天津地区住院腹泻患儿星状病毒感染情况及其型别分析

目的 调查天津地区5岁以下住院的腹泻患儿HAstV的感染情况及其分型特点.方法 收集天津市儿童医院2008年5月1日至2009年4月30日住院腹泻患儿的粪便标本837份,用ELISA进行HAstV抗原检测,将检测阳性的标本进行细胞培养,产生细胞病变(CPE)后,提取病毒RNA,RT-PCR扩增并对产物进行测序确证.同时用胶体金免疫层析法进行轮状病毒抗原检测.结果 HAstV抗原阳性检出率为3.0%(25/837),与轮状病毒共同感染者的检出率为0.7%(6/837);96%(24/25)的HAstV腹泻发生在2岁以下患儿,其中小于6月龄的患儿占HAstV阳性标本的48%(12/25);HAstV感染主要集中在2008年8月至2009年4月,与轮状病毒流行季节相似;21例接种的HAstV抗原阳性的标本中,由RT-PCR成功检出11例,经测序确证均为HAstV-1型.结论 HAstV是天津地区2008-2009年婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行型别以HAstV-1型为主.     

多重逆转录聚合酶链反应同步检测A组轮状病毒G基因型的研究

目的　为了检测A组轮状病毒VP7的基因型 ,建立一步多重逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)同步检测A组轮状病毒G基因型技术。方法　在参照文献并分析A组轮状病毒VP7基因的基础上 ,选取了一个共用的下游引物RVG9和 6个A组轮状病毒G基因型G1、G2、G3、G4、G8和G9的特异性上游引物 ,利用多重RT PCR技术对标准株和样品进行检测。结果　进行一轮RT PCR ,即可至少同时检出 5种不同标准株混合物中的各个基因型。对纯化的A组轮状病毒标准株RNAO2 6 5进行系列稀释后 ,其检测灵敏度可达 1PFU。经对A组轮状病毒阳性的 6 0份样本进行检测 ,其中G3有 5 1例、G2有 4例 ,G1与G3混合感染 3例 ,另外尚有 2例不能分型。　结论　本研究建立的一步多重RT PCR技术对A组轮状病毒基因型研究将为临床诊断和实验研究提供一种快速、灵敏和特异的检测手段。     

腹泻患儿粪便轮状病毒胶体金法检测分析

轮状病毒（RotaVims RV）作为非细菌性版泻的重婴病原体广泛分布于自然界中，它主璎通过粪-口感染多种动物。人作为被感染对象，常在秋冬季引起大范围流行，是婴幼儿急诊和死亡的第二大疾病。检验方法一般有酶联免疫吸附试验（ELISA）、电子显微镜直接观察、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。由于这些方法实验设备要求高、耗费用、耗时间，因此我科采用轮状病毒肢体金法对腹泻患儿进行了检测，结果报道如下。     

巢式聚合酶链反应检测A组轮状病毒基因型的研究

目的用巢式聚合酶链反应(PCR)对A组轮状病毒常见G、P基因型进行检测。方法根据A组轮状病毒不同型别共有的VP4、VP7基因设计的引物分别用于G、P分型的第1次PCR扩增,然后用可以区分不同G型和P型的A组轮状病毒的引物进行第2次PCR扩增。对不同型别A组轮状病毒标准毒株和68例A组轮状病毒腹泻的粪便标本进行了G、P型别的检测。结果不同型别A组轮状病毒标准毒株分别扩增出不同长度片段的条带。68例被检测的A组轮状病毒腹泻粪便标本中G分型以G3为主,P分型以P8为主,其余型别少见。结论巢式PCR检测A组轮状病毒基因型的分型具有较高的灵敏度,操作简便快速,适用于临床检测。     

巢式聚合酶链反应检测A组轮状病毒基因型的研究

目的用巢式聚合酶链反应（PCR）对A组轮状病毒常见G、P基因型进行检测。方法根据A组轮状病毒不同型别共有的VP4、VP7基因设计的引物分别用于G、P分型的第1次PCR扩增,然后用可以区分不同G型和P型的A组轮状病毒的引物进行第2次PCR扩增。对不同型别A组轮状病毒标准毒株和68例A组轮状病毒腹泻的粪便标本进行了G、P型别的检测。结果不同型别A组轮状病毒标准毒株分别扩增出不同长度片段的条带。68例被检测的A组轮状病毒腹泻粪便标本中G分型以G3为主,P分型以P8为主,其余型别少见。结论巢式PCR检测A组轮状病毒基因型的分型具有较高的灵敏度,操作简便快速,适用于临床检测。     

PCR检测婴儿腹泻粪便中A组轮状病毒

ＰＣＲ检测婴儿腹泻粪便中Ａ组轮状病毒李招云（黄岩第一人民医院，浙江黄岩３１８０２０）关键词轮状病毒婴儿腹泻聚合酶链反应人类轮状病毒（ＨＲＶ）属ＲＮＡ病毒，Ａ组ＨＲＶ是引起秋冬季婴儿腹泻的主要病原体之一。我们于１９９６年１０月至１９９７年１月对本院儿科...     

逆转录套式PCR快速检测婴幼儿轮状病毒感染初步报告

自行设计引物扩增轮状病毒基因６片段，用羟基磷灰石抽提病毒ＲＮＡ，具有快速，简便，敏感度高等特点，共检测７０例婴幼儿腹泻病例，其中３８例阳性（５４．３％），其阳性率高出ＰＡＧＥ检测法（３７．１％）。     

1型HIV感染多重PCR检测方法的建立

重复性,能覆盖我国最主要的流行病毒株.     

人偏肺病毒基因型双重逆转录PCR检测方法的建立

目的 建立一种鉴别不同基因型hMPV的RT-PCR方法.方法 根据不同基因型的hMPV G蛋白基因序列设计合成A、B基因型的特异性引物,在一次双重PCR反应中根据扩增产物大小鉴别不同基因型.用该方法鉴别37份hMPV阳性的临床标本的基因型.结果 用hMPV G蛋白编码基因的分型引物进行PCR反应,对已知的hMPV阳性标本直接进行分型得到的扩增产物大小易于区分;对常见的呼吸道病毒无非特异扩增,显示引物特异性良好.对37份临床标本进行基因分型结果显示,20份A基因型分型结果与M基因测序分型结果一致,17份经M基因测序分型为B基因型的阳性标本中有14份与M基因测序分型结果一致,3份未得到扩增产物从而不能分型,总符合率为91.9%[(20+14)/37].结论 成功建立了一种可以鉴别不同基因型的hMPV的RT-PCR方法.     

济南地区秋冬季腹泻中轮状病毒及诺如病毒的感染分析

目的分析济南地区腹泻中轮状病毒(RV)及诺如病毒(NV)的流行状况,为腹泻的诊治提供依据。方法采集2013年及2014年9~12月济南市腹泻患者粪便标本579例,实时荧光定量PCR检测A组RV及GⅠ/GⅡ型NV,采用SPSS 13.0统计软件对临床及流行病学资料进行统计分析。结果 579例腹泻患者中265例检测阳性,阳性率为45.77%(265/579);其中A组RV阳性166例,阳性率为28.67%;GⅠ型NV阳性2例,阳性率为0.35%;GⅡ型NV阳性97例,阳性率为16.75%。感染RV和NV的病例中,男女比例分别为2.53∶1(119/47)及1.30∶1(56/43);RV阳性病例年龄主要集中于2岁以下(80.12%),尤其是1岁以下幼儿所占比例最大(51.20%);NV感染对象主要为小于2岁的婴幼儿(56.57%)及20岁以上成年人(38.38%)。RV和NV感染患者职业均以儿童及学生为主(90.96%和62.63%);两者均以腹泻和恶心呕吐为主要临床症状(95.18%和84.85%)。结论 A组RV是2013~2014年济南地区秋冬季腹泻的主要病原体,GⅡ型NV也是引起散发性腹泻的主要病原;2岁以下幼儿是RV和NV感染的高危人群,NV还易引起成年人感染,腹泻和恶心呕吐为主要临床症状。     

Severe rotavirus gastroenteritis in children older than 5 years after vaccine introduction

IntroductionRotavirus (RV) is the major pathogen responsible for acute gastroenteritis in infants. Since RV vaccines were introduced, a substantial decline in the incidence of severe RV infection has been reported. However, some burden still exists, even in developed countries, including Japan.MethodsWe retrospectively surveyed 380 patients hospitalized for acute gastroenteritis from 2015 to 2019. In 2019, additional detailed clinical information of 21 patients with RV gastroenteritis was obtained to evaluate the efficacy of the RV vaccine. Nine fecal samples from those patients were collected to detect the RV genotypes.ResultsOur data showed an increasing trend in hospitalizations for severe RV gastroenteritis in children older than 5 years. According to the Vesikari clinical severity scores in the older group (≥5 years), the gastrointestinal symptoms in vaccinated patients were less severe than those in unvaccinated patients (p = 0.014). The genotype analysis revealed that G9P[8]I1 was the major genotype in the recruited patients in 2019.ConclusionsThis report warns that children older than 5 years could be affected by severe RV infection and suggests prompt intervention for this age group, similar to that in infants. In the new period in which the RV vaccine is included in Japanese national immunization programs beginning October 2020, continuous monitoring of patient clinical characteristics and RV epidemiology is required to determine the role of vaccines.     

白细胞介素类mRNA在儿童哮喘中异常表达的检测及意义

目的：研究白细胞介素－12（IL－12），IL－13在哮喘发病中的作用。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法半定量分析了哮喘急性发作期及正常对照组儿童外周血单个核细胞（PBMC）中IL－12，IL－13mRNA表达水平的变化，同时对IgE水平进行了检测，结果：哮喘组IL－12 mRNA表达减少，IL－13 mRNA表达增多，病情越重，IL－12mRNA表达越少，IL－13 mRNA表达越多，无论IgE升高与否。与对照组比较，IL－12，IL－13mRNA表达，差异均有显著性，结论：IL－12，IL－13可能是构成气道慢性炎症的各类因素之一。     

深圳地区婴幼儿诺如病毒感染的分子流行病学检测及分析

目的了解深圳地区婴幼儿属于人类杯状病毒（HuCV）的诺如病毒（NoV）的感染状况并对NoV阳性病毒株进行基因型分析。方法采集连续2个秋冬季腹泻流行期间在深圳市儿童医院就诊的临床检验已排除寄生虫、细菌性腹泻和轮状病毒检测结果为阴性的3岁以下腹泻患儿粪便标本226例，应用分型引物RT-PCR法进行检测NoVGⅠ和GⅡ群，扩增产物通过1．5％琼脂糖凝胶电泳鉴定；部分阳性标本测序，结合GenBank参考株相应核苷酸序列进行进化和型别流行特点分析。结果深圳地区婴幼儿NoV阳性率为10．62％（24／226），检测出NoV阳性株GⅡ／4群18株，GⅡ／3群5株；7至24月龄为NoV高发年龄段。结论NoV是深圳地区婴幼儿冬季腹泻的重要病原体之一，流行株为NoV-GⅡ／4。     

HPV16型E5基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-E5的构建与鉴定

目的构建HPV16型E5基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据HPV16型E5基因已知序列,用PCR方法扩增E5片段,利用逆转录病毒载体pLEGFP-N1构建重组质粒pLEGFP-E5。酶切电泳验证重组质粒pLEGFP-E5后,利用脂质体将重组质粒pLEGFP-E5转染入包装细胞PA317。收集PA317病毒上清转染NIH3T3细胞。结果 PCR结果显示扩增片断大小约252bp,与预期相同。重组质粒酶切后显示其大小约7300bp。pLEGFP-E5成功转染检测细胞。结论重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-E5基因构建成功,能有效感染靶细胞。     

5岁以下腹泻婴幼儿A群轮状病毒感染调查

目的了解本社区5岁以下腹泻婴幼儿A群轮状病毒的感染情况。方法收集2011年1月至12月腹泻婴幼儿粪便标本3124份,采用胶体金法进行检测。结果 3124份粪便标本中A群轮状病毒总检出率为28.3%(883/3124),其中男性患儿检出率为29.8%(523/1756),女性患儿检出率为26.3%(360/1368)。6～24个月龄婴幼儿检出率较高,占阳性病例的71.8%(634/883)。结论 A群轮状病毒是本社区5岁以下婴幼儿腹泻病的主要病原体,6～24个月龄婴幼儿是A群轮状病毒的易感人群,以冬季11、12月份至春季1、2月份为流行高峰期。