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NGAL蛋白Ni2+-金属鏊合层析纯化及其鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
背景与目的:通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 -金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定,最后获得一定丰度与纯度的NGAL蛋白.材料与方法:将pDsbA2.0-NGAL融合表达载体转化大肠杆菌,进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物的产量与可溶性,然后将表达产物进行Ni2 -金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定.结果:将pDs-bA2.0-NGAL融合表达载体进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示表达的NGAL融合蛋白产量高、可溶性好;对表达的NGAL蛋白进行Ni2 -金属鏊合层析纯化后其纯度>95%,MALDI-TOF-MS鉴定结果提示纯化后NGAL蛋白分子量与其理论分子量的误差仅为0.91‰.结论:通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 -金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定,最后确切获得了一定丰度电泳纯的NGAL蛋白,这为下一步制备其抗体奠定了良好的实验材料. 相似文献
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重组人GST/MCP-1融合蛋白纯化及其抗肿瘤作用的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从高表达GST/MCP-1的菌株纯化GST/MCP-1,其表达产物以包涵体形式存在.包涵体经分离洗涤后,探索了对其变性复性的最佳条件.复性后的样品经Glutathione Sepharose 4B一步亲合层析纯化,获得了具有生物学活性的SDS-PAGE纯的GST/MCP-1.Western Blot检测表明,纯化的GST/MCP-1可与MCP-1抗体发生特异反应.体外抗肿瘤试验表明,CST/MCP-1激活单核细胞及淋巴细胞后,具有抑制肿瘤细胞生长的能力.裸鼠抗肿瘤试验同样显示明显的抑制反应.上述结果提示MCP-1具有抗肿瘤能力. 相似文献
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目的:分离活卡介苗(bacille calmette guérin,BCG)的有效组分,分析其组分的免疫调节活性。方法:采用酶裂解法和超声波破碎法对活BCG进行裂解,通过Sephadex G100凝胶层析对其有效组分进行分离及相对分子质量的测定,用SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定纯度;采用四氮唑蓝(MTT)方法检测小鼠脾细胞的增殖反应,用ELISA方法检测细胞培养上清液中细胞因子的产生。结果:BCG提取液经Sephadex G100层析和SDS-PAGE凝胶电泳分离后得到3个组分BCGE1、BCGE2和BCGE3,相对分子质量分别为42.5×103、36.3×103和28.6×103;BCGE2和BCGE3均能诱导小鼠脾细胞的增殖反应和IL-12、TNF-α等细胞因子的产生,P值分别为0.0001、0.0001和0.0027,并且有剂量效应关系;但BCGE1对小鼠脾细胞的增殖反应无促进作用,P=0.497;BCGE1、BCGE2和BCGE3对小鼠脾细胞产生IL-4无诱导作用,P值分别为0.988、0.889和0.841。结论:BCGE2和BCGE3可能是BCG免疫调节作用的有效组分,对该成分的进一步分离纯化和机制研究,可为BCG的免疫治疗奠定基础。 相似文献
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浙江蝮蛇蛇毒成分的分离及其对K562细胞的增殖抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]分离纯化浙江蝮蛇蛇毒主要组分并分析其对抑制白血病细胞株K562的细胞增殖作用。[方法]采用DEAE-Cellulose、CM-Sephadex C-50和Sephadex G-75柱层析,以离子交换和凝胶过滤法从蝮蛇蛇毒中分离纯化主要组分;SDS-PAGE检测其纯度和估计其分子量;MTT及FCM方法检测蛇毒主要组分对白血病细胞的增殖抑制。[结果]从浙江蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一分子量约为30kD组分,该组分对白血病细胞具有较强的细胞增殖抑制作用,且呈剂量依赖性关系,5.0、10.0mmol/L浓度时对K562细胞增殖抑制率分别达26.32%和32.28%,并使细胞阻滞于G2/M期。[结论]浙江蝮蛇蛇毒可抑制白血病细胞的增殖,其有较好的应用前景。 相似文献
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中药白头翁提取物抗肿瘤活性的体外实验研究 总被引:2,自引:1,他引:2
背景与目的:探讨中药白头翁[pulsatilla chinensis(Bunge)regel]提取物的体外抗肿瘤作用.材料与方法:采用噻唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5diphenyltetrazoliumbromide,MTT)比色法测定白头翁提取物对肿瘤细胞增殖反应的影响;用三步法初步分离,纯化白头翁提取物的抗肿瘤有效部位.结果:白头翁提取物对多种组织来源的肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用,量-效关系明显,IC50值均低于30 μg/ml,并找到其有效部位.结论:白头翁作为抗肿瘤药物有待进一步开发. 相似文献
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北豆根抗肿瘤有效成分的分离、纯化和活性分析 总被引:3,自引:0,他引:3
背景与目的:提取、纯化和鉴定北豆根抗肿瘤有效成分,并对纯化的成分作进一步的活性研究。材料与方法:常规方法制备北豆根水提液(RMW)和醇提液(RME),对RME以3%HCl溶解、有机溶剂萃取和水相浓缩得到纯化提取物1、2、3(PE1、PE2、PE3)。用MTT法测定各提取物的抑瘤活性。根据抑瘤实验结果,通过凝胶和硅胶柱层析将PE2进一步分离得到两个单体化合物PF1和PF2。提取RME后的北豆根药渣用水回流提取,去除蛋白和鞣酸,再经乙醇沉淀和冷冻干燥得到多糖成分(RMP)。有效成分采用薄层层析和改良碘化铋钾显色对其进行鉴定分析。用电喷雾质谱ESI-MS检测单体化合物PF1和PF2的分子量。用紫外分光光度计检测RMP的纯度。结果:RMW和RME对K562、BGC823及TE13三种肿瘤细胞的增殖反应均有明显的抑制作用(P<0.01),并有良好的量效及时效关系,RMP无此作用。进一步将RME应用三步法纯化得到PE1、PE2、PE3 。PE1和PE2对上述3种细胞的增殖反应均有明显的抑制作用(提高了近10倍)(P<0.01),PE3无此抑制作用。有效成分分析结果显示,PE2主要含一系列生物碱成分。对PE2进一步分离得到两个化合物PF1和PF2,分子量分别为624和610。PF1和PF2对K562、BGC823及TE13细胞均有显著抑制作用(P<0.01),PF2的抑制作用更强,PF2可导致上述细胞的形态学改变,表现为细胞体积变小,形态不规则等。PF2对肿瘤组织原代培养细胞增殖反应有较强抑制作用(P<0.01)。结论:北豆根水提物和醇提物在体外均有很强的抗肿瘤作用,醇提物的作用高于水提物。PE2是醇提物抗肿瘤的有效部位,其化学成分是生物碱;PF1和PF2均是醇提物抗肿瘤的有效成分,可能为蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱,PF2对肿瘤组织原代培养细胞也有较强的杀伤作用。北豆根多糖成分对K562等3种肿瘤细胞无抑制作用。 相似文献
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背景与目的: 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法: 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果: 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论: 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。 相似文献
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中晚期贲门癌148例的外科治疗 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法 对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果 本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论 提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。 相似文献
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目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例,剖腹探查发现已属晚期,9例为Ⅳ期行根治术,12例为Ⅴ期未行根治术,均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例,剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例,Ⅴ期未行根治术,Ⅳ期行根治术,均于术后1年内死亡;Ⅲ期者3例,行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌,行胆囊癌根治术,分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌,术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害,重在及时治疗胆囊结石。 相似文献
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背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。 相似文献
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Biswa Mohan Biswal Chandra Sekhar Bal Manavjit Singh Sandhu Ajit Kumar Padhy Goura Kishore Rath 《Journal of neuro-oncology》1994,22(1):77-81
Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively. 相似文献
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目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。 相似文献
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目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性(P>0.05),而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P<0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P<0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。 相似文献