新型粘膜免疫佐剂候选株LTAˉB+的构建

目的 :产肠毒素大肠杆菌产生的不耐热肠毒素 (LT)不仅是很强的口服免疫原 ,而且其粘膜免疫佐剂作用显著。LT的毒性限制了它的直接使用 ,希望通过体外定点诱变技术 ,获得具有粘膜免疫佐剂作用的LT减毒株。方法 :以人源LT基因为研究对象 ,首先构建了重组质粒 pUC19 LT ,然后用单引物PCR法和重叠延伸PCR法分别构建了LTQ7和K63基因突变体。结果 :CHO细胞体外试验和家兔肠结扎体内试验毒性测定的结果表明 ,LT突变体K63的毒性明显降低。结论 :K63有希望成为候选的高效粘膜免疫佐剂。     

表达大肠杆菌LT—B／pro—ST融合抗原的减毒鼠伤寒沙门？…

目的：构建表达ＬＴ－Ｂ／ＳＴ融合蛋白的产肠毒素大肠杆菌口服活菌疫苗候选要。方法：编码ＬＴ＿Ｂ／ＳＴ融合蛋白的基因插入ｐＹＡ２４８载体中,构建了重组质粒ｐＸＺＬ６６。该重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌ＳＲ－１１,ΔＣｙａ,ΔＣｒｐ,ΔＡｓｄ菌株Ｘ４０７２。结果：此无抗药性的杂合菌株Ｘ４０７２（ＰＸ－ＺＬ６６）表达的ＬＴ－Ｂ／ＳＴ融合蛋白具有耐热及不耐热肠毒素的免疫原性而没有可检出的生物毒性。结论：为研究     

三基因PCR检测产毒性大肠杆菌

产毒性大肠杆菌（ＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓ－ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ＥＴＥＣ）产生的毒素分为不耐热肠毒素（ＬＴ）和耐热肠毒素（ＳＴ）［１］，根据其来源不同，耐热肠毒素又可分为猪源性（ＳＴｐ）和人源性（ＳＴｈ），它们分别由位于质粒上的三种毒力基因编码，产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）一般含有三个毒力基因中的一个或几个基因。目前，用于检测产毒性大肠杆菌的ＰＣＲ方法，一般是单基因ＰＣＲ，每次扩增只能检测一种毒力基因，虽然具有较高的特异性和敏感性，但往往产生漏检，也未能充分体现ＰＣＲ高时效的特点，…     

不同海拔地区高原红细胞增多症患者红细胞免疫功能测定

目的：对刚察（海拔３３００ｍ）和甘德（海拔４０８０ｍ）两地的８１例高原红细胞增多症（ＨＡＰＣ）患者和８８例健康人进行红细胞免疫功能观察。方法：采用郭峰红细胞花环法：ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲ,ＲＢＣ－ＩＣＲ试验。结果：两海拔地区的ＨＡＰＣ患者的ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲ均低于当地健康人（Ｐ〈０．００１）。结论：认为可能是低氧低氧压导致红细胞粘附功能下降、清除免疫复合物的能力也下降所致,因此研究ＨＡＰＣ患者红细胞免疫功     

表达大肠杆菌 LT-B/pro-ST融合抗原的减毒鼠伤寒沙门菌株的构建

目的：构建表达 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白的产肠毒素大肠杆菌口服活菌疫苗候选株。方法：编码 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白的基因插入ｐ Ｙ Ａ２４８ 载体中,构建了重组质粒 ｐ Ｘ Ｚ Ｌ６６。该重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌 Ｓ Ｒ１１,Δ Ｃｙａ, Δ Ｃｒｐ, Δ Ａｓｄ 菌株 Ｘ４０７２。结果：此无抗药性的杂合菌株 Ｘ４０７２（ｐ Ｘ Ｚ Ｌ６６） 表达的 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白具有耐热及不耐热肠毒素的免疫原性而没有可检出的生物毒性。结论：为研究预防产肠毒素大肠杆菌腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。     

表达毒素源性大肠杆菌LT－B抗原的重组鼠伤寒沙门菌株免疫原性的研究

探讨了能稳定表达毒素源性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）热敏肠毒素Ｂ亚基（ＬＴ－Ｂ）的重组鼠伤寒沙门菌株的安全性、免疫原性及其免疫保护力。用重组菌株活菌肌注免疫家兔，动物体内产生明显的抗鼠伤寒沙门菌抗体和抗ＬＴ－ＢｌｇＧ抗体。口服免疫小鼠，免疫后小鼠血清和肠液中均能测到抗ＬＴ－Ｂ抗体。兔肠结扎实验证明，重组菌株在达的ＬＴ－Ｂ没有ＬＴ的生物毒性。在小鼠安全性试验中，口服１６ｘ１０￣（１０）活菌３０ｄ后，小鼠存活率为１００％。免疫后的家兔肠结扎攻毒试验和小鼠攻毒试验结果表明，免疫后的动物对野生毒性人源ＥＴＥＣ、猪源ＥＴＥＣ、霍乱弧菌和鼠伤寒沙门菌的攻击均有一定的保护力．     

蛋白激酶C在肢体缺血预处置中的作用

目的：探讨缺血预处置（ＰＣ）减轻骨骼肌组织缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤的作用机制．方法：采用大鼠后肢原位灌流方法观察ＰＣ和ＰＣ加用蛋白激酶Ｃ抑制剂ｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢ或Ｈ７对Ｉ／Ｒ的影响．实验动物分为５组：Ｉ／Ｒ组，ＰＣ组，ＰＣ＋ＰＢ组，ＰＣ＋Ｈ７组，对照组．比较各组灌流液中和肌组织中的损伤性指标变化．结果：ＰＣ可以明显减轻肢体的Ｉ／Ｒ损伤，使用ｐｏｌｙｍｙｘｉｎＢ或Ｈ７则阻断ＰＣ对Ｉ／Ｒ骨骼肌细胞内酶漏出、丙二醛产生及钙超载等损伤性指标的改善作用．结论：ＰＣ对Ｉ／Ｒ肢体具有保护作用，其保护机制与蛋白激酶Ｃ的激活有关     

稳定,高效表达血小板生成素的真核细胞株的构建

目的：血小板生成素（ＴＰＯ）在治疗血小板减少症方面具有潜在的应用前景，为构建体外稳定表达ＴＰＯ的真核细胞株，进行了ＴＰＯ的稳定表达研究。方法：采用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从水囊引产的胎儿肝组织中得到ＴＰＯ ｃＤＮＡ并进行表达。结果：经过序列分析证明获得了没有错义突变的ＴＰＯ全长ｃＤＮＡ（约１ｋｂ）。在此基础上构建的ＴＰＯ的真核表达质粒在ＣＯＳ－７细胞中瞬时表达的产物能够维持并刺激ＴＰＯ     

五例急性放射病病人红细胞CR1数量基因表达及活性随访实验研究

目的研究中、重度骨髓型急性放射病病人红细胞免疫功能变化规律。方法用ＰＣＲ法研究红细胞ＣＲ１数量基因的变化，用红细胞Ｃ３ｂ受体花环试验研究红细胞ＣＲ１活性变化。结果５例放射病病人的红细胞ＣＲ１数量基因无变化，而红细胞ＣＲ１活性明显低于正常值。在事故发生后４．５年红细胞ＣＲ１活性才恢复正常。结论结果说明放射病病人红细胞ＣＲ１活性的变化是长期的     

五例急性放射病病人红细胞CR1数量基因表达及活性随访实 …

研究中、重度骨髓型急性放射病病人红细胞免疫功能变化规律。方法 用ＰＣＲ法研究红细胞ＣＲ１数量基因的变化，用红细胞Ｃ３ｂ受体花环试验研究红细胞ＣＲ１活性变化。要５例放射病病人的红细胞ＣＲ１数量基因无变化，而红细胞ＣＲ１活性明显低于正常值。在事故发生后４．５年红细胞ＣＲ１活性才恢复正常。结论 结果说明放射病病人红细胞ＣＲ１活性的变化是长期的。     

B16细胞中FLT3表达的检测及FLT3—Ligand对B16细胞生长的？…

目的;检测造血生长因子受体ＦＬＴ３在非造血来源的黑素瘤细胞系Ｂ１６中的表达,并研究其配基ＦＬＴ３－Ｌｉｇａｎｄ（ＦＬ）对ＧＬ１６细胞的作用。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂ１６细胞中ＦＬＴ３ｍＲＮＡ的表达,流式细胞仪检测ＬＦＴ３蛋白在Ｂ１６细胞表面的表达,在培养液中加入不同浓度的ＦＬＴ对Ｂ１６细胞进行培养。结果：ＦＬＴ３在Ｂ１６细胞中有ｍＲＮＡ的表达,在Ｂ１６细胞表面有蛋白质的表达。     

输血传播病毒(TTV)感染的肝病患者36例分析

目的：观察ＴＴＶ（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）阳性肝病患者的临床特征。方法：用巢式ＰＣＲ法检测血清ＴＴＶ ＤＮＡ,同时观察血清生化指标和肝组织学的变化。结果：ＴＴＶ感染者的血清学模式以ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＡＶ、ＨＥＶ混合感染为主,占６１．１％（２２／３６）,临床表现以乏力、纳关为特征,ＴＢＬ、ＡＬＴ变化不明显;而ＴＴＶ单独感染者为３８．９％（１４／３６）,临床特     

受电离辐射的细胞中p53介导增殖细胞核抗原表达的调控

增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）是一种高度保守的细胞蛋白,在ＤＮＡ复制和修复中起作用。本实验用γ射线照射大鼠胚胎成纤维细胞（ＣＲＥＦ）诱导ｐ５３,研究照射后ＰＣＮＡ表达的机制。方法：实验用ｐＢＡＣＡＴ（其ＰＣＮＡ－氯霉素转移酶报告基因区域内含有人ＰＣＮＡ启动子序列）和ｐＣＭＶ－ＤＭｐ５３（表达突变型ｐ５３蛋白）两种质粒,照前２４小时用磷酸钙介导法将报告质粒转染细胞,６小时后实行甘油休克;转染２４小时后用１３７　Ｃｓγ射线照射ＣＲＥＦ１２Ｇｙ,剂量率为１．２５Ｇｙ·ｍｉｎ－１。照后在４８小时内进行细胞瞬…     

B16细胞中FLT3表达的检测及FLT3-Ligand对B16细胞生长的抑制作用

目的：检测造血生长因子受体ＦＬＴ３ 在非造血来源的黑素瘤细胞系Ｂ１６ 中的表达,并研究其配基ＦＬＴ３－Ｌｉｇａｎｄ（ＦＬ）对Ｂ１６ 细胞的作用。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂ１６ 细胞中ＦＬＴ３ ｍ ＲＮＡ的表达,流式细胞仪检测ＦＬＴ３ 蛋白在Ｂ１６ 细胞表面的表达,在培养液中加入不同浓度的ＦＬ对Ｂ１６ 细胞进行培养。结果：ＦＬＴ３ 在Ｂ１６ 细胞中有ｍ ＲＮＡ 的表达,在Ｂ１６ 细胞表面有蛋白质的表达。ＦＬ对Ｂ１６ 细胞的生长有抑制作用,并且这种抑制作用是浓度依赖性的,在一定的浓度范围内随着ＦＬ浓度的增高而增强。结论：ＦＬＴ３ 的分布不仅仅局限于小鼠的造血系统和神经系统,也表达于上皮性的肿瘤细胞Ｂ１６ 中,并在其配基ＦＬ的作用下抑制Ｂ１６ 细胞的生长。     

将抗体库所获抗HBs Fab转换为全长人IgG

目的：将大肠杆菌表达的抗乙肝表面抗原（ＨＢｓ）人Ｆａｂ转换为真核表达的全长人ＩｇＧ１。方法：用重叠ＰＣＲ法将人工合成的人Ｖｋ前导序列拼接到抗ＨＢｓ的ＶＨ和Ｖｋ上,构建人ＩｇＧ１真核表达载体,转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测抗ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结果：用轻链和重链同时表达的单一莲体在ＣＨＯ细胞中获得了抗ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结论：通过噬菌体抗体库所获Ｆａｂ段可通过拼接人Ｖｌ     

甲肝患者血清SIL－2R及其与T淋巴细胞表面标志的关系

应用双单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ法对甲肝患者５２例血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平做了动态观察，同时以ＣＤ系列单克隆抗体ＡＰＡＡＰ法对以上患者外周血Ｔ淋巴细胞表面ＩＬ－２Ｒ（ｍＩＬ－２Ｒ）及Ｔ细胞亚群进行了动态监测，并对其相互关系及其与肝细胞损伤标志ＡＬＴ做了相关分析。发现ｓＩＬ－２Ｒ及ｍＩＬ－２Ｒ在甲肝急性期均显著增高，恢复期则基本恢复正常；两者在急性期、恢复期均存在非常显著的正相关；两者与ＡＬＴ亦显著相关。同时发现甲肝急性期外周血Ｔ淋巴细胞ＣＤ￣＋＿４率显著降低，ＣＤ￣＋＿８率则明显增高，致ＣＤ￣＋＿４／ＣＤ￣＋＿８比值明显下降且倒置；在恢复期以上改变均恢复正常。还发现ＣＤ￣＋＿８率与ｓＩＬ－２Ｒ、ｍＩＬ－２Ｒ及ＡＬＴ之间均存在着程度不同的正相关。此结果在一定程度上提示细胞免疫可能参与了甲肝的发病机制。     

人转化生长因子β1基因非翻译区的改造及其全长序列测定

通过ＰＣＲ和体外重组技术对ＴＧＦβ１基因５＇和３＇非翻译区进行了改造，在此基础上，通过构建缺失突变体，采用双脱氧终止法，利用ｐＵＣ／Ｍ１３系统测定了人ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ的全长序列。这为今后研究不同长度非翻译区对ＴＧＦβｃＤＮＡ表达水平的影响并实施其高效表达奠定了基础。     

检测人巨细胞病毒的套式PCR法及在妇产科的临床应用

报告了检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，及其在妇产科临床应用的结果。改进了从临床样品中提取ＤＮＡ的方法，优化了套式ＰＣＲ的条件。测得套式ＰＣＲ的扩增倍数为２．９×１０￣９，套式ＰＣＫ／电泳法的灵敏度为４０个ＨＣＭＶ基因组拷贝。临床应用结果表明，孕妇的ＨＣＭＶ感染率很高，母婴间存在ＨＣＭＶ感染的垂直传播关系。胎盘是传播的主要途径，胎盘的屏障功能随妊娠时间的延长而减弱。宫颈分泌物的感染也是母婴间ＨＣＭＶ感染传播的感染源。ＨＣＭＶ感染对胎儿发育的影响，应引起优生优育工作者们的重视。     

我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA体外RNA转录物感染性的研究

目的：研究我国登革２型病毒４３株（Ｄ２－４３）基因组全长ｃＤＮＡ体外ＲＮＡ转录物的感染性,为进一步阐明登革２型病毒的致病机制及探索其新型疫苗奠定基础。方法：用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶系统制备Ｄ２－４３基因组全长ｃＤＮＡ的体外ＲＮＡ转录物,纯化后经电穿孔法转染Ｃ６／３６细胞,观察致细胞病变作用以判断其感染性。从病变的细胞和培养上清中提取总ＲＮＡ,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为ＲＮＡ转录物感染所致;同时收集可产生细胞病变的培养上清,再感染Ｃ６／３６细胞以进一步证实该体外ＲＮＡ转录物感染的稳定性。结果：以我国Ｄ２－４３病毒株基因组全长ｃＤＮＡ为模板制备的体外ＲＮＡ转录物可使Ｃ６／３６细胞产生病变,从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段。在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用。结论：构     

颈内—后交通小动脉瘤的3D PC MRA评价

评价三维相位对比法磁共振血管成像（３Ｄ ＰＣ ＭＲＡ）显示颈内－后交通小动脉瘤的能力。材料和方法，对８例疑颅内血管性病变患者在ＧＥ Ｖｅｃｔｒａ０．５Ｔ超导系统上进行３Ｄ ＰＣ ＭＲＡ检查，并与ＣＡＧ／ＤＳＡ结果对照，以矢状在ＳＥＴ１ＷＩ为定位像，采用最短ＴＥ、３０－４０ｃｍ／ｓ的编码流速等参数运用３ＤＰＣ法，采集范围包括颈内动脉虹吸部和Ｗｉｌｌｉｓ图像进行分析。结果：经ＣＡＧ／ＤＳＡ证实右侧颈内