肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达与分布

目的　观察肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达和分布。　方法　免疫组织化学ABC法显示大鼠脊髓和背根神经节中PTEN阳性免疫反应产物。　结果　背根节神经元及穿越背根节神经纤维轴突有阳性免疫反应产物存在 ;PTEN阳性免疫反应产物在脊髓主要位于灰质神经元。　结论　PTEN在成年大鼠腰段脊髓和背根节神经元及神经纤维轴突中表达。     

CNTF及其受体在大鼠脊髓组织中的表达

CNTF具有广泛的神经营养活性 ,可能在神经发育与再生修复中发挥重要作用。有关 CNTF在大鼠脊髓组织中的表达尚不清楚 ,我们在制备抗人 CNTF多克隆抗体的基础上 ,利用免疫组化及原位杂交的方法系统的研究了成年大鼠脊髓组织 CNTF与受体 CNTFRα的分布与细胞定位。免疫组化结果显示 :CNTF免疫反应物质存在于脊髓灰质各层神经元中 ,包括运动神经元、中间灰质神经元及部分背角小细胞 ,尤其腹角运动神经元染色明显。胞浆胞核均有染色 ,胞核染色更深 ,无核仁染色 ,灰白质中有散在胶质细胞染色。原位杂交结果表明 ,CNTF m RNA的分布与…     

Nogo(N-18)在成年大鼠三叉神经节、背根节及腰段脊髓中分布的免疫组织化学研究

目的：观察Nogo在成年大鼠三叉神经节、背根节及腰段脊髓中的分布，探讨其存在的意义。方法：采用抗Nogo(N-18)多克隆抗体免疫组织化学SP法。结果：成年大鼠三叉神经节、背根节感觉神经元胞浆和胞核以及腰段脊髓灰质神经元胞核内出现Nogo免疫反应。结论：Nogo免疫反应存在于大鼠三叉神经节、背根节感觉神经元胞浆和胞核以及腰段脊髓灰质神经元胞核内，应重新认识Nogo的功能。     

突触后密度蛋白-95在大鼠脊髓发育过程中的表达变化

目的:探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在大鼠脊髓发育过程中的表达变化以及细胞定位。方法:采用实时定量PCR(Real-Time PCR)和Western blot测定发育不同时期PSD-95 mRNA及蛋白水平的表达变化。采用免疫荧光染色显示PSD-95在发育脊髓中的细胞定位。结果:大鼠脊髓发育过程中PSD-95 mRNA及其蛋白水平从生后1d开始逐渐升高,在生后1周达高锋,成年后维持在一定的生理水平。免疫荧光双标证实PSD-95在生后发育早期主要定位于脊髓灰质,与神经元的标记物NeuN和突触的标记物synapsin存在共定位;成年后广泛分布于脊髓前角、后角以及白质,分别与NeuN和synapsin以及小胶质细胞的标记物OX-42共定位。结论:大鼠脊髓发育过程中PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,在生后发育早期主要表达在前角运动神经元和后角感觉神经元,提示PSD-95参与了神经元的发育和成熟。     

龟龄集对大鼠脊髓灰质内突触小泡蛋白变化的影响

目的：研究龟龄集对大鼠脊髓灰质内突触小泡蛋白的影响，探索龟龄集的抗衰老功效。方法：采用免疫组织化学结合图像分析法，对龟龄集喂药鼠和对照鼠的脊髓颈膨大、胸髓、腰膨大和骶尾髓灰质内突触小泡蛋白的免疫反应产物进行了观测。结果：对照和喂药鼠各自的脊髓各段后角内突触小泡蛋白免疫反应产物的灰度值不同，均以脊髓胸段最小，腰膨大最大；脊髓后角内免疫反应产物的灰度值均低于前角。对照组脊髓各段后角内突触小泡蛋白免疫反应产物的灰度值均明显高于喂药组。结论：龟龄集可延缓神经元的衰老，防止脊髓灰质内突触小泡蛋白的丢失，增强动物肢体感觉的灵敏性和活动的灵活性。     

大鼠脊髓半横断损伤后Versican及其受体CD44的表达变化

目的探讨大鼠脊髓半横断(hemisected spinal cord injury,hSCI)损伤后14d硫酸软骨素蛋白多糖Versi-can及其受体CD44的表达变化。方法10只成年SD大鼠随机分为正常对照组和术后14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9~T10)模型。14d后取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican、CD44抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数脊髓腹角和Ⅰ、Ⅱ板层内Versican、CD44的免疫反应阳性细胞数。结果Ver-sican主要分布于正常大鼠脊髓腹角,CD44主要分布于正常大鼠脊髓Ⅰ、Ⅱ板层和腹角。损伤后14d腹角Versican阳性细胞数较正常组明显下降(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ板层和腹角的CD44阳性细胞数也较正常组明显下降(P<0.05)。而手术组损伤侧与未损伤侧Versican和CD44表达水平均无明显差异(P>0.05)。结论大鼠脊髓半横断损伤14d后Versican、CD44表达均明显下降,提示脊髓半横断损伤对脊髓灰质内细胞表达Versican、CD44有影响。     

Nogo(N-18)在正常大鼠脊髓和坐骨神经的分布及损伤后变化的免疫组织化学研究

目的　研究Nogo蛋白在大鼠脊髓的正常分布及损伤后的变化 ,探索其在脊髓运动神经元表达的意义和作用。　方法　大鼠分脊髓夹伤组、坐骨神经夹伤组及正常对照组。损伤动物存活 1d和 3d后 ,分别进行Nogo(N 18)抗体的免疫组织化学染色。　结果　正常大鼠脊髓灰质腹角的运动神经元出现强烈的Nogo(N 18)免疫反应 ;而在脊髓白质呈阴性反应 ;寡突胶质细胞呈明显的阳性反应 ;在脊髓全段未发现Nogo染色的星形胶质细胞。在脊髓夹伤区域以外的上下部分 ,灰质和白质对Nogo(N 18)的表达与对照组的脊髓相同 ,在损伤部位的白质 ,出现明显的Nogo(N 18)免疫反应物。在正常和损伤的大鼠坐骨神经均未发现阳性反应的施万细胞。　结论　Nogo蛋白在正常大鼠脊髓运动神经元的分布和在损伤部位的积聚 ,提示人们要重新认识Nogo的功能     

用BrdU标记技术观察大鼠脊髓上胸段灰质细胞的分化发育

目的 观察脊髓灰质细胞的分化发育,寻找脊髓移植时胎鼠脊髓取材的最佳时间。方法 用５－溴－２脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）标记ＤＮＡ,ＡＢＣ免疫细胞化学方法观察大鼠上胸段脊髓灰质细胞的增殖分化情况。结果 孕鼠于Ｅ１０ｄｅ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎刀脊髓上胸段ＢｒｄＵ免疫反应神经元主要集中在脊髓后角,脊髓侧角的ＢｒｄＵ免疫反应神经元较少,前角仅有少量的ＢｒｄＵ免疫反应神经元;孕鼠于Ｅ１１ｄ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎鼠脊髓     

脑红蛋白在成年西门塔尔牛几种主要器官组织中的分布

目的探寻脑红蛋白(NGB)在成年西门塔尔牛不同组织细胞的分布特征。方法选择健康成年西门塔尔牛5只,利用免疫组织化学染色SP法观察NGB在其不同组织细胞的分布特征。结果结果显示,NGB在成年西门塔尔牛大脑和小脑皮质部、嗅球,海马,脊髓、肾上腺皮质部与髓质部、垂体、松果体、胰、睾丸、附睾、卵巢、子宫、胃、肠、肝、颌下腺、腮腺、心肌、脾脏、肺脏和肾脏等组织细胞中均有表达,NGB免疫阳性物质主要定位于细胞质。此外,本研究发现NGB在西门塔尔牛十二指肠段小肠腺细胞的表达强度要高于十二指肠腺细胞。结论NGB在成年西门塔尔牛多种器官组织细胞中的广泛分布,提示NGB不仅在氧的利用及功能活动中发挥作用,在其它生理活动中可能也担负着重要的功能。     

垂体同源盒家族因子3基因在大鼠脊髓发育和生存维持过程中的表达变化

目的:探讨垂体同源盒家族因子3(Pitx3)基因在SD大鼠脊髓不同年龄阶段的表达变化以及细胞定位。方法:采用半定量RT-PCR和Western Blot检测不同年龄组大鼠脊髓中Pitx3 mRNA及蛋白水平表达变化;采用免疫荧光和免疫组化染色显示Pitx3在脊髓中的细胞定位。结果:(1)RT-PCR和Western Blot检测显示Pitx3基因在各年龄组脊髓各段均有表达;大鼠脊髓发育过程中Pitx3 mRNA及其蛋白水平出生前逐渐升高,在出生后(P0 d)达高锋,以后维持在一定的生理水平,且出生以后随年龄的增长表达呈下调趋势;(2)免疫荧光双标证实Pitx3蛋白在P0 d大鼠脊髓主要定位于脊髓灰质,与神经元的标记物NeuN存在共定位;免疫组化检测显示Pitx3蛋白集中分布于各年龄组脊髓灰质腹角运动神经元胞质中,少量分布于背角和侧角神经元胞质中。结论:在大鼠脊髓发育和生存维持过程中,Pitx3在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化;提示Pitx3基因的表达在脊髓腹角运动神经元的发育和生存维持中可能发挥一定的调控作用。     

信号转导子与转录激活子3和细胞因子信号转导抑制因子-3蛋白在成年大鼠脊髓内的表达与定位

目的分析JAK-STAT信号转导途径重要成员STAT3蛋白和该途径抑制蛋白SOCS-3在大鼠脊髓内的表达和细胞内定位分布。方法免疫细胞化学技术和形态计量学方法。结果STAT3免疫阳性产物主要分布于脊髓前角运动神经元的胞浆内；SOCS-3免疫阳性产物广泛分布于脊髓前角及后角神经元内、部分胶质细胞及神经纤维内。在前角运动神经元内，SOCS-3免疫阳性产物主要分布于核内，有时也可分布于胞浆中。结论STAT3和SOCS-3广泛表达于正常大鼠脊髓内，其中SOCS-3具有核蛋白或胞浆蛋白两种存在形式。     

蛋白激酶Cγ在成年大鼠延髓和脊髓白质中的分布

目的 观察蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)在成年大鼠延髓和脊髓白质内的分布.方法 免疫组织化学ABC法显示PKCγ免疫阳性物质在延髓和脊髓颈、胸、腰、骶段白质内的表达和分布.结果 PKCγ免疫阳性物质分布于锥体、锥体交叉及脊髓颈、胸、腰、骶段后索腹侧中;延髓和脊髓背角神经元中也有PKCγ免疫阳性物质存在.结论 PKCγ免疫阳性反应产物广泛分布于成年大鼠延髓和脊髓白质内的皮质脊髓束中.PKCγ免疫阳性反应产物在延髓锥体和脊髓后索内的定位与大鼠皮质脊髓束的位置和走行一致,提示其在运动神经传导通路中可能起着重要作用.     

大鼠腰髓背角星形胶质细胞及神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及其相互关系

目的 研究大鼠脊髓内星形胶质细胞及神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及相互关系。方法 应用细胞免疫组织化学方法，观察脊髓内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、Fos蛋白双标记以及蛋白激酶C(PKC)在左侧胫、腓骨骨折后不同时程的表达变化。结果 1．左侧胫、腓骨骨折后，GFAP阳性反应产物主要分布于同侧腰髓背角的星形胶质细胞胞浆，Fos阳性产物在其胞核也有表达，且以浅层为主，神经元的胞核也有Fos阳性产物；2．Fos—LI神经元与GFAP／Fos-LI星形胶质细胞的分布基本一致，两者关系密切；3．GFAP／Fos—LI星形胶质细胞表达高峰期在骨折后45min，而Fos—LI神经元的表达高峰期在骨折后90min；PKC—LI星形胶质细胞出现及达到高峰的时间比PKC—LI神经元要早。结论 腰髓背角的星形胶质细胞参与了下肢骨折伤害性刺激的应激反应及调节过程，而且Fos—LI、PKC-LI的表达早于神经元，可能主动地影响神经元的活动。     

大白鼠脊髓向延髓外侧网状核投射的体部定位——HRP顺行法研究

向大白鼠脊髓的颈、腰膨大和胸髓右侧半分别注入HRP或WGA—HRP,研究了脊髓向延髓外侧网状核的投射。 1.双侧的三叉神经下亚核同时接受颈、胸和腰髓来的投射。 2.大白鼠脊髓主要投射于外侧网状核的尾侧半,有一定的体部定位关系。颈髓投射于双侧大细胞亚核的外侧2/3及与共相邻接的一部分小细胞亚核内,以同侧投射为主。胸髓投射于双侧的大细胞亚核的内侧2/3和与之相邻接的一部分小细胞亚核内,两侧无明显差別。腰髓投射于双侧小细胞亚核和与之相邻接的部分大细胞亚核内,以对侧投射为主。它们相互间有部分重叠。 3.颈、胸和腰髓内外侧网状核投射的神经元位于从背角至腹角的灰质内,越边投射的神经元比不越边投射的神经元位置更靠腹侧。     

大鼠发育过程中脊髓组织CAPON与Dexras1 mRNA表达的实验研究

为探讨大鼠发育过程中神经型一氧化氮合酶羧基末端PSD-95/DLG/ZO-1(PDZ)结合配体(carboxy-terminal PDZ ligandof nNOS,CAPON)与Dexras1 mRNA的表达及二者的相关性,本实验采用大鼠发育模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime-PCR)及原位杂交组织化学(ISH)与免疫组织化学相结合的技术检测脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA的表达变化。结果表明:在胚胎14~18d的脊髓组织中,CAPON mRNA呈低水平表达,生后1d表达升高并达到高峰。从形态上看,表达于尚未分化成熟的前角,随后呈逐渐下降趋势。在生后12w,表达于脊髓后角。而Dexras1 mRNA在胚胎14d呈低水平表达,16~18d时表达升高,同样在生后1d出现表达高峰并定位于尚未分化成熟的前角,随后表达逐渐下降。生后12w,在后角有表达。根据Real-time PCR结果作直线相关分析,在生后脊髓发育过程中CAPON与Dexras1 mRNA表达呈高度相关,于生后1d共定位于脊髓前角。形态学结果显示CAPON与神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达于相同细胞,但亚细胞定位不同。本研究表明,大鼠发育过程中,脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA存在共表达,提示CAPON可能通过调节nNOS,进而激活Dexras1,在神经元的分化、突触的可塑性及突触发生过程中发挥一定的作用。     

大鼠脊髓钙调蛋白Parvalbumin和Calbindin-28 KD阳性神经元的形态与分布特征

目的观察证实钙调蛋白Parvalbumin（PV）和Calbindin-28KD（CB）阳性神经元在大鼠脊髓不同节段不同区域内的形态及分布特征。方法成年雄性SD大鼠常规灌注固定,取第5～8颈髓、3～6胸髓和1～5腰髓节段;振动切片之后进行免疫组化PAP单标记;光镜观察阳性神经元的形态和分布特征、并进行计数和测量;用Excel软件对阳性神经元数量、胞体大小、突起数量进行统计处理。结果PV阳性神经元主要存在于后角的Ⅱ层和胸核、中间带外侧、中间内侧核、前角的Ⅷ层;CB阳性神经元主要存在于后角Ⅰ～Ⅱ层、中间带,前角的Ⅷ～Ⅸ层之间。后角细胞较中间带及前角细胞数量多,胞体小,突起少。在不同区域,两种阳性神经元的细胞数量,胞体大小,突起数目都存在统计学差异（P﹤0.05）;而在不同节段同一区域的比较中,只有腰前角PV阳性神经元的胞体比较大（P﹤0.05）。结论PV阳性神经元在胸核及中间内侧核的聚集以及阳性纤维在薄楔束和后角Ⅱ层胶状质内的密集分布提示其与机体痛觉传入﹑本体感觉及内脏感觉的联系;CB阳性神经元在前角Ⅷ～Ⅸ层之间的特征性分布说明其与闰绍细胞功能有关;两种钙调蛋白在脊髓不同节段之间的形态及分布基本无差别提示它们的功能并没有特异地对应于躯体或内脏。     

脑红蛋白mRNA在大鼠脑内的定位

目的：了解脑红蛋白（NGB）mRNA在大鼠脑内的定位。方法：用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术观察了NGBmRNA在成年大鼠脑中 的正常分布。结果：NGBmRNA在成年大鼠脑中有非常广泛的表达，其分布区域包括大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、嗅球及小脑等。NGBmRNA阳性物质定位于神经元的细胞质。结论：NGBmRNA在大鼠脑中有非常广泛的表达，提示NGB基因在中枢神经系统的功能活动中可能起重要作用。     

利用GAD67-GFP基因敲入方法显示小鼠脊髓内表达GFP的GABA能神经元的分布(英文)

γ-氨基丁酸 (GABA)是脊髓背角、前角内主要的抑制性神经递质。为了更好地观察脊髓背角内 GABA能神经元的形态和功能 ,本研究使用了两种谷氨酸脱羧酶 67-绿色荧光蛋白 (GAD67-GFP)基因敲入小鼠 ,并观察了敲入小鼠脊髓内的 GFP表达状况。用免疫荧光组织化学双标记方法显示脊髓内所有的 GF P阳性神经元基本上都呈 GAD67和 GABA阳性 ;GFP阳性神经元在脊髓背角的 ～ 层最为密集 ,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布 ,而在脊髓背角其它部位及前角则呈散在分布。脊髓内 GFP阳性神经元的分布与 GABA能神经元的分布一致。本文作者等还进一步在 GAD67-GFP敲入小鼠中观察了 GFP和神经元标志物神经元核蛋白 (Neu N )的共存状况。脊髓背角内 GFP阳性神经元分别占 、 和 层的 Neu N阳性神经元的 3 1.5 %、3 3 .3 %和 44 .7% ,与以往的 GABA免疫组化研究结果基本一致。本研究表明 GAD67-GFP基因敲入小鼠脊髓内的 GFP在GAD67启动子的调节下正确地表达于 GABA能神经元 ,该基因敲入小鼠可用于脊髓 GABA能神经元的形态学特征和生理学特性及其发育规律等方面的研究