改良抗酸染色法对儿童结核性脑膜炎诊断价值分析

目的:探讨改良抗酸染色法在儿童结核性脑膜炎诊断中的价值。方法:应用BACTEC MGIT 960培养法、离心涂片法、改良抗酸染色法同时对30份临床诊断为结核性脑膜炎的儿童的脑脊液标本进行检测。结果:BACTEC MGIT 960培养法、离心涂片法及改良抗酸染色法的阳性率分别为13.3%(4/30)、3.33%(1/30)、56.7%(17/30)。改良抗酸染色法与BACTEC MGIT 960培养法、离心涂片法比较差异均有统计学意义(P<0.005)。结论:改良抗酸染色法诊断儿童结核性脑膜炎阳性率明显提高,值得临床推广应用。     

兔骨骼肌干细胞向平滑肌细胞分化的实验研究

目的:探讨兔骨骼肌干细胞(MDSCs)分离、鉴定及诱导分化为平滑肌细胞的方法。方法:应用酶消化法消化兔骨骼肌组织,应用改良差速贴壁法获得MDSCs,并用免疫组化和免疫荧光鉴定,体外诱导骨骼肌干细胞向平滑肌细胞定向分化,镜下观察细胞生长情况;Real-time PCR和Western blot检测平滑肌细胞特异标记α-SMA和SM-MHC的表达情况。结果:骨骼肌干细胞具有良好的增殖能力和分化潜能,免疫细胞化学染色法和免疫细胞荧光法显示MDSCs呈结蛋白、干细胞抗原-1(Sca-1)和CD34阳性,CD45阴性,诱导后细胞排列形态呈漩涡状,Real-time PCR和Western blot结果提示α-SMA和SM-MHC表达增高。结论:骨骼肌干细胞经体外培养及诱导后,呈明显的平滑肌细胞特性,可作为输尿管组织工程新的种子细胞来源。     

酶联免疫吸附法检测HBsAg及与其它两种方法的比较

1976年Wolters等应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg,近年来国内外有不少报导。我们改用Tween80配制洗涤液,用改良戊二醛二步法标记酶结合物,以联大茴香胺做底物进行了ELISA双抗体夹心法检测HBsAg的敏感性,同时用临床常用的反向血凝法(RPHA)和对流免疫电泳法(CIEP)进行试验比较,现将结果报导如下:     

丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子致大鼠成骨细胞凋亡的作用

目的探讨丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对体外培养大鼠成骨细胞凋亡的作用。方法用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,采用淬灭流动反应方法体外制备ONOO-,以1 mm o l/L终浓度加入成骨细胞培养体系,作用30 m in后弃去,继续常规培养12 h,用Hoechst33258染色法及TUNEL法检测成骨细胞的凋亡,并以0.1 mm o l/L丹皮酚消除ONOO-(1 mm o l/L)对大鼠成骨细胞凋亡的影响。结果1 mm o l/L的ONOO-可导致大鼠成骨细胞凋亡;0.1 mm o l/L丹皮酚能拮抗ONOO-(1 mm o l/L)所引起的大鼠成骨细胞凋亡。结论丹皮酚0.1 mm o l/L在体外具有拮抗ONOO-(1 mm o l/L)致大鼠成骨细胞凋亡的作用。     

盆腔积液改良抗酸染色法的建立与应用价值分析

目的探讨改良抗酸染色法在盆腔积液中检测结核分枝杆菌对于盆腔结核的诊断价值。方法建立改良抗酸染色法,对58例已确诊为盆腔结核病人及58例盆腔肿瘤病人(对照组)的盆腔积液分别利用改良抗酸染色法、离心涂片法、荧光定量PCR法进行检测,比较3种方法的检测灵敏度及特异度。结果改良抗酸染色法、离心涂片法、荧光定量PCR法的灵敏度分别为34.48%(20/58)、1.72%(1/58)和39.66%(23/58)。改良抗酸染色法与离心涂片法灵敏度差异有统计学意义,改良抗酸染色法较高(配对χ~2=19.00,P0.001);改良抗酸染色法和荧光定量PCR法差异无统计学意义(配对χ~2=3.00,P0.05);离心涂片法和荧光定量PCR法差异有统计学意义,荧光定量PCR法较高(配对χ~2=22.00,P0.001)。3种方法特异度分别为100.00%、100.00%和95.08%,差异无统计学意义(配对χ~2=3.00,P0.05)。结论盆腔积液采用改良抗酸染色法进行结核分枝杆菌检测灵敏度高,特异度好,具有较高的临床应用价值。     

EdU标记心脏细胞增殖:一种检测心脏再生的新方法

目的:寻找一种简单、快速、更有效的检测心脏细胞增殖的方法,以探讨损伤心脏再生潜能的机制。方法:取小鼠不同时期(胚胎、新生及成年期)及不同生理状态下(健康、心肌梗死后)心脏行组织冰冻切片后,用免疫荧光染色法分别标记心脏细胞:心肌细胞(心脏特异转录因子Nkx 2.5和Gata 4,心肌特异性标记蛋白TnT),内皮细胞(CD34),血管平滑肌细胞(SMMIgG),心脏干细胞(IsL1,Tbx18和Wt1);在此基础上用EdU染色法检测不同心脏细胞的增殖能力。结果:EdU能强烈地标记不同时期及不同生理状态下小鼠心脏细胞的增殖;心梗后心脏细胞进入细胞增殖周期,但增殖能力非常有限。结论:EDU可简单、快速、更有效的检测心脏细胞增殖,为探讨损伤心脏再生潜能机制提供了新的方法。     

组织块法培养人胃成纤维细胞及其结缔组织生长因子的表达

[目的]探索人胃成纤维细胞体外培养的技术方法及其结缔组织生长因子表达情况。[方法]采用组织块贴壁培养法进行人胃成纤维细胞体外培养并传代,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态,并用免疫细胞化学法检测培养细胞的波形蛋白与角蛋白表达。用RT-PCR法检测人胃成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫细胞荧光染色法检测人胃成纤维细胞CTGF蛋白表达情况。[结果]人胃成纤维细胞培养成功传代,表现为长梭形或星形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性。RT-PCR法与免疫细胞荧光染色法证实体外培养的人胃纤维细胞表达CTGF。[结论]组织块法培养的人胃成纤维细胞可在体外稳定培养、传代,人胃成纤维细胞能合成CTGF。     

三种方法检测结核分枝杆菌的比较

目的比较PCR技术与抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,及在临床诊断中的应用价值。方法对108例临床确诊的结核病患者、90例结核性胸膜炎患者的痰标本和50例非结核患者痰标本应用PCR法、痰涂片抗酸染色法和改良罗氏培养法检测,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为44.4%,改良罗氏培养法阳性率为57.4%,PCR技术检测阳性率为80.5%。结论 PCR技术是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

大鼠生精细胞体外培养条件的研究

目的:寻找一个最适合生精细胞体外培养的培养体系,为进一步培养人类生精细胞提供技术基础.方法:用单一酶-研磨-Percoll法制备15 d龄雄性大鼠生精细胞混悬液用于体外培养.①设计两种不同的培养条件:DMEM/F12和改良人类输卵管液(HTF)作为基础培养液,分为两组.每组根据添加不同浓度的激素分为6小组.添加的睾酮(T)和FSH浓度分别为:对照组H0(T 1 μmol/L,FSH 0 IU/L)、H1组(T 1 μmol/L,FSH 10 IU/L)、 H2组(T 1 μmol/L,FSH 25 IU/L)、H3组(T 1 μmol/L,FSH 50 IU/L)、H4组(T 1 μmol/L,FSH 100 IU/L)、H5组(T 0 μmol/L,FSH 50 IU/L). ②通过BRDU标记和流式细胞仪检测所有实验的生精细胞倍体的变化来判断其发育,进一步确认本研究使用培养条件的可靠性.结果:在生精细胞与支持细胞共培养过程中以改良人类输卵管液作为基础培养液,添加T 1 μmol/L ,FSH 50 IU/L或100 IU/L都适宜生精细胞体外培养;另通过BRDU标记及流式细胞仪检测均表明,在本研究条件下体外培养生精细胞能从初级精母细胞阶段分化到精子细胞阶段.结论:改良人类输卵管液作为基础培养液,添加浓度为50 IU/L或100 IU/L的FSH及T 1 μmol/L,最适合生精细胞的体外成熟培养.     

荧光定量PCR技术在痰结核菌中的检测评价

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测技术,厚片涂片抗酸染色,改良罗氏培养法在检测结核病患者痰标本中的结核杆菌的灵敏性和特异性。评价FQ-PCR检测技术在痰结核菌中的意义。方法对我院感染科收治的临床确诊的210例肺结核病患者的同一份痰标本分别进行FQ-PCR法,痰厚片涂片抗酸染色法,改良罗氏培养法检测结核杆菌。结果 FQ-PCR法,痰厚片涂片抗酸染色法,改良罗氏培养法检测结核杆菌的阳性率分别为78%,60%,23%。结论 FQ-PCR法检测结核杆菌灵敏性和特异性比厚涂片法和培养法高。     

PD-1在器官移植患者T细胞上的表达及其意义

目的:检测共刺激分子PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者外周血单个核细胞(PBMCs)和T细胞上PD-1的表达,并对其表达的意义以及抗PD-1单克隆抗体与免疫抑制剂的协同作用进行探讨。方法:采用流式细胞分析技术,应用单标记和双标记的方法,对应用免疫抑制剂的肝移植和肾移植患者的外周血单个核细胞和T细胞上PD-1的表达进行检测。以混合淋巴试验在体外模拟移植模型,应用MTT法,观察PD-1单抗与免疫抑制剂的协同作用。结果:PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者PBMCs和T细胞上有特异性高表达,环孢素A(CsA)能诱导PD-1在PBMCs上的表达,且抗PD-1单克隆抗体与CsA联用具有协同作用。结论:PD-1可作为抗移植排斥作用的免疫干预新靶点。     

PCR-EIA法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 :探讨用PCR EIA法检测人端粒酶活性及其临床应用。方法 :利用kim法处理细胞和组织标本及扩增端粒酶产物 ,引物TS用生物素标记 ,CX用地高辛标记 ,PCR产物与包被有链亲和素的酶标板结合 ,并与酶标抗地高辛抗体反应 ,用TMB显色。结果 :PCR EIA法与TRAP 银染色法有很好的相关性 ,批内变异系数CV为 4 .138% ,在 30例各种恶性肿瘤组织中端粒酶活性检出率为 90 % ,2 8例癌旁组织中为 7.1%。结论 :该法具有较好的灵敏度与重复性 ,无同位素污染 ,较银染色法更为简便、快速 ,检测成本低 ,无需特殊仪器 ,适合于各级医院推广。     

免疫金-银染色法——介绍一种最新的、最敏感的免疫组织化学方法

<正> Holgate等(1983)发表了一种新的免疫组织化学方法——免疫金-银染色法(Immunogold-Silver Staining method,简称IGSS法)。据认为此法的敏感度可达标准的免疫酶技术PAP法(peroxidaseantiperoxidasc method)的200倍。本法省时,经济,不接触致癌性试剂,方法简便,背景染色浅。组织块经常规固定剂处理,石蜡包埋,染色后可用HE等一般染色法复染。此法与PAP法合併使用,可做双标记免疫染色。免疫金-银染色法能更好地稳定地显示组织中的抗原,并适用于标记活细     

生前与死后伤的区别——用免疫组化法检测损伤组织中的免疫球蛋白G

目的 :研究损伤组织中的免疫球蛋白 G(Ig G)的分布以区别生前与死后伤。方法 :卵白素—生物素过氧化物酶复合物技术 (ABC法 ) ,直接用辣根过氧化物酶标记单一特异性抗体 (直接法 )检测人体生前与死后损伤皮肤组织中的 Ig G。结果 :生前损伤标本均阳性 ,死后损伤标本均阴性。应用本方法可以检测极短时间 (<1 0 min)内死亡的生前伤。钝器伤 Ig G阳性反应分布范围比锐器伤广。结论 :应用 ABC法、直接法的免疫组化技术检测人体损伤皮肤组织中的 Ig G比较简便 ,该方法适用基层推广应用。     

188Re-血管抑素的制备及其在小鼠体内分布

目的: 探索用铼( 188Re)直接标记血管抑素(Angiostatin,AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其在小鼠体内的生物分布.方法: 制备的AS经鉴定后,用氯化亚锡(SnCl2)还原法进行 188Re标记AS;对标记产物用纸层析法测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性.结果: AS 100 μg,20 g/L SnCl2(溶于1 mol/L的HCl中)200 μL,以0.1 mol/L酒石酸钠(溶于0.05 mol/L的HCl中)1 mL为络合剂,加入188ReO4 37 MBq,标记率可达76.3%.产物在体外较为稳定;标记物在肝、肾、脾中有较高的放射性摄取,放射性在24 h内大部分排出体外.结论: 用188Re直接法标记AS简单易行,稳定性较好.     

酒石酸锑钾在诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡中的影响

目的:本研究旨在明确酒石酸锑钾(PAT)在体外对人肝癌BEL7402细胞凋亡的影响及抑癌机制。方法:用PAT以不同浓度、不同时间作用于人肝癌BEL7402细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、TUNEL染色法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:PAT以剂量依赖和时间依赖的方式抑制BEL7402细胞的生长。5～40μmol·L-1的PAT处理48h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪均能检测到凋亡细胞。结论:PAT在体外诱导肝癌BEL7402细胞凋亡,能作为一种凋亡诱导剂用于肝癌的治疗。     

改良结核分枝杆菌L型检测方法在结核病早期诊断中的价值

目的探讨改良结核分枝杆菌L型检测方法在结核病早期诊断中的应用价值。方法选择2012年8月至2014年8月在武汉市第十一医院门诊确诊的120例活动性肺结核患者,分别采用荧光定量聚合酶链反应法(PCR)、MTB-L抗酸染色法、萋-尼抗酸染色法(Ziehl-Nelsen,Z-N)、改良IK抗酸染色法检测MTB-L的阳性感染率,以荧光定量PCR法作为金标准,评价各种检测方法对MTB-L结核病的诊断价值。结果荧光定量PCR法MTB-L阳性检出率为30.0%(36/120),Z-N法阳性检出率为14.2%(17/120),改良IK抗酸染色法阳性检出率为25.8%(27/120),MTB-L抗酸染色法阳性检出率为28.3%(34/120)。以荧光定量PCR法作为金标准,MTB-L抗酸染色法检测特异度为96.4%,灵敏度为86.1%,准确度为93.3%;与荧光定量PCR法结果比较,Z-N法检测Kappa值为0.509,改良IK抗酸染色法Kappa值为0.731,MTB-L抗酸染色法Kappa值为0.839,MTB-L抗酸染色法与荧光定量PCR法一致性最好。结论 MTB-L抗酸染色法检测MTB-L的特异度、准确度较高,与荧光定量PCR法一致性最好,且操作简单,对MTB-L早期诊断具有重要的参考价值。     

用双重免疫荧光染色法研究两种不同肿瘤胚胎抗原在人类结肠癌的分布情况

癌胚抗原(Cascinoembryonic antigen,简称 CEA)系人类结肠癌的一种胚胎抗原。近来我们的研究显示特定时期胚胎抗原(Stage-specific embryonic antigen,简称 SSEA—1)系一新的人类结肠癌的胚胎抗原。为了解这两种胚胎抗原在结肠癌及正常结肠粘膜上皮的分布,作者用双重免疫荧光染色法(用若丹明标记显示 CEA,用异硫氰酸荧光素标记显示 SSEA—1)进行了研究。结果:1.所有13例结肠癌组织均呈 CEA     

酶标记SPA在检测疟疾抗体中的应用 1.实验条件的选择及与酶标记、荧光标记抗体染色法的比较

本文建立了HRP—SPA染色法,探讨了检测疟疾抗体的实验条件。用本法与酶标记抗体、荧光标记抗体染色法,对某恶性疟区126份一般人群滤纸干血滴血清,进行对比试验,检出疟疾抗体的阳性率分别为36.5%,36.5%、和36.7%。用三种方法检测44份阳性的滤纸干血滴血清,疟疾抗体的滴变,HRP—SPA为1:101.3,HRP—马抗人为1:96.7,FITC—羊抗人为1:81.3,HRP—SPA与FITC—羊抗人两法比较,相差显著(p<0.05),其余各组间,无显著差异(p>0.05)。     

^99mTc标记抗人喉癌单克隆抗体在荷人喉癌裸鼠模型体内的分布研究

目的 :探索99mTc标记抗人喉癌单克隆抗体 (McAb -Lc)的方法 ,观察99mTc-McAb -Lc在喉癌移植瘤模型体内的分布情况。方法 :应用改良Schwarz法进行99mTc标记McAb -Lc,用γ计数仪测定放射强度 ,计算肿瘤和非肿瘤组织的单位质量摄取放射性活度的百分比 (ID % g)和肿瘤与非肿瘤组织的放射性比值 (T NT)。结果 :改良Schwarz法制备的99mTc -McAb -Lc无毒、无菌、无热原 ,性质稳定 ,标记率在 90 %～ 95% ,抗体的活性在标记前后无明显改变。注射99mTc -McAb -Lc后 ,各时相肿瘤组织ID % g均显著高于注射99mTc-鼠IgG对照组 (P≤ 0 .0 0 3) ,注射99mTc -McAb -Lc后 2h和 6h ,肿瘤组织ID % g和肿瘤与血液的放射性比值 (T B)分别从 4.56± 0 .51、1 .0 3± 0 .1 7增加到 7.84± 1 .46和 1 .84± 0 .30 ,差异有高度显著性 (P≤ 0 .0 0 5)。结论 :改良Schwarz法制备的99mTc -McAb -Lc ,能较好地满足放射免疫显像 (RII)的要求 ,McAb -Lc的免疫导向作用可靠 ,注射后 6h ,99mTc -McAb -Lc在肿瘤组织中有相对较高的特异性浓聚。