聚合酶链反应测Vi抗原在伤寒早期诊断中的应用

为选择更为敏感、特异的伤寒早期诊断方法，从伤塞沙门菌表达Ｖｉ抗原的特异结构基因ＶｉａＢ区域选择二对引物，建立了套式－聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）。检测伤寒早期标本３６份、结果血培养阳性２５份（６９％），肥达反应阳性１７份（４７．２％），ＰＣＲ阳性２９份（８０．６％）；２５份血培养阳性标本，ＰＣＲ均为阳性，并从血培养奶性标本中检出Ｖｉ－ＤＮＡ阳性４份。研究表明，应用ｎｅｓｔ－ｅｄ－ＰＣＲ检测     

聚合酶链反应快速诊断伤寒

聚合酶链反应快速诊断伤寒周伯平，谌取鼎，高志良，陈士竹，刘水腾，唐蔚目前对伤寒尚缺乏有效的早期诊断方法。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）快速诊断伤寒，现将结果报告如下。材料与方法一、病例选择临床拟诊伤寒患者４ｌ例，均具有典型临床表现，为１９９３年３月～...     

聚合酶链反应在鼠疫菌检测中的应用 研究

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，通过扩增鼠疫菌９．５ｋｂ质粒ｐｌａ基础上一个４７８ｂｌ片段，用于鼠疫菌检测，被试的４５株鼠疫菌扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析均呈现单一ＤＮＡ带，其分子量大小与预期结果符合。而假结核菌和一株缺６ＭＤ质粒鼠疫菌未见扩增带，洽部实验可在４ｈ内完成。本法具有快速、特异、敏感等优点，可用于不同生态型鼠疫菌的快速诊断和流行病学研究．     

聚合酶链反应在结核杆菌检测中的应用

本文综述了近5年来聚合酶链反应(PCR)技术在结核杆菌检测中的应用情况。主要介绍了PCR检测结核杆菌的方法、PCR扩增靶基因的选择、敏感性和特异性及临床应用情况,并对临床应用中的一些问题,如临床标本处理的简化、假阳性结果和假阴性结果的原因及对策进行了讨论。     

175聚合酶链反应在结核杆菌检测中的应用

本综述了近５年来聚合链反应（ＰＣＲ）技术在结核杆菌检测中的应用情况，主要介绍了ＰＣＲ检测结核杆菌的方法，ＰＣＲ扩增靶基因的选择，敏感性和特异性及临床应用情况，并对临床应用中一些问题，如临床标本处理的简化，假阳性结果和假阴性结果的原因及对策进行了讨论。     

聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用吴青平，徐朝斌结核病主要依靠患者临床表现，实验室常规检查以及结核病原菌的培养结果而诊断，采用实验室的一般检查培养方法。结核菌的培养检出时间长，阳性率低，不能及时地为临床提供可靠的诊断依据。本文介绍应用聚合酶链反应（...     

聚合酶链反应在淋巴结结核诊断中的应用

聚合酶链反应在淋巴结结核诊断中的应用梁树旗李江珍李明吾对象７３例颈部包块患者中男２４例，女４９例。年龄３～７９岁。淋巴结结核组３５例。根据病史、临床表现、体征、实验室检查及其他检查结果诊断。包括结核纯蛋白衍生物（ＰＰＤ）皮试阳性、血沉加快、胸片检查发...     

聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌

聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌殷常红，倪语星，王祥兴淋病奈瑟菌（ＮＧ）是性传染疾病的主要病原之一。传统的涂片染色和分离培养法其敏感性和特异性还不能达到临床的要求。本文作者将ＰＣＲ技术用于检测ＮＧ，旨在为临床上诊断淋病提供新的敏感、特异和快速的方法。材料...     

套式聚合酶链反应检测伤寒杆菌DNA及其临床应用

应用套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术，建立了扩增伤寒杆菌鞭毛蛋白基因多变区特异核苷酸序列的方法。对９株沙门氏菌及７株其他临床分离菌进行检测，结果仅伤寒杆菌扩增出３４８ｂｐ特异性片段，以γ－３２ｐＡＴＰ标记的为伤寒杆菌特异的寡核苷酸探针对扩增产物做ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实上述结果可靠。扩增灵敏度为３０ｆｇ伤寒杆菌ＤＮＡ（约１０个菌体）。对６９例发热待查患者的７８份血标本进行检测，其敏感性（１００％）明显高于传统（血，骨髓）培养法（７３％），Ｐ＜０．０１；特异性均为１００％。另外，其检出敏感性不受预先抗菌治疗的影响，整个实验在１０～ｌ２小时内完成。以上表明ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ是一种快速、敏感、特异诊断伤寒的方法。     

伤寒沙门菌耐药基因检测及定位

目的探讨伤寒沙门菌耐药基因的定位。方法３２Ｐ随机引物标记氯霉素耐药基因为探针，以Ｓｌｏｔｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测，同时以氯霉素乙酰转移酶活性（ＣＡＴ）和药敏试验（ＭＩＣ）作为耐药标志。结果１６株伤寒菌中有１４株含９８６０００００大质粒。经杂交，其中７株质粒阳性；１株染色体阳性；３株质粒与染色体均为阳性。质粒杂交带位于４．３ｋｂ片段，染色体为５．２ｋｂ片段。结论伤寒菌耐氯霉素基因大部分位于９８６０００００大质粒上，少数位于染色体上或两者兼有     

Multiplex PCR for the concurrent detection and differentiation of Salmonella spp., Salmonella Typhi and Salmonella Typhimurium

Salmonellosis outbreaks involving typhoid fever and human gastroenteritis are important diseases in tropical countries where hygienic conditions are often not maintained. A rapid and sensitive method to detect Salmonella spp., Salmonella Typhi and Salmonella Typhimurium is needed to improve control and surveillance of typhoid fever and Salmonella gastroenteritis. Our objective was the concurrent detection and differentiation of these food-borne pathogens using a multiplex PCR. We therefore designed and optimized a multiplex PCR using three specific PCR primer pairs for the simultaneous detection of these pathogens. The concentration of each of the primer pairs, magnesium chloride concentration, and primer annealing temperature were optimized before verification of the specificity of the primer pairs. The target genes produced amplicons at 429 bp, 300 bp and 620 bp which were shown to be 100% specific to each target bacterium, Salmonella spp., Salmonella Typhi and Salmonella Typhimurium, respectively.     

2005年新疆77株伤寒沙门菌对抗菌药物的耐药性监测分析

目的 了解伤寒沙门菌对抗菌药物的耐药性.方法 收集伤寒发病地区的菌株,按肠道菌常规方法鉴定,采用琼脂扩散法(K-B法)进行耐药性测定.结果 77株菌对卡那霉素、多粘菌素B、庆大霉素、丁胺卡那霉素、氟哌酸、菌必治、奥氟星、环丙沙星、复达星敏感率均为100%,红霉素耐药率最高(97.40%).仅有2株对21种抗菌药物全部敏感,其余75株菌均有不同程度耐受;3个县伤寒沙门菌抗生素耐受情况不同.结论 新疆是伤寒病的高发区,抗生素耐受情况仍很严重,因此在伤寒防治实践中科学、合理的使用抗菌药物.     

直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌

目的 通过样品试验，得到优化的沙门氏菌检测方法。方法 在单抗直接ELISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上，将PCR法和单抗直接ELISA两种快速检测方法进行比较研究。结果 直接ELISA方法结合PCR方法对城区141份水样、2002年春季饮食行业工作人员健康检查的1426份人粪便样品，并与常规国标方法对比，直接ELISA法的敏感性和特异性达100％和97．2％，PCR法的敏感性和特异性均为100％。通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试，最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。结论 PCR法的敏感性优于直接ELISA法。对大量样品采用直接ELISA筛检，除去大量阴性样品，阳性样品用PCR法作进一步鉴定；需要确定血清型时则用国标方法。     

Vi polysaccharide of Salmonella typhi targets the prohibitin family of molecules in intestinal epithelial cells and suppresses early inflammatory responses

Vi capsular polysaccharide (Vi) was first identified as a virulence antigen of Salmonella typhi, the causative agent of typhoid fever in humans; it renders S. typhi resistant to phagocytosis and the action of serum complement. However, the role of Vi during the infection of intestinal epithelium with S. typhi is not completely understood. We show here that Vi can interact with a model human intestinal epithelial cell line, Caco-2, through a cell-surface-associated molecular complex containing two major proteins of 30 and 35 kDa and a minor protein of approximately 68 kDa. The two major proteins were identified as the putative tumor suppressor molecule, prohibitin, and its closely related homolog, B cell receptor-associated protein 37. These two proteins were enriched in lipid rafts, and Vi readily associated with these membrane microdomains. Engagement of Caco-2 cells with Vi inhibited their ability to produce an inflammatory response upon infection with Vi(-) S. typhi. Consistent with this effect, infection of Caco-2 cells with Vi(+) S. typhi produced less IL-8 compared with Vi(-) S. typhi. Cells treated with Vi showed reduced extracellular signal-regulated kinase phosphorylation in response to infection with Vi(-) S. typhi or stimulation with phorbol 12-myristate 13-acetate, suggesting that the mitogen-activated protein kinase pathway might be a target for Vi-mediated inhibition of inflammatory responses. These findings reveal a crucial role for Vi in the modulation of early inflammatory responses during infection with S. typhi. This kind of a modulation could play a significant role in the establishment of infection by S. typhi.     

巢式PCR技术在输入性疟疾监测中的应用

目的评价巢式PCR技术在高疟区回国人员疟疾监测中的应用价值。方法收集2007-2009年自非洲、东南亚等疟疾流行区回国人员中疟疾现症患者及其他无症状高危人群的滤纸血,采用巢式PCR技术检测疟原虫ssRNA基因,并与血片镜检结果进行比对。结果巢式PCR检测53例血检确诊的疟疾现症患者均为阳性,两法的阳性符合率为100%,其中PCR检出恶性疟、间日疟混合感染6例,高于镜检检出的3例。检测疟疾流行区返回的高危人群157人,镜检阳性3例,阳性率1.91%;巢式PCR阳性5例,阳性率为3.18%;其中,镜检阳性、巢式PCR阴性的1例,镜检阴性、巢式PCR阳性的3例,两种方法的阳性符合率为66.7%,阴性符合率为98.1%,两法检测结果一致的血样占检测血样的97.5%。结论巢式PCR技术对输入性疟疾的监测具有实用价值。     

伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制的探讨

目的了解伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制。方法在巨噬细胞中分别加入caspase3,caspase8,caspase9抑制剂和TNF-α抗体共孵育后加入伤寒沙门菌建立感染模型,于8h后用流式细胞术检测细胞凋亡率,进一步检测伤寒沙门菌作用巨噬细胞8h后caspase3,caspase8,caspase9含量和TNF-α、NO产生量。结果caspase3,caspase8抑制剂和TNF-α抗体均能不同程度抑制伤寒沙门菌诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01);且作用8h后caspase3、caspase8及NO、TNF-α的产生量均高于对照组(P<0.01)。结论伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡可以由NO及TNF-α介导,caspase3和caspase8参与的外源性凋亡途迳。     

PCR法与细菌培养法在急性腹泻患者沙门氏菌检测中的应用比较

目的通过与传统细菌培养法比较,明确聚合酶链反应(PCR)法能否提高沙门氏菌检出率。方法分别应用传统细菌培养法(含生化、血清学鉴定)及普通PCR方法,对300例急性腹泻患者粪标本进行检测,将两种方法检测的阳性率进行比较。结果300例急性腹泻患者粪标本,传统法分离培养出沙门氏菌29例,阳性率9.67%;普通PCR检测沙门氏菌高侵袭性位点A(hyperinvasive locus A,hilA)阳性65例,阳性率为21.67%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。其中传统法分离培养阳性的标本,PCR检测均为阳性。PCR法扩增阳性的65例粪标本hilA基因测序结果与基因库标准菌株序列一致率为100%。结论与传统细菌培养生化法相比,PCR法可提高腹泻患者沙门氏菌的检出率,缩短检出时间,适于临床快速诊断。     

Evaluation of staining techniques, antigen detection and nested PCR for the diagnosis of cryptosporidiosis in HIV seropositive and seronegative patients

The study was designed to determine the efficacy of modified Ziehl-Neelsen (ZN), safranine methylene blue (SM) staining, antigen detection ELISA and a nested PCR assay (specific for Cryptosporidium parvum) for detection of Cryptosporidium in HIV seropositive and seronegative patients with diarrhoea. Cryptosporidium was detected in 10 (4.9%), 9 (4.4%), 39 (18.9%) and 27 (13.1%) of 206 HIV seropositive and 7 (4.6%), 6 (3.9%), 21 (13.7%) and 17 (11.1%) of 153 HIV seronegative patients by ZN staining, SM staining, antigen detection ELISA and PCR, respectively. None of the 50 apparently healthy control subjects was found to be infected with Cryptosporidium by any of the techniques. Based on the criteria of 'true positive' samples positive by at least any two techniques out of ZN staining, antigen detection and PCR, sensitivity of ZN and SM staining techniques was 37% and 33.3% in HIV seropositive and 41.2% and 35.3% in seronegative patients, respectively. Sensitivity of antigen detection ELISA was 92.6% and 94.1% in HIV seropositive and seronegative patients, respectively, while sensitivity of PCR was 100% each in HIV seropositive and seronegative patients. Specificity of all three techniques, i.e. ZN, SM staining and PCR was 100% in both HIV seropositive and seronegative patients while specificity of antigen detection was 92.2% and 96.3% in HIV seropositive and seronegative patients, respectively. The staining techniques were found less sensitive as compared to antigen detection and PCR for detection of Cryptosporidium in HIV seropositive patients with CD4 count >200cells/microl.     

伤寒杆菌致感染性腹主动脉瘤合并腹腔脓肿1例

[摘要]　伤寒杆菌感染所致的感染性动脉瘤是一种罕见且病死率较高的疾病,是沙门菌感染肠外并发症中最严重的疾病,常发生在高龄或者免疫力低下患者,患者多表现为发热或者相应位置的疼痛,但初期表现一般不典型,临床容易漏诊、误诊。伤寒杆菌所致的感染性动脉瘤治疗须手术及抗感染治疗同步进行,如抗感染治疗不充分则容易造成术后感染复发,导致病情加重、局部形成化脓性病灶。本文汇报1例表现为发热、腹痛的伤寒杆菌所致的感染性腹主动脉瘤,予以抗感染及腹主动脉瘤覆膜支架腔内修复术,但患者术后仍有反复发热。血培养结果为伤寒杆菌,根据药物敏感性试验结果调整抗感染治疗方案,但疗效欠佳,予以全麻下行剖腹探查,手术中发现腹腔脓肿,予以切开引流。术后患者一般情况可,未再腹痛和发热。