菌株,再用PBP2a胶乳法进一步检测耐药菌株的mecA基因。结果121株的葡萄球菌,对苯唑西林的耐药率为97.5%,其中金黄色葡萄球菌31株,表皮葡萄球菌67株,腐生葡萄球菌18株,溶血葡萄球菌5株,用PBP2a胶乳试剂和头孢西丁纸片检测金葡菌中MRSA发生率均为77.4%(24/31),凝固酶阴性葡萄球菌中MRCNS发生率96.6%(87/90)和94.4%(85/90)。头孢西丁纸片扩散法的符合率为99%(109/111)。结论苯唑西林纸片扩散法检测MRSA假阳性率较高,而头孢西丁纸片法(K-B法)与PBP2a胶乳凝集法检测MRSA和MRCNS的结果相近,适合实验室推广使用。     

215例性病可疑标本应用PCR技术同步检测淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体结果分析

近年来,性传播疾病出现明显上升趋势,尤其是淋球菌(NGH)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(MU)等病原体感染引起的性病,上升趋势最为显著,成为临床最常见的三种性病.通过对215例可疑标本应用PCR技术同步检测NGH、CT、MU三种病原体,目的是了解三种病原体在性病中的分布情况.     

多联实时荧光PCR检测几种重要肠道致病菌的实验研究

目的建立一种能同时检测志贺氏菌(Sh)、O139霍乱弧菌(O139VC)和空肠弯曲菌(CJ)的多联实时荧光PCR定量方法。方法根据Sh的ipaH基因序列、O139VC的wbfR基因序列、CJ的c基因序列的开放读码框(orf),分别利用ABI primer experess 2.0和DNAStar中的Primer Select软件设计出数对特异性的引物和探针,筛选出最佳的各组引物和探针组合,对引物、探针的浓度、Mg2 浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,从而建立了检测临床标本中Sh、O139VC和CJ的多联荧光PCR反应体系和检测方法。结果实验显示该方法具有特异性强,灵敏度高,均达到100copies/ml。结论多联实时荧光PCR方法可同时定量地检测临床标本中Sh、O139VC、CJ,结果显示快速简便,准确高效,有利于上述病原菌所致疾病的早期诊断和治疗。     

CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法。方法 针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008~2012年期间采集的1344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照。结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432%。对1344份标本进行检测,结果TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本。TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40分钟。结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测。