吉西他滨作用于肝癌HepG2细胞后对DR5、caspase-8、caspase-9和caspase-3表达的影响

目的 研究吉西他滨作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达,以期探讨吉西他滨诱导HepG2细胞凋亡的机制.方法 应用MTT法和流式细胞仪体外研究吉西他滨对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及Western blot法,观察吉西他滨作用于HepG2细胞24 h后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase 3的表达情况.结果 吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖性;吉西他滨作用于HepG2细胞24 h后,细胞表面DR5及caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达均增强.结论 吉西他滨诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其能够上调DR5及caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达有关.     

吲哚-3-甲醇诱导人鼻咽癌细胞凋亡作用及机制的初步研究

背景与目的： 了解吲哚-3-甲醇在体外对人鼻咽癌CNE细胞增殖的影响及其诱导CNE细胞凋亡的作用及其可能机制。 材料与方法： 采用WST-1法检测吲哚-3-甲醇在体外对人鼻咽癌CNE细胞增殖的抑制作用;用Hochest33258荧光染色法及TUNEL法观察吲哚-3-甲醇诱导CNE细胞的凋亡;用Western blotting方法检测凋亡相关信号分caspase-9、caspase-3蛋白表达情况,实验同时设空白对照组及溶剂对照组。 结果： 吲哚-3-甲醇在体外可以明显抑制人鼻咽癌细胞增殖,诱导细胞凋亡并呈剂量依赖性,且在细胞凋亡过程中,半胱天冬酶家族成员caspase-9和caspase-3 活化片段表达阳性。 结论： 吲哚-3-甲醇在体外可抑制人鼻咽癌CNE细胞增殖并诱导其发生凋亡,且凋亡的发生可能与caspase-9、caspase-3活化有关。     

雷公藤红素上调lncRNA MEG3表达抑制肝癌细胞增殖及促进细胞凋亡

目的:探讨MEG3在雷公藤红素诱导的肝癌HepG2细胞凋亡和细胞增殖抑制过程中的作用。方法:采用CCK-8法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达,real-time PCR检测MEG3的表达。结果:雷公藤红素抑制HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡并上调MEG3的表达;敲低MEG3的表达后显著逆转了雷公藤红素诱导的HepG2细胞增殖抑制和细胞凋亡。结论:雷公藤红素通过上调MEG3的表达抑制HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡。     

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

雷公藤内酯醇对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制

[目的]探讨雷公藤内酯醇（TPL）对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制和凋亡诱导作用及作用机制。[方法]MTT法检测TPL对细胞增殖的影响,Hoechst荧光染色观察凋亡细胞形态变化,AnnexinV/PI流式细胞仪标记法检测TPL对HepG2细胞凋亡作用的影响,Western blot检测caspase-3、8、9与PARP的表达情况。[结果 ]经MTT检测,10、20、40、80nmol/L浓度TPL作用24h后HepG2细胞的抑制率分别为15.2%、22.5%、34.9%和40.7%;48h后抑制率分别为21.5%、34.8%、44.1%和44.8%;72h后抑制率分别为31.6%、47.2%、51.6%和56.0%;抑制作用呈时间和剂量的依赖性。10、20、40、80nmol/L浓度的TPL作用24h的HepG2细胞,hoechst荧光染色显微镜下均出现明显的凋亡细胞;AnnexinV/PI流式细胞仪检测其凋亡率分别为8.89%、9.81%、14.69%和22.04%,对照组凋亡率为7.35%;Western blot结果显示,其caspase-3、9、PARP蛋白活化显影,且均较对照组显影增强,显影强度随TPL浓度的增加而增强,未见caspase-8活化显影。[结论]TPL通过诱导HepG2凋亡发挥增殖抑制作用,其机制可能与caspase-3、9活化有关,即与线粒体通路相关,与caspase-8即死亡受体通路无关。     

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的：观察曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT—PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达。结果：TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高（F〈0．05）。RT—PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达水平上调。结论：不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。     

人参皂苷Compound K对慢性粒细胞白血病K562细胞系凋亡诱导作用及其机制的研究

[目的]探讨人参皂苷CompoundK（CK）对慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的诱导作用及其机制。[方法]应用MTT法检测CK对K562细胞增殖的影响,用流式细胞术分析细胞凋亡情况,半定量RT—PCR检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,WesternBlot检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax蛋白质的表达。[结果]人参皂苷CK能诱导K562细胞的凋亡,细胞凋亡率呈浓度依赖性增加。RT—PCR结果显示Caspase3、Caspase9mRNA的表达上调,Bcl-2mRNA的表达下调,WesternBlot实验显示蛋白质表达情况与RT—PCR结果-致,Caspase3、Caspase9蛋白质的表达上调,Bcl-2的表达下调。[结论]人参皂苷CK诱导K562细胞凋亡作用的机制可能是CK抑制Bcl-2基因的表达,进而使Caspase3、Caspase9表达量上调,启动凋亡途径,引起凋亡。     

CIK细胞对A549肺癌细胞株的诱导凋亡作用的研究

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells,CIK）对A549肺癌细胞株诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用末端脱氧核苷酸转移酶﹙TdT﹚介导的脱氧核苷酸缺口末端标志（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫组织化学染色法检测A549细胞中凋亡相关基因p53、Fas、caspase-3,caspase-8,caspase-9、survivin蛋白,细胞增殖相关蛋白Ki-67的阳性表达率。结果 （1）TUNEL法检测结果：效靶细胞混合培养后,起初随时间延长凋亡细胞逐渐增多,5-14小时凋亡率明显上升,14-24小时凋亡率下降;（2）免疫组织化学染色结果表明,CIK实验组p53、Ki-67、survivin蛋白随作用时间延长而均下降,Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达上调,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 （1）CIK细胞对A549肺癌细胞具有抗增殖及诱导凋亡作用;（2）CIK细胞对A549肺癌细胞的抗增殖作用机制可能与下调Ki-67蛋白的表达,使癌细胞处于静止期有关;（3）CIK细胞对A549肺癌细胞的诱导凋亡作用机制可能与下调p53、survivin蛋白的表达,上调Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达有关,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行;（4）CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外肺癌细胞的免疫活性细胞,有可能用于临床上晚期肺癌的过继性免疫治疗。     

Pin1对内质网应激下肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨内质网应激下HepG2细胞中Pin1蛋白的表达情况及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法 衣霉素（TM）分别作用于正常肝细胞THLE3和肝癌细胞HepG2（THLE3细胞TM组和HepG2细胞TM组）、全反式维甲酸（ATRA）单独作用于HepG2细胞（ATRA组）、TM和ATRA共同作用于HepG2细胞（TM+ATRA组）及DMSO处理的对照组细胞。48 h后,Western blot检测Bip和Pin1蛋白的表达水平,CCK-8试剂检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞的凋亡情况。结果 TM处理的THLE3和HepG2细胞中Bip蛋白表达增加,说明TM有效诱导细胞发生内质网应激;与DMSO组相比,THLE3细胞TM组中Pin1的蛋白水平随着TM浓度的升高而降低（P<0.001）。HepG2细胞TM+ATRA组中Pin1蛋白水平随着TM浓度的升高而降低（P<0.01）。HepG2细胞TM组细胞增殖抑制率仅（29.33±4.73）%,明显低于THLE3细胞TM组（（60.33±2.08）%）（P<0.001）,但HepG2细胞TM+ATRA组细胞增殖抑制率显著提高至（60.33±6.03）%。与DMSO组相比,THLE3细胞TM组凋亡率显著升高（（22.25±0.78）% vs.（3.57±0.31）%,P<0.01）。与DMSO组（5.10±1.00）%相比,HepG2细胞ATRA组凋亡率只有（10.03±0.49）%（P<0.05）,但TM+ATRA组凋亡率显著增加至（23.70±0.75）%（P<0.01）。结论 HepG2细胞通过维持Pin1蛋白水平抵制ERS诱导的细胞凋亡,降低Pin1蛋白水平能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。     

油茶皂苷体外诱导人白血病Jurkat细胞凋亡及其可能机制

目的:探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病Jurkat细胞的凋亡及其可能机制。方法:将不同浓度的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数法检测其对细胞增殖的影响,FCM检测细胞周期分布和细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、p-Bcl-2、Bcl-2、Bax和caspase-9蛋白的表达。结果:1～16μg/mL油茶皂苷可抑制Jurkat细胞的增殖,呈剂量依赖性。1～4μg/mL油茶皂苷作用Jurkat细胞24h后,G0/G1期和G2/M期细胞比率下降,S期细胞比率上升,细胞凋亡率随着油茶皂苷浓度的增加而上升;Jurkat细胞中,p-Bcl-2和Bcl-2蛋白的表达水平下调,caspase-3、PARP和caspase-9蛋白的表达水平上调,Bax蛋白的表达水平无明显变化。结论:油茶皂苷能抑制人白血病Jurkat细胞增殖和诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞凋亡的线粒体途径有关。     

告达庭激活Caspase-3诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡

[目的]评价告达庭体外诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用。[方法]MTT法检测细胞活性;吖啶橙染色观察核形态;流式细胞术检测细胞凋亡率：Western-blot及比色法检测Cas-pase-3表达及活性。[结果]告达庭抑制SGC-7901细胞的活性,具有浓度、时间依赖性;告达庭70μM能使SGC-7901细胞出现核染色体浓聚等典型的凋亡形态学改变,告达庭35、70μLM使细胞凋亡率升高,并使Caspase-3蛋白表达量和蛋白活性显著升高。[结论]告达庭可能通过激活Caspase-3诱导SGC-7901细胞凋亡。     

丹酚酸乙对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡研究

[目的]观察丹酚酸乙对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。[方法]MTT法观察丹酚酸乙对体外培养MCF-7细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测丹酚酸乙作用于MCF-7细胞48h后细胞凋亡率和细胞周期的变化;Western Blot检测caspase-3蛋白表达的变化。[结果]丹酚酸乙能明显抑制MCF-7细胞的生长,呈剂量和时间依赖性;荧光染色结果显示,丹酚酸乙与MCF-7细胞共培养24、48和72h后,细胞呈现明显的核固缩、碎裂以及凋亡小体形成等细胞凋亡现象;流式细胞仪检测结果显示,不同浓度的丹酚酸乙处理MCF-7细胞48h后,细胞凋亡率和S期细胞的比例逐渐升高;Western Blot显示,随着丹酚酸乙浓度的增加,MCF-7细胞caspase-3蛋白表达水平逐渐升高。[结论]丹酚酸乙对MCF-7细胞具有明显的生长抑制和促凋亡作用,这种作用可能与上调caspase-3表达以及阻滞细胞于S期有关。     

YM155对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨YM155对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:采用CCK-8法检测细胞生长抑制率；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化；Western blot法检测细胞中蛋白表达的变化，实时定量RT-PCR检测survivin mRNA表达的变化。结果:YM155对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示，HepG2细胞凋亡率明显升高,呈现剂量依赖性。YM155可引起survivin mRNA及蛋白表达下降，而caspase-3、caspase-9和PARP蛋白表达上升。结论:YM155可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并促进其凋亡，其机制可能是通过激活caspase凋亡途径来实现。     

重楼皂苷Ⅰ通过PI3K/Akt途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡的研究

[目的]评价重楼皂甙I对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。[方法]以体外培养的胰腺癌PANC-1细胞为研究对象。MTr法检测重楼皂甙I对PANC．1细胞增殖的抑制作用,Annexin．V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡,WesternBlot法检测P13K、Akt、pAkt、Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达改变。[结果]不同浓度重楼皂甙I能有效抑制PANC-1细胞的增殖,且呈时间浓度依赖性（P〈0．01）。低、中、高浓度重楼皂甙I作用PANC-1细胞24、d8h后,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,具有统计学差异（P〈0．01）。2μg／ml重楼皂甙I作用PANC．1细胞48h后,P13K、pAkt、Bcl．2蛋白表达降低．caspase-3、Bax蛋白表达增加,与对照组相比,具有统计学差异（P〈0．01）。[结论]重楼皂甙I能抑制胰腺癌PANC．1细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与降低P13K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,增加Bax及caspase-3蛋白表达有关。     

The effect of fatty acid-CoA ligase 4 on the growth of hepatic cancer cells

In this study, we detected the expression of FACL4 mRNA in 40 patients with hepatic carcinoma and its adjacent normal tissues by semi-quantitative RT-PCR. The changes of proliferation and apoptosis of hepatic cancer cell line HepG2 with FACL4 protein expression were examined by MTT and flow cytometry respectively after FACL4 selective inhibitor triacsin C treatment. The activity related to apoptosis of proteinases, caspase-3, caspase-8 and caspase-9, were detected by colorimetry. The expression related to apoptosis of protein, wt-p53, Bax and Bcl-2, in HepG2 cells were evaluated by S-P immunocytochemical dyeing. The results were: (1) FACL4 mRNA was expressed in 95.0% of hepatic cancer tissue, while the positive expression of FACL4 mRNA was 82.5% in cancer adjacent normal liver tissues. Moreover, there was a statistically significant increased in quantity of FACL4 mRNA in cancer tissues compared with adjacent normal liver tissues. (2) The concentration of triacsin C (0.5-2 mg/L) could inhibit the proliferation and induce the apoptosis of HepG2 cells significantly in a dose- and time-effect. (3) During the apoptosis of HepG2 cells induced by triacsin C, flow cytometry coupled with Rhodamine 123 dyeing showed that mitochondrial transmembrane potential of HepG2 declined significantly, and the activity of caspase-9 and caspase-3 increased more remarkably than caspase-8. Besides, the increased apoptosis was accompanied by increased Bax, and decreased wtp53 and Bcl-2 protein levels. The present study suggested that FACL4 might play a role in the growth of hepatic cancer cells. FACL4 selective inhibitor triacsin C leads to a marked growth inhibition of human liver tumor cells, based on the inhibition of proliferation and induction of apoptosis. The apoptotic process was mediated by intrinsic mitochondrial apoptotic pathway due to activation of caspase-9 and caspase-3. The increased apoptosis was accompanied by upregulation of Bax, and decreased wt-p53 and Bcl-2 protein level.     

重楼皂甙Ⅰ对肺腺癌细胞株PC9增殖及凋亡的影响

[目的]评价重楼皂甙Ⅰ对肺腺癌细胞株PC9增殖和凋亡的影响.[方法]以体外培养的肺腺癌细胞株PC9为研究对象,MTT法检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞周期的影响,Annexin-V-FITC/PI双染法检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞凋亡的影响,Western blot法检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达的影响.[结果]不同浓度重楼皂甙Ⅰ能有效抑制PC9细胞的增殖,且呈时间浓度依赖性(P＜0.01).2.5.μg/ml重楼皂甙Ⅰ作用PC9细胞12h、24h、48h后,出现G2/M期阻滞.2.5μg/ml重楼皂甙Ⅰ作用PC9细胞24h、48h后,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,具有统计学差异(P＜0.01).2.5μg/ml重楼皂甙Ⅰ作用PC9细胞48h后,Bcl-2蛋白表达降低、Bax及caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比,亦具有统计学差异(P＜0.01).[结论]重楼皂甙Ⅰ能抑制PC9细胞的体外增殖,且抑制作用表现出时效和量效关系,其机制可能与G2/M期阻滞、促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax及caspase-3蛋白表达有关.     

Molecular mechanism of inhibitory effects of C-phycocyanin combined with all-trans-retinoic acid on the growth of HeLa cells in vitro

We studied the effects of all-trans-retinoic acid (ATRA), C-phycocyanin (C-PC), or ATRA?+?C-PC on the growth of cervical cells (HeLa cells), cell cycle distribution, and apoptosis. The anticancer mechanism of the drug combination was revealed. MTT assay was adopted to determine the effects of C-PC and ATRA on the growth of HeLa cells. The expression quantities of cyclin-dependent kinase (CDK) 4, cyclin D1, Bcl-2, caspase-3, and CD59 were determined by in situ hybridization, immunofluorescence, immunohistochemistry staining, Western blot, and RT-PCR. TUNEL assay was adopted to determine the cellular apoptosis levels. Both C-PC and ATRA could inhibit the growth of HeLa cells, and the combination of ATRA?+?C-PC functioned cooperatively to induce apoptosis in HeLa cells. The dosage of ATRA was reduced when it cooperated with C-PC to reduce the toxicity. ATRA treated with C-PC could induce more cell cycle arrests than the single drug used by decrease in cyclin D1 and CDK4 expression. The combination of the two drugs could upregulate caspase-3 and downregulate the Bcl-2 gene and induce cell apoptosis. Moreover, the combination therapy has an important immunological significance in decreased expression of the CD59 protein. Singly, C-PC or ATRA could inhibit the growth of HeLa cells, and the effects of treatment were further enhanced in the combination group. In combination with C-PC, the dosage of ATRA was effectively reduced. The C-PC?+?ATRA combination might take effect by inhibiting the progress of the cell cycle, inducing cell apoptosis and promoting complement-mediated cytolysis.